Name: human primary trophoblast cell culture model to study the protective effects of melatonin against hypoxia/reoxygenation-induced disruption
Uploaded: 2016-07-30T15:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Human Primary Trophoblast Cell Culture Model to Study the Protective Effects of Melatonin Against Hypoxia/reoxygenation-induced Disruption at JoVE.com

Supported by grants from the Natural Sciences and Engineering Research Council of Canada (NSERC) (no. 262011-2009) to CV and March of Dimes Social and Behavioral Sciences Research grant (#12-FY12-179) to CV and JTS; by studentships to LSF from the Minist&#232;re de l'&#233;ducation, de l'Enseignement sup&#233;rieurs et de la recherche (MEESR)-Fonds de recherche du Qu&#233;bec (FRQ)-Nature et technologies (NT) and the Fondation Universitaire Armand-Frappier INRS, to HC from the R&#233;seau Qu&#233;b&#233;cois en Reproduction-NSERC-CREATE, to AAHT from the Canadian Institutes of Health Research (CIHR) and FRQ-Sant&#233;, and to JBP from NSERC; by a fellowship to EMAS from the Conselho Nacional de Desenvolvimento Cient&#236;fico e Tecnol&#242;gico (CNPq) and the Programme de bourses d'excellence pour &#233;tudiants &#233;trangers MEESR-FRQNT.

Placentas fueron obtenidos inmediatamente después de los partos vaginales espontáneos de embarazos sin complicaciones en el CHUM St-Luc del Hospital, Montreal, QC, Canadá, con el consentimiento del paciente informado y la aprobación de los comités éticos (CHUM-St-Luc hospital y INRS-Institut Armand-Frappier, Laval, Quebec, Canadá). 1. Aislamiento y purificación de células citotrofoblastos velloso <ol><li> Soluciones y medios <ol><li> Preparar los medios de transporte, completándolo Dulbecco modificad...

En los mamíferos, el desarrollo fetal depende directamente de la función placentaria adecuada. Los orígenes del desarrollo de trastornos de la salud se basan en la hipótesis de que la causa de las enfermedades que se manifiestan más tarde en la vida se remonta al desarrollo temprano y que la placenta tiene una función mecánica en la programación fetal 30-32. La placenta es el mediador clave de crecimiento y desarrollo del feto: regula la transferencia de nutrientes, protege contra la exposición dañi...

Durante el embarazo humano, las células citotrofoblastos placentarios, que son células madre mononucleadas, rápidamente proliferan y se diferencian en cualquiera de las células citotrofoblastos vellosos o extravillous. citrofoblastos extravelloso invaden y remodelar las arterias espirales de la pared uterina. Citotrofoblastos vellosos, por el contrario, siguen proliferar, diferenciarse y se fusionan para formar sincitiotrofoblasto multinucleadas (el sincitio) 1. El mantenimiento de la homeostasis del trofoblasto velloso es esencial para el bienestar del feto y el embarazo saludable. De hecho, los trofoblastos vellosidades permiten el intercambio materno-fetal de oxígeno y nutrientes, y producen hormonas esenciales para el embarazo. Por otra parte, el sincitiotrofoblasto es el único tipo de células en contacto directo con la circulación de la sangre materna y proporciona una barrera física e inmunológica esencial. Por lo tanto, el sincitiotrofoblasto debe someterse a la apoptosis y sustitución para el mantenimiento de la homeostasis y para evIdentificación del placentaria patologías 2-5. La técnica desarrollada por Kliman et al., 6 en 1986 para aislar citrofoblastos vellosidades primarias de placentas humanas provocó una revolución en la investigación de la placenta al permitir el estudio de los mecanismos moleculares implicados en la diferenciación del trofoblasto velloso. Esta técnica clásica, sobre la base de las digestiones enzimáticas secuenciales con tripsina y DNasa, seguido de aislamiento en los medios de densidad de centrifugación (partículas de sílice coloidal recubierto por polivinilpirrolidona, o Percoll) es ahora reconocido como el estándar de oro para el aislamiento de células del citotrofoblasto velloso. La técnica se puede optimizar mediante inmunopurificación magnético, un procedimiento que separa citotrofoblastos vellosos de las células no trofoblásticas en base a la expresión diferencial de antígenos específicos en la superficie de estas células. Elegimos el antígeno leucocitario humano ABC (HLA-ABC) debido a la ausencia de su expresión en la célula trofoblástica membrane 7,8. La placenta es un órgano que sufre variaciones importantes en los niveles de oxígeno durante el embarazo. En el primer trimestre, la relación de la oxigenación es fisiológicamente muy baja (2% de O2), pero aumenta a niveles leves de oxigenación (8% O 2) en el segundo y tercer trimestre. Tuuli et al. 9 describe que la reproducción in vitro del medio ambiente en el interior del trofoblasto vellosidades placentarias es un desafío y las variaciones en los niveles de oxigenación pueden incluso conducir a cambios fenotípicos. Es, por lo tanto, sugiere adoptar 8% de oxígeno como normoxia para imitar la tensión de oxígeno que se encuentra en vellosidades placentarias durante el tercer trimestre de gestación 8,9. Chen et al. 10 ampliamente estudiado diversas variables relacionadas con la tensión de oxígeno en cultivos de células del trofoblasto y demostró la importancia de la determinación de los niveles de oxígeno en un ambiente pericellular. Los niveles de oxígeno en el vellosidades tienden a aumentardebido a la vasculogénesis. El flujo de sangre en las vellosidades placentarias aumenta constantemente y el nivel de peróxido de hidrógeno (una abundancia de especies reactivas del oxígeno) es una señal importante que controla la vasculogénesis 11,12. En las complicaciones del embarazo, la falta de vasculogénesis genera hipoxia, y lo más importante, las variaciones intermitentes de oxigenación (hipoxia llamados / reoxigenación). Estas condiciones llevan a un aumento anormal en el estrés oxidativo, lo que compromete la placenta y del 13,14 viabilidad fetal. Las alteraciones que se someten las células del trofoblasto in vivo durante los episodios de hipoxia / reoxigenación se pueden imitar in vitro de la siguiente manera: citrofoblastos vellosidades se mantienen en condiciones de normoxia (8% O 2) hasta que se diferencian en sincitiotrofoblasto. A continuación, se someten a condiciones de hipoxia (0,5% de O 2) para 4 horas, seguido de un 18 hr adicional de normoxia (reoxigenación). El uso de este enfoque hipoxia / reoxigenación, trofoblastos exHiBit desregulado estado redox y el aumento de los niveles de apoptosis intrínseca 8, como se ha observado en ciertas complicaciones del embarazo. Por lo tanto, este es un útil modelo in vitro para evaluar nuevos enfoques preventivos y terapéuticos para combatir las complicaciones del embarazo asociados con la placenta hipoxia / reoxigenación. Células de la placenta producen melatonina, que tiene varias funciones importantes, tales como la capacidad de evitar el estrés oxidativo y la disfunción placentaria 15. A continuación, presentamos los modelos de aproximación y de células experimentales utilizados para demostrar el efecto protector de la melatonina en las células trofoblásticas de la placenta a nivel molecular, celular y funcional 8.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>Curved Metzenbaum Scissors</td>
			<td>Shandon</td>
			<td>9212</td>
			<td>surgical equipment (cell isolation) (2 units)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Splinter Forceps Fine 41/2in</td>
			<td>Fisherbrand</td>
			<td>13-812-42</td>
			<td>surgical equipment (cell isolation) (2 units)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Scissors 4.5 Str Dissection</td>
			<td>Fisherbrand</td>
			<td>08-940</td>
			<td>surgical equipment (cell isolation) (2 units)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Gauze Sponge 10cm X 10cm</td>
			<td>Cardinal Health</td>
			<td>361020733</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Oblong Glass Baking Dish</td>
			<td>Pyrex</td>
			<td>1105397</td>
			<td>Glassware (2.8L)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Funnel Buchner&#160;</td>
			<td>Coorstek Inc</td>
			<td>10-356E</td>
			<td>Glassware (114MM DIAMeter)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Watch Glass&#160;</td>
			<td>pyrex</td>
			<td>9985100EMD</td>
			<td>Glassware</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Formalin solution, neutral buffered, 10%</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>HT501128-4L</td>
			<td>histological tissue fixative solution</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Trypsinizing Flasks</td>
			<td>Wheaton</td>
			<td>355395</td>
			<td>Glassware (1 unit)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Disposable Culture Tubes</td>
			<td>Kimble</td>
			<td>73750-13100</td>
			<td>Glassware</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Borosilicate Glass Pasteur Pipet (22.8 Cm)&#160;</td>
			<td>Fisherbrand</td>
			<td>K63B1367820C</td>
			<td>Glassware</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>250 Ml Glass Beakers&#160;</td>
			<td>Fisherbrand</td>
			<td>KFS14005250</td>
			<td>Glassware</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Glass Media Bottles With Cap</td>
			<td>Fisherbrand</td>
			<td>KFS14395250</td>
			<td>Glassware (8 units)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>50 Ml Corex Tube&#160;</td>
			<td>Corning</td>
			<td>8422-A</td>
			<td>(1 unit)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>15 Ml Polystyrene Centrifuge Tube</td>
			<td>Corning</td>
			<td>430791</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>50 Ml Polystyrene Centrifuge Tube</td>
			<td>Corning</td>
			<td>430829</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>10ml Serological Pipet</td>
			<td>Corning</td>
			<td>11415038</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cell Strainer 100&#956;m Nylon</td>
			<td>Corning</td>
			<td>431752</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Absorbant Liner</td>
			<td>Scienceware</td>
			<td>1199918</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>500&#160;Ml Bottles Top Filter&#160;</td>
			<td>Corning</td>
			<td></td>
			<td>Pore: 0,22&#160;&#181;m / medium and HBSS preparation</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>2 Ml Criogenic Vials</td>
			<td>Corning</td>
			<td>430488</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Freezing Container, Nalgene Mr. Frosty</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>C1562-1EA</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Peristaltic Pump</td>
			<td>Pharmacia Fine Chemicals</td>
			<td>P3 model</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Shaking Water Bath</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>Model 127</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Vacuum Pump</td>
			<td>ABM</td>
			<td>4EKFS6CX-4</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium Chloride</td>
			<td>Fisherbrand</td>
			<td>EC231-598-3</td>
			<td>Saline solution 0.9%</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hank&#8217;s Buffered Salt Solution (Hbss)</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>H2387</td>
			<td>Quantity: 9.25 (one vial) for 1L of digestion solution</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hydroxypiperazineethansulphonic Acid (Hepes)</td>
			<td><a name="RANGE!B29">Life Technologies</a></td>
			<td>15630-080</td>
			<td>25mL (1M) for 1L of digestion solution</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Trypsin Type I</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>T8003</td>
			<td>9,888U</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Deoxyribonuclease Type Iv</td>
			<td>Roche</td>
			<td>10-104-159-001</td>
			<td>402,000U</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Calcium Chloride</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>C4901</td>
			<td>100mM</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Magnesium Sulfate</td>
			<td>Baker</td>
			<td>2500-01</td>
			<td>800mM</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dulbecco&#8217;s Modified Eagle Medium High Glucose (Dmem)</td>
			<td>Life Technologies</td>
			<td>10564-045</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Penicillin/Streptomycin Sulphate</td>
			<td>Hyclone</td>
			<td>SV30010</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fetal Bovine Serum</td>
			<td>Corning</td>
			<td>35-010-CV</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Percoll</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>P1644</td>
			<td>&#160;Density centrifugation media gradient. Volume: 36mL</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Isopropanol</td>
			<td>Acros</td>
			<td>42383-0010</td>
			<td>50mL</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dimethyl Sulfoxide</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>472301</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Automacs Magnetic Separator&#160;</td>
			<td>Miltenyi Biotec</td>
			<td>Model 003</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Automacs&#160;Columns&#160;</td>
			<td>Miltenyi Biotec</td>
			<td>130-021-101</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Automacs Running Buffer&#160;</td>
			<td>Miltenyi Biotec</td>
			<td>130-091-221</td>
			<td>http://www.miltenyibiotec.com/~/media/Images/Products/Import/0001100/IM0001131.ashx?force=1</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Automacs Rinsing Solution&#160;</td>
			<td>Miltenyi Biotec</td>
			<td>130-091-222</td>
			<td>http://www.miltenyibiotec.com/en/products-and-services/macs-cell-separation/cell-separation-buffers/automacs-rinsing-solution.aspx</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Anti-Human Hla Abc Purified Clone W6/32</td>
			<td>Affymetrix eBioscience</td>
			<td>14-9983-82</td>
			<td>anti-mouse antibody</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Anti Mouse Igg Microbeads</td>
			<td>Miltenyi Biotec</td>
			<td>130048401</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Multiple Well Plate -&#160; 6 Well With Lid</td>
			<td>Corning</td>
			<td>3335</td>
			<td>Cell Bind surface</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Multiple Well Plate -&#160; 24 Well With Lid</td>
			<td>Corning</td>
			<td>3337</td>
			<td>Cell Bind surface</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Multiple Well Plate -&#160; 96 Well With Lid</td>
			<td>Corning</td>
			<td>3300</td>
			<td>Cell Bind surface</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Modular Incubator Chamber&#160;</td>
			<td>Billups-Rothenberg</td>
			<td>MIC-101</td>
			<td>A set of two is necessary for simultaneous to generate normoxia and hypoxia/reoxygenation conditions</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Single Flow Meter</td>
			<td>Billups-Rothenberg</td>
			<td>SFM3001</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>50 Mm In-Line Filter&#160;</td>
			<td>Whatman</td>
			<td>6721-5010</td>
			<td>PTFE, pore: 1.0 &#181;m</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Gas Regulator</td>
			<td>Pro Star</td>
			<td>PRS301233</td>
			<td>A set of two is necessary for simultaneous to generate normoxia and hypoxia/reoxygenation conditions</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Gas Hose Class Vi Clear 5/16&#160;</td>
			<td>Parker</td>
			<td>100-05070102</td>
			<td>3 pieces with ~ 0.5 m</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>17 Mm Adjustable Gas Hose Clamp</td>
			<td>Tiewraps</td>
			<td>THCSS-16</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Normoxia Gas Cylinder&#160;</td>
			<td>Praxair</td>
			<td>NI CDOXR1U-K</td>
			<td>Size K (3rd trimester&#8216;s composition: 5% CO2, 8% O2, Bal. N2)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Normoxia Gas Cylinder&#160;</td>
			<td>Praxair</td>
			<td>NI CDOXR1U-K</td>
			<td>Size K (3rd trimester&#8216;s composition: 5% CO2, 0.5% O2, Bal. N2)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Oxygen Microelectrode Mi-730</td>
			<td>Microelectrodes INC</td>
			<td>84477</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Oxygen Adapter</td>
			<td>Microelectrodes INC</td>
			<td>3572</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>ROS Detection Reagent: CM-H2DCFDA&#160;</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>C-400</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>&#946;-hCG ELISA kit&#160;</td>
			<td>DRG internatinal</td>
			<td>EIA-4115</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Anti-Vimentin ourified antibody</td>
			<td>eBioscience</td>
			<td>14-9897</td>
			<td>Host: mouse</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Anti-Cytokeratin 7 (FITC) antibody&#160;</td>
			<td>Abcam</td>
			<td>ab119697</td>
			<td>Host: mouse</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Alexa Fluor 488 Goat Anti-mousse IgG H&#38;L antibody</td>
			<td>Life Technologies</td>
			<td>A-11029</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

human primary trophoblast cell culture model to study the protective effects of melatonin against hypoxia/reoxygenation-induced disruption

This protocol describes how villous cytotrophoblast cells are isolated from placentas at term by successive enzymatic digestions, followed by density centrifugation, media gradient isolation and immunomagnetic purification. As observed in vivo, mononucleated villous cytotrophoblast cells in primary culture differentiate into multinucleated syncytiotrophoblast cells after 72 hr. Compared to normoxia (8% O2), villous cytotrophoblast cells that undergo hypoxia/reoxygenation (0.5% / 8% O2) undergo increased oxidative stress and intrinsic apoptosis, similar to that observed in vivo in pregnancy complications such as preeclampsia, preterm birth, and intrauterine growth restriction. In this context, primary villous trophoblasts cultured under hypoxia/reoxygenation conditions represent a unique experimental system to better understand the mechanisms and signalling pathways that are altered in human placenta and facilitate the search for effective drugs that protect against certain pregnancy disorders. Human villous trophoblasts produce melatonin and express its synthesizing enzymes and receptors. Melatonin has been suggested as a treatment for preeclampsia and intrauterine growth restriction because of its protective antioxidant effects. In the primary villous cytotrophoblast cell model described in this paper, melatonin has no effect on trophoblast cells in normoxic state but restores the redox balance of syncytiotrophoblast cells disrupted by hypoxia/reoxygenation. Thus, human villous trophoblast cells in primary culture are an excellent approach to study the mechanisms behind the protective effects of melatonin on placental function during hypoxia/reoxygenation.

El aislamiento y la inmunopurificación de las células del citotrofoblasto velloso de la placenta normal plazo obtenidos por parto vaginal produjo 1 x 10 8 células viables. La placenta pesa 350 g, fue de 19 cm de diámetro, 4 cm de altura con forma discoidal y las membranas transparentes. No se detectó cotiledón malformación. El cordón umbilical tenía localización paracentral y una longitud de 56 cm. La pureza se evaluó por citometría de flujo utilizando vimentina y ...

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Human Primary Trophoblast Cell Culture Model to Study the Protective Effects of Melatonin Against Hypoxia/reoxygenation-induced Disruption

This manuscript presents a unique in vitro model of immunopurified human villous cytotrophoblast cells cultured under hypoxia/reoxygenation. This model is suitable to study the protective effects of promising treatments, such as melatonin, on pregnancy complications associated with increased oxidative stress and altered placental function.

Trofoblasto humana primaria cultivo celular modelo para estudiar los efectos protectores de la melatonina contra la hipoxia / reoxigenación interrupción inducida

This protocol describes how villous cytotrophoblast cells are isolated from placentas at term by successive enzymatic digestions, followed by density ...

Research

JoVE Journal

Developmental Biology

Efficient Gene Transfer in Chick Retinas for Primary Cell Culture Studies: An Ex-ovo Electroporation Approach

Efficient Gene Transfer in Chick Retinas for Primary Cell Culture Studies: An Ex-ovo Electroporation Approach

Transferencia génica eficaz en polluelo retinas para estudios de cultivo celular primario: Un<em&gt; Ex-ovo</em&gt; Enfoque electroporación

The cone photoreceptor-enriched cultures derived from embryonic chick retinas have become an indispensable tool for researchers around the world studying ...

Investigación

Biología del Desarrollo

Isolation and Quantitative Immunocytochemical Characterization of Primary Myogenic Cells and Fibroblasts from Human Skeletal Muscle

Aislamiento y Caracterización cuantitativa inmunocitoquímica de células miogénicas Primarias y fibroblastos de músculo esquelético humano

The repair and regeneration of skeletal muscle requires the action of satellite cells, which are the resident muscle stem cells. These can be isolated ...

Ex Vivo Culture of Pharyngeal Arches to Study Heart and Muscle Progenitors and Their Niche

Ex Vivo Culture of Pharyngeal Arches to Study Heart and Muscle Progenitors and Their Niche

Ex Vivo Cultura de faríngea Arcos para el Estudio de corazón y músculo Progenitores y su nicho

The pharyngeal mesoderm of developing embryos contributes to broad regions of head and heart musculature. We have developed a novel method to study head ...

Assessment of Maternal Vascular Remodeling During Pregnancy in the Mouse Uterus

Evaluación del Materno remodelado vascular durante el embarazo en el útero de ratón

The placenta mediates the exchange of factors such as gases and nutrients between mother and fetus and has specific demands for supply of blood from the ...

Primary Endodermal Epithelial Cell Culture from the Yolk Sac Membrane of Japanese Quail Embryos

Endodérmico primario de células epiteliales Cultura de la membrana del saco vitelino de embriones de codorniz japonesa

We established an endodermal epithelial cell culture model (EEC) for studying the function of certain enzymes and proteins in mediating nutrient ...

Large-Scale Production of Cardiomyocytes from Human Pluripotent Stem Cells Using a Highly Reproducible Small Molecule-Based Differentiation Protocol

La producción a gran escala de los cardiomiocitos de células madre pluripotentes utilizando un pequeño protocolo de diferenciación basada en la molécula altamente reproducible

Maximizing the benefit of human pluripotent stem cells (hPSCs) for research, disease modeling, pharmaceutical and clinical applications requires robust ...

Using Primary Neurosphere Cultures to Study Primary Cilia

El uso de cultivos de neuroesferas primarias estudian primaria cilios

The primary cilium is fundamentally important for the proliferation of neural stem/progenitor cells and for neuronal differentiation during embryonic, ...

Isolation and Characterization of Primary Rat Valve Interstitial Cells: A New Model to Study Aortic Valve Calcification

Células intersticiales de la válvula de aislamiento y caracterización de rata principal: un nuevo modelo para el estudio de calcificación de la válvula aórtica

Calcific aortic valve disease (CAVD) is characterized by the progressive thickening of the aortic valve leaflets. It is a condition frequently found in ...

The Isolation and Culture of Primary Epicardial Cells Derived from Human Adult and Fetal Heart Specimens

El aislamiento y cultivo de células epicárdicas principales derivan de ejemplares de corazón humano adulto y Fetal

The epicardium, an epithelial cell layer covering the myocardium, has an essential role during cardiac development, as well as in the repair response of ...

Organotypic Culture Method to Study the Development Of Embryonic Chicken Tissues

Cultura Organotypic método para estudiar el desarrollo de tejidos de embrión de pollo

The embryonic chicken is commonly used as a reliable model organism for vertebrate development. Its accessibility and short incubation period makes it ...