Name: functional characterization of regulatory macrophages that inhibit graft-reactive immunity
Uploaded: 2017-06-07T12:30:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Functional Characterization of Regulatory Macrophages That Inhibit Graft-reactive Immunity at JoVE.com

Wij erkennen de technische bijdragen van de Flow Cytometry, Microchirurgie, en Bio-repository / Patologie Centra of Excellence in onderzoek in Mount Sinai. Dit werk werd ondersteund door de COST Action BM1305: Actie om de Tolerogene Therapieën van de Cel te concentreren en te versnellen (FACTT), de ontwikkelingsfondsen van het Sinai Recanati / Miller Transplantatie Instituut, Ministerio de Ciencia en Innovacion SAF2013-48834-R en SAF2016-80031-R JO

<html> In deze studie zijn muizen gehuisvest in overeenstemming met de richtlijnen van de Verenigde Staten van Landbouw en de aanbevelingen van de Public Health Service Guide voor de zorg en het gebruik van laboratoriumdieren. Alle experimentele technieken met betrekking tot dierlijk gebruik werden uitgevoerd in overeenstemming met de protocols van de Sinai School of Medicine van de Instituut voor Dierenartsen en Inrichtingen (IACUC). 1. Media Voorbereiding <ol><li> Bereid compleet RPMI 164...

<ol>
	<li>Jose, M. D., Ikezumi, Y., van Rooijen, N., Atkins, R. C., Chadban, S. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Macrophages+act+as+effectors+of+tissue+damage+in+acute+renal+allograft+rejection.">Macrophages act as effectors of tissue damage in acute renal allograft rejection.</a> Transplantation. 76 (7), 1015-1022 (2003).</li><li>Oberbarnscheidt, M. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Non-self+recognition+by+monocytes+initiates+allograft+rejection.">Non-self recognition by monocytes initiates allograft rejection.</a> J Clin Invest. 124 (8), 3579-3589 (2014).</li><li>Garcia, M. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Monocytic+suppressive+cells+mediate+cardiovascular+transplantation+tolerance+in+mice.">Monocytic suppressive cells mediate cardiovascular transplantation tolerance in mice.</a> J Clin Invest. 120 (7), 2486-2496 (2010).</li><li>Conde, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=DC-SIGN(+)+Macrophages+Control+the+Induction+of+Transplantation+Tolerance.">DC-SIGN(+) Macrophages Control the Induction of Transplantation Tolerance.</a> Immunity. 42 (6), 1143-1158 (2015).</li><li>Ginhoux, F., Schultze, J. L., Murray, P. J., Ochando, J., Biswas, S. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=New+insights+into+the+multidimensional+concept+of+macrophage+ontogeny,+activation+and+function.">New insights into the multidimensional concept of macrophage ontogeny, activation and function.</a> Nat Immunol. 17 (1), 34-40 (2016).</li><li>Quah, B. J., Wijesundara, D. K., Ranasinghe, C., Parish, C. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+use+of+fluorescent+target+arrays+for+assessment+of+T+cell+responses+in+vivo.">The use of fluorescent target arrays for assessment of T cell responses in vivo.</a> J Vis Exp. (88), e51627 (2014).</li><li>Tario, J. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Optimized+staining+and+proliferation+modeling+methods+for+cell+division+monitoring+using+cell+tracking+dyes.">Optimized staining and proliferation modeling methods for cell division monitoring using cell tracking dyes.</a> J Vis Exp. (70), e4287 (2012).</li><li>Poujol, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Flow+cytometric+evaluation+of+lymphocyte+transformation+test+based+on+5-ethynyl-2'deoxyuridine+incorporation+as+a+clinical+alternative+to+tritiated+thymidine+uptake+measurement.">Flow cytometric evaluation of lymphocyte transformation test based on 5-ethynyl-2'deoxyuridine incorporation as a clinical alternative to tritiated thymidine uptake measurement.</a> J Immunol Methods. 415, 71-79 (2014).</li><li>Last'ovicka, J., Budinsky, V., Spisek, R., Bartunkova, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Assessment+of+lymphocyte+proliferation:+CFSE+kills+dividing+cells+and+modulates+expression+of+activation+markers.">Assessment of lymphocyte proliferation: CFSE kills dividing cells and modulates expression of activation markers.</a> Cell Immunol. 256 (1-2), 79-85 (2009).</li><li>Corry, R. J., Winn, H. J., Russell, P. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Primarily+vascularized+allografts+of+hearts+in+mice.+The+role+of+H-2D,+H-2K,+and+non-H-2+antigens+in+rejection.">Primarily vascularized allografts of hearts in mice. The role of H-2D, H-2K, and non-H-2 antigens in rejection.</a> Transplantation. 16 (4), 343-350 (1973).</li><li>Liu, F., Kang, S. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Heterotopic+heart+transplantation+in+mice.">Heterotopic heart transplantation in mice.</a> J Vis Exp. (6), e238 (2007).</li><li>Ochando, J., Conde, P., Bronte, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Monocyte-Derived+Suppressor+Cells+in+Transplantation.">Monocyte-Derived Suppressor Cells in Transplantation.</a> Curr Transplant Rep. 2 (2), 176-183 (2015).</li><li>Gallina, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tumors+induce+a+subset+of+inflammatory+monocytes+with+immunosuppressive+activity+on+CD8++T+cells.">Tumors induce a subset of inflammatory monocytes with immunosuppressive activity on CD8+ T cells.</a> J Clin Invest. 116 (10), 2777-2790 (2006).</li><li>Huang, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Gr-1+CD115++immature+myeloid+suppressor+cells+mediate+the+development+of+tumor-induced+T+regulatory+cells+and+T-cell+anergy+in+tumor-bearing+host.">Gr-1+CD115+ immature myeloid suppressor cells mediate the development of tumor-induced T regulatory cells and T-cell anergy in tumor-bearing host.</a> Cancer Res. 66 (2), 1123-1131 (2006).</li><li>Luan, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Monocytic+myeloid-derived+suppressor+cells+accumulate+in+renal+transplant+patients+and+mediate+CD4(+)+Foxp3(+)+Treg+expansion.">Monocytic myeloid-derived suppressor cells accumulate in renal transplant patients and mediate CD4(+) Foxp3(+) Treg expansion.</a> Am J Transplant. 13 (12), 3123-3131 (2013).</li><li>Tario, J. D., Muirhead, K. A., Pan, D., Munson, M. E., Wallace, P. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tracking+immune+cell+proliferation+and+cytotoxic+potential+using+flow+cytometry.">Tracking immune cell proliferation and cytotoxic potential using flow cytometry.</a> Methods Mol Biol. 699, 119-164 (2011).</li></ol>

Dit protocol beschrijft de methoden die we gebruikt om immuun-infiltrerende myeloïde cel subsets te immunocharacteriseren in een experimenteel murine model van harttransplantatie, die ook van toepassing is op andere weefsels in verschillende muizen experimentele modellen. Lage drukcellen sorteren bij 20 psi was de voorkeursmethode om een ​​goede opbrengst van subgroepen met zuivere cellen te isoleren. Het behouden van de zuiverheid van elke myeloïde subset is essentieel om afdoende resultaten van de onderdrukkende...

Dit protocol beschrijft in vitro technieken om de functie van weefsel-infiltrerende macrofagen die geïsoleerd zijn van cardiale allografen te bestuderen, volgens hun vermogen om T-cel responsen te moduleren. In de literatuur worden fluorescerende celopsporingskleurstoffen in combinatie met flowcytometrie beschreven, krachtige hulpmiddelen om de onderdrukkende functie van specifieke celsoorten in vitro en in vivo te bestuderen . Ons protocol volgt de carboxyfluoresceïne succinimidylester (CFSE) methode voor het monitoren van lymfocyt proliferatie in vitro . Wanneer een CFSE-gemarkeerde cel verdeelt, verwerft zijn nageslacht het halve aantal carboxyfluoresceïne-gelabelde moleculen 6 . De bijbehorende afname in celfluorescentie door flowcytometrie kan worden gebruikt om celverdeling te beoordelen, de capaciteit van onderdrukkende macrofagen te monitoren om T-cel immuunresponsen te moduleren. Aangezien CFSE een fluoresceïne-gebaseerde kleurstof is, is het compatibel met een brOad reeks van andere fluorochromen, waardoor het van toepassing is op multi-color flow cytometry. De juiste keuze van fluorochromen voor fenotyping is ook belangrijk om overmatige spectrale overlap te vermijden en het onvermogen om antilichaam-positieve cellen te herkennen, met name met zichtbare proteïne kleurstoffen zoals CFSE 7 . Er zijn vele voordelen van het gebruik van fluorescerende kleurstoffen over alternatieve technieken die cel proliferatie meten, zoals de thymidine incorporation assay, die radioactief gelabelde thymidine (TdR) 8 gebruikt . Deze bepaling maakt gebruik van tritiated thymidine ( 3 H-TdR) die in de nieuwe strengen van chromosomaal DNA is opgenomen tijdens de mitotische celdeling. Een veiligheidsprobleem in verband met deze analyse is het gebruik van radio-isotopen, aangezien een scintillatie-beta-teller gebruikt wordt om de radioactiviteit te meten in DNA die uit de cellen is hersteld om de mate van celverdeling te bepalen. Methodologisch, de tritiated thymidine assAy is niet flexibel genoeg om belangrijke klinische laboratorium beperkingen aan te passen, zoals een laag aantal cellen en vertraagde analyse na kleuring. Integendeel, CFSE-kleuring is aangetoond dat cel proliferatie voorkomt en interfereren met kritische activatie markers, zoals CD69, HLA-DR en CD25 9 . Daarom begrijpen de voordelen en beperkingen van elke methodologie, met name in multicolor studies waarbij meerdere kleurstoffen worden gebruikt om verschillende celtypes te volgen, om kritische en reproduceerbare resultaten te verkrijgen.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" width="459">
	<colgroup>
		<col />
		<col />
		<col />
		<col />
	</colgroup>
	<tbody>
		<tr height="38">
			<td height="38" style="height:39px;width:147px;">RPMI 1640 Media</td>
			<td style="width:111px;">Life Technologies</td>
			<td style="width:123px;">11875119</td>
			<td style="width:81px;"></td>
		</tr>
		<tr height="38">
			<td height="38" style="height:39px;width:147px;">10 % FBS</td>
			<td style="width:111px;">Life Technologies</td>
			<td style="width:123px;">26140-079</td>
			<td style="width:81px;"></td>
		</tr>
		<tr height="34">
			<td height="34" style="height:35px;width:147px;">1000X 2-mercaptoethanol</td>
			<td style="width:111px;">Life Technologies</td>
			<td style="width:123px;">21985023</td>
			<td style="width:81px;"></td>
		</tr>
		<tr height="38">
			<td height="38" style="height:39px;width:147px;">100X Pen/Strep</td>
			<td style="width:111px;">Life Technologies</td>
			<td style="width:123px;">15140122</td>
			<td style="width:81px;"></td>
		</tr>
		<tr height="38">
			<td height="38" style="height:39px;width:147px;">100X L-glutamine</td>
			<td style="width:111px;">Life Technologies</td>
			<td style="width:123px;">25030081</td>
			<td style="width:81px;"></td>
		</tr>
		<tr height="34">
			<td height="34" style="height:35px;width:147px;">100X Non Esential amino acids</td>
			<td style="width:111px;">Corning</td>
			<td style="width:123px;">25025039</td>
			<td style="width:81px;"></td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:23px;width:147px;">1M HEPES buffer&#160;</td>
			<td style="width:111px;">Corning</td>
			<td style="width:123px;">25060CL</td>
			<td style="width:81px;"></td>
		</tr>
		<tr height="38">
			<td height="38" style="height:39px;width:147px;">100mM Sodium Pyruvate</td>
			<td style="width:111px;">ThermoScientific</td>
			<td style="width:123px;">SH30239.01</td>
			<td style="width:81px;"></td>
		</tr>
		<tr height="38">
			<td height="38" style="height:39px;width:147px;">Penicilin/Streptavidyn</td>
			<td style="width:111px;">ThermoScientific</td>
			<td>15140122</td>
			<td style="width:81px;"></td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:23px;width:147px;">Collagenese A</td>
			<td style="width:111px;">Roche</td>
			<td style="width:123px;">70381322</td>
			<td style="width:81px;"></td>
		</tr>
		<tr height="34">
			<td height="34" style="height:35px;width:147px;">DPBS (w/o calcium&#38;magnesium)</td>
			<td style="width:111px;">Corning</td>
			<td style="width:123px;">21031CV</td>
			<td style="width:81px;"></td>
		</tr>
		<tr height="38">
			<td height="38" style="height:39px;width:147px;">70 micron Cell strainer</td>
			<td style="width:111px;">Fisher</td>
			<td style="width:123px;">22363548</td>
			<td style="width:81px;"></td>
		</tr>
		<tr height="38">
			<td height="38" style="height:39px;width:147px;">ACK lysis buffer</td>
			<td style="width:111px;">Life Technologies</td>
			<td style="width:123px;">A10492-01</td>
			<td style="width:81px;"></td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:23px;">DAPI</td>
			<td style="width:111px;">Sigma</td>
			<td style="width:123px;">32670-5mg-F</td>
			<td style="width:81px;"></td>
		</tr>
		<tr height="18">
			<td height="18" style="height:19px;width:147px;">CFSE-FITC</td>
			<td style="width:111px;">Invitrogen</td>
			<td style="width:123px;">C34554</td>
			<td style="width:81px;"></td>
		</tr>
		<tr height="34">
			<td height="34" style="height:35px;width:147px;">Dynabeads Mouse T cell activator CD3/CD28</td>
			<td style="width:111px;">Life Technologies</td>
			<td style="width:123px;">11452D</td>
			<td style="width:81px;"></td>
		</tr>
		<tr height="38">
			<td height="38" style="height:39px;width:147px;">96 well&#160; U-bottom plate</td>
			<td style="width:111px;">Corning</td>
			<td style="width:123px;">353077</td>
			<td style="width:81px;"></td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:23px;width:147px;">Antibodies:</td>
			<td style="width:111px;"></td>
			<td style="width:123px;"></td>
			<td style="width:81px;"></td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:23px;width:147px;">anti-Ly6C-APC</td>
			<td style="width:111px;">eBioscience</td>
			<td style="width:123px;">175932-80</td>
			<td style="width:81px;"></td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:23px;width:147px;">anti-Ly6G-Pe/Cy7</td>
			<td style="width:111px;">Biolegend</td>
			<td style="width:123px;">127617</td>
			<td style="width:81px;"></td>
		</tr>
		<tr height="38">
			<td height="38" style="height:39px;width:147px;">anti-CD11b-Percp/Cy5.5</td>
			<td style="width:111px;">eBioscience</td>
			<td style="width:123px;">45011282</td>
			<td style="width:81px;"></td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:23px;width:147px;">anti-CD45-APC/Cy7</td>
			<td style="width:111px;">eBioscience</td>
			<td style="width:123px;">47045182</td>
			<td style="width:81px;"></td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:23px;width:147px;">anti-CD4-APC</td>
			<td style="width:111px;">eBioscience</td>
			<td style="width:123px;">17004181</td>
			<td style="width:81px;"></td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:23px;width:147px;">anti-CD8-P/ Cy7</td>
			<td style="width:111px;">eBioscience</td>
			<td style="width:123px;">25008181</td>
			<td style="width:81px;"></td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:23px;width:147px;">LSRII Flow Cytometer</td>
			<td style="width:111px;">BD Bioscience</td>
			<td style="width:123px;"></td>
			<td style="width:81px;"></td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:23px;width:147px;">FACSDiva Software</td>
			<td style="width:111px;">BD Bioscience</td>
			<td style="width:123px;"></td>
			<td style="width:81px;"></td>
		</tr>
		<tr height="38">
			<td height="38" style="height:39px;width:147px;">C57BL/6-Foxp3tm1Flv/J&#160;</td>
			<td style="width:111px;">The Jackson Laboratory</td>
			<td style="width:123px;">008374</td>
			<td style="width:81px;"></td>
		</tr>
		<tr height="38">
			<td height="38" style="height:39px;width:147px;">C57BL/6</td>
			<td style="width:111px;">The Jackson Laboratory</td>
			<td style="width:123px;">000664</td>
			<td style="width:81px;"></td>
		</tr>
		<tr height="38">
			<td height="38" style="height:39px;width:147px;">Balb/c</td>
			<td style="width:111px;">The Jackson Laboratory</td>
			<td style="width:123px;">000651</td>
			<td style="width:81px;"></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

functional characterization of regulatory macrophages that inhibit graft-reactive immunity

Macrofage accumulatie in getransplanteerde organen is al lang herkend als een kenmerk van allograft afwijzing 1 . Immunogene monocyten infiltreren de allotransplantatie vroeg na transplantatie, bevestig een transplantaatreactieve reactie tegen het getransplanteerde orgaan en start orgaanafstoting 2 . Recente gegevens suggereren dat onderdrukkende macrofagen succesvolle langetermijntransplantatie 3 vergemakkelijken en nodig zijn voor de inductie van transplantatietolerantie 4 . Dit suggereert een multidimensionaal concept van macrofage ontogenie, activatie en functie, die een nieuwe routekaart vereist voor de isolatie en analyse van macrofage functie 5 . Vanwege de plasticiteit van macrofagen is het nodig een methode te geven om macrofagen te isoleren en te karakteriseren, afhankelijk van de weefselomgeving, en om hun functies te definiëren volgens verschillende scenario&#39;s. Hier worden we beschrevenEen protocol voor immuun karakterisering van transfusie-infiltrerende macrofagen en de methoden die we functioneerden om hun capaciteit te evalueren om CD8 + T proliferatie te remmen en om de groei van CD4 + Foxp3 + Treg in vitro te bevorderen.

De representatieve resultaten tonen de gate strategie beschreven in het bovenstaande protocol. Resultaten tonen ook de analyse van de T-cel proliferatie activiteit na de co-cultuur met transplantatie-infiltrerende macrofagen. De in vitro onderdrukkende capaciteit van macrofaag subsets werd geanalyseerd in figuur 4 . De resultaten wijzen erop dat de Ly6C lo Ly6G - macrofagen verkregen uit getolereerde ontvangers onderdrukkend zijn. De result...

Watch this Scientific Journal Video about Functional Characterization of Regulatory Macrophages That Inhibit Graft-reactive Immunity at JoVE.com

Functional Characterization of Regulatory Macrophages That Inhibit Graft-reactive Immunity

Macrofagen zijn plastic cellen van het hematopoietische systeem die een cruciale rol spelen in beschermende immuniteit en homeostase. In dit rapport beschrijven we geoptimaliseerde in vitro technieken voor het fenotypisch en functioneel karakteriseren van transplantatie-infiltrerende regulerende macrofagen die zich in het getransplanteerde orgaan verzamelen onder tolerogene omstandigheden.

Functionele karakterisering van regulerende macrofagen die de transplantaatreactieve immuniteit verhinderen

Macrophage accumulation in transplanted organs has long been recognized as a feature of allograft rejection1. Immunogenic monocytes infiltrate the ...

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

Isolation and Characterization of Dendritic Cells and Macrophages from the Mouse Intestine

Isolatie en karakterisering van dendritische cellen en macrofagen van de muis Darm

Within the intestine reside unique populations of innate and adaptive immune cells that are involved in promoting tolerance towards commensal flora and ...

Forward Genetics Screens Using Macrophages to Identify Toxoplasma gondii Genes Important for Resistance to IFN-&#947;-Dependent Cell Autonomous Immunity

Forward Genetics Screens Using Macrophages to Identify Toxoplasma gondii Genes Important for Resistance to IFN-ÃƒÅ½Ã‚Â³-Dependent Cell Autonomous Immunity

Forward Genetica Schermen Met behulp van macrofagen te identificeren<em&gt; Toxoplasma gondii</em&gt; Genen Belangrijk voor Weerstand tegen IFN-γ-Dependent Cell Autonome Immuniteit

Toxoplasma gondii, the causative agent of toxoplasmosis, is an obligate intracellular protozoan pathogen. The parasite invades and replicates within ...

Isolation, Characterization and Functional Examination of the Gingival Immune Cell Network

Isolatie, karakterisering en functionele onderzoek van het tandvlees Immune Cell Network

Immune cell networks in tissues play a vital role in mediating local immunity and maintaining tissue homeostasis, yet little is known of the resident ...

Phenotypic and Functional Analysis of Activated Regulatory T Cells Isolated from Chronic Lymphocytic Choriomeningitis Virus-infected Mice

Fenotypische en functionele analyse van geactiveerde regulatoire T-cellen Geïsoleerd van Chronische Lymfatische choriomeningitis-virus geïnfecteerde muizen

Regulatory T (Treg) cells, which express Foxp3 as a transcription factor, are subsets of CD4+ T cells. Treg cells play crucial roles in immune tolerance ...

The Isolation, Differentiation, and Quantification of Human Antibody-secreting B Cells from Blood: ELISpot as a Functional Readout of Humoral Immunity

De isolatie, differentiatie en kwantificering van menselijk antilichaam-uitscheidende B-cellen uit bloed: ELISpot als functionele Uitlezing van humorale immuniteit

The hallmark of humoral immunity is to generate functional ASCs, which synthesize and secrete Abs specific to an antigen (Ag), such as a pathogen, and are ...

Phenotypic Characterization of Macrophages from Rat Kidney by Flow Cytometry

Fenotypische karakterisering van macrofagen van Rat Kidney door flowcytometrie

There is increasing evidence suggesting the important role of inflammation and, subsequently, macrophages in the development and progression of renal ...

Using X-ray Crystallography, Biophysics, and Functional Assays to Determine the Mechanisms Governing T-cell Receptor Recognition of Cancer Antigens

Via röntgenkristallografie, Biophysics en functionele testen om de mechanismen van T-cel-receptorherkenning van kankerantigenen bepalen

Human CD8+ cytotoxic T lymphocytes (CTLs) are known to play an important role in tumor control. In order to carry out this function, the cell ...

Isolation, Characterization, and Purification of Macrophages from Tissues Affected by Obesity-related Inflammation

Isolatie, karakterisering en zuivering van macrofagen uit weefsels beïnvloed door zwaarlijvigheidbetrekking hebbende ontsteking

Obesity promotes a chronic inflammatory state that is largely mediated by tissue-resident macrophages as well as monocyte-derived macrophages. ...

Isolation and Characterization of Neutrophil-derived Microparticles for Functional Studies

Isolatie en karakterisatie van neutrofiele afkomstige deeltjes voor functionele Studies

Polymorphonuclear neutrophil-derived microparticles (PMN)-MPs) are lipid bilayer, spherical microvesicles with sizes ranging from 50&#8211;1,000 nm in ...

Flow Cytometric Measurement Of ROS Production In Macrophages In Response To Fc&#947;R Cross-linking

Flow Cytometric Measurement Of ROS Production In Macrophages In Response To FcÃƒÅ½Ã‚Â³R Cross-linking

Cytometrische Stroommeting van ROS productie In macrofagen In reactie op FcγR dwarsbinding

The oxidative or respiratory burst is used to describe the rapid consumption of oxygen and generation of reactive oxygen species (ROS) by phagocytes in ...