Name: assays for studying the role of vitronectin in bacterial adhesion and serum resistance
Uploaded: 2018-10-16T12:30:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Assays for Studying the Role of Vitronectin in Bacterial Adhesion and Serum Resistance at JoVE.com

Diese Arbeit wurde unterstützt durch Zuschüsse der Stiftung Anna und Edwin Berger, Lars Hierta, O.E und Edla Johansson Stiftung, dem schwedischen Medical Research Council (gewähren Nummer K2015-57 X-03163-43-4, www.vr.se), der Krebs-Stiftung an der Universität Krankenhaus in Malmö, die Physiographische Gesellschaft (Forssman Stiftung) und Skåne County Council Research and Development Foundation.

1. Analyse der Vn als eine bakterielle Oberfläche Protein-Ligand
<ol><li>
Erkennung von Vn-Bindung an der bakteriellen Oberfläche mit Durchflusszytometrie Hinweis: In der Durchflusszytometrie verwendeten wir Side Scatter und forward Scatter um positive Ereignisse Tor. Untersuchen die Wechselwirkungen mit Vn Hif klinische Isolate (n = 10)7 ausgewählt wurden, zusammen mit E. Coli BL21 (DE3) als Negativkontrolle (Abb. 1A...

<ol>
	<li>Singh, B., Su, Y. C., Riesbeck, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Vitronectin+in+bacterial+pathogenesis:+a+host+protein+used+in+complement+escape+and+cellular+invasion.">Vitronectin in bacterial pathogenesis: a host protein used in complement escape and cellular invasion.</a> Mol. Microbiol. 78 (3), 545-560 (2010).</li><li>Hallstrom, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Conserved+Patterns+of+Microbial+Immune+Escape:+Pathogenic+Microbes+of+Diverse+Origin+Target+the+Human+Terminal+Complement+Inhibitor+Vitronectin+via+a+Single+Common+Motif.">Conserved Patterns of Microbial Immune Escape: Pathogenic Microbes of Diverse Origin Target the Human Terminal Complement Inhibitor Vitronectin via a Single Common Motif.</a> PloS one. 11 (1), 0147709 (2016).</li><li>Su, Y. C., Hallstrom, B. M., Bernhard, S., Singh, B., Riesbeck, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Impact+of+sequence+diversity+in+the+Moraxella+catarrhalis.+UspA2/UspA2H+head+domain+on+vitronectin+binding+and+antigenic+variation.">Impact of sequence diversity in the Moraxella catarrhalis. UspA2/UspA2H head domain on vitronectin binding and antigenic variation.</a> Micro. Infect. 15 (5), 375-387 (2013).</li><li>Singh, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+fine-tuned+interaction+between+trimeric+autotransporter+haemophilus+surface+fibrils+and+vitronectin+leads+to+serum+resistance+and+adherence+to+respiratory+epithelial+cells.">A fine-tuned interaction between trimeric autotransporter haemophilus surface fibrils and vitronectin leads to serum resistance and adherence to respiratory epithelial cells.</a> Infect. Immun. 82 (6), 2378-2389 (2014).</li><li>Kohler, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Binding+of+vitronectin+and+Factor+H+to+Hic+contributes+to+immune+evasion+of+Streptococcus+pneumoniae.+serotype+3.">Binding of vitronectin and Factor H to Hic contributes to immune evasion of Streptococcus pneumoniae. serotype 3.</a> Thromb. haemostasis. 113 (1), 125-142 (2015).</li><li>Onelli, E., Citterio, S., O'Connor, J. E., Levi, M., Sgorbati, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Flow+cytometry,+sorting+and+immunocharacterization+with+proliferating+cell+nuclear+antigen+of+cycling+and+non-cycling+cells+in+synchronized+pea+root+tips.">Flow cytometry, sorting and immunocharacterization with proliferating cell nuclear antigen of cycling and non-cycling cells in synchronized pea root tips.</a> Planta. 202 (2), 188-195 (1997).</li><li>Al-Jubair, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Haemophilus+influenzae+Type+f+Hijacks+Vitronectin+Using+Protein+H+To+Resist+Host+Innate+Immunity+and+Adhere+to+Pulmonary+Epithelial+Cells.">Haemophilus influenzae Type f Hijacks Vitronectin Using Protein H To Resist Host Innate Immunity and Adhere to Pulmonary Epithelial Cells.</a> J. Immunol. 195 (12), 5688-5695 (2015).</li><li>Martinez-Martin, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Technologies+for+Proteome-Wide+Discovery+of+Extracellular+Host-Pathogen+Interactions.">Technologies for Proteome-Wide Discovery of Extracellular Host-Pathogen Interactions.</a> J. Immunol. Res. 2017, 2197615 (2017).</li><li>Boleij, A., Laarakkers, C. M., Gloerich, J., Swinkels, D. W., Tjalsma, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Surface-affinity+profiling+to+identify+host-pathogen+interactions.">Surface-affinity profiling to identify host-pathogen interactions.</a> Infect. Immun. 79 (12), 4777-4783 (2011).</li><li>Abdiche, Y., Malashock, D., Pinkerton, A., Pons, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Determining+kinetics+and+affinities+of+protein+interactions+using+a+parallel+real-time+label-free+biosensor,+the+Octet.">Determining kinetics and affinities of protein interactions using a parallel real-time label-free biosensor, the Octet.</a> Anal. Biochem. 377 (2), 209-217 (2008).</li><li>Sultana, A., Lee, J. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Measuring+protein-protein+and+protein-nucleic+Acid+interactions+by+biolayer+interferometry.">Measuring protein-protein and protein-nucleic Acid interactions by biolayer interferometry.</a> Cur. Prot. Prot. Sc. 79, 11-26 (2015).</li><li>Su, Y. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Haemophilus+influenzae+acquires+vitronectin+via+the+ubiquitous+Protein+F+to+subvert+host+innate+immunity.">Haemophilus influenzae acquires vitronectin via the ubiquitous Protein F to subvert host innate immunity.</a> Mol. Microbiol. 87 (6), 1245-1266 (2013).</li><li>Ronander, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Nontypeable+Haemophilus+influenzae+adhesin+protein+E:+characterization+and+biological+activity.">Nontypeable Haemophilus influenzae adhesin protein E: characterization and biological activity.</a> J. Infect. Dis. 199 (4), 522-531 (2009).</li><li>Sezonov, G., Joseleau-Petit, D., D'Ari, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Escherichia+coli+physiology+in+Luria-Bertani+broth.">Escherichia coli physiology in Luria-Bertani broth.</a> J. Bact. 189 (23), 8746-8749 (2007).</li><li>Fleury, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Identification+of+a+Haemophilus+influenzae+factor+H-Binding+lipoprotein+involved+in+serum+resistance.">Identification of a Haemophilus influenzae factor H-Binding lipoprotein involved in serum resistance.</a> J. Imunol. 192 (12), 5913-5923 (2014).</li><li>Abdiche, Y., Malashock, D., Pinkerton, A., Pons, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Determining+kinetics+and+affinities+of+protein+interactions+using+a+parallel+real-time+label-free+biosensor,+the+Octet.">Determining kinetics and affinities of protein interactions using a parallel real-time label-free biosensor, the Octet.</a> Anal. Biochem. 377 (2), 209-217 (2008).</li><li>Rich, R. L., Myszka, D. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Higher-throughput,+label-free,+real-time+molecular+interaction+analysis.">Higher-throughput, label-free, real-time molecular interaction analysis.</a> Anal. Biochem. 361 (1), 1-6 (2007).</li><li>McNamara, G., Difilippantonio, M. J., Ried, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Microscopy+and+image+analysis.">Microscopy and image analysis.</a> Current protoc. Hum. Genet. , 4 (2005).</li><li>Lieber, M., Smith, B., Szakal, A., Nelson-Rees, W., Todaro, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+continuous+tumor-cell+line+from+a+human+lung+carcinoma+with+properties+of+type+II+alveolar+epithelial+cells.">A continuous tumor-cell line from a human lung carcinoma with properties of type II alveolar epithelial cells.</a> International J. Canc. 17 (1), 62-70 (1976).</li><li>Foster, K. A., Oster, C. G., Mayer, M. M., Avery, M. L., Audus, K. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Characterization+of+the+A549+cell+line+as+a+type+II+pulmonary+epithelial+cell+model+for+drug+metabolism.">Characterization of the A549 cell line as a type II pulmonary epithelial cell model for drug metabolism.</a> Exp. Cell Res. 243 (2), 359-366 (1998).</li><li>Su, Y. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Haemophilus+influenzae+P4+Interacts+With+Extracellular+Matrix+Proteins+Promoting+Adhesion+and+Serum+Resistance.">Haemophilus influenzae P4 Interacts With Extracellular Matrix Proteins Promoting Adhesion and Serum Resistance.</a> J. Infect. Dis. 213 (2), 314-323 (2016).</li><li>Singh, B., Al-Jubair, T., Morgelin, M., Thunnissen, M. M., Riesbeck, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+unique+structure+of+Haemophilus+influenzae+protein+E+reveals+multiple+binding+sites+for+host+factors.">The unique structure of Haemophilus influenzae protein E reveals multiple binding sites for host factors.</a> Infect. Immun. 81 (3), 801-814 (2013).</li><li>Vellaiswamy, M., Campagna, B., Raoult, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Transmission+electron+microscopy+as+a+tool+for+exploring+bacterial+proteins:+model+of+RickA+in+Rickettsia+conorii.">Transmission electron microscopy as a tool for exploring bacterial proteins: model of RickA in Rickettsia conorii.</a> New Microbiolog. 34 (2), 209-218 (2011).</li><li>Pinne, M., Haake, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Immuno-fluorescence+assay+of+leptospiral+surface-exposed+proteins.">Immuno-fluorescence assay of leptospiral surface-exposed proteins.</a> J. Vis. Exp. JoVE. (53), (2011).</li></ol>

Bakterielle Krankheitserreger rekrutieren Vn an der Zelloberfläche und Ergänzung der Regler zur Verhinderung der Ablagerung von Komplementfaktoren und Fertigstellung der Membrane Angriff Komplex2zu nutzen. VL fungiert auch als eine Brücke Molekül zwischen bakteriellen Oberflächenproteine und Host-Zell-Oberfläche Rezeptoren, so dass Krankheitserreger an der Oberfläche der Epithelzellen haften und anschließend vermitteln Verinnerlichung. In dieser Studie beschreiben wir Protokolle, die verwe...

Vitronectin (Vn) ist eine wichtige menschliche Glykoprotein Homöostase per Verordnung das fibrinolytische System beteiligt. VL fungiert auch als Regulator Ergänzung durch Hemmung des terminal Ergänzung Weges während der C5b6-7 Komplexbildung und C9 Polymerisation. Verschiedene bakterielle Krankheitserreger haben gezeigt, VL an der Zelloberfläche als Mittel der widerstehenden Ergänzung Ablagerung1,2,3zu rekrutieren. Darüber hinaus fungiert VL wie ein "Sandwich" Molekül zwischen Bakterien und Host epithelialen Zell-Rezeptoren, dadurch Förderung festhalten und Internalisierung von Krankheitserregern2,4,5. Bindung des Vn an der bakteriellen Zellenoberfläche wird durch andere derzeit nicht identifizierte Proteine vermittelt. Voll die funktionale Rolle der Vn-Bindung in Umgehung der Schlauch Immunantwort Aufklärung erfordert daher Identifizierung von Proteinen, VL-recruiting.
Der erste Schritt bei der Ermittlung von Vn-bindende Proteine ist zu prüfen, ob ein Erreger von Interesse gereinigten VL. Durchflusszytometrie binden kann eine bequeme und einfache Methode um festzustellen, ob VL Erreger Zellen gebunden ist. In dieser Studie untersuchten wir die Bindung von Vn an verschiedenen Haemophilus Influenzae Typ f (Hif) klinischen Isolaten6. Die hier beschriebene Methode ist quantitativ und kann verwendet werden, um die Bindungskapazität einer Vielzahl von Bakterienstämmen zu unterscheiden. In einer früheren Studie gekennzeichnet wir Protein H (PH) der Hif als Vn-bindende Protein7. Daher in der vorliegenden Studie das Vn-Bindung-Potenzial der Wildtyp (WT) Hif und Hif M10ΔLph Mutanten wurden verglichen mit den beschriebenen Protokollen.
Sobald festgestellt wird, dass ein Erreger Vn bindet, ist der zweite Schritt, die Oberfläche Proteom zu charakterisieren, um potenzielle Vn-bindende Proteine zu identifizieren. Eine Vielzahl von Ansätzen eignet sich für diesen Zweck8,9, aber diese Methoden sind nicht in diesem Bericht beschrieben. Die Methode am besten geeignet für die Untersuchung von Protein-Protein-Wechselwirkungen ist rekombinant express ausgewählte bakterielle Oberflächenproteine in E. Coli und reinigen durch Affinitätschromatographie. Hier verwenden wir PH und seine molekularen Wechselwirkung mit VL um die Methode zu veranschaulichen. Wechselwirkungen zwischen rekombinante PH und VL zeichneten sich mit einem Enzym-linked Immunosorbentprobe Assay (ELISA)7 und eine neu entwickelte markierungsfreie Technik bekannt als Bio-Schicht Interferometrie (BLI)10,11. Während ELISAs verwendet werden können, um Protein-Protein-Wechselwirkungen zu bestätigen, bietet BLI detaillierte Daten über die kinetischen Parameter der Interaktionen.
Um die funktionale Rolle der Vn in der bakterielle Haftfähigkeit zu studieren, können zwei verschiedene Tests genutzt werden. Der erste Test hier beschriebenen ist direkte Messung der bakteriellen Einhaltung der Vn-beschichtete Glasoberflächen, während der zweite Test festhalten an der Oberfläche der Epithelzellen untersucht. Für den ersten Test Glas-Objektträger wurden mit VL beschichtet, und die Bindung von WT oder mutierten Hif Stämme wurde durch gramfärbung und Mikroskopie beurteilt. Diese Technik unterscheidet leicht Bakterien basiert auf der Fähigkeit, VL12binden. Bakterielle Adhäsion für Säugerzellen war dann analysiert, durch Zugabe von kultivierten Bakterien auf einem monomolekularen Film der Typ II alveolären Epithelzellen; bakterielle Anlage wurde beurteilt durch zählen der Anzahl der koloniebildenden Einheiten (KBE). Eingehalten und internalisierte Bakterien können in das Vorhandensein oder Fehlen von VL4,13unterschieden werden.
Die Rolle der Vn-Akquisition im bakteriellen Serum Widerstand wurde mit einem Serum Tötung Assay (d.h. Serum bakterizide Aktivität) ausgewertet. Um die Bedeutung der Vn-Akquisition im Serum Widerstand zu beurteilen, wurde die bakterizide Aktivität von Vn-abgereicherte Serum (VDS) mit der normalen menschlichen Serum (NHS) verglichen. Die Methode leicht unterscheidet Vn-Bindung im Vergleich zu nicht-bindenden Bakterien anhand Serum Widerstand. Wir haben diese Methode zur Untersuchung der Rolle der Vn im Serum Widerstand von einigen bakteriellen Krankheitserregern4,12verwendet.
Zahlreiche Methoden wurden für die Untersuchung von Wirt-Pathogen Interaktionen beschrieben. Hier beschreiben wir eine Reihe von Protokollen, die für die Untersuchung von jeder Erreger leicht angepasst werden kann, um die Rolle der Vn in der Pathogenese zu bewerten. Wir testeten diese Protokolle mit verschiedenen Krankheitserregern und Hif wurde gewählt als Beispiel für diesen Bericht.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" style="width:1013px;" width="1014">
	<colgroup>
		<col />
		<col />
		<col />
		<col />
	</colgroup>
	<tbody>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:335px;">1.5 mL thermomixter</td>
			<td style="width:288px;">Eppendorf</td>
			<td style="width:119px;">5355</td>
			<td style="width:272px;">dry block heating and cooling shaker</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">5 mL polystyrene round-bottom tube&#160;</td>
			<td>BD Falcon</td>
			<td>60819-138</td>
			<td>12 &#215; 75 mm style</td>
		</tr>
		<tr height="25">
			<td height="25" style="height:25px;width:335px;">5% CO2 supplied incubator&#160;</td>
			<td style="width:288px;">Thermo Scientific&#160;</td>
			<td style="width:119px;">BBD6220</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;">6 mL polystyrene round-bottom tube&#160;</td>
			<td style="width:288px;">VWR</td>
			<td>89000-478</td>
			<td>12 &#215; 75 mm style with cap</td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:335px;">24-well plates</td>
			<td style="width:288px;">BD Falcon</td>
			<td>08-772-1H</td>
			<td style="width:272px;">Cell culture grade</td>
		</tr>
		<tr height="26">
			<td height="26" style="height:26px;width:335px;">30% Hydrogen peroxide (H2O2) solution</td>
			<td style="width:288px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:119px;">H1009-100ML</td>
			<td>Laboratory analysis grade</td>
		</tr>
		<tr height="25">
			<td height="25" style="height:25px;width:335px;">75 cm2 tissue culture flask</td>
			<td style="width:288px;">BD Falcon</td>
			<td>BD353136</td>
			<td>Vented</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">96 well black flat bottom plate</td>
			<td style="width:288px;">Greiner Bio-One</td>
			<td>655090</td>
			<td>Tissue culture treated &#181;Clear black plates</td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:335px;">A549 Cell Line human</td>
			<td style="width:288px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:119px;">86012804-1VL</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:335px;">Cell detachment enzyme (Accutase)&#160;</td>
			<td style="width:288px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td>A6964-500ML</td>
			<td style="width:272px;">Cell Culture Grade</td>
		</tr>
		<tr height="43">
			<td height="43" style="height:43px;width:335px;">AR2G sensors</td>
			<td style="width:288px;">Pall Life Science</td>
			<td>18-5095</td>
			<td style="width:272px;">Sensor to immobilized protein by amino coupling&#160;</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:335px;">Acetone</td>
			<td style="width:288px;">VWR</td>
			<td>97064-786</td>
			<td>Analysis grade</td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:335px;">Bovine Serum Albumins (BSA)</td>
			<td style="width:288px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td>A2058</td>
			<td style="width:272px;">Suitable for cell culture</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:335px;">Bibulous paper&#160;</td>
			<td style="width:288px;">VWR</td>
			<td>28511-007</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="43">
			<td height="43" style="height:43px;width:335px;">Bio-layer interferometer</td>
			<td style="width:288px;">Pall Life Science</td>
			<td style="width:119px;">FB-50258</td>
			<td style="width:272px;">Bilayer interferometry measuring equipment</td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;">Crystal violet solution</td>
			<td style="width:288px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td>HT90132-1L</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:335px;">C4BP (C4b binding protein)</td>
			<td style="width:288px;">Complement Technology, Inc.</td>
			<td style="width:119px;">A109</td>
			<td>Bought as Frozen liquid form</td>
		</tr>
		<tr height="26">
			<td height="26" style="height:26px;width:335px;">Calcium chloride (CaCl2)</td>
			<td style="width:288px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td>C5670-500G</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:335px;">Carbol-fuchsin solution</td>
			<td style="width:288px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td>HT8018-250ML</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:335px;">Citric acid</td>
			<td style="width:288px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td>251275-500G</td>
			<td>American Chemical Society (ACS) grade</td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:335px;">Decolorizing solution</td>
			<td style="width:288px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td>75482-250ML-F</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:335px;">E. coli host (E. Coli BL21)</td>
			<td style="width:288px;">Novagen</td>
			<td>69450-3</td>
			<td>Protein expression host</td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:335px;">F12 medium</td>
			<td style="width:288px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td>D6421</td>
			<td style="width:272px;">Cell Culture Grade</td>
		</tr>
		<tr height="43">
			<td height="43" style="height:43px;width:335px;">Flow cytometer&#160;</td>
			<td style="width:288px;">BD Biosciences</td>
			<td style="width:119px;">651154</td>
			<td style="width:272px;">Cell analysis grade for research applications&#160;</td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:335px;">Fetal Calf Serum (FCS)</td>
			<td style="width:288px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td>12003C</td>
			<td style="width:272px;">Suitable for cell culture</td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:335px;">Normal human serum (NHS)</td>
			<td style="width:288px;">Complement Technology, Inc.</td>
			<td>NHS</td>
			<td style="width:272px;">Pooled human serum</td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:335px;">FITC-conjugated donkey anti-sheep antibodies&#160;</td>
			<td style="width:288px;">AbD Serotec</td>
			<td>STAR88F</td>
			<td style="width:272px;">Polyclonal</td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:335px;">Gentamicin</td>
			<td style="width:288px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td>G1397</td>
			<td style="width:272px;">Cell culture grade</td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;">Glucose</td>
			<td style="width:288px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:119px;">G8270-1KG</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:335px;">Gelatin</td>
			<td style="width:288px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td>G9391</td>
			<td>Suitable for cell culture</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Hemocytometer</td>
			<td style="width:288px;">Marienfeld</td>
			<td>640210</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:335px;">HRP-conjugated anti-His tag antibodies</td>
			<td style="width:288px;">Abcam</td>
			<td style="width:119px;">ab1269</td>
			<td style="width:272px;">Polyclonal</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:335px;">Human factor H</td>
			<td style="width:288px;">Complement Technology, Inc.</td>
			<td style="width:119px;">A137</td>
			<td>Bought as Frozen liquid form</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:335px;">C4BP</td>
			<td style="width:288px;">Complement Technology, Inc.</td>
			<td style="width:119px;">A109</td>
			<td>Frozen solution</td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:335px;">Human serum albumin</td>
			<td style="width:288px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:119px;">A1653-10G</td>
			<td>lyophilized powder</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Histidine affinity resin column (HisTrap HP)</td>
			<td style="width:288px;">GE Health Care Life Science</td>
			<td style="width:119px;">17-5247-01</td>
			<td>Columns prepacked with Ni Sepharose</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:335px;">His-tagged PH</td>
			<td style="width:288px;"></td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td>Recombinantly expressed and purified in our lab</td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:335px;">Iodine solution</td>
			<td style="width:288px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td>HT902-8FOZ</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:335px;">Methanol</td>
			<td style="width:288px;">VWR</td>
			<td>BDH1135-1LP</td>
			<td>Analysis grade</td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:335px;">&#160;Microscope</td>
			<td style="width:288px;">Olympus</td>
			<td style="width:119px;">IX73</td>
			<td style="width:272px;">Inverted microscope</td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:335px;">Microscope slides</td>
			<td style="width:288px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td>S8902</td>
			<td style="width:272px;">plain, size 25 mm &#215; 75 mm&#160;</td>
		</tr>
		<tr height="26">
			<td height="26" style="height:26px;width:335px;">Magnesium chloride (MgCl2)</td>
			<td style="width:288px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td>M8266-1KG</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Plasmid containg C terminal 6x His-tag on the backbone (pET26(b))</td>
			<td style="width:288px;">Novagen</td>
			<td>69862-3</td>
			<td>DNA vector</td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:335px;">Polysorb microtitre plates&#160;</td>
			<td style="width:288px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td>M9410</td>
			<td style="width:272px;">For ELISA</td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:335px;">Potassium hydroxide (KOH)</td>
			<td style="width:288px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:119px;">6009</td>
			<td>American Chemical Society (ACS) grade</td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:335px;">Sheep anti-human Vn antibodies</td>
			<td style="width:288px;">AbD Serotec</td>
			<td>AHP396</td>
			<td style="width:272px;">Polyclonal</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:335px;">Shaker&#160;</td>
			<td style="width:288px;">Stuart Scientific</td>
			<td style="width:119px;">STR6</td>
			<td>Platform shaker</td>
		</tr>
		<tr height="26">
			<td height="26" style="height:26px;width:335px;">Tissue culture flask</td>
			<td style="width:288px;">BD Falcon</td>
			<td style="width:119px;">3175167</td>
			<td style="width:272px;">75 cm2</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:335px;">&#160;Thermomixer&#160;</td>
			<td style="width:288px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td>T3317</td>
			<td>Dry block heating and cooling shaker</td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:335px;">Tetramethylbenzidine</td>
			<td style="width:288px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td>860336-100MG</td>
			<td>ELISA grade</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:335px;">Vitronectin (Vn) from human plasma</td>
			<td style="width:288px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td>V8379-50UG</td>
			<td>cell culture grade</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

assays for studying the role of vitronectin in bacterial adhesion and serum resistance

Bakterien nutzen Ergänzung Regulatoren als Mittel zur Umgehung der Host Immunantwort. Hier beschreiben wir Protokolle für die Bewertung des Rolle Vitronectin Erwerbs bei der bakteriellen Zelle Oberfläche spielt im Widerstand gegen das Immunsystem des Wirts. Flow Cytometry Experimente identifiziert Humanplasma Vitronectin als Liganden für die bakterielle Rezeptor Außenmembran Protein H von Haemophilus Influenzae Typ f. Ein Enzym-linked Immunosorbentprobe-Assay wurde eingesetzt, um die Protein-Protein-Wechselwirkungen zwischen gereinigtes rekombinante Protein H und Vitronectin zu charakterisieren, und verbindliche Affinität wurde anhand Bio-Schicht Interferometrie. Die biologische Bedeutung der Bindung von Vitronectin an Protein H an der bakteriellen Zellenoberfläche in Umgehung der Wirt Immune Antwort bestätigte mit einem Serum-Widerstand-Assay mit normal- und Vitronectin erschöpft Humanserum. Die Bedeutung der Vitronectin in der bakterielle Haftfähigkeit war mit Glas-Objektträger mit und ohne Vitronectin Beschichtung, gefolgt von gramfärbung analysiert. Zu guter Letzt wurde bakterielle Adhäsion zur menschlichen alveoläre Epithelzelle Monolagen untersucht. Die hier beschriebenen Protokolle können die Studie von einer bakteriellen Spezies von Interesse leicht angepasst.

VN-Bindung an der Oberfläche der Bakterien wurde durch Durchflusszytometrie bestimmt. Alle klinische Isolaten in dieser Studie getestet Hif rekrutiert Vn an der Zelloberfläche. Keine Interaktion des Vn mit der Zelloberfläche wurde für die E. Coli Negativkontrolle Belastung (Abb. 1A) beobachtet. Wie in Abbildung 1B, ist PH eine große VL-bindendes Protein auf der Oberfläche des Hif Z...

Watch this Scientific Journal Video about Assays for Studying the Role of Vitronectin in Bacterial Adhesion and Serum Resistance at JoVE.com

Assays for Studying the Role of Vitronectin in Bacterial Adhesion and Serum Resistance

Dieser Bericht beschreibt die Protokolle für die Charakterisierung von Interaktionen zwischen bakteriellen äußeren Membranproteine und menschliche Ergänzung Regler Vitronectin. Die Protokolle können verwendet werden, um die Bindung Reaktionen und die biologische Funktion von Vitronectin in alle Bakterienarten zu studieren.

Assays für die Untersuchung der Rolle von Vitronectin in bakterielle Adhäsion und Serum-Widerstand

Bacteria utilize complement regulators as a means of evading the host immune response. Here, we describe protocols for evaluating the role vitronectin ...

Diese Methode kann helfen, wichtige Fragen im Wirts-Pathogen-Interaktionsfeld zu beantworten, wie bakterielle Krankheitserreger Beim Menschen Krankheiten verursachen, indem sie menschliche Proteine nutzen. Der Hauptvorteil dieser Technik ist es kann beantworten, wenn jeder Erreger Vitronectin zur Etablierung einer Infektion des Wirts nutzen kann. Wir konzentrieren uns auf Vitronectin, ein Wirtsprotein, das an der extrazellulären Matrix teilnimmt, aber auch als Komplementshemmer im determinanten Weg der Komplementaktivierung fungiert.Diese Fakten sind sehr wichtig und sehr attraktiv für Krankheitserreger, die Krankheiten beim Menschen verursachen. Zur Vorbereitung auf die Durchflusszytometrie setzen Sie die bakteriellen Pellets mit 50 Mikroliter Blockierpuffer n. Chr. mit 250 nanomolar vitronectin auf. Dann inkubieren Sie die Proben für eine Stunde bei Raumtemperatur ohne zu schütteln.Nach der Inkubation die Bakterien durch Zentrifugieren bei 3, 500 g für fünf Minuten pellet. Dann waschen Sie die Pellets dreimal mit PBS und ähnlichen Zentrifugationsschritten. Nach dem Waschen 50 Mikroliter primärer Schafe antihuman vitronectin polyklonaler Antikörper in das bakterielle Pellet bei einer verdünnungsgemäßen Eins bis 100 in PBS BSA hinzufügen.Inkubieren Sie die Suspension für eine Stunde bei Raumtemperatur. Dann waschen Sie die Bakterien dreimal mit PBS, um ungebundene Antikörper zu entfernen. Als nächstes fügen Sie 50 Mikroliter PBS BSA mit Fluorescein isothiocyanat konjugierte Esel Anti-Schaf polyklonale Antikörper auf das Pellet.Bei Raumtemperatur eine Stunde im Dunkeln bebrüten. Schließlich, nach drei Waschschritten, das bakterielle Pellet mit 300 Mikroliter PBS wieder aufsetzen und durch Durchflusszytometrie analysieren. Zur Vorbereitung auf ELISA 100 Mikroliter Proteinlösung in jeden Brunnen einer PolySorp Mikrotiterplatte geben.Schließen Sie die Platte mit dem Deckel und lagern Sie bei vier Grad Celsius über Nacht, um die Immobilisierung von Protein auf Mikrotiter-Plattenbrunnen zu erleichtern. Entsorgen Sie die Lösung von der Mikrotiterplatte, indem Sie kopfüber über das Waschbecken kippen. Dann waschen Sie die Brunnen dreimal mit 300 Mikroliter PBS pro Brunnen.Blockieren Sie die beschichteten Brunnen für eine Stunde bei Raumtemperatur mit PBS mit 2,5 Gewichtsvolumen prozents BSA. Nach dem Entfernen der Sperrlösung die Brunnen dreimal mit 300 Mikroliter PBST pro Brunnen waschen. Fügen Sie nun 100 Mikroliter von 50 nanomolaren rekombinanten PH zu jeder Probe hinzu.Fügen Sie in den Steuerbrunnen nur 100 Mikroliter PBS BSA hinzu. Inkubieren Sie die Platte für eine Stunde bei Raumtemperatur. Nach der Inkubation entsorgen Sie die Proteinlösung und entfernen Sie die ungebundenen Proteine, indem Sie die Brunnen dreimal mit 300 Mikroliter PBST pro Brunnen waschen.Fügen Sie dann 100 Mikroliter PBS BSA hinzu, die Pferderettichperoxidase konjugierte Anti-seine polyklonalen Antikörper enthalten. Nach einer Stunde Bei Raumtemperatur eine Stunde inkubieren, waschen Sie die Brunnen dreimal mit 300 Mikroliter PBST pro Brunnen. Erkennen Sie die Antigen-Antikörper-Komplexe, indem Sie jedem Brunnen 100 Mikroliter ELISA-Detektionsreagenz hinzufügen.Dann fügen Sie 50 Mikroliter einer Molschwefelsäure pro Brunnen hinzu, um die Reaktion zu stoppen. Messen Sie die optische Dichte der Brunnen mit einem Mikroplattenleser bei 450 Nanometern. Immobilisieren Sie humanes Vitronectin auf Amin-reaktiven Sensoren mit dem Amin-Kopplungsverfahren gemäß den Richtlinien des Herstellers.Mit PBS wird der rekombinante PH-Ligand seriell von Null auf vier Mikromolar verdünnt und die resultierenden Lösungen auf eine 96-well schwarze Flachboden-Mikrotiterplatte übertragen. Führen Sie das Experiment bei 30 Grad Celsius mit einem Bioschicht-Interferometrie-Instrument aus. Pipette 10 Mikroliter einer Zwei-Mikrogramm-Pro-Milliliter-Lösung von Vitronectin in PBS auf ein Glasmikroskop-Dia als einzigen Tropfen.Lassen Sie den Tropfen auf der Rutsche für 30 Minuten bei Raumtemperatur trocknen. Waschen Sie die proteinbeschichteten Glasgletten dreimal, indem Sie sie zwei Sekunden lang in ein PBS-haltiges Becherglas tauchen, um überschüssiges unbeschichtetes Protein zu entfernen. Fügen Sie nun 10 Milliliter einer frischen Hif-Kultur in eine sterile Kunststoff-Petrischale ein und tauchen Sie die beschichteten Glasgletten in das Kulturmedium ein.Inkubieren Sie die Gerichte bei 37 Grad Celsius für eine Stunde mit Schütteln bei 20 Umdrehungen pro Minute. Nach der Inkubation entfernen Sie alle ungebundenen Bakterien, indem Sie die Dias dreimal in einen mit PBS gefüllten Becher tauchen, bevor Sie die gebundenen Bakterien durch Gram-Färbung visualisieren, wie im Textprotokoll beschrieben. Kultur A549 Epithelzellen, wie im Textprotokoll beschrieben.Nach einer Spülung und Trypsinisierung der Zellen bei 37 Grad Celsius, verdünnen Sie die Zellsuspension auf 5.000 Zellen pro Milliliter mit einem vollständigen Medium mit fünf Mikrogramm pro Milliliter Gentamycin. Vor der bakteriellen Infektion, ersetzen Sie das Medium in den Brunnen mit F12 medium und inkubieren über Nacht bei 37 Grad Celsius. Waschen Sie die Zellmonolayer dreimal mit einem Milliliter PBS bei Raumtemperatur.Dann legen Sie die Platte auf Eis und 200 Mikroliter vorgekühlten F12 Medium mit 10 Mikrogramm pro Milliliter Vitronectin. Nachdem Sie die Platte eine Stunde lang bei vier Grad Celsius inkubiert haben, entsorgen Sie die Lösung durch Pipettieren und waschen Sie die Zellschicht zweimal mit einem Milliliter PBS bei Raumtemperatur. Fügen Sie 100 Mikroliter frisch angebauten Hif Wildtyp in F12 Medium zu jedem Brunnen hinzu.Inkubieren Sie die Platte für zwei Stunden bei 37 Grad Celsius. Dann das Medium mit einer Pipette aspirieren und die A549 Epithelzellen dreimal mit PBS waschen. Fügen Sie 50 Mikroliter pro Brunnen der Zellablösung Lösung und folgen mit einer fünfminütigen Inkubation bei 37 Grad Celsius.Als nächstes fügen Sie 50 Mikroliter F12 komplettes Medium pro Brunnen hinzu, um die enzymatische Reaktion zu stoppen. Übertragen Sie die Epithelzellen von jedem Brunnen auf ein sechs Milliliter Glasrohr mit vier Glasperlen. Lyse die Zellen bei Raumtemperatur durch Wirbeln für zwei Minuten.Nach verdünnter Zelllysat 100-fach, Platte 10 Mikroliter der verdünnten Probe auf eine Schokoladen-Agar-Platte. Zählen Sie die Kolonien nach einer nächtlichen Inkubation bei 37 Grad Celsius. Zur Durchführung der Analyse der Vitronectin-abhängigen Resistenz gegen die bakterizide Aktivität des menschlichen Serums, der ersten Kultur und des Pellets der Bakterien, wie im Textprotokoll beschrieben.Nach der Zentrifugation das bakterielle Pellet mit einem Volumen dextrose-Gelatin-Veronal-Puffer wieder aufsetzen. Fügen Sie nun 1, 500 KBE von Bakterien zu 100 Mikroliter DGVB plus plus enthält 5%Serum. Inkubieren Sie die Probe bei 37 Grad Celsius für 15 Minuten mit Schütteln bei 300 RPM.Entfernen Sie ein 10 Mikroliter Aliquot aus der Reaktionsmischung bei null Minuten und 15 Minuten. Legen Sie das Aliquot auf Schokoladenagar und bebrüten den Teller bei 37 Grad Celsius über Nacht. Zählen Sie nach der Inkubation der Schokoladen-Agar-Platten die Kolonien, die auf den Tellern erscheinen, und berechnen Sie den Prozentsatz der getöteten Bakterien, wie im Textprotokoll beschrieben.Alle in dieser Studie getesteten klinischen Hif-Isolate rekrutierten Vitronectin an die Zelloberfläche, wie durch Durchflusszytometrie bestimmt. Die Bindung von Vitronectin durch den wilden Stamm Hif verursachte eine Verschiebung der Population, während der Mutant Vitronectin nicht bindete. Protein-Protein-Wechselwirkungen zwischen dem großen Vitronectin-bindenden Protein PH und Vitronectin wurden von ELISA geschätzt.Die Ergebnisse deuten auf eine signifikante Wechselwirkung zwischen PH und Vitronectin und der positiven Kontrolle relativ zur Negativkontrolle hin. Die Wechselwirkung zwischen PH und Vitronectin wurde in Echtzeit mit Bioschicht-Interferometrie auf eine Affinität von 2,2 Mikromolar geschätzt. Darüber hinaus zeigte die bakterielle fehlende Expression von PH auf der Zelloberfläche eine geringere Haftung an vitronectinbeschichteten Glasoberflächen im Vergleich zu Wildtypzellen.Darüber hinaus hat das Vorhandensein von Vitronectin auf der Oberfläche von Epithelzellen die Adhärenz von Hif signifikant verbessert. Um die Komplementhemmende Aktivität von Vitronectin abzuschätzen, wurde die serumvermittelte Tötung untersucht. Wildtyp Hif-Zellen wiesen eine höhere Serumresistenz auf als mutierte Zellen.In Gegenwart von hitzeinaktiviertem Serum wurden keine Bakterien abgetötet. Interessanterweise zeigte der wilde Typ Hif ein vermindertes Überleben im von Vitronectin erschöpften Serum und die Auffüllung von Vitronectin erhöhtes bakterielles Überleben. Der mutierte Stamm reagierte jedoch nicht auf die Erschöpfung von Vitronectin, da er Vitronectin nicht an die Zelloberfläche rekrutieren konnte.Einmal gemeistert, kann diese Technik in drei bis vier Tagen für jeden Erreger getan werden und denken Sie daran, die frische Kultur der bakteriellen Krankheitserreger zu verwenden. Nachdem Sie sich dieses Video angeschaut haben, sollten Sie ein gutes Verständnis dafür haben, wie Sie die Vitronectin-Bindung an einen Erreger analysieren können. Zusätzlich zu dieser Technik können Vitronectin-bindende Oberflächenproteine von Bakterien durch Proteomik und Western-Blotting identifiziert werden.Diese Technik ist wichtig für die Forscher auf dem Gebiet der Wirt-Pathogen-Interaktion und auch den Mechanismus der Virulenz in Bakterien zu erforschen.

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

In Vitro Assay of Bacterial Adhesion onto Mammalian Epithelial Cells

In Vitro Assay of Bacterial Adhesion onto Mammalian Epithelial Cells

In-vitro-Assay der bakteriellen Adhäsion auf Mammalian Epithelzellen

To cause infections, bacteria must colonize their host. Bacterial pathogens express various molecules or structures able to promote attachment to host ...

Forschung

Immunologie und Infektion

Amplifying and Quantifying HIV-1 RNA in HIV Infected Individuals with Viral Loads Below the Limit of Detection by Standard Clinical Assays

Verstärkung und Quantifizierung von HIV-1 RNA in HIV-infizierten Personen mit Viruslast unter der Nachweisgrenze von Standard Clinical Assays

Amplifying viral genes and quantifying HIV-1 RNA in HIV-1 infected individuals with viral loads below the limit of detection by standard assays (below ...

Introducing Shear Stress in the Study of Bacterial Adhesion

Introducing Schubspannung in der Studie der bakteriellen Adhäsion

During bacterial infections a sequence of interactions occur between the pathogen and its host. Bacterial adhesion to the host cell surface is often the ...

One-day Workflow Scheme for Bacterial Pathogen Detection and Antimicrobial Resistance Testing from Blood Cultures

Ein-Tages-Workflow-Schema für bakterielles Pathogen-Erkennung und Resistenz gegen antimikrobielle Tests aus Blutkulturen

Bloodstream infections are associated with high mortality rates because of the probable manifestation of sepsis, severe sepsis and septic shock1. ...

VIGS-Mediated Forward Genetics Screening for Identification of Genes Involved in Nonhost Resistance

VIGS-vermittelte Stürmer Genetics Screening zur Identifizierung von Genen in Nichtwirtresistenz Beteiligte


	Nonhost disease resistance of plants against bacterial pathogens is controlled by complex defense pathways. Understanding this mechanism is important ...

Static Adhesion Assay for the Study of Integrin Activation in T Lymphocytes

Statische Haftung Assay für das Studium der Integrin-Aktivierung in T-Lymphozyten

T lymphocyte adhesion is required for multiple T cell functions, including migration to sites of inflammation and formation of immunological synapses with ...

In Vitro and In Vivo Model to Study Bacterial Adhesion to the Vessel Wall Under Flow Conditions

In Vitro and In Vivo Model to Study Bacterial Adhesion to the Vessel Wall Under Flow Conditions

In-vitro- und In-vivo-Modell, um die bakterielle Adhäsion an der Gefäßwand unter Strömungsbedingungen Studieren

In order to cause endovascular infections and infective endocarditis, bacteria need to be able to adhere to the vessel wall while being exposed to the ...

Assay of Adhesion Under Shear Stress for the Study of T Lymphocyte-Adhesion Molecule Interactions

Test der Haftung unter Scherspannung für das Studium der T-Lymphozyten-Adhäsions-Molekül-Wechselwirkungen

Overall, T cell adhesion is a critical component of function, contributing to the distinct processes of cellular recruitment to sites of inflammation and ...

A Multi-well Format Polyacrylamide-based Assay for Studying the Effect of Extracellular Matrix Stiffness on the Bacterial Infection of Adherent Cells

Ein Multi-well-Format Polyacrylamid-basierten Test zur Untersuchung der Wirkung der extrazellulären Matrix Steifigkeit auf die bakterielle Infektion von adhärenten Zellen

Extracellular matrix stiffness comprises one of the multiple environmental mechanical stimuli that are well known to influence cellular behavior, ...

Rapid, Safe, and Simple Manual Bedside Nucleic Acid Extraction for the Detection of Virus in Whole Blood Samples

Schnelle, sichere und einfache manuelle am Krankenbett Nukleinsäure-Extraktion für den Nachweis des Virus in Vollblut-Proben

The rapid diagnosis of an infection is essential for the outbreak management, risk containment, and patient care. We have previously shown a method for ...