Name: assays for studying the role of vitronectin in bacterial adhesion and serum resistance
Uploaded: 2018-10-16T12:30:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Assays for Studying the Role of Vitronectin in Bacterial Adhesion and Serum Resistance at JoVE.com

עבודה זו נתמכה על ידי מענקים קרן של אנה אדווין ברגר, לארס Hierta, רוצה שתיכנס לשם ואת Edla יוהנסון קרן, המועצה למחקר רפואי שוודי (להעניק מספר K2015-57 X-03163-43-4, www.vr.se), קרן סרטן באוניברסיטה חולים במאלמו, החברה Physiographical (קרן של Forssman), ולא של מועצת המחוז סקונה ומחקר ופיתוח.

1. ניתוח של Vn כמו ליגנד חלבון משטח חיידקי
<ol><li>
זיהוי Vn-איגוד על פני השטח חיידקים באמצעות cytometry זרימה הערה: ב cytometry זרימה, היינו בצד פיזור ופיזור קדימה שער אירועים חיוביים. כדי לבחון את האינטראקציות עם Vn, מבודד Hif קליניים (n = 10)7 נבחרו יחד עם e. coli BL21 (DE3) כפקד שלילי (<stron...

<ol>
	<li>Singh, B., Su, Y. C., Riesbeck, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Vitronectin+in+bacterial+pathogenesis:+a+host+protein+used+in+complement+escape+and+cellular+invasion.">Vitronectin in bacterial pathogenesis: a host protein used in complement escape and cellular invasion.</a> Mol. Microbiol. 78 (3), 545-560 (2010).</li><li>Hallstrom, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Conserved+Patterns+of+Microbial+Immune+Escape:+Pathogenic+Microbes+of+Diverse+Origin+Target+the+Human+Terminal+Complement+Inhibitor+Vitronectin+via+a+Single+Common+Motif.">Conserved Patterns of Microbial Immune Escape: Pathogenic Microbes of Diverse Origin Target the Human Terminal Complement Inhibitor Vitronectin via a Single Common Motif.</a> PloS one. 11 (1), 0147709 (2016).</li><li>Su, Y. C., Hallstrom, B. M., Bernhard, S., Singh, B., Riesbeck, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Impact+of+sequence+diversity+in+the+Moraxella+catarrhalis.+UspA2/UspA2H+head+domain+on+vitronectin+binding+and+antigenic+variation.">Impact of sequence diversity in the Moraxella catarrhalis. UspA2/UspA2H head domain on vitronectin binding and antigenic variation.</a> Micro. Infect. 15 (5), 375-387 (2013).</li><li>Singh, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+fine-tuned+interaction+between+trimeric+autotransporter+haemophilus+surface+fibrils+and+vitronectin+leads+to+serum+resistance+and+adherence+to+respiratory+epithelial+cells.">A fine-tuned interaction between trimeric autotransporter haemophilus surface fibrils and vitronectin leads to serum resistance and adherence to respiratory epithelial cells.</a> Infect. Immun. 82 (6), 2378-2389 (2014).</li><li>Kohler, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Binding+of+vitronectin+and+Factor+H+to+Hic+contributes+to+immune+evasion+of+Streptococcus+pneumoniae.+serotype+3.">Binding of vitronectin and Factor H to Hic contributes to immune evasion of Streptococcus pneumoniae. serotype 3.</a> Thromb. haemostasis. 113 (1), 125-142 (2015).</li><li>Onelli, E., Citterio, S., O'Connor, J. E., Levi, M., Sgorbati, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Flow+cytometry,+sorting+and+immunocharacterization+with+proliferating+cell+nuclear+antigen+of+cycling+and+non-cycling+cells+in+synchronized+pea+root+tips.">Flow cytometry, sorting and immunocharacterization with proliferating cell nuclear antigen of cycling and non-cycling cells in synchronized pea root tips.</a> Planta. 202 (2), 188-195 (1997).</li><li>Al-Jubair, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Haemophilus+influenzae+Type+f+Hijacks+Vitronectin+Using+Protein+H+To+Resist+Host+Innate+Immunity+and+Adhere+to+Pulmonary+Epithelial+Cells.">Haemophilus influenzae Type f Hijacks Vitronectin Using Protein H To Resist Host Innate Immunity and Adhere to Pulmonary Epithelial Cells.</a> J. Immunol. 195 (12), 5688-5695 (2015).</li><li>Martinez-Martin, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Technologies+for+Proteome-Wide+Discovery+of+Extracellular+Host-Pathogen+Interactions.">Technologies for Proteome-Wide Discovery of Extracellular Host-Pathogen Interactions.</a> J. Immunol. Res. 2017, 2197615 (2017).</li><li>Boleij, A., Laarakkers, C. M., Gloerich, J., Swinkels, D. W., Tjalsma, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Surface-affinity+profiling+to+identify+host-pathogen+interactions.">Surface-affinity profiling to identify host-pathogen interactions.</a> Infect. Immun. 79 (12), 4777-4783 (2011).</li><li>Abdiche, Y., Malashock, D., Pinkerton, A., Pons, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Determining+kinetics+and+affinities+of+protein+interactions+using+a+parallel+real-time+label-free+biosensor,+the+Octet.">Determining kinetics and affinities of protein interactions using a parallel real-time label-free biosensor, the Octet.</a> Anal. Biochem. 377 (2), 209-217 (2008).</li><li>Sultana, A., Lee, J. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Measuring+protein-protein+and+protein-nucleic+Acid+interactions+by+biolayer+interferometry.">Measuring protein-protein and protein-nucleic Acid interactions by biolayer interferometry.</a> Cur. Prot. Prot. Sc. 79, 11-26 (2015).</li><li>Su, Y. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Haemophilus+influenzae+acquires+vitronectin+via+the+ubiquitous+Protein+F+to+subvert+host+innate+immunity.">Haemophilus influenzae acquires vitronectin via the ubiquitous Protein F to subvert host innate immunity.</a> Mol. Microbiol. 87 (6), 1245-1266 (2013).</li><li>Ronander, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Nontypeable+Haemophilus+influenzae+adhesin+protein+E:+characterization+and+biological+activity.">Nontypeable Haemophilus influenzae adhesin protein E: characterization and biological activity.</a> J. Infect. Dis. 199 (4), 522-531 (2009).</li><li>Sezonov, G., Joseleau-Petit, D., D'Ari, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Escherichia+coli+physiology+in+Luria-Bertani+broth.">Escherichia coli physiology in Luria-Bertani broth.</a> J. Bact. 189 (23), 8746-8749 (2007).</li><li>Fleury, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Identification+of+a+Haemophilus+influenzae+factor+H-Binding+lipoprotein+involved+in+serum+resistance.">Identification of a Haemophilus influenzae factor H-Binding lipoprotein involved in serum resistance.</a> J. Imunol. 192 (12), 5913-5923 (2014).</li><li>Abdiche, Y., Malashock, D., Pinkerton, A., Pons, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Determining+kinetics+and+affinities+of+protein+interactions+using+a+parallel+real-time+label-free+biosensor,+the+Octet.">Determining kinetics and affinities of protein interactions using a parallel real-time label-free biosensor, the Octet.</a> Anal. Biochem. 377 (2), 209-217 (2008).</li><li>Rich, R. L., Myszka, D. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Higher-throughput,+label-free,+real-time+molecular+interaction+analysis.">Higher-throughput, label-free, real-time molecular interaction analysis.</a> Anal. Biochem. 361 (1), 1-6 (2007).</li><li>McNamara, G., Difilippantonio, M. J., Ried, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Microscopy+and+image+analysis.">Microscopy and image analysis.</a> Current protoc. Hum. Genet. , 4 (2005).</li><li>Lieber, M., Smith, B., Szakal, A., Nelson-Rees, W., Todaro, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+continuous+tumor-cell+line+from+a+human+lung+carcinoma+with+properties+of+type+II+alveolar+epithelial+cells.">A continuous tumor-cell line from a human lung carcinoma with properties of type II alveolar epithelial cells.</a> International J. Canc. 17 (1), 62-70 (1976).</li><li>Foster, K. A., Oster, C. G., Mayer, M. M., Avery, M. L., Audus, K. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Characterization+of+the+A549+cell+line+as+a+type+II+pulmonary+epithelial+cell+model+for+drug+metabolism.">Characterization of the A549 cell line as a type II pulmonary epithelial cell model for drug metabolism.</a> Exp. Cell Res. 243 (2), 359-366 (1998).</li><li>Su, Y. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Haemophilus+influenzae+P4+Interacts+With+Extracellular+Matrix+Proteins+Promoting+Adhesion+and+Serum+Resistance.">Haemophilus influenzae P4 Interacts With Extracellular Matrix Proteins Promoting Adhesion and Serum Resistance.</a> J. Infect. Dis. 213 (2), 314-323 (2016).</li><li>Singh, B., Al-Jubair, T., Morgelin, M., Thunnissen, M. M., Riesbeck, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+unique+structure+of+Haemophilus+influenzae+protein+E+reveals+multiple+binding+sites+for+host+factors.">The unique structure of Haemophilus influenzae protein E reveals multiple binding sites for host factors.</a> Infect. Immun. 81 (3), 801-814 (2013).</li><li>Vellaiswamy, M., Campagna, B., Raoult, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Transmission+electron+microscopy+as+a+tool+for+exploring+bacterial+proteins:+model+of+RickA+in+Rickettsia+conorii.">Transmission electron microscopy as a tool for exploring bacterial proteins: model of RickA in Rickettsia conorii.</a> New Microbiolog. 34 (2), 209-218 (2011).</li><li>Pinne, M., Haake, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Immuno-fluorescence+assay+of+leptospiral+surface-exposed+proteins.">Immuno-fluorescence assay of leptospiral surface-exposed proteins.</a> J. Vis. Exp. JoVE. (53), (2011).</li></ol>

פתוגנים חיידקיים לגייס Vn השטח תא ולנצל את הרגולטור המשלים כדי למנוע התצהיר המשלים גורמים והשלמה של קרום התקפה מורכבים2. Vn משמשת גם כחברת מולקולה גשר בין חלבונים חיידקי משטח קולטני פני השטח של התא המארח, ובכך מאפשר פתוגנים לדבוק פני השטח של תאי אפיתל, לאחר מכן לתווך הפנמה. במחקר...

Vitronectin (Vn) הוא גליקופרוטאין אנושי חשוב מעורב בשמירה על הומאוסטזיס באמצעות התקנה של מערכת fibrinolytic. Vn מתפקד גם כרגולטור המשלים על ידי עיכוב מסלול המשלים מסוף במהלך היווצרות מורכבות C5b6-7, C9 הפילמור. מספר פתוגנים חיידקיים הוכחו לגייס Vn אל פני השטח של התא, כאמצעי2,1,התצהיר המשלים התנגדות3. בנוסף, Vn מתפקד מולקולה "כריך" בין חיידקים, המארח תאים אפיתל רצפטורים, הדבקות ובכך קידום הפנמה של פתוגנים2,4,5. איגוד של Vn השטח תא החיידק מתווך על ידי לחלבונים אחרים לא מזוהה כיום. מלא שחקרתי את תפקיד פונקציונלי Vn-איגוד של התחמקות של התגובה החיסונית צינור של ולכן ידרוש זיהוי של חלבונים Vn-גיוס.
השלב הראשוני לזיהוי. Vn-מחייב חלבונים הוא כדי לבדוק אם. חיידק עניין באפשרותך לאגוד מטוהרים Vn-מיכשור היא שיטה נוחה וישירה כדי לקבוע אם Vn מאוגד לתאים הפתוגן. במחקר זה, אנחנו העריכו את הכריכה של Vn שונים Haemophilus influenzae סוג f (Hif) מבודד קליניים6. השיטה המתוארת כאן היא כמותית, והוא יכול לשמש כדי להבדיל את קיבולת איגוד של מגוון רחב של זני חיידקים. במחקר הקודם, אנחנו מאופיין חלבון H (PH) של Hif כמו חלבון מחייב Vn7. לפיכך, במחקר הנוכחי, הפוטנציאל Vn-איגוד של מוטציות (WT) Hif פראי-סוגlph Hif M10Δ הושוו באמצעות פרוטוקולים המתואר.
ברגע נקבע כי. חיידק נקשר Vn, השלב השני הוא לאפיין את פרוטאום השטח על מנת לזהות פוטנציאל Vn-מחייב חלבונים. מגוון רחב של גישות יכול לשמש למטרה זו,8,9, אך הללו לא שתוארו בדו ח זה. השיטה המתאימה ביותר לבחינת אינטראקציות חלבון-חלבון היא recombinantly אקספרס שנבחר פני שטח חלבונים חיידקי ב e. coli ולטהר מאת כרומטוגרפיית זיקה. כאן, אנו משתמשים PH ואינטראקציה המולקולרי שלה עם Vn כדי להמחיש את השיטה. אינטראקציות בין PH רקומביננטי Vn מאופיינים באמצעות מקושרים-אנזים immunosorbent assay (אליסה)7 וטכניקה ללא תווית שפותחו לאחרונה המכונה ביו-שכבה אינטרפרומטריה (בלי)10,11. בעוד ELISAs יכול לשמש כדי לאשר אינטראקציות חלבון-חלבון, רבנות בלי מספק נתונים מפורטים לגבי הפרמטרים קינטי של האינטראקציות.
ללמוד את תפקיד פונקציונלי Vn הדבקות חיידקים, שני מבחני שונים יכול להיות מנוצל. הבדיקה הראשונה המתוארת כאן היא מדידה ישירה של חיידקי ההקפדה משטחי זכוכית מצופים Vn, בעוד וזמינותו השני בוחן את הדבקות על פני השטח של תאים אפיתל. הבדיקה הראשונה, שקופיות זכוכית היו מצופים Vn, הכריכה של WT או מוטציה Hif זנים הוערכה על ידי גראם מיקרוסקופ. טכניקה זו מבדיל בקלות חיידקים מבוססת על היכולת לאגד Vn12. הידבקות חיידקים בתרבית של תאים ואז נותחו על ידי הוספת חיידקים בתרבית על גבי טפט של סוג II מכתשי תאים אפיתל; מצורף חיידקי הוערכה על ידי ספירת מספר המושבה יוצרי יחידות (CFUs). חיידקים מודבקת למביטה יכול להיות מכובד ב נוכחות או היעדרות של Vn4,13.
התפקיד של רכישת Vn בהתנגדות סרום חיידקי הוערך באמצעות הרג סרום assay (כלומר, פעילות אחרים סרום). כדי להעריך את המשמעות של רכישת Vn בהתנגדות סרום, פעילות אחרים של סרום מדולדל Vn (VDS) נמשל עם זה של נסיוב אדם נורמלי (NHS). השיטה המשמשת ברצון מבדיל Vn-איגוד נגד חיידקים מחייב מבוסס על התנגדות סרום. השתמשנו בשיטה זו כדי ללמוד את התפקיד של Vn במחתרת סרום של פתוגנים חיידקיים מספר4,12.
שיטות רבות דווחו ללמוד אינטראקציות פתוגן-פונדקאי. כאן, אנו מתארים את ערכה של פרוטוקולים של ניתן להתאים בקלות במחקר של כל פתוגן כדי להעריך את התפקיד של Vn ב פתוגנזה. בדקנו פרוטוקולים אלה באמצעות פתוגנים שונים ולאחר Hif נבחר כדוגמה עבור דוח זה.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" style="width:1013px;" width="1014">
	<colgroup>
		<col />
		<col />
		<col />
		<col />
	</colgroup>
	<tbody>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:335px;">1.5 mL thermomixter</td>
			<td style="width:288px;">Eppendorf</td>
			<td style="width:119px;">5355</td>
			<td style="width:272px;">dry block heating and cooling shaker</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">5 mL polystyrene round-bottom tube&#160;</td>
			<td>BD Falcon</td>
			<td>60819-138</td>
			<td>12 &#215; 75 mm style</td>
		</tr>
		<tr height="25">
			<td height="25" style="height:25px;width:335px;">5% CO2 supplied incubator&#160;</td>
			<td style="width:288px;">Thermo Scientific&#160;</td>
			<td style="width:119px;">BBD6220</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;">6 mL polystyrene round-bottom tube&#160;</td>
			<td style="width:288px;">VWR</td>
			<td>89000-478</td>
			<td>12 &#215; 75 mm style with cap</td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:335px;">24-well plates</td>
			<td style="width:288px;">BD Falcon</td>
			<td>08-772-1H</td>
			<td style="width:272px;">Cell culture grade</td>
		</tr>
		<tr height="26">
			<td height="26" style="height:26px;width:335px;">30% Hydrogen peroxide (H2O2) solution</td>
			<td style="width:288px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:119px;">H1009-100ML</td>
			<td>Laboratory analysis grade</td>
		</tr>
		<tr height="25">
			<td height="25" style="height:25px;width:335px;">75 cm2 tissue culture flask</td>
			<td style="width:288px;">BD Falcon</td>
			<td>BD353136</td>
			<td>Vented</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">96 well black flat bottom plate</td>
			<td style="width:288px;">Greiner Bio-One</td>
			<td>655090</td>
			<td>Tissue culture treated &#181;Clear black plates</td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:335px;">A549 Cell Line human</td>
			<td style="width:288px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:119px;">86012804-1VL</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:335px;">Cell detachment enzyme (Accutase)&#160;</td>
			<td style="width:288px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td>A6964-500ML</td>
			<td style="width:272px;">Cell Culture Grade</td>
		</tr>
		<tr height="43">
			<td height="43" style="height:43px;width:335px;">AR2G sensors</td>
			<td style="width:288px;">Pall Life Science</td>
			<td>18-5095</td>
			<td style="width:272px;">Sensor to immobilized protein by amino coupling&#160;</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:335px;">Acetone</td>
			<td style="width:288px;">VWR</td>
			<td>97064-786</td>
			<td>Analysis grade</td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:335px;">Bovine Serum Albumins (BSA)</td>
			<td style="width:288px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td>A2058</td>
			<td style="width:272px;">Suitable for cell culture</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:335px;">Bibulous paper&#160;</td>
			<td style="width:288px;">VWR</td>
			<td>28511-007</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="43">
			<td height="43" style="height:43px;width:335px;">Bio-layer interferometer</td>
			<td style="width:288px;">Pall Life Science</td>
			<td style="width:119px;">FB-50258</td>
			<td style="width:272px;">Bilayer interferometry measuring equipment</td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;">Crystal violet solution</td>
			<td style="width:288px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td>HT90132-1L</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:335px;">C4BP (C4b binding protein)</td>
			<td style="width:288px;">Complement Technology, Inc.</td>
			<td style="width:119px;">A109</td>
			<td>Bought as Frozen liquid form</td>
		</tr>
		<tr height="26">
			<td height="26" style="height:26px;width:335px;">Calcium chloride (CaCl2)</td>
			<td style="width:288px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td>C5670-500G</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:335px;">Carbol-fuchsin solution</td>
			<td style="width:288px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td>HT8018-250ML</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:335px;">Citric acid</td>
			<td style="width:288px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td>251275-500G</td>
			<td>American Chemical Society (ACS) grade</td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:335px;">Decolorizing solution</td>
			<td style="width:288px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td>75482-250ML-F</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:335px;">E. coli host (E. Coli BL21)</td>
			<td style="width:288px;">Novagen</td>
			<td>69450-3</td>
			<td>Protein expression host</td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:335px;">F12 medium</td>
			<td style="width:288px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td>D6421</td>
			<td style="width:272px;">Cell Culture Grade</td>
		</tr>
		<tr height="43">
			<td height="43" style="height:43px;width:335px;">Flow cytometer&#160;</td>
			<td style="width:288px;">BD Biosciences</td>
			<td style="width:119px;">651154</td>
			<td style="width:272px;">Cell analysis grade for research applications&#160;</td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:335px;">Fetal Calf Serum (FCS)</td>
			<td style="width:288px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td>12003C</td>
			<td style="width:272px;">Suitable for cell culture</td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:335px;">Normal human serum (NHS)</td>
			<td style="width:288px;">Complement Technology, Inc.</td>
			<td>NHS</td>
			<td style="width:272px;">Pooled human serum</td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:335px;">FITC-conjugated donkey anti-sheep antibodies&#160;</td>
			<td style="width:288px;">AbD Serotec</td>
			<td>STAR88F</td>
			<td style="width:272px;">Polyclonal</td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:335px;">Gentamicin</td>
			<td style="width:288px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td>G1397</td>
			<td style="width:272px;">Cell culture grade</td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;">Glucose</td>
			<td style="width:288px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:119px;">G8270-1KG</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:335px;">Gelatin</td>
			<td style="width:288px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td>G9391</td>
			<td>Suitable for cell culture</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Hemocytometer</td>
			<td style="width:288px;">Marienfeld</td>
			<td>640210</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:335px;">HRP-conjugated anti-His tag antibodies</td>
			<td style="width:288px;">Abcam</td>
			<td style="width:119px;">ab1269</td>
			<td style="width:272px;">Polyclonal</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:335px;">Human factor H</td>
			<td style="width:288px;">Complement Technology, Inc.</td>
			<td style="width:119px;">A137</td>
			<td>Bought as Frozen liquid form</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:335px;">C4BP</td>
			<td style="width:288px;">Complement Technology, Inc.</td>
			<td style="width:119px;">A109</td>
			<td>Frozen solution</td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:335px;">Human serum albumin</td>
			<td style="width:288px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:119px;">A1653-10G</td>
			<td>lyophilized powder</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Histidine affinity resin column (HisTrap HP)</td>
			<td style="width:288px;">GE Health Care Life Science</td>
			<td style="width:119px;">17-5247-01</td>
			<td>Columns prepacked with Ni Sepharose</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:335px;">His-tagged PH</td>
			<td style="width:288px;"></td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td>Recombinantly expressed and purified in our lab</td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:335px;">Iodine solution</td>
			<td style="width:288px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td>HT902-8FOZ</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:335px;">Methanol</td>
			<td style="width:288px;">VWR</td>
			<td>BDH1135-1LP</td>
			<td>Analysis grade</td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:335px;">&#160;Microscope</td>
			<td style="width:288px;">Olympus</td>
			<td style="width:119px;">IX73</td>
			<td style="width:272px;">Inverted microscope</td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:335px;">Microscope slides</td>
			<td style="width:288px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td>S8902</td>
			<td style="width:272px;">plain, size 25 mm &#215; 75 mm&#160;</td>
		</tr>
		<tr height="26">
			<td height="26" style="height:26px;width:335px;">Magnesium chloride (MgCl2)</td>
			<td style="width:288px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td>M8266-1KG</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Plasmid containg C terminal 6x His-tag on the backbone (pET26(b))</td>
			<td style="width:288px;">Novagen</td>
			<td>69862-3</td>
			<td>DNA vector</td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:335px;">Polysorb microtitre plates&#160;</td>
			<td style="width:288px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td>M9410</td>
			<td style="width:272px;">For ELISA</td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:335px;">Potassium hydroxide (KOH)</td>
			<td style="width:288px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:119px;">6009</td>
			<td>American Chemical Society (ACS) grade</td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:335px;">Sheep anti-human Vn antibodies</td>
			<td style="width:288px;">AbD Serotec</td>
			<td>AHP396</td>
			<td style="width:272px;">Polyclonal</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:335px;">Shaker&#160;</td>
			<td style="width:288px;">Stuart Scientific</td>
			<td style="width:119px;">STR6</td>
			<td>Platform shaker</td>
		</tr>
		<tr height="26">
			<td height="26" style="height:26px;width:335px;">Tissue culture flask</td>
			<td style="width:288px;">BD Falcon</td>
			<td style="width:119px;">3175167</td>
			<td style="width:272px;">75 cm2</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:335px;">&#160;Thermomixer&#160;</td>
			<td style="width:288px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td>T3317</td>
			<td>Dry block heating and cooling shaker</td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:335px;">Tetramethylbenzidine</td>
			<td style="width:288px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td>860336-100MG</td>
			<td>ELISA grade</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:335px;">Vitronectin (Vn) from human plasma</td>
			<td style="width:288px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td>V8379-50UG</td>
			<td>cell culture grade</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

assays for studying the role of vitronectin in bacterial adhesion and serum resistance

חיידקים לנצל המשלים הרגולטורים, כאמצעי התחמקות את התגובה החיסונית של המארח. כאן, אנו מתארים את הפרוטוקולים להערכת הרכישה vitronectin תפקיד-ההצגות משטח של תא החיידק בהתנגדות מערכת החיסון של הפונדקאי. ניסויים cytometry זרימה מזוהות vitronectin לפלסמה אנושית ליגנד עבור החלבון הממברנה החיצונית קולטן חיידקי H של Haemophilus influenzae סוג f. וזמינותו מקושרים-אנזים immunosorbent הועסק כדי לאפיין את אינטראקציות חלבון חלבון רקומביננטי מטוהרים H בין vitronectin, איגוד זיקה הוערכה באמצעות ביו-שכבה אינטרפרומטריה. החשיבות הביולוגית של הכריכה של vitronectin לחלבון H על פני תא החיידק תוך התחמקות של התגובה החיסונית מארח אושר שימוש assay ההתנגדות של סרום עם נורמלי, מדולדל vitronectin בנסיוב אדם. חשיבותה של vitronectin ב הדבקות חיידקים נותחו באמצעות שקופיות זכוכית עם או בלי ציפוי vitronectin, ואחריו צביעת גראם. לבסוף, חיידקי הדבקה על תאי אפיתל מכתשי אדם monolayers נחקר. הפרוטוקולים המתוארים כאן ניתן להתאים בקלות במחקר של כל המינים חיידקי של ריבית.

Vn-איגוד אל פני השטח של חיידקים נקבע על ידי cytometry זרימה. כל Hif מבודד קליני נבדק במחקר זה גייס Vn אל פני השטח של התא. אין אינטראקציה של Vn עם משטח תאים נצפתה לזן בקרה שלילית של e. coli (איור 1א'). כפי שמוצג באיור 1B, PH הוא חלבון Vn-אי...

Watch this Scientific Journal Video about Assays for Studying the Role of Vitronectin in Bacterial Adhesion and Serum Resistance at JoVE.com

Assays for Studying the Role of Vitronectin in Bacterial Adhesion and Serum Resistance

הדו ח מתאר פרוטוקולים עבור אפיון אינטראקציות בין חלבונים חיידקי הממברנה החיצונית vitronectin מווסת את המשלים אנושי. הפרוטוקולים ניתן ללמוד את איגוד תגובות והתפקוד הביולוגי של vitronectin של כל מין חיידקית.

מבחני ללמוד את התפקיד של Vitronectin הידבקות חיידקים עמידות סרום

Bacteria utilize complement regulators as a means of evading the host immune response. Here, we describe protocols for evaluating the role vitronectin ...

שיטה זו יכולה לעזור לענות על שאלות מפתח בתחום האינטראקציה בין מארח לפתוגן כגון כיצד פתוגנים חיידקיים גורמים למחלות בבני אדם על ידי שימוש בחלבונים אנושיים. היתרון העיקרי של טכניקה זו היא שזה יכול לענות אם כל פתוגן יכול לנצל Vitronectin לביסוס זיהום של המארח. נתמקד בוויטרונצין, חלבון מארח המשתתף במטריצה החוץ-תאית, אך גם מתפקד כמעכב משלים במסלול הקובע של הפעלה משלימה.עובדות אלה חשובות מאוד ומושך מאוד עבור פתוגנים גרימת מחלות בבני אדם. כדי להתכונן לציטומטריית זרימה, יש להשתמש שוב כדורי החיידקים עם 50 מיקרוליטרים של חיץ חסימה המכיל 250 ויטרונקטין ננו-מולאר. לאחר מכן, הדגירה את הדגימות במשך שעה בטמפרטורת החדר מבלי לרעוד.לאחר הדגירה, גלולה את החיידקים על ידי צנטריפוגה ב 3, 500 גרם במשך חמש דקות. לאחר מכן, לשטוף את כדורי שלוש פעמים באמצעות PBS וצעדי צנטריפוגה דומים. לאחר שטיפה, להוסיף 50 microliters של נוגדנים אנטי אנושיים ויטרונצין polyclonal כבשים לכדור חיידקי ב 1 עד 100 דילול ב PBS BSA.הדגירה ההשעיה במשך שעה בטמפרטורת החדר. לאחר מכן, לשטוף את החיידקים שלוש פעמים עם PBS כדי להסיר נוגדנים לא מאוגדים. לאחר מכן, להוסיף 50 microliters של PBS BSA המכיל פלואורסין isothiocyanate מצומד נוגדנים נגד כבשים polyclonal גלולה.דגירה בטמפרטורת החדר במשך שעה אחת בחושך. לבסוף, לאחר שלושה צעדי כביסה, להשתמש שוב גלולה חיידקי עם 300 microliters של PBS ולנתח על ידי ציטומטריה זרימה. כדי להתכונן ל- ELISA, יש לחלק 100 מיקרוליטרים של תות פתרון חלבון לכל באר של צלחת מיקרוטיטר של PolySorp.סגור את הצלחת עם המכסה ולאחסן בארבע מעלות צלזיוס לילה כדי להקל על קיבוע של חלבון על בארות צלחת microtiter. השלך את הפתרון מצלחת המיקרוטיטר על ידי הטיה הפוכה מעל הכיור. לאחר מכן, לשטוף את בארות שלוש פעמים עם 300 microliters של PBS לגם.חסום את הבארים הצפויים למשך שעה בטמפרטורת החדר עם PBS המכיל נפח של 2.5 אחוזי BSA. לאחר הסרת פתרון החסימה, לשטוף את בארות שלוש פעמים עם 300 microliters של PBST לבא. עכשיו, להוסיף 100 microliters של 50 רקומביננטי nanomolar שלו מתויג PH לכל מדגם.בארות הבקרה, להוסיף רק 100 microliters של PBS BSA. הדגירה את הצלחת במשך שעה בטמפרטורת החדר. לאחר הדגירה, השלך את תפתור החלבון והסר את החלבונים הלא מאוגדים על ידי שטיפת הבאר שלוש פעמים עם 300 מיקרוליטרים של PBST לבא.לאחר מכן, להוסיף 100 microliters של PBS BSA המכיל צנון סוס peroxidase מצומד נוגדנים אנטי פוליקלונאליים שלו. לאחר הדגירה במשך שעה בטמפרטורת החדר, לשטוף את בארות שלוש פעמים עם 300 microliters של PBST לבא. זהה את מתחמי נוגדני האנטיגן על ידי הוספת 100 מיקרוליטרים של רגנט גילוי ELISA לכל באר.לאחר מכן, מוסיפים 50 מיקרוליטרים של חומצה גופרתית טוחנית אחת לגם כדי לעצור את התגובה. למדוד את הצפיפות האופטית של בארות ב 450 ננומטר באמצעות קורא מיקרופלסטיק. לשתק ויטונוקטין אנושי על חיישנים תגובתי אמין באמצעות שיטת צימוד אמין על פי הנחיות היצרן.באמצעות PBS, לדלל באופן סדרתי את ליגנד PH רקומביננטי מאפס לארבעה micromolar ולהעביר את הפתרונות וכתוצאה מכך 96 גם שחור שטוח תחתון צלחת מיקרוטיטר. הפעל את הניסוי ב 30 מעלות צלזיוס באמצעות מכשיר אינטרפרומטריה ביו שכבה. פיפטה 10 microliters של פתרון שני מיקרוגרם למיליליטר של Vitronectin ב PBS על מגלשת מיקרוסקופ זכוכית כמו טיפה אחת.אפשר לירידה להתייבש במגלשה במשך 30 דקות בטמפרטורת החדר. לשטוף את שקופיות זכוכית מצופה חלבון שלוש פעמים על ידי טבילת אותם ב המכילה PBS במשך שתי שניות כדי להסיר עודף חלבון לא מצופה. עכשיו, להוסיף 10 מיליליטר של תרבות Hif טרי לתוך צלחת פטרי פלסטיק סטרילי להטביע את מגלשות זכוכית מצופה במדיום התרבות.הדגירה את הכלים ב 37 מעלות צלזיוס במשך שעה אחת עם רועד ב 20 סל"ד. לאחר הדגירה, הסר חיידקים לא מאוגדים על-ידי טביעה של השקופיות שלוש פעמים במקו מקור מלא ב- PBS לפני הדמיה של החיידקים המאוגדים על-ידי כתמי גרם כמתואר בפרוטוקול הטקסט. תאים אפיתל A549 תרבות כמתואר בפרוטוקול הטקסט.לאחר שטיפה אחת ו טריפסיניזציה של התאים ב 37 מעלות צלזיוס, לדלל את ההשעיה התא ל 5, 000 תאים למיליליטר באמצעות מדיום שלם המכיל חמישה מיקרוגרם למיליליטר של ג'נטמיצין. לפני זיהום חיידקי, להחליף את המדיום בארות עם F12 בינוני דגירה לילה ב 37 מעלות צלזיוס. לשטוף את monolayer התא שלוש פעמים עם מיליליטר אחד של PBS בטמפרטורת החדר.לאחר מכן, מניחים את הצלחת על קרח ו 200 microliters של מדיום F12 מקורר מראש המכיל 10 מיקרוגרם למיליליטר של Vitronectin. לאחר הדגירה את הצלחת בארבע מעלות צלזיוס במשך שעה אחת, להשליך את הפתרון על ידי צינור ולשטוף את שכבת התא פעמיים עם מיליליטר אחד של PBS בטמפרטורת החדר. הוסיפו 100 מיקרוליטרים של סוג הפרא החדש Hif במדיום F12 לכל באר.דגירה הצלחת במשך שעתיים ב 37 מעלות צלזיוס. לאחר מכן, שאפו את המדיום עם פיפטה ושטפו את תאי האפיתל A549 שלוש פעמים עם PBS. מוסיפים 50 מיקרוליטרים ל הבאר של פתרון ניתוק התאים ומעקב עם דגירה של חמש דקות ב 37 מעלות צלזיוס.לאחר מכן, להוסיף 50 microliters של F12 להשלים בינוני ל הבא כדי לעצור את התגובה אנזימטית. מעבירים את תאי האפיתל מכל באר לצינור זכוכית של שישה מיליליטר המכיל ארבעה בחנורי זכוכית. Lyse התאים בטמפרטורת החדר על ידי מערבולת במשך שתי דקות.לאחר דילול התא lysate 100-פי, צלחת 10 microliters של מדגם מדולל על צלחת אגר שוקולד. לספור את המושבות בעקבות דגירה לילה ב 37 מעלות צלזיוס. כדי לבצע את הניתוח של עמידות תלויה Vitronectin לפעילות החיידקית של סרום אנושי, התרבות הראשונה גלולה החיידקים כמתואר בפרוטוקול הטקסט.לאחר צנטריפוגה, תן שימוש חוזר גלולה חיידקי עם נפח אחד של חיץ Dextrose-Gelatin-Veronal. עכשיו, להוסיף 1, 500 CFU של חיידקים כדי 100 microliters של DGVB בתוספת המכיל 5% סרום. דגירה המדגם ב 37 מעלות צלזיוס במשך 15 דקות עם רעידות ב 300 סל"ד.מוציאים 10 מיליליטר מתערובת התגובה באפס דקות ו-15 דקות. מניחים את aliquot על אגר שוקולד הדגירה את הצלחת ב 37 מעלות צלזיוס לילה. לאחר הדגירה של צלחות אגר שוקולד, לספור את המושבות המופיעות על הצלחות ולחשב את אחוז החיידקים שנהרגו כמתואר בפרוטוקול הטקסט.כל המבודדים הקליניים של Hif שנבדקו במחקר זה גייסו את ויטוונקטין לפני השטח של התא כפי שנקבע על ידי ציטומטריית זרימה. קשירה של ויטרונקטין על ידי סוג הבר זן Hif גרם לשינוי באוכלוסייה ואילו המוטנט לא לקשור Vitronectin. אינטראקציות חלבון חלבון בין חלבון ויטרונאטין מחייב גדול PH ו Vitronectin הוערכו על ידי ELISA.התוצאות מצביעות על אינטראקציה משמעותית בין PH וגם Vitronectin ואת השליטה החיובית ביחס לשליטה השלילית. האינטראקציה בין PH ו Vitronectin הוערכו בזמן אמת באמצעות אינטרפרומטריה ביו שכבה יש זיקה של 2.2 micromolar. יתר על כן, ביטוי חסר חיידקים של PH על פני התא הפגין דבקות מופחתת משטחי זכוכית מצופה Vitronectin בהשוואה לתאי סוג הבר.בנוסף, נוכחותו של Vitronectin על פני השטח של תאי אפיתל שיפרה באופן משמעותי את הדבקות של Hif. כדי להעריך את הפעילות המשלים של Vitronectin, הרג מתווך בסרום נבדק. תאי Hif מסוג פראי הפגינו עמידות גבוהה יותר בסרום מאשר תאים מוטנטים.לא נהרגו חיידקים בנוכחות סרום שהושבת בחום. מעניין, סוג הבר Hif הפגין הישרדות מופחתת בסרום מדולדל Vitronectin וחידוש של Vitronectin גדל הישרדות חיידקית. עם זאת, זן המוטנטים לא הגיב לדלדול Vitronectin כי זה לא יכול לגייס Vitronectin על פני השטח של התא.לאחר השליטה, טכניקה זו ניתן לעשות זאת בשלושה עד ארבעה ימים עבור כל פתוגן ולזכור להשתמש בתרבות הטרייה של פתוגנים חיידקיים. לאחר צפייה בסרטון זה, אתה צריך הבנה טובה על איך לנתח את ויטרונקטין מחייב פתוגן. בנוסף לטכניקה זו, ויטרונאטין מחייב חלבוני משטח של חיידקים ניתן לזהות באמצעות פרוטומיקה ו כתמים מערביים.טכניקה זו חשובה לחוקרים בתחום האינטראקציה בין המארח לפתוגן וגם לחקור את מנגנון הארסיות בחיידקים.

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

In Vitro Assay of Bacterial Adhesion onto Mammalian Epithelial Cells

In Vitro Assay of Bacterial Adhesion onto Mammalian Epithelial Cells

ב Assay חוץ גופית של הידבקות חיידקים על תאים אפיתל היונקים

To cause infections, bacteria must colonize their host. Bacterial pathogens express various molecules or structures able to promote attachment to host ...

Amplifying and Quantifying HIV-1 RNA in HIV Infected Individuals with Viral Loads Below the Limit of Detection by Standard Clinical Assays

הגברה וכימות HIV-1 RNA אצל אנשים שנדבקו ב-HIV עם המון ויראלי מתחת לגבול של זיהוי על ידי מבחני קלינית רגילה

Amplifying viral genes and quantifying HIV-1 RNA in HIV-1 infected individuals with viral loads below the limit of detection by standard assays (below ...

Introducing Shear Stress in the Study of Bacterial Adhesion

היכרות עם מתח שאר בחקר הדבקה חיידקית

During bacterial infections a sequence of interactions occur between the pathogen and its host. Bacterial adhesion to the host cell surface is often the ...

One-day Workflow Scheme for Bacterial Pathogen Detection and Antimicrobial Resistance Testing from Blood Cultures

יום אחד זרימת עבודה עבור תוכנית זיהוי פתוגן חיידקי ובדיקות ההתנגדות Antimicrobial מתרבויות דם

Bloodstream infections are associated with high mortality rates because of the probable manifestation of sepsis, severe sepsis and septic shock1. ...

VIGS-Mediated Forward Genetics Screening for Identification of Genes Involved in Nonhost Resistance

הקרנת גנטיקה קדימה VIGS בתיווך לזיהוי גני המעורבים בהתנגדות Nonhost


	Nonhost disease resistance of plants against bacterial pathogens is controlled by complex defense pathways. Understanding this mechanism is important ...

Static Adhesion Assay for the Study of Integrin Activation in T Lymphocytes

סטטי הידבקות Assay לחקר Integrin ההפעלה בT לימפוציטים

T lymphocyte adhesion is required for multiple T cell functions, including migration to sites of inflammation and formation of immunological synapses with ...

In Vitro and In Vivo Model to Study Bacterial Adhesion to the Vessel Wall Under Flow Conditions

In Vitro and In Vivo Model to Study Bacterial Adhesion to the Vessel Wall Under Flow Conditions

במבחנת in vivo המודל ללמוד הידבקות חיידקים לכלי השיט וול תנאי זרימה תחת

In order to cause endovascular infections and infective endocarditis, bacteria need to be able to adhere to the vessel wall while being exposed to the ...

Qualitative and Quantitative Assays for Detection and Characterization of Protein Antimicrobials

מבחנים איכותיים וכמוני עבור זיהוי ואפיון של antimicrobials החלבון

Initial evaluations of large microbial libraries for potential producers of novel antimicrobial proteins require both qualitative and quantitative methods ...

Assay of Adhesion Under Shear Stress for the Study of T Lymphocyte-Adhesion Molecule Interactions

Assay הדבקה תחת מאמץ גזירה לחקר T לימפוציטים-הדבקה אינטראקציות מולקולה

Overall, T cell adhesion is a critical component of function, contributing to the distinct processes of cellular recruitment to sites of inflammation and ...

Rapid, Safe, and Simple Manual Bedside Nucleic Acid Extraction for the Detection of Virus in Whole Blood Samples

חילוץ מהיר, בטוח, ופשוט ידנית המיטה חומצת גרעין איתור וירוס בדגימות דם מלא

The rapid diagnosis of an infection is essential for the outbreak management, risk containment, and patient care. We have previously shown a method for ...