Name: parallel measurement of circadian clock gene expression and hormone secretion in human primary cell cultures
Uploaded: 2016-11-11T15:00:00
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Nous sommes reconnaissants à nos collègues de l&#39;Université de Genève: Jacques Philippe pour des commentaires constructifs sur ce travail, Ueli Schibler pour une aide précieuse au développement du système de perifusion et d&#39;inspiration scientifique, André Liani pour avoir conçu la conception, la fabrication et la mise en service de le système de perfusion, société Lesa-Technology LTD pour l&#39;assistance dans le système perifusion et le développement de logiciels Drip-biolumicorder, George Severi d&#39;assistance avec les expériences de périfusion, Ursula Loizides-Mangold pour la lecture critique du manuscrit, et Anne-Marie Makhlouf pour les préparations de lentivirus ; Etienne Lefai, Stéphanie Chanon et Hubert Vidal (INSERM, Lyon) pour la préparation de myoblastes primaires humains; et Domenico Bosco et Thierry Berney (Human Islet Transplantation Center, Hôpital Universitaire de Genève) pour fournir des îlots humains. Ce travail a été financé par le n ° national suisse Science Foundation Grant 31003A_146475 / 1, le Sinergia Swiss National Science Foundation Grant No. CRSII3-154405, Fondation Romande verser Diabète de la Recherche, Fondation Bo Hjelt, Fondation Ernst et Lucie Schmidheiny, et la Société Académique de Genève (CD).

Déclaration éthique: Manipulations inclus dans ce protocole ont été approuvés par le comité d&#39; éthique de l&#39;hôpital universitaire de Genève et par l&#39;éthique Comité SUD EST IV (Accord 12/111) 19. Les îlots humains ont été isolés à partir de pancréas de donneurs multi-organes de mort cérébrale dans le Centre de transplantation Islet à l&#39;hôpital universitaire de Genève (Suisse) , comme décrit par nous dans les références 16,18, ou obtenu à partir d&#39; une so...

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Les paramètres expérimentaux décrits ici sont composés de livraison lentiviral de reporters de bioluminescence circadiens dans des cellules primaires humaines en culture, suivie par une synchronisation ultérieure in vitro et l&#39; enregistrement continu de bioluminescence pendant plusieurs jours, et l&#39; analyse parallèle de la sécrétion d&#39; hormones par les mêmes cellules. Ils représentent une approche efficace pour explorer les mécanismes moléculaires et les aspects fonctionnels des horloges...

Le système de chronométrage circadien (du latin &quot;Circa diem&quot;) a vu le jour dans tous les organismes sensibles à la lumière, comme un mécanisme d&#39; adaptation à la rotation de la Terre. Chez les mammifères, elle est organisée de façon hiérarchique, qui englobe l&#39;horloge centrale, qui est située dans le noyau suprachiasmatique de l&#39;hypothalamus ventrale et périphérique (ou esclave) qui sont des oscillateurs fonctionnant dans différents organes. En outre, ces oscillateurs autonomes auto-entretenues cellules sont fonctionnelles dans presque toutes les cellules du corps 1. Signaux photiques représentent un signal de synchronisation dominant (Zeitgeber) pour les neurones du RCS, alors que les signaux neuronaux et humorale émanant du SCN réinitialiser les horloges périphériques. En addition des rythmes de repos-activité, qui poussent dans les cycles d&#39;alimentation à jeun tour, sont d&#39; autres synchroniseurs pour horloges périphériques 2. D&#39;après les connaissances actuelles, la composition moléculaire de l&#39;horloge de base est basée sur la transcription et traducboucles de rétroaction tions, qui sont conservées entre les organismes. Cela comprend les activateurs de transcription BMAL1 et CLOCK, qui activent ensemble la transcription des gènes négatifs noyau horloge PER et CRY. Des niveaux élevés de PER et de protéines CRY inhibent leur propre transcription par l&#39;inhibition du complexe / CLOCK BMAL1. Une boucle auxiliaire se compose des récepteurs nucléaires REV-Erbs et reurs, qui régulent également la transcription de BMAL1 et CLOCK. En outre, les événements post - traductionnelles , y compris la phosphorylation, sumoylation, acétylation, O-GlcNAcylation, la dégradation et l&#39; entrée nucléaire des protéines noyau d&#39;horloge représentent une couche supplémentaire de régulation important dans l&#39; établissement du cycle d&#39;oscillation 24 h 3. L&#39;accumulation des données provient des études dans des modèles de rongeurs et met en évidence le rôle critique du système circadien dans la coordination des fonctions métaboliques et endocriniens 4-5. Un certain nombre de large-échelle de l&#39; analyse du transcriptome suggèrent que l&#39; alimentation - cycles de jeûne jouent un rôle central dans la synchronisation des oscillateurs périphériques 6-8. En accord avec ces études, l&#39; analyse métabolomique et lipidomiques chez les rongeurs et les humains ont révélé qu&#39;un grand nombre de métabolites osciller dans les tissus, le plasma et la salive d&#39;une manière circadien 9-11. Fait important, la plupart des hormones présentent des rythmes circadiens dans 5,12-13 de sang. En outre, les horloges circadiennes de l&#39;hormone correspondante produisant des tissus périphériques pourraient réguler la sécrétion d&#39;hormones localement. Oscillateurs circadiens cellulaires autonomes ont été décrits dans les rongeurs et les cellules des îlots pancréatiques humains 14-16. Ces oscillateurs jouent un rôle essentiel dans la régulation de l&#39;îlot transcriptome du pancréas et de la fonction 15,17-18. En outre, la sécrétion Myokine par myotubes squelettiques humains a été démontré récemment pour présenter un modèle circadien, qui est régulée par oscillato cellulaire autonomers opératoires dans ces cellules 19. Plusieurs approches pour l&#39; étude des rythmes circadiens chez les humains in vivo ont été largement utilisés. Par exemple, la mélatonine plasmatique ou les niveaux de cortisol, ainsi que thoracique température de surface de la peau (revue dans les références 3,20) ont été étudiés pour évaluer horloges circadiennes endogènes. Bien que ces méthodes permettent d&#39; étudier les oscillations circadiennes systémiques in vivo, ils sont loin de fournir une évaluation fiable des rythmes circadiens autonomes libres fonctionnant dans différents organes et tissus. Néanmoins, une telle dissection de la régulation systémique serait un outil indispensable pour la compréhension de l&#39;effet spécifique des horloges moléculaires intracellulaires sur la fonction de ces cellules. Par conséquent, un effort important a été entrepris pour développer des approches fiables pour l&#39; étude des horloges humaines dans des cellules cultivées immortalisées ou primaires synchronisées in vitro. Surtout, il a été démontré quecaractéristiques d&#39;horloge mesurées dans des cellules de fibroblastes primaires de peau en culture reflètent étroitement les propriétés d&#39;horloge individuelles de l&#39;ensemble de l&#39; organisme 21. Le développement des reporters circadiens fluorescents et bioluminescentes a considérablement avancé cette approche 22-27. En outre, l&#39; étude des horloges de cellules primaires qui sont dérivées de différents organes périphériques permet l&#39;étude des propriétés moléculaires des horloges spécifiques de tissus humains 3,5,16,19-20,28. Ainsi, l&#39; évaluation des horloges circadiennes dans explants in vitro ou les cellules primaires synchronisées, en utilisant les journalistes bioluminescentes, représente une méthode très utile pour étudier la composition moléculaire des horloges périphériques humaines et leur impact sur le fonctionnement des organes. Dans cet article, nous présenterons des protocoles détaillés pour l&#39; évaluation de l&#39; expression du gène circadien dans les cellules des îlots pancréatiques primaires et les muscles squelettiques humains synchronisés in vitro, ainsi que l&#39;impact de l&#39; horloge cellulaire autonomela perturbation de la fonction de sécrétion de ces cellules.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" width="1006">
	<tbody>
		<tr height="19">
			<td height="19" style="height:20px;width:215px;">Trypsin-EDTA</td>
			<td style="width:112px;">Invitrogen</td>
			<td style="width:119px;">25300-054</td>
			<td style="width:560px;">For muscle biopsy digestion</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:215px;">DPBS no calcium no magnesium</td>
			<td style="width:112px;">Invitrogen</td>
			<td style="width:119px;">14190-094</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:215px;">HAM F-10</td>
			<td style="width:112px;">Invitrogen</td>
			<td style="width:119px;">41550-021</td>
			<td>For myoblasts culture</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:215px;">FBS</td>
			<td style="width:112px;">Invitrogen</td>
			<td style="width:119px;">10270</td>
			<td>Supplement to culture medium</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:215px;">Penicillin-Streptomycin</td>
			<td style="width:112px;">Sigma</td>
			<td style="width:119px;">P0781-100</td>
			<td>Supplement to culture medium</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:215px;">Gentamycin</td>
			<td style="width:112px;">Axon&#160;</td>
			<td style="width:119px;">A1492.0001</td>
			<td>Supplement to culture medium</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:215px;">Fungizone</td>
			<td style="width:112px;">Invitrogen</td>
			<td style="width:119px;">15290-026</td>
			<td>Amphotericin B, supplement to culture medium</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:215px;">DMEM 1g/L glucose + Na pyruvate + glutamax&#160;</td>
			<td style="width:112px;">Invitrogen</td>
			<td style="width:119px;">21885-025</td>
			<td>For myotubes culture</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:215px;">DMEM 1g/L glucose -Na Pyruvate - glutamax</td>
			<td style="width:112px;">Invitrogen</td>
			<td style="width:119px;">11880-028</td>
			<td>Recording medium for LumiCycle</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:215px;">Glutamax</td>
			<td style="width:112px;">Invitrogen</td>
			<td style="width:119px;">35050-028</td>
			<td>L-alanyl-L-glutamine dipeptide, supplement to recording medium</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:215px;">Accutase</td>
			<td style="width:112px;">Innovative Cell Technologies</td>
			<td style="width:119px;">AT-104</td>
			<td>Cell detachment solution, for islet cell dissociation</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:215px;">CMRL</td>
			<td style="width:112px;">Gibco</td>
			<td style="width:119px;">21530-027</td>
			<td>Culture medium for islet cells</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:215px;">Sodium Pyruvate</td>
			<td style="width:112px;">Gibco</td>
			<td style="width:119px;">11360-039</td>
			<td>Supplement to culture medium</td>
		</tr>
		<tr height="19">
			<td height="19" style="height:20px;width:215px;">15 ml High-Clarity Polipropylene Conical Tube</td>
			<td style="width:112px;">Falcon</td>
			<td style="width:119px;">352096</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:215px;">F75 flask</td>
			<td style="width:112px;">BD Falcon</td>
			<td style="width:119px;">353136</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:215px;">3.5 cm Petri dish&#160;</td>
			<td style="width:112px;">BD Falcon</td>
			<td style="width:119px;">353001</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:215px;">Foskolin</td>
			<td style="width:112px;">Sigma</td>
			<td style="width:119px;">F6886</td>
			<td>Adenylyl cyclase activator, used for synchronization</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:215px;">Luciferin</td>
			<td style="width:112px;">Prolume LTD</td>
			<td style="width:119px;">260150</td>
			<td>Supplement to recording medium</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:215px;">OptiMEM&#160;</td>
			<td style="width:112px;">Invitrogen</td>
			<td style="width:119px;">51985-026</td>
			<td>Serum-free Minimal Essential Medium (MEM) used for human islet cells transfection</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:215px;">Lipofectamine RNAiMAX reagent</td>
			<td style="width:112px;">Invitrogen</td>
			<td style="width:119px;">13778-150</td>
			<td>Transfection reagent</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:215px;">HiPerFect reagent</td>
			<td style="width:112px;">Qiagen</td>
			<td style="width:119px;">301705</td>
			<td>Transfection reagent</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:215px;">ON-TARGET plus siCLOCK smartpool&#160;</td>
			<td style="width:112px;">Dharmacon</td>
			<td style="width:119px;">L-008212-00</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:215px;">ON-TARGET plus non targeting siRNA #1 (siControl)</td>
			<td style="width:112px;">Dharmacon</td>
			<td style="width:119px;">D-001810-01</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:215px;">DNeasy Blood &#38; Tissue Kit&#160;</td>
			<td style="width:112px;">Qiagen</td>
			<td style="width:119px;">69504</td>
			<td>For myotubes DNA extraction</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:215px;">RNeasy Plus Mini kit&#160;</td>
			<td style="width:112px;">Qiagen</td>
			<td style="width:119px;">74104</td>
			<td>For myotubes RNA extraction</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:215px;">QIAshredder&#160;</td>
			<td style="width:112px;">Qiagen</td>
			<td style="width:119px;">79654</td>
			<td>For myotubes RNA extraction</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:215px;">2 ml collecting tubes</td>
			<td style="width:112px;">Axygen</td>
			<td style="width:119px;">311-10-051</td>
			<td>To collect the medium with the perifusion</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:215px;">Tissue culture Plate, 6 Well</td>
			<td style="width:112px;">BD Falcon&#160;</td>
			<td style="width:119px;">353046</td>
			<td>To collect the medium with the perifusion</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:215px;">RNeasy Plus Micro kit&#160;</td>
			<td style="width:112px;">Qiagen</td>
			<td style="width:119px;">74034</td>
			<td>For islet RNA extraction</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:215px;">Human IL-6 Instant ELISA kit&#160;</td>
			<td style="width:112px;">eBioscience</td>
			<td style="width:119px;">88-7066-22</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:215px;">Human Insulin Kit Mercodia</td>
			<td style="width:112px;">Mercodia</td>
			<td style="width:119px;">10-1113-01</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:215px;">Hydrochloric acid, min,37%,p.a.</td>
			<td style="width:112px;">Acros organics</td>
			<td style="width:119px;">124630010</td>
			<td>Used for preparation of lysis buffer (375ml Ethanol+7.5%HCl+117.5%H2O)</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:215px;">Ethanol (&#62;99.8%)</td>
			<td style="width:112px;">Fluka Analytical</td>
			<td style="width:119px;">02860-1L</td>
			<td>Used for preparation of lysis buffer (375ml Ethanol+7.5%HCl+117.5%H2O)</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Human Islets for Research</td>
			<td colspan="2">Prodo Laboratories</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:215px;">Name</td>
			<td style="width:112px;">Company</td>
			<td style="width:119px;">Catalog Number</td>
			<td>Comments</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:215px;">Equipment:</td>
			<td style="width:112px;"></td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:215px;">Centrifuge</td>
			<td style="width:112px;">Heraeus</td>
			<td style="width:119px;">Megafuge 1.0R</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:215px;">Water bath</td>
			<td style="width:112px;">VWR</td>
			<td style="width:119px;">1112A</td>
			<td>&#160;at 37 &#176;C</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:215px;">Tissu culture hood</td>
			<td style="width:112px;">Faster&#160;</td>
			<td style="width:119px;">SafeFastElite</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="25">
			<td height="25" style="height:25px;width:215px;">Tissu culture incubator</td>
			<td style="width:112px;">Heraeus</td>
			<td style="width:119px;">HeraCell 150</td>
			<td style="width:560px;">5% CO2 at 37 &#176;C, no water due to the LumiCycle installation</td>
		</tr>
		<tr height="25">
			<td height="25" style="height:25px;width:215px;">Tissu culture incubator</td>
			<td style="width:112px;">Heraeus</td>
			<td style="width:119px;">HeraCell 150</td>
			<td style="width:560px;">5% CO2 at 37 &#176;C, no water due to the LumiCycle installation</td>
		</tr>
		<tr height="44">
			<td height="44" style="height:44px;width:215px;">Tissu culture incubator</td>
			<td style="width:112px;">Thermo Scientific</td>
			<td style="width:119px;">Hera Cell 150i</td>
			<td style="width:560px;">5% CO2 at 37 &#176;C</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:215px;">Shaker</td>
			<td style="width:112px;">Heidolph Instruments</td>
			<td style="width:119px;">Unimax 1010</td>
			<td>For agitation of the siRNA mix</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:215px;">LumiCycle</td>
			<td style="width:112px;">Actimetrics</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td style="width:560px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:215px;">LumiCycle software</td>
			<td style="width:112px;">Actimetrics</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:215px;">CosinorJ software</td>
			<td style="width:112px;">EPFL</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td>Freely available at: http://bigwww.epfl.ch/algorithms/cosinorj/</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Rheodyne titan MX&#160;</td>
			<td style="width:112px;">ERC GmbH</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td>Control software that controls the timing of the automated switch</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

parallel measurement of circadian clock gene expression and hormone secretion in human primary cell cultures

Les horloges circadiennes sont fonctionnelles dans tous les organismes sensibles à la lumière, ce qui permet une adaptation au monde extérieur, en anticipant les changements environnementaux quotidiennes. Des progrès considérables dans notre compréhension de la connexion étanche entre l&#39;horloge circadienne et la plupart des aspects de la physiologie ont été réalisés dans le domaine au cours de la dernière décennie. Cependant, effilocher la base moléculaire qui sous-tend la fonction de l&#39;oscillateur circadien chez l&#39;homme reste de la plus haute défi technique. Ici, nous fournissons une description détaillée d&#39;une approche expérimentale à long terme (2-5 jours) enregistrement bioluminescence et de collecte de moyen d&#39;écoulement dans les cellules primaires humaines en culture. A cet effet, nous avons transduit des cellules primaires avec un reporter de luciférase lentivirale qui est sous le contrôle d&#39;un promoteur de gène d&#39;horloge de base, ce qui permet l&#39;évaluation parallèle de la sécrétion d&#39;hormones et de bioluminescence circadien. En outre, nous décrivons les conditions pour perturber l&#39;horloge circadienne dans prcellules humaines imary en transfectant siRNA CLOCK ciblage. Nos résultats sur la régulation circadienne de la sécrétion d&#39;insuline par les îlots pancréatiques humains, et Myokine la sécrétion par les cellules musculaires squelettiques humaines, sont présentés ici pour illustrer l&#39;application de cette méthodologie. Ces paramètres peuvent être utilisés pour étudier la composition moléculaire des horloges périphériques humaines et d&#39;analyser leur impact fonctionnel sur les cellules primaires dans des conditions physiologiques ou physiopathologiques.

Évaluation de l&#39;Islet Hormone Sécrétion avec Parallel Circadian bioluminescence Enregistrement à partir de cellules Perifused îlots humains Après avoir fourni une première caractérisation moléculaire de l&#39;horloge circadienne, fonctionnant dans des cellules d&#39;îlots humains 16, nous avons pour but d&#39;étudier l&#39;impact de la perturbation de l&#39; horloge sur la fonction des îlots et la tr...

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Parallel Measurement of Circadian Clock Gene Expression and Hormone Secretion in Human Primary Cell Cultures

Here, we describe settings to monitor in parallel circadian bioluminescence and the secretory activity of human islet cells and primary myotubes. For this, we employed lentiviral gene delivery of a luciferase core clock reporter, followed by in vitro synchronization and collection of outflow medium by continuous cell perifusion.

Mesure parallèle d&#39;expression Circadian Clock génique et la sécrétion d&#39;hormones dans des cultures de cellules humaines primaires

Circadian clocks are functional in all light-sensitive organisms, allowing for an adaptation to the external world by anticipating daily environmental ...

The overall goal of this procedure is the parallel assessment of circadian bioluminescence and the secretory activity of human primary endocrine cells cultured and synchronized en vitro.This method can help to investigate the temporal pattern of cell secretion and how it can be regulated by cell-autonomous circadian clocks.The main advantage of this technique is that it allows us to monitor the circadian luciferins as reporter activity and, simultaneously collect outflow medium for measuring the levels of secreted hormones and myokines.To introduce circadian bioluminescence reporters into primary cells by lentiviral transduction, first, transfer the 3.5 cm petri dishes containing human myoblasts at 30%to 50%confluency to a laminar flow cabinet.Replace the human myoblast medium with 2 mL of growth medium.Then transduce the primary cell culture by pipetting lentivirus solution into the dish to obtain a multiplicity of infection equal to three.Incubate the cells overnight in a tissue-culture incubator.Change medium the next day.To achieve en vitro synchronization, add 10 micromolar adenylyl cyclase activator in 2 mL of medium per 3.5 cm petri dish containing the previously transfected primary cells.Incubate the cells for 60 minutes at 37

Research

JoVE Journal

Genetics

Single-cell Gene Expression Using Multiplex RT-qPCR to Characterize Heterogeneity of Rare Lymphoid Populations

Unicellulaire Gene Expression utilisant Multiplex RT-qPCR à Caractériser Hétérogénéité des rares populations lymphoïdes

Gene expression heterogeneity is an interesting feature to investigate in lymphoid populations. Gene expression in these cells varies during cell ...

Recherche

Génétique

Rearing and Double-stranded RNA-mediated Gene Knockdown in the Hide Beetle, Dermestes maculatus

Rearing and Double-stranded RNA-mediated Gene Knockdown in the Hide Beetle, Dermestes maculatus

L&#39;élevage et d&#39;ARN double brin médiée Gene Knockdown dans le Hide Beetle,<em&gt; Dermestes maculatus</em

Advances in genomics have raised the possibility of probing biodiversity at an unprecedented scale. However, sequence alone will not be informative ...

Single-cell Gene Expression Profiling Using FACS and qPCR with Internal Standards

Unicellulaire profil d&#39;expression génique utilisant FACS et qPCR avec les normes internes

Gene expression measurements from bulk populations of cells can obscure the considerable transcriptomic variation of individual cells within those ...

Studying Cell Cycle-regulated Gene Expression by Two Complementary Cell Synchronization Protocols

Étude de l&#39;expression génétique régulée par un cycle cellulaire par deux protocoles complémentaires de synchronisation cellulaire

The gene expression program of the cell cycle represents a critical step for understanding cell cycle-dependent processes and their role in diseases such ...

Selection-dependent and Independent Generation of CRISPR/Cas9-mediated Gene Knockouts in Mammalian Cells

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Une méthode Standard pour examiner la mutagénicité sur place en fonction de la Mutation ponctuelle de réparation catalysée par CRISPR/Cas9 et SsODN dans les cellules humaines

Combinatorial gene editing using CRISPR/Cas9 and single-stranded oligonucleotides is an effective strategy for the correction of single-base point ...

Measuring Gene Expression in Bombarded Barley Aleurone Layers with Increased Throughput

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Une méthode Optogenetic pour contrôler et analyser les profils d’Expression génique dans les Interactions cellule-cellule

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Perturbation de gène hautement efficace des cellules progénitrices hématopoïétiques murins et humains par CRISPR/Cas9

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