Name: a murine model of group b streptococcus vaginal colonization
Uploaded: 2016-11-16T14:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about A Murine Model of Group B Streptococcus Vaginal Colonization at JoVE.com

We would like to thank the vivarium manager and staff at San Diego State University for support with animal husbandry. During this work, K.A.P. was supported by an ARCS scholarship and a fellowship from the Inamori Foundation. K.S.D. is supported by an R01 grant, NS051247, from the National Institutes of Health.

Alle dyr arbeidet ble godkjent av Office of Lab Animal Care i San Diego State University og gjennomført under aksepterte veterinær standarder. Hunnmus, alder 8 - 16 uker, ble anvendt for utvikling av denne fremgangsmåte. 1. Forberedelse og intraperitoneal injeksjon av β-østradiol <ol><li> Mål opp β-østradiol (0,5 mg / mus) på veier papir mens iført egnet personlig verneutstyr (PVU). FORSIKTIG: β-østradiol kan absorberes gjennom huden og slimhinneoverflater. </li><li> Overfør β-ø...

For å fremme utvikling av forståelsen av GBS-interaksjoner med både verts og andre mikrober innenfor rammen av verten, er en dyremodell nødvendig. Dette arbeidet beskriver de tekniske aspektene ved å etablere GBS vaginal kolonisering hos mus. Denne protokollen oppnår&gt; 90% koloniseringen av musene uten bruk av bedøvelse for å inokulere bakterier eller for å samle inn penselprøver, immun-undertrykkende midler for å muliggjøre kolonisering, vaginal forvask eller additiver for å fortykke inokulum. Dessuten v...

Streptococcus agalactiae, gruppe B Streptococcus (GBS), er en innkapslet, grampositiv bakterie som ofte isoleres fra tarmen og urogenitalsystem hos friske voksne. På 1970-tallet GBS dukket opp som den ledende agent for smittsomme neonatal dødelighet, med over 7000 tilfeller av neonatal sykdom årlig 1. Tidlig innsettende GBS-sykdom (EOD) oppstår i de første timene eller dagene av livet, oppstår som lungebetennelse eller pustevansker, og ofte utvikler seg til sepsis, mens sent oppstått sykdom (LOD) følger etter flere måneder, og presenterer med bakteriemi, som ofte avanserer til meningitt to. Per 2002, Centers for Disease Control and Prevention anbefaler universell screening for GBS vaginal kolonisering i slutten av svangerskapet og intrapartum antibiotikaprofylakse (IAP) for å GBS-positive mødre 1. Til tross for reduksjon av tidlig debut av sykdommen til ca 1000 tilfeller i USA hvert år på grunn av IAP,GBS er fortsatt den ledende årsak til tidlig debut neonatal sepsis, og sent innsettende forekomst forblir upåvirket en. Enten i utero, under fødselen, eller til og med sen debut tilfeller neonatal eksponering for GBS krever overlevelse, tverrgående gjennom en rekke vertsmiljøer og barrierer, immune evasion, og i tilfelle av hjernehinnebetennelse, kryssing av sterkt regulert blod- hjerne barrieren to. Upstream av disse virulente interaksjoner i det nyfødte barnet er den første kolonisering av morens vaginal kanalen. Mors GBS vaginal koloniserings priser varierer 8-18% i utviklede og utviklingsland, med en anslått gjennomsnittlig rente på 12,7% 3,4. GBS kolonisering av vaginal skrift under svangerskapet kan være konstant, intermitterende, eller forbigående blant enkelte kvinner 5. Interessant er en mors alder&gt; 36 år i forbindelse med vedvarende kolonisering 6. Mange biologiske og sosioøkonomiske risikofaktorer for GBS vaginal koloniseringDet er identifisert. Biologiske faktorer omfatter gastrointestinalt GBS kolonisering og fravær av Lactobacillus i tarmen. Imidlertid har etnisk, fedme, hygiene, og seksuell aktivitet har også blitt assosiert med GBS vaginal vogn 7. Selv beryktet for å forårsake neonatal infeksjoner, GBS fører også en rekke mors infeksjoner både peripartum og postpartum. GBS vogn er økt hos kvinner som opplever vaginitt 8 og, i enkelte tilfeller kan til og med være sykdom enhet 9. I tillegg kan GBS himmelfart skjede under svangerskapet fører til intra-fostervann infeksjon eller korioamnionitt 10. Videre, i opp til 3,5% av alle svangerskap, GBS formidler til urinblæren til å forårsake en urinveisinfeksjon eller asymptomatisk bakteriuri 11. GBS bakteriuri under svangerskapet er forbundet med økt risiko for intrapartal feber, korioamnionitt, prematur fødsel, og premature vannavgang 12. Tatt sammen, er nærværet av GBS innenfor vaginal kanalen koblet til infeksjoner av flere verts vev, og evnen til å eliminere GBS fra denne nisjen er viktig for både mor og neonatal helse. Inntil nylig var det meste av arbeidet undersøker GBS interaksjoner med cervicovaginal kanalen begrenset til in vitro cellemodeller 13-15. Disse in vitro forsøk har avdekket bakterielle faktorer som er viktige for etterlevelse, inkludert overflateproteiner slik en pili og serin-rich gjentar 17,18, samt to-komponent regelverk 15,19 og den globale transcriptional responsen av vaginal Epitel til GBS 19. Men for å fullt ut belyse host-mikrobe interaksjoner innenfor skjedekanalen, er en robust dyremodell nødvendig. Tidlig arbeid vist at GBS kan utvinnes fra vaginal skrift av inokulerte mus 20,21 og rotter &lt;sup&gt; 22 i både gravide og ikke-gravide betingelser. I 2005 ble kortvarig GBS vaginal kolonisering modellert på mus for å undersøke effekten av et fag lytisk enzym for å behandle vaginal GBS over en 24 timers periode 23. Flere år senere, ble en langsiktig GBS vaginal kolonisering musemodell utviklet for å studere verts og bakterielle faktorer som styrer GBS utholdenhet. Denne modellen har identifisert en rekke GBS faktorer som bidrar til kolonisering, inkludert overflate vedheng 17,18 og GBS to-komponent systemer 19,24. Denne modellen har bidratt til identifisering av vertsresponsmekanismer 19,25 og ble brukt til å teste flere terapeutiske strategier, inkludert immunmodulerende peptider 26 og probiotika 27. Denne protokollen gir nødvendig veiledning for å vaksinere GBS i musen vaginal kanalen og deretter å spore kolonisering og samle inn prøver for videre analyser.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" width="592">
	<colgroup>
		<col />
		<col />
		<col />
		<col />
	</colgroup>
	<tbody>
		<tr height="43">
			<td height="43" style="height:43px;width:216px;">Sesame oil&#160;</td>
			<td style="width:91px;">Sigma Aldrich</td>
			<td style="width:119px;">S3547-250ML</td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="46">
			<td height="46" style="height:46px;width:216px;">&#946;-Estradiol&#160;</td>
			<td style="width:91px;">Sigma Aldrich</td>
			<td style="width:119px;">E8875-1G</td>
			<td>CAUTION: Wear appropriate PPE. &#946;-estradiol can be absorbed through the skin and mucosal surfaces.&#160;</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">200 &#956;L gel loading pipette tips&#160;</td>
			<td style="width:91px;">USA Scientific</td>
			<td style="width:119px;">1252-0610</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">Urethro-genital, sterile, calcium alginate swabs</td>
			<td style="width:91px;">Puritan</td>
			<td style="width:119px;">25-801 A 50</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">CHROMagar StrepB</td>
			<td style="width:91px;">DRG International</td>
			<td style="width:119px;">SB282</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">Todd Hewitt Broth</td>
			<td style="width:91px;">Hardy Diagnostics</td>
			<td style="width:119px;">7161C</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">18 G, 1.5 inch needles</td>
			<td style="width:91px;">BD</td>
			<td style="width:119px;">305199</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">26 G, 0.5 inch needles</td>
			<td style="width:91px;">BD</td>
			<td style="width:119px;">305111</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">10 mL syringes</td>
			<td style="width:91px;">BD</td>
			<td style="width:119px;">309604</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">1 mL syringes</td>
			<td style="width:91px;">BD</td>
			<td style="width:119px;">309659</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">0.45 &#956;m PVDF syringe filters</td>
			<td style="width:91px;">Whatman</td>
			<td style="width:119px;">6900-2504</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">Dulbecco&#39;s Phosphate-Buffered Salt Solution 1X</td>
			<td style="width:91px;">Corning</td>
			<td style="width:119px;">21-031-CV</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

a murine model of group b streptococcus vaginal colonization

Streptococcus agalactiae (gruppe B Streptococcus, GBS), er en Gram-positiv, asymptomatisk colonizer av den humane mage-tarmkanalen og vaginal skrift av 10 - 30% av voksne. I svekket immunforsvar personer, inkludert nyfødte, gravide og eldre, kan GBS bytte til en invasiv patogen forårsaker sepsis, leddgikt, lungebetennelse og hjernehinnebetennelse. Fordi GBS er en ledende bakteriell patogen av nyfødte, er aktuell profylakse består av sent i svangerskapet screening for GBS vaginal kolonisering og påfølgende peripartum antibiotikabehandling av GBS-positive mødre. Heavy GBS vaginal byrde er en risikofaktor for både neonatal sykdom og kolonisering. Dessverre er lite kjent om verten og bakterielle faktorer som fremmer eller tillater GBS vaginal kolonisering. Denne protokollen beskriver en teknikk for å etablere vedvarende vaginal GBS kolonisering ved hjelp av et enkelt β-østradiol forbehandling og daglig sampling for å bestemme bakterie load. Det videre detaljer metoder for å administrere flere behandlinger eller reagenser av interesse og for å samle vaginal lavage væske og reproduktive veis vev. Denne musen modellen vil fremme forståelsen av GBS-host samhandling innen vaginal miljøet, noe som vil føre til potensielle terapeutiske mål å kontrollere mors vaginal kolonisering under graviditet og for å hindre overføring til den sårbare nyfødte. Det vil også være av interesse å øke vår forståelse av generelle bakterie-vert interaksjoner i den kvinnelige vaginal kanalen.

Under utviklingen av denne modellen, ble flere observasjoner gjort om faktorer som påvirker varigheten av GBS vaginal kolonisering. For å finne ut hvordan estrous scenen på inokulasjon konsekvenser GBS bakteriell utholdenhet, ble musene iscenesatt på dagen for vaksinasjon via vaginal lavage væske. Figur 1 viser de fire faser av mus brunst, bestemt ved hjelp av våt-typen vaginal vaskevæske, en veletablert metode 29. Musene ble delt inn i grupper basert p...

Watch this Scientific Journal Video about A Murine Model of Group B Streptococcus Vaginal Colonization at JoVE.com

A Murine Model of Group B Streptococcus Vaginal Colonization

Hensikten med denne protokollen er å etterligne humant gruppe B Streptococcus (GBS) vaginal kolonisering i en murin modell. Denne fremgangsmåten kan brukes til å undersøke vertsimmunresponser og bakterielle faktorer som bidrar til GBS vaginal utholdenhet, så vel som for å teste terapeutiske strategier.

En Murine modell av gruppe B<em&gt; Streptococcus</em&gt; Vaginal Colonization

Streptococcus agalactiae (group B Streptococcus, GBS), is a Gram-positive, asymptomatic colonizer of the human gastrointestinal tract and vaginal tract of ...

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

A Murine Model of Group B Streptococcus Vaginal Colonization

Murine Model of CD40-activation of B cells

Research on B cells has shown that CD40 activation improves their antigen presentation capacity. When stimulated with interleukin-4 and CD40 ligand ...

Induction and Assessment of Class Switch Recombination in Purified Murine B Cells

Humoral immunity is the branch of the immune system maintained by B cells and mediated through the secretion of antibodies. Upon B cell activation, the ...

Live Cell Imaging of Bacillus subtilis and Streptococcus pneumoniae using Automated Time-lapse Microscopy

Live Cell Imaging of Bacillus subtilis and Streptococcus pneumoniae using Automated Time-lapse Microscopy

During the last few years scientists became increasingly aware that average data obtained from microbial population based experiments are not ...

Protocols for Vaginal Inoculation and Sample Collection in the Experimental Mouse Model of Candida vaginitis

Protocols for Vaginal Inoculation and Sample Collection in the Experimental Mouse Model of Candida vaginitis

Protokoller for Vaginal Inokulasjon og Prøvetaking i Experimental mus modell av Candida Vaginitt

Vulvovaginal candidiasis (VVC), caused by Candida species, is a fungal infection of the lower female genital tract that affects approximately 75% of ...

Quantification of Fungal Colonization, Sporogenesis, and Production of Mycotoxins Using Kernel Bioassays

Kvantifisering av Fungal Colonization, Sporogenesis, og produksjon av mykotoksiner Bruk Kernel bioassay

The rotting of grains by seed-infecting fungi poses one of the greatest economic challenges to cereal production worldwide, not to mention serious risks ...

Characterization of Inflammatory Responses During Intranasal Colonization with Streptococcus pneumoniae

Characterization of Inflammatory Responses During Intranasal Colonization with Streptococcus pneumoniae

Karakterisering av inflammatoriske responser under intranasal kolonisering med streptokokker lungebetennelse

Nasopharyngeal colonization by Streptococcus pneumoniae is a prerequisite to invasion to the lungs or bloodstream1. This organism is capable of colonizing ...

Non-Invasive Model of Neuropathogenic Escherichia coli Infection in the Neonatal Rat

Non-Invasive Model of Neuropathogenic Escherichia coli Infection in the Neonatal Rat

Non-invasiv Model of Neuropathogenic<em&gt; Escherichia coli</em&gt; Infeksjon i Neonatal Rat

Investigation of the interactions between animal host and bacterial pathogen is only meaningful if the infection model employed replicates the principal ...

Non-invasive Imaging of the Innate Immune Response in a Zebrafish Larval Model of Streptococcus iniae Infection

Non-invasive Imaging of the Innate Immune Response in a Zebrafish Larval Model of Streptococcus iniae Infection

Non-invasiv Imaging av det medfødte immunrespons i en Sebrafisk Larve Modell av<em&gt; Streptococcus iniae</em&gt; Infeksjon

The aquatic pathogen, Streptococcus iniae, is responsible for over 100 million dollars in annual losses for the aquaculture industry and is capable of ...

Intracranial Subarachnoidal Route of Infection for Investigating Roles of Streptococcus suis Biofilms in Meningitis in a Mouse Infection Model

Intracranial Subarachnoidal Route of Infection for Investigating Roles of Streptococcus suis Biofilms in Meningitis in a Mouse Infection Model

Intrakranielt Subarachnoidal ruten infeksjon for undersøker rollene Streptococcus suis biofilm i hjernehinnebetennelse i en mus infeksjon modell

Streptococcus suis is not only a major bacterial pathogen of pigs worldwide but also an emerging zoonotic agent. In humans and pigs, meningitis is a major ...

Quantifying Vibrio cholerae Colonization and Diarrhea in the Adult Zebrafish Model

Quantifying Vibrio cholerae Colonization and Diarrhea in the Adult Zebrafish Model

Kvantifisere Vibrio cholerae kolonisering og diaré i voksen sebrafisk modell

Vibrio cholerae is best known as the infectious agent that causes the human disease cholera. Outside the human host, V. cholerae primarily exists in the ...