Name: a murine model of group b streptococcus vaginal colonization
Uploaded: 2016-11-16T14:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about A Murine Model of Group B Streptococcus Vaginal Colonization at JoVE.com

We would like to thank the vivarium manager and staff at San Diego State University for support with animal husbandry. During this work, K.A.P. was supported by an ARCS scholarship and a fellowship from the Inamori Foundation. K.S.D. is supported by an R01 grant, NS051247, from the National Institutes of Health.

Alla djur arbete godkändes av Office of Lab Animal Care på San Diego State University och genomförs under vedertagna veterinära normer. Honmöss, ålder 8 - 16 veckor, användes för att utveckla denna metod. 1. Upprättande och intraperitoneal injektion av β-östradiol <ol><li> Mät upp β-östradiol (0,5 mg / mus) på väga papper iklädd lämplig personlig skyddsutrustning (PPE). VARNING: β-estradiol kan absorberas genom huden och slemhinnor. </li><li> Överföra β-östradiol till en...

Att främja utvecklingen av förståelsen av GBS interaktioner med både värden och andra mikrober i samband med värden, är en djurmodell krävs. Detta arbete beskriver de tekniska aspekterna av upprättandet GBS vaginal kolonisering hos möss. Detta protokoll åstadkommer&gt; 90% kolonisering av möss utan användning av bedövningsmedel för att inokulera bakterier eller för att samla pinnprover, immun-suppressants att möjliggöra kolonisering, vaginal förtvätt, eller tillsatser för att förtjocka inokulat. De...

Streptococcus agalactiae, grupp B-streptokock (GBS), är en inkapslad, grampositiv bakterie som ofta isoleras från tarmen och urogenital-tarmkanalen hos friska vuxna. På 1970-talet, GBS dykt upp som den ledande agent infektiös neonatal dödlighet, med över 7000 fall av neonatal sjukdom årligen 1. Tidig debut GBS sjukdom (EOD) förekommer i de första timmarna eller dagarna i livet, uppstår som lunginflammation eller andnöd, och ofta utvecklas till sepsis, medan sen debut sjukdom (LOD) följer efter flera månader och presenterar med bakteriemi, som ofta avancerar till meningit 2. Från och med 2002, de Centers for Disease Control and Prevention rekommenderar universell rastrering för GBS vaginal kolonisation i sen dräktighet och intrapartal antibiotikaprofylax (IAP) för att GBS-positiva mödrar 1. Trots minskningen av tidig debut av sjukdomen till cirka 1000 fall i USA varje år på grund av IAPGBS förblir den vanligaste orsaken till tidig debut neonatal sepsis, och sen debut händelse förblir opåverkad 1. Vare sig i livmodern, under förlossningen, eller ens i sen debut fall neonatal exponering för GBS kräver överlevnad, tvärgående genom ett antal värdmiljöer och barriärer, immun skatteflykt, och, i fallet med meningit, passage av den starkt reglerade blod- hjärnbarriären 2. Uppströms dessa virulenta interaktioner inom det nyfödda barnet är den första koloniseringen av moderns vaginan. Moderns GBS vaginal kolonisering varierar mellan 8-18% i utvecklade länder och utvecklingsländer, med en beräknad genomsnittlig hastighet av 12,7% 3,4. GBS kolonisering av vaginan under graviditeten kan vara konstant, intermittent, eller övergående natur bland enskilda kvinnor 5. Intressant nog är en moderns ålder&gt; 36 år i samband med ihållande kolonisering 6. Talrika biologiska och socioekonomiska riskfaktorer för GBS vaginal koloniseringhar identifierats. Biologiska faktorer inkluderar gastrointestinala GBS kolonisering och frånvaro av Lactobacillus i tarmen. Emellertid har etnicitet, fetma, hygien, och sexuell aktivitet också förknippats med GBS vaginal vagnen 7. Även ökända för att orsaka neonatala infektioner GBS orsakar också en mängd av moderns infektioner både peripartumperioden och postpartum. GBS vagnen ökar hos kvinnor som framlägger med vaginit 8 och, i vissa fall kan till och med vara sjukdomen enheten 9. Dessutom kan GBS uppstigning av fortplantningsorganen under graviditeten leda till inom fostervatten infektion eller korioamnionit 10. Dessutom i upp till 3,5% av graviditeter, sprider GBS till urinblåsan för att orsaka en urinvägsinfektion eller asymtomatisk bakteriuri 11. GBS bakteriuri under graviditeten är associerat med en ökad risk för intrapartal feber, korioamnionit, för tidig födsel, och Premature hinnbristning 12. Sammantaget är närvaron av GBS i vaginan kopplat till infektioner i flera värdvävnader, och förmåga att eliminera GBS från denna nisch är viktigt för både mödrar och nyfödda hälsa. Tills nyligen var de flesta av arbete undersöker GBS interaktioner med cervicovaginal vägarna begränsas till cell in vitro modeller 13-15. Dessa in vitro experiment har visat bakteriella faktorer som är viktiga för efterlevnad, inklusive ytproteiner såsom en pili och serin rika upprepningarna 17,18, samt två-komponent regelsystem 15,19 och den globala transkriptionssvaret hos vaginala epitel till GBS 19. Men för att fullt belysa värd-mikrobinteraktioner inom vaginalkanalen, är det nödvändigt med en robust djurmodell. Tidigt arbete visade att GBS kan utvinnas ur vaginan av ympade möss 20,21 och råttor &lt;sup&gt; 22 i både gravida och icke-gravida förhållanden. År 2005 var kortsiktiga GBS vaginal kolonisation modelleras i möss för att undersöka effekten av en fag lytiskt enzym för att behandla vaginal GBS under en 24 timmarsperiod 23. Flera år senare, var en långsiktig GBS vaginal kolonisering musmodell utvecklats för att studera värd och bakteriella faktorer som styr GBS uthållighet. Denna modell har identifierat ett antal GBS faktorer som bidrar till kolonisering, inklusive ytan bihang 17,18 och GBS tvåkomponentsystem 19,24. Denna modell har bidragit till identifiering av värdsvarsmekanismer 19,25 och användes för att testa flera terapeutiska strategier, bland annat immunmodulerande peptider 26 och probiotika 27. Detta protokoll ger nödvändig vägledning för att ympa GBS i musen vaginan och därefter spåra kolonisering och samla in prover för ytterligare analyser.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" width="592">
	<colgroup>
		<col />
		<col />
		<col />
		<col />
	</colgroup>
	<tbody>
		<tr height="43">
			<td height="43" style="height:43px;width:216px;">Sesame oil&#160;</td>
			<td style="width:91px;">Sigma Aldrich</td>
			<td style="width:119px;">S3547-250ML</td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="46">
			<td height="46" style="height:46px;width:216px;">&#946;-Estradiol&#160;</td>
			<td style="width:91px;">Sigma Aldrich</td>
			<td style="width:119px;">E8875-1G</td>
			<td>CAUTION: Wear appropriate PPE. &#946;-estradiol can be absorbed through the skin and mucosal surfaces.&#160;</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">200 &#956;L gel loading pipette tips&#160;</td>
			<td style="width:91px;">USA Scientific</td>
			<td style="width:119px;">1252-0610</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">Urethro-genital, sterile, calcium alginate swabs</td>
			<td style="width:91px;">Puritan</td>
			<td style="width:119px;">25-801 A 50</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">CHROMagar StrepB</td>
			<td style="width:91px;">DRG International</td>
			<td style="width:119px;">SB282</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">Todd Hewitt Broth</td>
			<td style="width:91px;">Hardy Diagnostics</td>
			<td style="width:119px;">7161C</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">18 G, 1.5 inch needles</td>
			<td style="width:91px;">BD</td>
			<td style="width:119px;">305199</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">26 G, 0.5 inch needles</td>
			<td style="width:91px;">BD</td>
			<td style="width:119px;">305111</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">10 mL syringes</td>
			<td style="width:91px;">BD</td>
			<td style="width:119px;">309604</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">1 mL syringes</td>
			<td style="width:91px;">BD</td>
			<td style="width:119px;">309659</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">0.45 &#956;m PVDF syringe filters</td>
			<td style="width:91px;">Whatman</td>
			<td style="width:119px;">6900-2504</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">Dulbecco&#39;s Phosphate-Buffered Salt Solution 1X</td>
			<td style="width:91px;">Corning</td>
			<td style="width:119px;">21-031-CV</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

a murine model of group b streptococcus vaginal colonization

Streptococcus agalactiae (grupp B-streptokock, GBS), är en grampositiv, asymtomatisk kolonisatör av den humana mag-tarmkanalen och vaginal-tarmkanalen av 10 - 30% av vuxna. I immun äventyras individer, inklusive nyfödda, gravida kvinnor och äldre, kan GBS byta till en invasiv patogen som orsakar sepsis, artrit, lunginflammation, och hjärnhinneinflammation. Eftersom GBS är en ledande bakteriell patogen av nyfödda, är nuvarande profylax består av sen dräktighet screening för GBS vaginal kolonisation och efterföljande peripartumperioden antibiotikabehandling av GBS-positiva mödrar. Tung GBS vaginalt börda är en riskfaktor för både neonatal sjukdom och kolonisering. Tyvärr lite är känt om värden och bakteriella faktorer som främjar eller tillåter GBS vaginal kolonisering. Detta protokoll beskriver en teknik för upprättande av långlivade GBS vaginal kolonisation användning av en enda β-östradiol förbehandling och daglig provtagning för att bestämma bakteriell load. Det ytterligare detaljer metoder för att administrera ytterligare behandlingar eller reagens av intresse och för att samla vaginal lavage och reproduktionsorganen vävnader. Denna musmodell kommer att främja förståelsen av GBS-värd interaktionen i vaginala miljön, vilket kommer att leda till potentiella terapeutiska mål för att kontrollera moderns vaginala kolonisering under graviditet och för att förhindra överföring till utsatta nyfödda. Det kommer också att vara av intresse att öka vår förståelse av allmänna bakterievärdinteraktioner i den kvinnliga vaginan.

Under utvecklingen av denna modell, har flera observationer gjorts avseende faktorer som påverkar varaktigheten av GBS vaginalt kolonisering. För att avgöra hur brunst scenen på ympning effekter GBS bakteriella uthållighet, möss iscensatt på dagen för ympning via vaginalsköljvätska. Figur 1 visar de fyra stegen i musen Östrogencykeln, som bestäms av wet-mount vaginal lavage, en väletablerad metod 29. Mössen delades in i grupper baserat på detta ...

Watch this Scientific Journal Video about A Murine Model of Group B Streptococcus Vaginal Colonization at JoVE.com

A Murine Model of Group B Streptococcus Vaginal Colonization

Syftet med detta protokoll är att imitera mänskliga grupp B Streptococcus (GBS) vaginal kolonisation i en musmodell. Denna metod kan användas för att undersöka värdimmunsvar och bakteriella faktorer som bidrar till GBS vaginal uthållighet, såväl som för att testa terapeutiska strategier.

En musmodell av grupp B<em&gt; Streptococcus</em&gt; Vaginal Colonization

Streptococcus agalactiae (group B Streptococcus, GBS), is a Gram-positive, asymptomatic colonizer of the human gastrointestinal tract and vaginal tract of ...

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

A Murine Model of Group B Streptococcus Vaginal Colonization

Murine Model of CD40-activation of B cells

Murina Modell av CD40-aktivering av B-celler

Research on B cells has shown that CD40 activation improves their antigen presentation capacity. When stimulated with interleukin-4 and CD40 ligand ...

Induction and Assessment of Class Switch Recombination in Purified Murine B Cells

Induktion och Bedömning av klass Switch rekombination i Renad mus B-celler

Humoral immunity is the branch of the immune system maintained by B cells and mediated through the secretion of antibodies. Upon B cell activation, the ...

Live Cell Imaging of Bacillus subtilis and Streptococcus pneumoniae using Automated Time-lapse Microscopy

Live Cell Imaging of Bacillus subtilis and Streptococcus pneumoniae using Automated Time-lapse Microscopy

Levande cell imaging av Bacillus subtilis Och Streptococcus pneumoniae Med hjälp av automatiserade Time-lapse Mikroskopi

During the last few years scientists became increasingly aware that average data obtained from microbial population based experiments are not ...

Protocols for Vaginal Inoculation and Sample Collection in the Experimental Mouse Model of Candida vaginitis

Protocols for Vaginal Inoculation and Sample Collection in the Experimental Mouse Model of Candida vaginitis

Protokoll för vaginal Inokulation och Provtagning i den experimentella musmodell av Candida Vaginit

Vulvovaginal candidiasis (VVC), caused by Candida species, is a fungal infection of the lower female genital tract that affects approximately 75% of ...

Quantification of Fungal Colonization, Sporogenesis, and Production of Mycotoxins Using Kernel Bioassays

Kvantifiering av Svamp kolonisering, sporogenes och produktion av mykotoxiner användningen av kernel Bioanalyser

The rotting of grains by seed-infecting fungi poses one of the greatest economic challenges to cereal production worldwide, not to mention serious risks ...

Characterization of Inflammatory Responses During Intranasal Colonization with Streptococcus pneumoniae

Characterization of Inflammatory Responses During Intranasal Colonization with Streptococcus pneumoniae

Karakterisering av inflammatoriska svar under intranasal kolonisering med Streptococcus pneumoniae

Nasopharyngeal colonization by Streptococcus pneumoniae is a prerequisite to invasion to the lungs or bloodstream1. This organism is capable of colonizing ...

Non-Invasive Model of Neuropathogenic Escherichia coli Infection in the Neonatal Rat

Non-Invasive Model of Neuropathogenic Escherichia coli Infection in the Neonatal Rat

Icke-invasiv Modell av Neuropathogenic<em&gt; Escherichia coli</em&gt; Infektion i neonatal Rat

Investigation of the interactions between animal host and bacterial pathogen is only meaningful if the infection model employed replicates the principal ...

Non-invasive Imaging of the Innate Immune Response in a Zebrafish Larval Model of Streptococcus iniae Infection

Non-invasive Imaging of the Innate Immune Response in a Zebrafish Larval Model of Streptococcus iniae Infection

Icke-invasiv avbildning av det medfödda immun Response i en Zebrafish Larv Modell av<em&gt; Streptococcus iniae</em&gt; Infektion

The aquatic pathogen, Streptococcus iniae, is responsible for over 100 million dollars in annual losses for the aquaculture industry and is capable of ...

Intracranial Subarachnoidal Route of Infection for Investigating Roles of Streptococcus suis Biofilms in Meningitis in a Mouse Infection Model

Intracranial Subarachnoidal Route of Infection for Investigating Roles of Streptococcus suis Biofilms in Meningitis in a Mouse Infection Model

Intrakraniell Subarachnoidal rutten av infektion för undersöker roller av Streptococcus suis biofilmer i hjärnhinneinflammation i en musmodell för infektion

Streptococcus suis is not only a major bacterial pathogen of pigs worldwide but also an emerging zoonotic agent. In humans and pigs, meningitis is a major ...

Quantifying Vibrio cholerae Colonization and Diarrhea in the Adult Zebrafish Model

Quantifying Vibrio cholerae Colonization and Diarrhea in the Adult Zebrafish Model

Kvantifiera Vibriocholerae koloniseringen och diarré hos vuxna zebrafisk modellen

Vibrio cholerae is best known as the infectious agent that causes the human disease cholera. Outside the human host, V. cholerae primarily exists in the ...