Name: inoculating anopheles gambiae mosquitoes with beads to induce and measure the melanization immune response
Uploaded: 2017-01-12T14:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Inoculating Anopheles gambiae Mosquitoes with Beads to Induce and Measure the Melanization Immune Response at JoVE.com

This research was possible through funding from the University of Neuch&#226;tel. We would like to thank all the students that helped in improving this technique, namely our colleague Kevin Thievent. We would also like to thank the members of the Thomas Lab for making their laboratory available. We would like to thank Janet Teeple for her help with mosquito rearing. We would also like to thanks Loyal Hall in the laboratory of Pr. Tom Baker for his help in the preparation of the micro capillary glass tubes.

1. इंजेक्शन और विच्छेदन के लिए खारा समाधान <ol><li> पीएच = 6.8 में 1.3 मिमी NaCl, 0.5 मिमी KCl, और 0.2 मिमी 2 CaCl प्राप्त करने के लिए आसुत जल को NaCl, KCl, और 2 CaCl जोड़कर नमकीन घोल तैयार करें। </li><li> खारा समाधान के 99 मिलीलीटर 0.1% मिथाइ...

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	<li>Dong, Y., Aguilar, R., Xi, Z., Warr, E., Mongin, E., Dimopoulos, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Anopheles+gambiae+immune+responses+to+human+and+rodent+Plasmodium+parasite+species.">Anopheles gambiae immune responses to human and rodent Plasmodium parasite species.</a> PLoS pathog. 2 (6), e52 (2006).</li><li>Sadd, B. M., Schmid-Hempel, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=PERSPECTIVE:+Principles+of+ecological+immunology.">PERSPECTIVE: Principles of ecological immunology.</a> Evolutionary Appl. 2 (1), 113-121 (2008).</li><li>Crompton, P. 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A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Response+of+Plasmodium+refractory+and+susceptible+strains+of+Anopheles+gambiae+to+inoculated+Sephadex+beads.">Response of Plasmodium refractory and susceptible strains of Anopheles gambiae to inoculated Sephadex beads.</a> Dev comp immunol. 18 (5), 369-375 (1994).</li></ol>

यह इंजेक्शन तकनीक को प्रोत्साहित और मच्छरों में melanization प्रतिक्रिया का अध्ययन करने के लिए उपयोगी है। उदाहरण के लिए, यहाँ हम प्रतिरक्षा उत्तेजनाओं लोड के प्रभाव का अध्ययन किया। इस प्रक्रिया म?...

3 कि उनके छल्ली या उनके आद्यमध्यांत्र उपकला 4 के माध्यम से ब्रीच - कीड़े खुद को परजीवी और रोगजनकों 1 के खिलाफ की रक्षा करने के लिए प्रतिरक्षा प्रतिक्रिया पर निर्भर हैं। मच्छरों में, इन प्रतिक्रियाओं बैक्टीरिया 5, वायरस 6, फाइलेरिया नेमाटोड 7, और मलेरिया परजीवी के खिलाफ 1,8,9 कुशल हैं। 12 - मच्छरों में एक महत्वपूर्ण प्रतिरक्षा प्रतिक्रिया मेलेनिन 10 के साथ विदेशी कणों के encapsulation है। 12 - इस encapsulation आद्यमध्यांत्र में या hemolymph घूम प्रणाली 10 में भी हो सकता है। इस melanization प्रतिक्रिया समर्थक phenoloxidase का परिणाम झरना 10 - 12, और यह परजीवी की मौत के लिए या उनके phagocytosis को जन्म दे सकता है। वयस्क मच्छरों, जहां hemocytes कोशिकाओं की संख्या सीमित है, melanization एक त्रिदोषन प्रतिक्रिया, प्लाज्मोडियम परजीवी या फाइलेरिया नेमाटोड 7 के खिलाफ की तरह है।कुछ अन्य कीड़ों में, यह सीधे hemocytes कोशिकाओं है कि उन्हें 7 melanize करने के परजीवी के आसपास इकट्ठा होते हैं। इसके अलावा, मेलेनिन भी अंडा उत्पादन और छल्ली घावों को भरने 7 की तरह कई अन्य शारीरिक प्रक्रिया के लिए आवश्यक है। 18 - प्रतिरक्षा प्रतिक्रिया की उत्तेजना कई कृषि और सार्वजनिक स्वास्थ्य मॉडल प्रणाली 13 में कीट प्रतिरोधक क्षमता का अध्ययन करने के लिए एक उपकरण के रूप में प्रयोग किया जाता है। 16,19 - यह एनोफ़ेलीज़ में gambiae मच्छरों, अफ्रीका में मलेरिया के प्रमुख वेक्टर, मेजबान परजीवी बातचीत 14 अध्ययन करने के लिए प्रयोग किया जाता है। इन तकनीकों में कीड़े की क्षमता को अपने पैटर्न मान्यता रिसेप्टर्स (PRR) 2 के साथ परजीवी का पता लगाने के आधार पर कर रहे हैं। मच्छरों भी इस तरह के रोगज़नक़ जुड़े आणविक पैटर्न (PAMPs) के रूप में उनके जीव विज्ञान के साथ हस्तक्षेप अन्य अणुओं का पता लगाने कर सकते हैं, या अपने स्वयं के क्षतिग्रस्त कोलेजन और न्यूक्लिक एसिड की रिहाई के कारण कोशिकाओं का पता लगाने। मच्छर प्रतिरक्षा सेल23 - इस तरह के hemocytes के रूप में पता लगाने के लिए 20 उपयोग किया जाता है। मुख्य प्रतिरक्षा संकेत दे रास्ते हैं आईएमडी, टोल, जे ए / स्टेट 24, और ribonucleic एसिड हस्तक्षेप (आरएनएआई) 25,26। दोनों टोल और आईएमडी रास्ते melanization प्रतिक्रिया को प्रभावित करती है और समर्थक phenoloxidase के साथ बातचीत 10 झरना - 12। मानक melanization प्रतिक्रिया को प्रोत्साहित करने के लिए उपकरण का इस्तेमाल किया वक्ष गुहा की hemolymph में एक छोटे से मनका के साथ एक मच्छर की टीका है। मेलेनिन encapsulation की डिग्री तो मच्छर के विच्छेदन के माध्यम से मनका पुन: प्राप्त करने के बाद 19 मापा जा सकता है। ज्यादातर अध्ययनों में, केवल एक मनका मच्छर 15,16,27 प्रति इंजेक्ट किया गया था, लेकिन अधिक मोती इंजेक्शन लगाने melanization प्रतिक्रिया 19 की सीमा का अध्ययन करने के क्रम में संभव है। ये मोती मच्छर शरीर क्रिया विज्ञान की अशांति को सीमित करने का एक इंजेक्शन समाधान (शारीरिक सीरम) का उपयोग कर रहे हैं और इंजेक्शनमच्छर 15,16,27 के सुखाना। एक डाई इस समाधान मनका चयन को कम करने के लिए कहा है। यह विच्छेदन मनका 15,16,27 को पुनः प्राप्त करने के लिए इस्तेमाल समाधान के लिए ही है। गैर रोगजनक उत्तेजनाओं के साथ कीड़े inoculating का लाभ प्रतिरक्षा प्रतिक्रिया पर सीधा प्रभाव पर ध्यान केंद्रित करने की क्षमता है। 31, या प्रतिरक्षा चोरी के 31 - - 34 कोई उलझी प्रभाव परजीवी pathogenicity 28, प्रतिरक्षादमन 29 के कारण कर रहे हैं। इसके अलावा, इस तरह के दीर्घायु या उपजाऊपन के रूप में अन्य जीवन इतिहास लक्षण, पर stimulations के परिणामों का भी अध्ययन किया जा सकता है। इस प्रकार, विकासवादी पारिस्थितिकी का अध्ययन शोधकर्ताओं ने ऐसे उपकरण 2,35,36 आवश्यकता हो सकती है। उदाहरण के लिए, इम्युनो को चुनौती दी bumblebees भुखमरी के तहत एक छोटा जीवन काल है। प्रतिरक्षा stimulations और तैनाती के इसी तरह के नकारात्मक प्रभाव को अलग अकशेरुकी मॉडल में देखा गया है, अक्सर एक छोटी, जिसके परिणामस्वरूपएर उम्र या उससे कम प्रजनन सफलता 13,27,37। इस तरह के अध्ययन अलग वातावरण 2,4,38 में आयोजित किया जा सकता है। उत्तेजक प्रतिरोधक क्षमता भी इम्युनोपैथोलोजी 39,40 पर सीधे ध्यान केंद्रित कर उन लोगों के लिए ब्याज की है। इस प्रोटोकॉल मच्छरों melanization प्रतिक्रिया को उत्तेजित और सीधे मेलेनिन की मात्रा को मापने के साथ मोती का टीका पर आधारित है। यह अलग प्रयोगात्मक सेटिंग में melanization प्रतिक्रिया के मात्रात्मक और गुणात्मक अध्ययन सक्षम बनाता है। मारे गर्मी बैक्टीरिया 41 तरह के एक उपकरण जैसे जीवाणुरोधी प्रतिक्रिया के रूप में अन्य प्रतिरक्षा प्रतिक्रिया, की उत्तेजना के लिए बढ़ाया जा सकता है। यह भी कई पारिस्थितिक सेटिंग्स में आयोजित किया जा सकता है।

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" width="718">
	<tbody>
		<tr height="85">
			<td height="85" style="height:85px;width:301px;">Microcapillary glass tubes GB120TF-10</td>
			<td style="width:177px;">science-products.com</td>
			<td style="width:84px;">GB120TF-10</td>
			<td style="width:156px;">http://www.science-products.com/Products/CatalogG/Glass/Glass.html</td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:301px;">Microcaps Capillary pipette bulb</td>
			<td style="width:177px;">Drumond</td>
			<td style="width:84px;">1-000-9000</td>
			<td style="width:156px;"></td>
		</tr>
		<tr height="43">
			<td height="43" style="height:43px;width:301px;">negatively charged Sephadex CM C-25 beads</td>
			<td style="width:177px;">Sigma-Aldrich, Steinheim, Germany</td>
			<td style="width:84px;">C25120 SIGMA</td>
			<td style="width:156px;">need few to start</td>
		</tr>
		<tr height="43">
			<td height="43" style="height:43px;width:301px;">Methyl green</td>
			<td style="width:177px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:84px;">323829 ALDRICH</td>
			<td style="width:156px;">need few to start</td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:301px;">Software ImageJ</td>
			<td style="width:177px;">opensource</td>
			<td style="width:84px;"></td>
			<td style="width:156px;">Version 1.47f7 or later</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

inoculating anopheles gambiae mosquitoes with beads to induce and measure the melanization immune response

प्रतिरक्षा प्रतिक्रिया की उत्तेजना प्रभावकारिता और प्रतिरक्षा तंत्र की जांच करने के लिए अकशेरुकी अध्ययन में एक आम उपकरण है। इस उत्तेजना, कीड़ों में गैर रोगजनक कणों के इंजेक्शन पर आधारित कणों के रूप में प्रतिरक्षा प्रणाली द्वारा पता लगाया जाएगा और प्रतिरक्षा प्रभावोत्पादक के उत्पादन के लिए प्रेरित करेगा। हम मच्छर एनोफ़ेलीज़ gambiae में melanization प्रतिक्रिया की उत्तेजना पर यहाँ ध्यान केंद्रित। विदेशी कणों और मेलेनिन के एक अंधेरे परत के साथ परजीवी के encapsulation में melanization प्रतिक्रिया का परिणाम है। इस प्रतिक्रिया को प्रोत्साहित करने के लिए, मच्छरों microcapillary ग्लास ट्यूब का उपयोग करते हुए वक्ष गुहा में मोतियों के साथ inoculated हैं। फिर, 24 घंटे के बाद, मच्छरों मोती पुनः प्राप्त करने के विच्छेदित कर रहे हैं। मनका के melanization की डिग्री छवि विश्लेषण सॉफ्टवेयर का उपयोग कर मापा जाता है। मोती परजीवी के रोगजनक इफेक्ट नहीं है, या अपनी क्षमता से बचने या प्रतिरक्षा प्रतिक्रिया को दबाने के लिए। ये इंजेक्शन measu करने के लिए एक तरीका हैप्रतिरक्षा प्रभावकारिता और इस तरह के उपजाऊपन या दीर्घायु के रूप में अन्य जीवन इतिहास लक्षण, पर प्रतिरक्षा stimulations के प्रभाव को फिर से। यह वास्तव में सीधे मेजबान परजीवी बातचीत का अध्ययन कर के रूप में ही नहीं है, लेकिन यह प्रतिरक्षा और इसके विकासवादी पारिस्थितिकी का अध्ययन करने के लिए एक दिलचस्प उपकरण है।

<html> मच्छरों में एक ही रास्ते में मोती melanize सब नहीं था, जैसा कि कुछ मोती कम (चित्रा 1) दूसरों की तुलना में मेलेनिन के साथ कवर किया गया। दरअसल, कुछ मोती melanization की कमी की वजह से नीले रंग की बनी हुई ...

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Inoculating Anopheles gambiae Mosquitoes with Beads to Induce and Measure the Melanization Immune Response

Through inoculation with beads, the described technique enables the stimulation of the mosquito melanization response in the hemolymph circulating system. The amount of melanin covering the beads can be measured after dissection as a measure of the immune response.

inoculating<em&gt; एनोफ़ेलीज़ gambiae</em&gt; प्रेरित और उपाय करने के लिए प्रतिरक्षा प्रतिक्रिया melanization मोती के साथ मच्छरों

The stimulation of immune responses is a common tool in invertebrate studies to examine the efficacy and the mechanisms of immunity. This stimulation is ...

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

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