Name: collection of serum- and feeder-free mouse embryonic stem cell-conditioned medium for a cell-free approach
Uploaded: 2017-01-08T15:00:00
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Esta investigación fue apoyada por el Programa de Investigación de Ciencias Básicas (2013R1A1A2060930) y el Programa del Centro de Investigación Médica (2015R1A5A2009124) a través de la Fundación Nacional de Investigación de Corea (NRF), financiado por el Ministerio de Ciencia, TIC, y la planificación futura. Esta investigación también está apoyado por una subvención de funcionamiento Puesta en marcha del Hospital for Sick Children (HK Sung). Nos gustaría dar las gracias a Laura y Sara Barwell JS Kim por su excelente ayuda en la edición de este manuscrito y el doctor Andras Nagy para proporcionar la línea G4 mESC.

NOTA: un esquema del suero y protocolo de recogida de CM libre de alimentador se muestra en la Figura 1. 1. Materiales (Preparación de MEFs, Medio, Placas, y soluciones) <ol><li> Preparar 500 ml de medio de cultivo para los MEFs. Suplemento de Dulbecco medio de Eagle modificado (DMEM) con 10% de FBS (calidad ESC), 50 unidades / ml de penicilina, y 50 mg / ml de estreptomicina. </li><li> Aislar los MEF a partir de embriones después de un protocolo de rutina establecida 13 y mantene...

<ol>
	<li>Thomson, J. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Embryonic+stem+cell+lines+derived+from+human+blastocysts.">Embryonic stem cell lines derived from human blastocysts.</a> Science. 282, 1145-1147 (1998).</li><li>Lavasani, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Muscle-derived+stem/progenitor+cell+dysfunction+limits+healthspan+and+lifespan+in+a+murine+progeria+model.">Muscle-derived stem/progenitor cell dysfunction limits healthspan and lifespan in a murine progeria model.</a> Nat Commun. 3, 608 (2012).</li><li>Woo, D. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Direct+and+indirect+contribution+of+human+embryonic+stem+cell-derived+hepatocyte-like+cells+to+liver+repair+in+mice.">Direct and indirect contribution of human embryonic stem cell-derived hepatocyte-like cells to liver repair in mice.</a> Gastroenterology. 142, 602-611 (2012).</li><li>Lee, A. S., Tang, C., Rao, M. S., Weissman, I. L., Wu, J. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tumorigenicity+as+a+clinical+hurdle+for+pluripotent+stem+cell+therapies.">Tumorigenicity as a clinical hurdle for pluripotent stem cell therapies.</a> Nat Med. 19, 998-1004 (2013).</li><li>Moon, S. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+system+for+treating+ischemic+disease+using+human+embryonic+stem+cell-derived+endothelial+cells+without+direct+incorporation.">A system for treating ischemic disease using human embryonic stem cell-derived endothelial cells without direct incorporation.</a> Biomaterials. 32, 6445-6455 (2011).</li><li>Tongers, J., Roncalli, J. G., Losordo, D. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Therapeutic+angiogenesis+for+critical+limb+ischemia:+microvascular+therapies+coming+of+age.">Therapeutic angiogenesis for critical limb ischemia: microvascular therapies coming of age.</a> Circulation. 118, 9-16 (2008).</li><li>Lazarous, D. F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Basic+fibroblast+growth+factor+in+patients+with+intermittent+claudication:+results+of+a+phase+I+trial.">Basic fibroblast growth factor in patients with intermittent claudication: results of a phase I trial.</a> J Am Coll Cardiol. 36, 1239-1244 (2000).</li><li>Adams, P. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Healing+and+hurting:+molecular+mechanisms,+functions,+and+pathologies+of+cellular+senescence.">Healing and hurting: molecular mechanisms, functions, and pathologies of cellular senescence.</a> Mol Cell. 36, 2-14 (2009).</li><li>Harrison, D. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Rapamycin+fed+late+in+life+extends+lifespan+in+genetically+heterogeneous+mice.">Rapamycin fed late in life extends lifespan in genetically heterogeneous mice.</a> Nature. 460, 392-395 (2009).</li><li>Baur, J. A., Ungvari, Z., Minor, R. K., Le Couteur, D. G., de Cabo, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Are+sirtuins+viable+targets+for+improving+healthspan+and+lifespan.">Are sirtuins viable targets for improving healthspan and lifespan.</a> Nat Rev Drug Discov. 11, 443-461 (2012).</li><li>Martin-Montalvo, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Metformin+improves+healthspan+and+lifespan+in+mice.">Metformin improves healthspan and lifespan in mice.</a> Nat Commun. 4, 2192 (2013).</li><li>Loffredo, F. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Growth+differentiation+factor+11+is+a+circulating+factor+that+reverses+age-related+cardiac+hypertrophy.">Growth differentiation factor 11 is a circulating factor that reverses age-related cardiac hypertrophy.</a> Cell. 153, 828-839 (2013).</li><li>Jozefczuk, J., Drews, K., Adjaye, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Preparation+of+mouse+embryonic+fibroblast+cells+suitable+for+culturing+human+embryonic+and+induced+pluripotent+stem+cells.">Preparation of mouse embryonic fibroblast cells suitable for culturing human embryonic and induced pluripotent stem cells.</a> J Vis Exp. , (2012).</li><li>Debacq-Chainiaux, F., Erusalimsky, J. D., Campisi, J., Toussaint, O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Protocols+to+detect+senescence-associated+beta-galactosidase+(SA-betagal)+activity,+a+biomarker+of+senescent+cells+in+culture+and+in+vivo.">Protocols to detect senescence-associated beta-galactosidase (SA-betagal) activity, a biomarker of senescent cells in culture and in vivo.</a> Nat Protoc. 4, 1798-1806 (2009).</li><li>Bae, Y. U., Choi, J. H., Nagy, A., Sung, H. K., Kim, J. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Antisenescence+effect+of+mouse+embryonic+stem+cell+conditioned+medium+through+a+PDGF/FGF+pathway.">Antisenescence effect of mouse embryonic stem cell conditioned medium through a PDGF/FGF pathway.</a> FASEB J. 30, 1276-1286 (2016).</li><li>Nagy, A., Rossant, J., Nagy, R., Abramow-Newerly, W., Roder, J. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Derivation+of+completely+cell+culture-derived+mice+from+early-passage+embryonic+stem+cells.">Derivation of completely cell culture-derived mice from early-passage embryonic stem cells.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 90, 8424-8428 (1993).</li><li>Li, X. Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Passage+number+affects+the+pluripotency+of+mouse+embryonic+stem+cells+as+judged+by+tetraploid+embryo+aggregation.">Passage number affects the pluripotency of mouse embryonic stem cells as judged by tetraploid embryo aggregation.</a> Cell Tissue Res. 327, 607-614 (2007).</li><li>Mbeunkui, F., Fodstad, O., Pannell, L. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Secretory+protein+enrichment+and+analysis:+an+optimized+approach+applied+on+cancer+cell+lines+using+2D+LC-MS/MS.">Secretory protein enrichment and analysis: an optimized approach applied on cancer cell lines using 2D LC-MS/MS.</a> J Proteome Res. 5, 899-906 (2006).</li><li>Makridakis, M., Vlahou, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Secretome+proteomics+for+discovery+of+cancer+biomarkers.">Secretome proteomics for discovery of cancer biomarkers.</a> J Proteomics. 73, 2291-2305 (2010).</li><li>Kim, K. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Regulation+of+replicative+senescence+by+insulin-like+growth+factor-binding+protein+3+in+human+umbilical+vein+endothelial+cells.">Regulation of replicative senescence by insulin-like growth factor-binding protein 3 in human umbilical vein endothelial cells.</a> Aging Cell. 6, 535-545 (2007).</li><li>Kim, K. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Induction+of+cellular+senescence+by+insulin-like+growth+factor+binding+protein-5+through+a+p53-dependent+mechanism.">Induction of cellular senescence by insulin-like growth factor binding protein-5 through a p53-dependent mechanism.</a> Mol Biol Cell. 18, 4543-4552 (2007).</li><li>Eiselleova, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Comparative+study+of+mouse+and+human+feeder+cells+for+human+embryonic+stem+cells.">Comparative study of mouse and human feeder cells for human embryonic stem cells.</a> Int J Dev Biol. 52, 353-363 (2008).</li></ol>

Para el éxito de la recogida del suero y mESC-CM sin alimentador, las siguientes sugerencias deben ser tomados en consideración. El factor más importante es el uso de mESCs principios de paso para la recogida de mESC-CM. Anteriormente, se ha demostrado que temprano paso mESC-CM tiene mejores efectos anti-envejecimiento en comparación con mESCs paso finales. El número de pases de mESCs se ha informado que afectan a su potencial de desarrollo 16 y pluripotencia 17. A...

El objetivo de este protocolo es recoger células madre embrionarias de ratón (MESC) -conditioned medio (mESC-CM) a partir de las condiciones de cultivo sin suero y libre de alimentadoras y caracterizar sus funciones biológicas. En general, las células madre embrionarias (CES) tienen un gran potencial para la medicina regenerativa y la terapia celular debido a su pluripotencia y capacidad de auto-renovación 1-3. Sin embargo, el trasplante directo de las células madre tiene varias limitaciones, tales como el rechazo inmune y la formación de tumor 4,5. Por lo tanto, un enfoque libre de células puede proporcionar una estrategia terapéutica alternativa para la medicina regenerativa y las intervenciones de envejecimiento 6,7. La senescencia es vista como un homólogo celular para el envejecimiento de los tejidos y órganos, que se caracteriza por un estado permanente de detención del crecimiento, alteración de la fisiología celular, y comportamientos. El envejecimiento es el principal factor de riesgo para las enfermedades prevalentes, incluyendo cáncer, enfermedades cardiovasculares, type la diabetes 2, 8 y la neurodegeneración. Una de las características evidentes del envejecimiento es la disminución en el potencial de regeneración de los tejidos, que es causada por el envejecimiento de células madre y el agotamiento 9. Muchos estudios han demostrado importantes moléculas farmacológicas, tales como la rapamicina 9, resveratrol 10, y metformina 11, y factores sistémicos transmitidas por la sangre, a saber, GDF11 12, que tiene la capacidad de retrasar el envejecimiento consistentemente y extender la vida. En el presente estudio, mESC-CM ha sido cosechada sin suero capas (suero fetal bovino, FBS) y el alimentador (fibroblastos embrionarios de ratón, los MEF) para excluir la contaminación de los factores del suero y factores de secreción de MEFs. Estas condiciones permitieron un CM de suero y libre de alimentador que, por consiguiente permitió la identificación precisa de los factores de secreción mESC-específicas. Este protocolo propuesto es altamente eficiente y relativamente rentable y fácilpara operar. Esta técnica proporciona información detallada sobre la caracterización de los factores solubles derivados de mESC que puede mediar un efecto anti-senescencia, que puede utilizarse para el desarrollo de un enfoque terapéutico libre de células seguro y potencialmente ventajoso hacia intervenciones para las enfermedades de envejecimiento asociado y otros regenerativa tratos.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" width="256">
	<colgroup>
		<col span="4" />
	</colgroup>
	<tbody>
		<tr height="43">
			<td height="43" style="height:43px;width:64px;">DMEM</td>
			<td style="width:64px;">Invitrogen</td>
			<td style="width:64px;">#11960-044</td>
			<td style="width:64px;"></td>
		</tr>
		<tr height="64">
			<td height="64" style="height:64px;width:64px;">FBS</td>
			<td style="width:64px;">Invitrogen</td>
			<td style="width:64px;">#30044333</td>
			<td style="width:64px;">20%, ES cell quality</td>
		</tr>
		<tr height="126">
			<td height="148" rowspan="2" style="height:148px;width:64px;">Penicillin and streptomycin&#160;</td>
			<td rowspan="2" style="width:64px;">Invitrogen</td>
			<td rowspan="2" style="width:64px;">#15140</td>
			<td style="width:64px;">50units/ml penicillin and 50mg/ml strepto</td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:64px;">-mycin.</td>
		</tr>
		<tr height="43">
			<td height="43" style="height:43px;width:64px;">L-glutamine&#160;</td>
			<td style="width:64px;">Invitrogen</td>
			<td style="width:64px;">#25030</td>
			<td style="width:64px;">2mM</td>
		</tr>
		<tr height="106">
			<td height="106" style="height:106px;width:64px;">Nonessential amino acids (NEAA)&#160;</td>
			<td style="width:64px;">Invitrogen</td>
			<td style="width:64px;">#11140</td>
			<td style="width:64px;">100uM</td>
		</tr>
		<tr height="64">
			<td height="64" style="height:64px;width:64px;">&#946;-mercaptoethanol&#160;</td>
			<td style="width:64px;">Sigma</td>
			<td style="width:64px;">#M3148</td>
			<td style="width:64px;">100uM</td>
		</tr>
		<tr height="85">
			<td height="85" style="height:85px;width:64px;">Leukemia inhibitory factor&#160;</td>
			<td style="width:64px;">Millipore</td>
			<td style="width:64px;">#ESG1107</td>
			<td style="width:64px;">100units/ml</td>
		</tr>
		<tr height="43">
			<td height="43" style="height:43px;width:64px;">OPTI-MEM</td>
			<td style="width:64px;">Invitrogen</td>
			<td style="width:64px;">#22600</td>
			<td style="width:64px;"></td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:64px;">X-gal&#160;</td>
			<td style="width:64px;">Sigma</td>
			<td style="width:64px;">#B4252</td>
			<td style="width:64px;">1mg/ml</td>
		</tr>
		<tr height="64">
			<td height="64" style="height:64px;width:64px;">Paraformaldehyde (PFA)</td>
			<td style="width:64px;">Sigma</td>
			<td style="width:64px;">P6148</td>
			<td style="width:64px;">3.70%</td>
		</tr>
		<tr height="64">
			<td height="64" style="height:64px;width:64px;">Dimethylformamide (DMF)</td>
			<td style="width:64px;">Sigma</td>
			<td style="width:64px;">#D4551</td>
			<td style="width:64px;"></td>
		</tr>
		<tr height="85">
			<td height="85" style="height:85px;width:64px;">Potassium ferricyanide&#160;</td>
			<td style="width:64px;">Aldrich</td>
			<td style="width:64px;">#455946</td>
			<td style="width:64px;">5mM</td>
		</tr>
		<tr height="85">
			<td height="85" style="height:85px;width:64px;">potassium ferrocyanide&#160;</td>
			<td style="width:64px;">Aldrich</td>
			<td style="width:64px;">#455989</td>
			<td style="width:64px;">5mM</td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:64px;">NaCl&#160;</td>
			<td style="width:64px;">Sigma</td>
			<td style="width:64px;">#S7653</td>
			<td style="width:64px;">150mM</td>
		</tr>
		<tr height="26">
			<td height="26" style="height:26px;width:64px;">MgCl2&#160;</td>
			<td style="width:64px;">Sigma</td>
			<td style="width:64px;">#M2393</td>
			<td style="width:64px;">2mM</td>
		</tr>
		<tr height="43">
			<td height="43" style="height:43px;width:64px;">Mytomycin C&#160;</td>
			<td style="width:64px;">Sigma</td>
			<td style="width:64px;">#M4287</td>
			<td style="width:64px;">10ug/ml</td>
		</tr>
		<tr height="43">
			<td height="43" style="height:43px;width:64px;">Propidium iodide&#160;</td>
			<td style="width:64px;">Sigma</td>
			<td style="width:64px;">#P4170</td>
			<td style="width:64px;">50ug/ml</td>
		</tr>
		<tr height="43">
			<td height="43" style="height:43px;width:64px;">TRIzol</td>
			<td style="width:64px;">Ambion</td>
			<td style="width:64px;">#15596018</td>
			<td style="width:64px;"></td>
		</tr>
		<tr height="85">
			<td height="85" style="height:85px;width:64px;">M-MLV reverse transcript-tase</td>
			<td style="width:64px;">Promega</td>
			<td style="width:64px;">#M170B</td>
			<td style="width:64px;"></td>
		</tr>
		<tr height="127">
			<td height="127" style="height:127px;width:64px;">Power SYBR Green PCR master mix&#160;</td>
			<td style="width:64px;">Applied Biosystems</td>
			<td style="width:64px;">#4367659</td>
			<td style="width:64px;"></td>
		</tr>
		<tr height="106">
			<td height="106" style="height:106px;width:64px;">HDFs, NHDF-Ad-Der-Fibroblast&#160;</td>
			<td style="width:64px;">LONZA</td>
			<td style="width:64px;">#CC-2511</td>
			<td style="width:64px;"></td>
		</tr>
		<tr height="43">
			<td height="43" style="height:43px;width:64px;">Bottle top filter,&#160;</td>
			<td style="width:64px;">Corning</td>
			<td style="width:64px;">#430513</td>
			<td style="width:64px;">0.2&#956;m</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

collection of serum- and feeder-free mouse embryonic stem cell-conditioned medium for a cell-free approach

The capacity of embryonic stem cells (ESCs) and induced pluripotent stem cells (iPSCs) to generate various cell types has opened new avenues in the field of regenerative medicine. However, despite their benefits, the tumorigenic potential of ESCs and iPSCs has long been a barrier for clinical applications. Interestingly, it has been shown that ESCs produce several soluble factors that can promote tissue regeneration and delay cellular aging, suggesting that ESCs and iPSCs can also be utilized as a cell-free intervention method. Therefore, the method for harvesting mouse embryonic stem cell (mESC)-conditioned medium (mESC-CM) with minimal contamination of serum components (fetal bovine serum, FBS) and feeder cells (mouse embryonic fibroblasts, MEFs) has been highly demanded. Here, the present study demonstrates an optimized method for the collection of mESC-CM under serum- and feeder-free conditions and for the characterization of mESC-CM using senescence-associated multiple readouts. This protocol will provide a method to collect pure mESC-specific secretory factors without serum and feeder contamination.

Originalmente, mESCs se mantienen en un alimentador de MEF en medio mESC con FBS y otros suplementos (Figuras 1A y 2A). CM se recogió de mESCs en suero reducido de medios sin una capa de alimentación, FBS, u otros suplementos (Figuras 1B y 2B). Esta condición de cultivo nos permite recoger mESC específicos medio condicionado sin contaminación potencial por los factores de la alimentación, FBS, u otros suplementos. ...

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Collection of Serum- and Feeder-free Mouse Embryonic Stem Cell-conditioned Medium for a Cell-free Approach

Este protocolo proporciona un método para la obtención de células madre embrionarias de ratón (MESC) -conditioned medio (mESC-CM) derivado de suero (suero bovino fetal, FBS) - y alimentadoras (fibroblastos de embriones de ratón, MEFs) -free condiciones para una célula enfoque exento. Puede ser aplicable para el tratamiento de envejecimiento y las enfermedades de envejecimiento asociado.

Recogida de suero y libre de alimentador madre embrionarias de ratón medio celular acondicionado para un enfoque libre de células

The capacity of embryonic stem cells (ESCs) and induced pluripotent stem cells (iPSCs) to generate various cell types has opened new avenues in the field ...

Research

JoVE Journal

Developmental Biology

Neural Differentiation of Mouse Embryonic Stem Cells in Serum-free Monolayer Culture

Diferenciación neural de células madre embrionarias de ratón en el suero libre de monocapa Cultura

The ability to differentiate mouse embryonic stem cells (ESC) to neural progenitors allows the study of the mechanisms controlling neural specification as ...

Investigación

Biología del Desarrollo

Generation of Induced Pluripotent Stem Cells from Human Peripheral T Cells Using Sendai Virus in Feeder-free Conditions

Generación de pluripotentes inducidas células madre a partir de células T periféricas Humanos Uso de Sendai virus en Condiciones-Feeder gratuita

Recently, iPSCs have attracted attention as a new source of cells for regenerative therapies. Although the initial method for generating iPSCs relied on ...

Generating CRISPR/Cas9 Mediated Monoallelic Deletions to Study Enhancer Function in Mouse Embryonic Stem Cells

La generación de CRISPR / Cas9 mediada monoallelic deleciones para estudiar la función del reforzador en las células madre embrionarias de ratón

Enhancers control cell identity by regulating tissue-specific gene expression in a position and orientation independent manner. These enhancers are often ...

Feeder-free Derivation of Melanocytes from Human Pluripotent Stem Cells

Derivación sin alimentador de melanocitos partir de células madre pluripotentes

Human pluripotent stem cells (hPSCs) represent a platform to study human development in vitro under both normal and disease conditions. Researchers can ...

Reprogramming Mouse Embryonic Fibroblasts with Transcription Factors to Induce a Hemogenic Program

La reprogramación de fibroblastos embrionarios de ratón con factores de transcripción para inducir un programa Hemogenic

This protocol details the induction of a hemogenic program in mouse embryonic fibroblasts (MEFs) via overexpression of transcription factors (TFs). We ...

Structure-function Studies in Mouse Embryonic Stem Cells Using Recombinase-mediated Cassette Exchange

Los estudios de estructura-función en las células madre embrionarias de ratón Usando mediada por recombinasa Cambio de Cassette

Gene engineering in mouse embryos or embryonic stem cells (mESCs) allows for the study of the function of a given protein. Proteins are the workhorses of ...

Rapid, Directed Differentiation of Retinal Pigment Epithelial Cells from Human Embryonic or Induced Pluripotent Stem Cells

Diferenciación rápida y dirigida de las células epiteliales del pigmento retiniano de humanos embrionarios o inducidas pluripotenciales células

We describe a robust method to direct the differentiation of pluripotent stem cells into retinal pigment epithelial cells (RPE). The purpose of providing ...

Defined Xeno-free and Feeder-free Culture Conditions for the Generation of Human iPSC-derived Retinal Cell Models

Alimentador-libre las condiciones de cultivo para la generación de humanos derivados de iPSC de modelos de celulares de retina y definido sin Xeno

The production of specialized cells from pluripotent stem cells provides a powerful tool to develop new approaches for regenerative medicine. The use of ...

A Static Self-Directed Method for Generating Brain Organoids from Human Embryonic Stem Cells

Un método autodirigido estático para generar organoides cerebrales a partir de células madre embrionarias humanas

Human brain organoids differentiated from embryonic stem cells offer the unique opportunity to study complicated interactions of multiple cell types in a ...

Efficient Differentiation of Postganglionic Sympathetic Neurons using Human Pluripotent Stem Cells under Feeder-free and Chemically Defined Culture Conditions

Diferenciación eficiente de las neuronas simpáticas postgangliónicas utilizando células madre pluripotentes humanas bajo condiciones de cultivo sin alimentador y definidas químicamente

Human pluripotent stem cells (hPSCs) have become a powerful tool for disease modeling and the study of human embryonic development in vitro. We previously ...