Name: a syngeneic mouse model of metastatic renal cell carcinoma for quantitative and longitudinal assessment of preclinical therapies
Uploaded: 2017-04-12T14:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about A Syngeneic Mouse Model of Metastatic Renal Cell Carcinoma for Quantitative and Longitudinal Assessment of Preclinical Therapies at JoVE.com

وأيد هذا العمل من المنح المقدمة من المعهد الوطني للسرطان (R15CA173657 إلى AW وR01CA109446 إلى TSG)، ومعهد السرطان سيمونز (لAW)، وجامعة Minnestoa تسلق مؤسسة سرطان الكلى 4 (لTSG). نشكر الدكتور كريستين اندرسون للحصول على المساعدة مع المناعي.

يصف البروتوكول بعد إجراء التجارب لإحداث ورصد نمو الأورام الكلوية مثلي التجريبية وأي الانبثاث عفوية المحتملة. تتم جميع الإجراءات التالية وفقا للسياسات المؤسسية والإجراءات المعتمدة فيما يتعلق باستخدام إنسانية من حيوانات التجارب. 1. صيانة خط?...

<ol>
	<li>Siegel, R. L., Miller, K. D., Jemal, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cancer+statistics.">Cancer statistics.</a> CA Cancer J. Clin. 66, 7-30 (2016).</li><li>Chow, W. H., Dong, L. M., Devesa, S. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Epidemiology+and+risk+factors+for+kidney+cancer.">Epidemiology and risk factors for kidney cancer.</a> Nat. Rev. Urol. 7, 245-257 (2010).</li><li>Hollingsworth, J. M., Miller, D. C., Daignault, S., Hollenbeck, B. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Rising+incidence+of+small+renal+masses:+a+need+to+reassess+treatment+effect.">Rising incidence of small renal masses: a need to reassess treatment effect.</a> J. Natl. Cancer Inst. 98, 1331-1334 (2006).</li><li>Lee-Ying, R., Lester, R., Heng, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Current+management+and+future+perspectives+of+metastatic+renal+cell+carcinoma.">Current management and future perspectives of metastatic renal cell carcinoma.</a> Int. J. Urol. 21, 847-855 (2014).</li><li>Rini, B. I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=New+strategies+in+kidney+cancer:+therapeutic+advances+through+understanding+the+molecular+basis+of+response+and+resistance.">New strategies in kidney cancer: therapeutic advances through understanding the molecular basis of response and resistance.</a> Clin. Cancer Res. 16, 1348-1354 (2010).</li><li>Acquavella, N., Fojo, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Renal+cell+carcinoma:+trying+but+failing+to+improve+the+only+curative+therapy.">Renal cell carcinoma: trying but failing to improve the only curative therapy.</a> J. Immunother. 36, 459-461 (2013).</li><li>Salup, R. R., Wiltrout, R. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Adjuvant+immunotherapy+of+established+murine+renal+cancer+by+interleukin+2-stimulated+cytotoxic+lymphocytes.">Adjuvant immunotherapy of established murine renal cancer by interleukin 2-stimulated cytotoxic lymphocytes.</a> Cancer Res. 46, 3358-3363 (1986).</li><li>Ko, J. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Direct+and+differential+suppression+of+myeloid-derived+suppressor+cell+subsets+by+sunitinib+is+compartmentally+constrained.">Direct and differential suppression of myeloid-derived suppressor cell subsets by sunitinib is compartmentally constrained.</a> Cancer Res. 70, 3526-3536 (2010).</li><li>Kusmartsev, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Oxidative+stress+regulates+expression+of+VEGFR1+in+myeloid+cells:+link+to+tumor-induced+immune+suppression+in+renal+cell+carcinoma.">Oxidative stress regulates expression of VEGFR1 in myeloid cells: link to tumor-induced immune suppression in renal cell carcinoma.</a> J. Immunol. 181, 346-353 (2008).</li><li>Rocha, F. G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Endostatin+gene+therapy+enhances+the+efficacy+of+IL-2+in+suppressing+metastatic+renal+cell+carcinoma+in+mice.">Endostatin gene therapy enhances the efficacy of IL-2 in suppressing metastatic renal cell carcinoma in mice.</a> Cancer Immunol. Immunother. 59, 1357-1365 (2010).</li><li>Shanker, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Treating+metastatic+solid+tumors+with+bortezomib+and+a+tumor+necrosis+factor-related+apoptosis-inducing+ligand+receptor+agonist+antibody.">Treating metastatic solid tumors with bortezomib and a tumor necrosis factor-related apoptosis-inducing ligand receptor agonist antibody.</a> J. Natl. Cancer Inst. 100, 649-662 (2008).</li><li>VanOosten, R. L., Griffith, T. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Activation+of+tumor-specific+CD8++T+Cells+after+intratumoral+Ad5-TRAIL/CpG+oligodeoxynucleotide+combination+therapy.">Activation of tumor-specific CD8+ T Cells after intratumoral Ad5-TRAIL/CpG oligodeoxynucleotide combination therapy.</a> Cancer Res. 67, 11980-11990 (2007).</li><li>Bibby, M. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Orthotopic+models+of+cancer+for+preclinical+drug+evaluation:+advantages+and+disadvantages.">Orthotopic models of cancer for preclinical drug evaluation: advantages and disadvantages.</a> Eur. J. Cancer. 40, 852-857 (2004).</li><li>Devaud, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tissues+in+different+anatomical+sites+can+sculpt+and+vary+the+tumor+microenvironment+to+affect+responses+to+therapy.">Tissues in different anatomical sites can sculpt and vary the tumor microenvironment to affect responses to therapy.</a> Mol. Ther. 22, 18-27 (2014).</li><li>Devaud, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Differential+potency+of+regulatory+T+cell-mediated+immunosuppression+in+kidney+tumors+compared+to+subcutaneous+tumors.">Differential potency of regulatory T cell-mediated immunosuppression in kidney tumors compared to subcutaneous tumors.</a> Oncoimmunology. 3, 963395 (2014).</li><li>Devaud, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cross-talk+between+tumors+can+affect+responses+to+therapy.">Cross-talk between tumors can affect responses to therapy.</a> Oncoimmunology. 4, 975572 (2015).</li><li>Norian, L. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Eradication+of+metastatic+renal+cell+carcinoma+after+adenovirus-encoded+TNF-related+apoptosis-inducing+ligand+(TRAIL)/CpG+immunotherapy.">Eradication of metastatic renal cell carcinoma after adenovirus-encoded TNF-related apoptosis-inducing ligand (TRAIL)/CpG immunotherapy.</a> PLoS One. 7, 31085 (2012).</li><li>Matin, S. F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Immunological+response+to+renal+cryoablation+in+an+in+vivo+orthotopic+renal+cell+carcinoma+murine+model.">Immunological response to renal cryoablation in an in vivo orthotopic renal cell carcinoma murine model.</a> J. Urol. 183, 333-338 (2010).</li><li>Wilber, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=RNA+as+a+source+of+transposase+for+Sleeping+Beauty-mediated+gene+insertion+and+expression+in+somatic+cells+and+tissues.">RNA as a source of transposase for Sleeping Beauty-mediated gene insertion and expression in somatic cells and tissues.</a> Mol. Ther. 13, 625-630 (2006).</li><li>Lim, E., Modi, K. D., Kim, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+vivo+bioluminescent+imaging+of+mammary+tumors+using+IVIS+spectrum.">In vivo bioluminescent imaging of mammary tumors using IVIS spectrum.</a> J. Vis. Exp. , (2009).</li><li>Skrypnyk, N. I., Harris, R. C., de Caestecker, M. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ischemia-reperfusion+model+of+acute+kidney+injury+and+post+injury+fibrosis+in+mice.">Ischemia-reperfusion model of acute kidney injury and post injury fibrosis in mice.</a> J Vis Exp. , (2013).</li><li>Zimmerman, M., Hu, X., Liu, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Experimental+metastasis+and+CTL+adoptive+transfer+immunotherapy+mouse.">Experimental metastasis and CTL adoptive transfer immunotherapy mouse.</a> J. Vis. Exp. , (2010).</li><li>Wexler, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Accurate+identification+of+experimental+pulmonary+metastases.">Accurate identification of experimental pulmonary metastases.</a> J. Natl. Cancer Inst. 36, 641-645 (1966).</li><li>James, B. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=CpG-mediated+modulation+of+MDSC+contributes+to+the+efficacy+of+Ad5-TRAIL+therapy+against+renal+cell+carcinoma.">CpG-mediated modulation of MDSC contributes to the efficacy of Ad5-TRAIL therapy against renal cell carcinoma.</a> Cancer Immunol. Immunother. 63, 1213-1227 (2014).</li><li>James, B. R., Brincks, E. L., Kucaba, T. A., Boon, L., Griffith, T. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effective+TRAIL-based+immunotherapy+requires+both+plasmacytoid+and+CD8a+DC.">Effective TRAIL-based immunotherapy requires both plasmacytoid and CD8a DC.</a> Cancer Immunol. Immunother. 63, 685-697 (2014).</li><li>James, B. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Diet-induced+obesity+alters+dendritic+cell+function+in+the+presence+and+absence+of+tumor+growth.">Diet-induced obesity alters dendritic cell function in the presence and absence of tumor growth.</a> J. Immunol. 189, 1311-1321 (2012).</li><li>Brincks, E. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Triptolide+enhances+the+tumoricidal+activity+of+TRAIL+against+renal+cell+carcinoma.">Triptolide enhances the tumoricidal activity of TRAIL against renal cell carcinoma.</a> FEBS J. 282, 4747-4765 (2015).</li><li>Anderson, K. G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cutting+edge:+intravascular+staining+redefines+lung+CD8+T+cell+responses.">Cutting edge: intravascular staining redefines lung CD8 T cell responses.</a> J. Immunol. 189, 2702-2706 (2012).</li><li>Anderson, K. G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Intravascular+staining+for+discrimination+of+vascular+and+tissue+leukocytes.">Intravascular staining for discrimination of vascular and tissue leukocytes.</a> Nat. Protocols. 9, 209-222 (2014).</li></ol>

نقدم بروتوكول لنموذج الفأر RCC مثلي. زرع خلايا غدية الماوس ورم الكلى في الكلى الماوس يوفر نموذجا سريريا ذات الصلة من مركز تنسيق الانقاذ البحري. النتائج هذا النموذج في الورم الرئيسي داخل الكلى والانبثاث البعيد في الرئتين، وكلاهما بصمات RCC المتقدمة. وصف المقدمة في هذه ا?...

الكلوي سرطان الخلايا (RCC) يمثل غالبية الأورام الخبيثة الكلى وحوالي 3٪ من جميع الأورام الخبيثة الكبار في جميع أنحاء العالم 1، 2. نظرا لعدم وجود أعراض، خطأ في التشخيص، وأدوات الفحص كافية لمجلس قيادة الثورة، وتقريبا 30٪ من المرضى الحالي مع RCC المنتشر (مركز تنسيق الانقاذ البحري) في وقت التشخيص، مع 20-30٪ إضافية من المرضى تتقدم إلى مرحلة النقيلي 2. هذه الحالات تؤدي إلى ~ 13،500 حالة وفاة سنويا 1 و 3. على الرغم من اكتشاف وعلاج RCC الأساسي في وقت سابق قد تحسنت، لا يزال معدل الوفيات المرتبطة RCC لزيادة، مما يدل على أن المرض المنتشر هي المسؤولة إلى حد كبير عن الوفيات 3. وقد أحرز تقدم في تطوير علاج لمجلس قيادة الثورة على مدى العقد الماضي مع اكتشاف وتنفيذ العلاجات المناعية والمستهدفة. للأسف، surviv خالية من التقدمالقاعدة والبقاء على قيد الحياة الإجمالي للحالات المتقدمة لا تزال أقل بكثير من 2 سنوات بالنسبة لغالبية المرضى 4 و 5 و 6. تستدعي هذه الإحصاءات الحاجة إلى مزيد من البحث في تحديد وتطوير علاجات فعالة لقيادة الثورة. للمضي قدما نحو كاف التدخلات العلاجية لمركز تنسيق الانقاذ البحري، وهناك حاجة لأول مرة نماذج ما قبل السريرية translationally ذات الصلة من هذا المرض. تطوير نموذج ذات الصلة ومتسق لألخص الوضع البشري من RCC المتقدمة ينبغي أن تعالج عدة أسئلة أساسية: 1) هل نموذج ذات الصلة تشريحيا. 2) هل تقدم الورم على نحو مماثل لعلم الأمراض البشري؛ 3) هل الانبثاث تنشأ من الورم الرئيسي. و4) هل يمكن أن ترصد الابتدائي والمنتشر تطور الورم على مر الزمن؟ اعتمادا على نوع من العلاج يجري التحقيق فيها، خطوط الماوس RCC ورم الخلايا، RCC خطوط الخلايا السرطانية البشرية، والإنسان RCC xenog المستمدة من المريضويمكن استخدام الطوافات في مناعيا أو العوز المناعي الفئران. مطلوب المضيف مع الجهاز المناعي سليمة وظيفية لهذه الدراسات تقييم بعض جوانب العلاج المناعي، مما يستلزم استخدام خط الخلية رينكا موصوفة وصفا جيدا مستمدة من غدية الكلى عفوية من BALB / ج الفئران 7. معظم الدراسات حقن خلايا رينكا تحت الجلد (الشوري)، الذي يشكل الورم المحلي سهلة التدبير، أو عن طريق الوريد (IV) في الفئران BALB / ج لإنتاج التجريبية الرئة &quot;الانبثاث&quot; 8، 9، 10، 11، 12. استخدام وسيلة رينكا ورم زرع الشوري لنموذج RCC البشري لديه عدد من القيود، بما في ذلك تعصيب دقيقة من الأوعية الدموية 13، والاختلافات في المكروية 14 و 15، وعدم وجود الجهاز / ورم COMMUNIC الخلويأوجه 13 و 16. بالإضافة إلى ذلك، العديد من الأورام الشوري (لا سيما رينكا) لا metastasize إلى أجهزة البعيدة، مما يعوق دراسة حدث هو شائع السريرية المميزة 17. لدراسة مركز تنسيق الانقاذ البحري، وخلايا رينكا يمكن حقن الرابع لتأسيس عبء الورم في-الرئتين الموقع الأساسي الانبثاث في مرضى RCC. طريقة حقن الرابع من بدء أورام النقيلي، ومع ذلك، لا يسمح التحقيق في كيف ومتى، أو لماذا هاجرت الخلايا من الجهاز الرئيسي (أي الكلى) إلى موقع بعيد. نموذج مع كل من المرض الأساسي والمنتشر واضحا في نفس الحيوان أمر بالغ الأهمية لدراسة التقدم والعلاج من المرض المتقدمة، ولا سيما بالنظر إلى أن الانبثاث وعادة ما تكون سبب للوفيات في هؤلاء المرضى. وقد وضعت مختبرنا نموذج الفئران من مركز تنسيق الانقاذ البحري الذي يشتمل على كافة الميزات المذكورة أعلاه. لتأسيس العلاقات العامةimary والأورام مثلي، يتم زرع خلايا رينكا مباشرة في الكلى الحيوان من خلال الصفاق شفافة. شق صغير في الجهة اليسرى يسمح لرؤية الطحال (كمعلم) والكلية اليسرى. باستخدام إبرة عيار صغير، يتم حقن الخلايا السرطانية رينكا مباشرة في الكلى من خلال الغشاء البريتوني لزرع مثلي. بالمقارنة مع غيرها من أساليب زرع خلايا رينكا تحت كبسولة الكلى 18، وهذه الطريقة من زرع يسمح للإنتاجية أعلى، كما هو إلى حد ما غير الغازية، لا يحتاج إلى خياطة، هو من فئة ألم منخفضة، وعندما كفاءة في استهلاك للوقت تمارس. هذا جيدا اتسم نتائج النموذج في عبء استنساخه الأساسي الورم (~ 99٪ معدل اتخاذ) في الكلى حقن فضلا عن تحميل الورم النقيلي في الرئتين. وتشمل المزايا الهامة لهذا النموذج طبيعته مسانج، والسماح لالتحقيقات المناعي. الانبثاث عفوية، وذلك لدراسة ومرض dvanced. وزرع مثلي، وذلك لنمذجة تأثير التشريحية على تطور المرض والعلاج. أن العلاجات التي تهدف إلى استهداف RCC تستفيد كثيرا من الاستفادة من هذا النموذج خلال تجربة غير سريرية.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" width="420">
	<colgroup>
		<col span="2" />
		<col />
		<col />
	</colgroup>
	<tbody>
		<tr height="52">
			<td height="52" style="height:52px;width:88px;">Artificial tears ophthalmic ointment</td>
			<td style="width:88px;">Akorn</td>
			<td style="width:156px;">NDC 17478-162-35</td>
			<td style="width:88px;"></td>
		</tr>
		<tr height="52">
			<td height="52" style="height:52px;width:88px;">Vetbond Tissue Adhesive</td>
			<td style="width:88px;">3M</td>
			<td style="width:156px;">CBGBIW011019</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="69">
			<td height="69" style="height:69px;width:88px;">Betadine Solution (Povidone-iodine, 5%)</td>
			<td style="width:88px;">Purdue Products, L.P.</td>
			<td style="width:156px;">NDC 67618-155-32</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="69">
			<td height="69" style="height:69px;width:88px;">0.25% Marcaine (bupivavaine HCL injection)</td>
			<td style="width:88px;">Hospira</td>
			<td style="width:156px;">0409-1587-50&#160;</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:88px;">Heating pad</td>
			<td style="width:88px;">Sunbeam</td>
			<td style="width:156px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:88px;">Syringes</td>
			<td style="width:88px;">BD</td>
			<td style="width:156px;">309659</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:88px;">Gauze</td>
			<td style="width:88px;">Venture</td>
			<td style="width:156px;">908291</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="29">
			<td height="51" rowspan="2" style="height:51px;width:88px;">Ketamine</td>
			<td rowspan="2" style="width:88px;">Phoenix Pharmaceuticals</td>
			<td rowspan="2" style="width:156px;">NDC 57319-609-02</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;"></td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:88px;">Xylazine&#160;</td>
			<td style="width:88px;">Akorn</td>
			<td style="width:156px;">NDC 59399-111</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="52">
			<td height="52" style="height:52px;width:88px;">Hank&#8217;s Balanced Salts</td>
			<td style="width:88px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:156px;">H2387</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:88px;">IVIS</td>
			<td style="width:88px;">Caliper</td>
			<td style="width:156px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="52">
			<td height="52" style="height:52px;width:88px;">D-Luciferin, Potassium Salt</td>
			<td style="width:88px;">GoldBio</td>
			<td style="width:156px;">LUCK-1G</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:88px;">India Ink</td>
			<td style="width:88px;">Chartpak Inc</td>
			<td style="width:156px;">44201</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:88px;">Scissors</td>
			<td style="width:88px;"></td>
			<td style="width:156px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:88px;">Forceps</td>
			<td style="width:88px;"></td>
			<td style="width:156px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="69">
			<td height="69" style="height:69px;width:88px;">Sleeping Beauty (SB) transposon system</td>
			<td style="width:88px;">Neuromics</td>
			<td style="width:156px;">SBT0200</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:88px;">Renca</td>
			<td style="width:88px;">ATCC</td>
			<td style="width:156px;">CRL-2947</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

a syngeneic mouse model of metastatic renal cell carcinoma for quantitative and longitudinal assessment of preclinical therapies

سرطان الخلايا الكلوية (RCC) يؤثر&gt; 60000 شخص في الولايات المتحدة سنويا، و~ 30٪ من المرضى لديهم RCC الانبثاث متعددة في وقت التشخيص. النقيلي RCC (مركز تنسيق الانقاذ البحري) هو غير قابل للشفاء، مع فترة بقاء متوسط ​​18 شهرا فقط. التدخلات المناعية المستندة إلى (على سبيل المثال، انترفيرون (IFN) وانترلوكين (IL) -2) لحث على ردود دائمة في جزء من مرضى مركز تنسيق الانقاذ البحري، ومثبطات multikinase (على سبيل المثال، السونيتينيب sunitinib أو سورافينيب) أو مكافحة VEGF مستقبلات الأجسام المضادة وحيدة النسيلة (ماب) ل المهدئة إلى حد كبير، والهجوع كاملة نادرة. هذه النقائص في العلاجات الحالية للمرضى مركز تنسيق الانقاذ البحري توفر الأساس المنطقي لوضع بروتوكولات العلاج الرواية. ومن المكونات الرئيسية في اختبار قبل السريرية لعلاجات جديدة لمركز تنسيق الانقاذ البحري هو نموذج حيواني مناسبة. الميزات المفيدة التي تلخص حالة الإنسان تشمل الورم الرئيسي الكلوي، الانبثاث ورم الكلى، والجهاز المناعي سليمة للتحقيق في أي effecto مأمن يحركها العلاجردود r وتشكيل من العوامل المثبطة للمناعة التي يسببها الورم. يصف هذا التقرير على نموذج الفأر مركز تنسيق الانقاذ البحري مثلي أن لديه كل هذه الميزات. نحن تصف تقنية زرع داخل الكلية باستخدام الماوس الكلوي خط خلية غدية رينكا، تليها تقييم نمو الورم في (الموقع الرئيسي) في الكلى والرئتين (الموقع المتنقل).

<html> وزرع ناجحة من خلايا رينكا يؤدي إلى تطوير ورم في الكلى والانبثاث إلى الرئتين من الفئران. بعد استئصال الورم الحاملة والكلى المقابل، تم قياس الأوزان النسيج الرطب (ز) للتدليل على عبء الورم استنادا إلى زيادة الوزن (الشكل 1). الأورام رينكا يمكن...

Watch this Scientific Journal Video about A Syngeneic Mouse Model of Metastatic Renal Cell Carcinoma for Quantitative and Longitudinal Assessment of Preclinical Therapies at JoVE.com

A Syngeneic Mouse Model of Metastatic Renal Cell Carcinoma for Quantitative and Longitudinal Assessment of Preclinical Therapies

تنفيذ نموذج مثلي من سرطان الخلايا الكلوية في الفئران مناعيا يتيح للمحقق نظام سريريا ذات الصلة التي تحددها وجود الورم والرئة الكلى الأولية الانبثاث في نفس الحيوان. هذا النظام يمكن استخدامها لاختبار preclinically مجموعة متنوعة من العلاجات في الجسم الحي.

وسرطان الخلايا مسانج ماوس نموذج الإنتقالية الكلوي لتقييم الكمي وطولية من قبل السريرية العلاج

Renal cell carcinoma (RCC) affects &#62; 60,000 people in the United States annually, and ~ 30% of RCC patients have multiple metastases at the time of ...

The overall goal of this procedure is to establish mouse orthotopic renal tumors through the intrarenal implantation of tumor cell for the study of tumor growth and metastasis and the efficacy of anti-tumor therapies. This method can be used to answer key questions in the urologic oncology field such as how effective is a novel therapy in a pre-clinical model of kidney cancer. The main advantage of this technique is that intrarenal tumor implantation establishes a primary lung metastasizing renal tumor mimicking clinical renal cell carcinoma pathogenesis.To prepare the Renca tumor cells first detach the cell culture with 0.25%Trypsin and HBSS after rinsing with PBS. Neutralize the reaction after five minutes with Complete RPMI Medium. Transfer the cells to a conical tube for centrifugation and re-suspend the pellet in fresh HBSS.After counting, adjust the volume to a two times ten to the six cells per milliliter concentration in HBSS, and draw the cells into a one milliliter syringe equipped with an 18 gauge needle. Next, place a sterile surgical drape over a heating pad and confirm the appropriate level of sedation by toe pinch. Remove the hair from the left flank of the mouse and apply vet ointment to the eyes.Then swab the implantation site with 5%povidone iodine antiseptic and use a sterile scalpel to make a single one to one and a half centimeter incision on the left flank, taking care not to penetrate the peritoneum. Using scissors, separate the dermis from the peritoneum, dabbing the incision site with sterile cotton gauze to remove any blood. Then grasp the head with the left hand and support the flank with the right hand to locate the spleen through the peritoneum.Using one finger from the right hand, palpate the mouse from underneath. The kidney should become visible. Keeping a firm hold on the animal to provide tension across the peritoneum and kidney, have an assistant slowly deliver 0.1 milliliters of the Renca cells through the intact peritoneum into the center of the kidney.Hold the needle in place for five to 10 seconds to reduce the backflow of the cells. Then, close the incision with a thin layer of cyanoacrylate tissue adhesive. At the experimental end point, use scissors to make a midline incision, starting at the mid-abdomen through the ribcage, neck, and salivary glands.Using scissors and forceps, carefully remove the ribs without compromising the lung tissue, and remove the connective tissue to expose the trachea. Fill a three milliliter syringe equipped with an 18 gauge needle with 10%India Ink and PBS. Then use forceps to carefully thread a silk suture under the trachea and then tie a loose knot.Next, carefully insert the needle into the trachea and slowly inflate the lungs with one to one and a half milliliters of the India Ink solution. Pull the knot tight around the trachea to inhibit the backflow of the ink, then remove the needle and carefully cut away the connective tissue to remove the inflated lungs. Fix the lungs in a 15 milliliter conical tube containing five milliliter of Fekete's solution in a chemical fume hood at room temperature.After 24 to 48 hours, remove the intact de-stained lungs and carefully pull apart the lobes in a 35 by 10 millimeter petri dish. Then count the number of white tumor nodules under a dissecting microscope. A successful mouse intrarenal Renca cell implantation results in tumor development in the kidney and metastasis to the lungs with tumor-bearing animals demonstrating a robust tumor burden as measured by the increased weight of the tumor-implanted kidneys.As observed, Renca tumors can be identified by immunohistochemical staining for Cytokeratin eight and 18. The implantation of a luciferase expressing Renca cell line allows tracking of the tumor burden in the kidney and metastasis to the lung by bioluminescent imaging as further confirmed by india link lung inflation. Once mastered, this technique can be completed in less than five minutes per mouse if performed properly.While attempting this procedure it's important to remember to clearly identify the kidney through the peritoneum to ensure an accurate intrarenal tumor implantation. Following this procedure, other methods, like preclinical drug testing can be performed to answer additional questions, such as to what extent does novel drug effect the growth or metastasis of intrarenal tumors? After watching this video, you should have a good understanding of how to perform intrarenal tumor cell implantation for establishing orthotopic kidney tumors in the mouse.Don't forget that working with live animals and surgical instruments can be hazardous and that precautions, such as following institutional animal handling guidelines and maintaining a sterile surgical area and instruments should always be taken while performing this procedure.

Research

JoVE Journal

Cancer Research

Development and Maintenance of a Preclinical Patient Derived Tumor Xenograft Model for the Investigation of Novel Anti-Cancer Therapies

تطوير وصيانة للورم المريض قبل السريرية المستمدة طعم أجنبي نموذج للتحقيق في رواية مكافحة السرطان العلاج

Patient derived tumor xenograft (PDTX) models provide a necessary platform in facilitating anti-cancer drug development prior to human trials. Human tumor ...

Surgical Procedures and Methodology for a Preclinical Murine Model of De Novo Mammary Cancer Metastasis

Surgical Procedures and Methodology for a Preclinical Murine Model of De Novo Mammary Cancer Metastasis

الإجراءات الجراحية ومنهجية لنموذج الفئران قبل السريرية<em&gt; دي نوفو</em&gt; سرطان الثديي الانبثاث

A rate-limiting aspect of transgenic mouse models of mammary adenocarcinoma is that primary tumor burden in mammary tissue typically defines study ...

The Colon-26 Carcinoma Tumor-bearing Mouse as a Model for the Study of Cancer Cachexia

كولون-26 سرطان الفأر نموذجا لدراسة سرطان دنف الحاملة للورم

Cancer cachexia is the progressive loss of skeletal muscle mass and adipose tissue, negative nitrogen balance, anorexia, fatigue, inflammation, and ...

A Model for Perineural Invasion in Head and Neck Squamous Cell Carcinoma

نموذج للمحيط بالعصب الغزو في الرأس والرقبة قشري سرطان الخلايا

Perineural invasion (PNI) is found in approximately 40% of head and neck squamous cell carcinomas (HNSCC). Despite multimodal treatment with surgery, ...

Therapy Testing in a Spheroid-based 3D Cell Culture Model for Head and Neck Squamous Cell Carcinoma

اختبار في نموذج ثقافة خلية 3D على أساس كروي للرأس والرقبة الحرشفية خلية العلاج

Current treatment options for advanced and recurrent head and neck squamous cell carcinoma (HNSCC) enclose radiation and chemo-radiation approaches with ...

A Syngeneic Pancreatic Cancer Mouse Model to Study the Effects of Irreversible Electroporation

نموذج سرطان البنكرياس سينجينيك ماوس دراسة آثار انهانسر لا رجعة فيه

Pancreatic cancer (PC), a disease which kills approximately 40,000 patients each year in the US, has successfully evaded several therapeutic approaches ...

A Bioluminescent and Fluorescent Orthotopic Syngeneic Murine Model of Androgen-dependent and Castration-resistant Prostate Cancer

نموذج أورثوتوبيك طرحه ونيون مورين سينجينيك المعتمدة على الاندروجين والاخصاء مقاومة سرطان البروستاتا

Orthotopic tumor modeling is a valuable tool for pre-clinical prostate cancer research, as it has multiple advantages over both subcutaneous and ...

A Syngeneic Mouse B-Cell Lymphoma Model for Pre-Clinical Evaluation of CD19 CAR T Cells

نموذج ماوس سينجينيك اللمفاوية ب-خلية للتقييم قبل الإكلينيكية لخلايا تي سيارة CD19

The astonishing clinical success of CD19 chimeric antigen receptor (CAR) T-cell therapy has led to the approval of two second generation chimeric antigen ...

Intramucosal Inoculation of Squamous Cell Carcinoma Cells in Mice for Tumor Immune Profiling and Treatment Response Assessment

إينتراموكوسال تلقيح خلايا الخلايا الحرشفية في الفئران للورم التنميط المناعي وتقييم استجابة العلاج

Head and neck squamous cell carcinoma (HNSCC) is a debilitating and deadly disease with a high prevalence of recurrence and treatment failure. To develop ...

Micromanipulation of Circulating Tumor Cells for Downstream Molecular Analysis and Metastatic Potential Assessment

التحليل الجزئي للخلايا السرطانية المتداولة للتحليل الجزيئي المصب والتقييم المحتمل المنتشر

Blood-borne metastasis accounts for&#160;most cancer-related deaths and involves circulating tumor cells (CTCs) that are successful in establishing new ...