Name: a syngeneic mouse model of metastatic renal cell carcinoma for quantitative and longitudinal assessment of preclinical therapies
Uploaded: 2017-04-12T14:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about A Syngeneic Mouse Model of Metastatic Renal Cell Carcinoma for Quantitative and Longitudinal Assessment of Preclinical Therapies at JoVE.com

Эта работа была поддержана грантами от Национального института рака (R15CA173657 к AW и R01CA109446 к TSG), Института рака (Simmons к AW) и Университета Minnestoa Подняться 4 рака почки Foundation (для TSG). Мы благодарим д-ра Кристин Андерсон за помощь в иммунофлюоресценции.

Следующий протокол описывает экспериментальную процедуру для индукции и мониторинга роста экспериментальных ортотопических опухолей почек и любых потенциальных спонтанных метастазов. Все последующие процедуры осуществляются в соответствии с институциональной политики и утвержденными проц?...

<ol>
	<li>Siegel, R. L., Miller, K. D., Jemal, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cancer+statistics.">Cancer statistics.</a> CA Cancer J. Clin. 66, 7-30 (2016).</li><li>Chow, W. H., Dong, L. M., Devesa, S. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Epidemiology+and+risk+factors+for+kidney+cancer.">Epidemiology and risk factors for kidney cancer.</a> Nat. Rev. Urol. 7, 245-257 (2010).</li><li>Hollingsworth, J. M., Miller, D. C., Daignault, S., Hollenbeck, B. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Rising+incidence+of+small+renal+masses:+a+need+to+reassess+treatment+effect.">Rising incidence of small renal masses: a need to reassess treatment effect.</a> J. Natl. Cancer Inst. 98, 1331-1334 (2006).</li><li>Lee-Ying, R., Lester, R., Heng, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Current+management+and+future+perspectives+of+metastatic+renal+cell+carcinoma.">Current management and future perspectives of metastatic renal cell carcinoma.</a> Int. J. Urol. 21, 847-855 (2014).</li><li>Rini, B. I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=New+strategies+in+kidney+cancer:+therapeutic+advances+through+understanding+the+molecular+basis+of+response+and+resistance.">New strategies in kidney cancer: therapeutic advances through understanding the molecular basis of response and resistance.</a> Clin. Cancer Res. 16, 1348-1354 (2010).</li><li>Acquavella, N., Fojo, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Renal+cell+carcinoma:+trying+but+failing+to+improve+the+only+curative+therapy.">Renal cell carcinoma: trying but failing to improve the only curative therapy.</a> J. Immunother. 36, 459-461 (2013).</li><li>Salup, R. R., Wiltrout, R. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Adjuvant+immunotherapy+of+established+murine+renal+cancer+by+interleukin+2-stimulated+cytotoxic+lymphocytes.">Adjuvant immunotherapy of established murine renal cancer by interleukin 2-stimulated cytotoxic lymphocytes.</a> Cancer Res. 46, 3358-3363 (1986).</li><li>Ko, J. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Direct+and+differential+suppression+of+myeloid-derived+suppressor+cell+subsets+by+sunitinib+is+compartmentally+constrained.">Direct and differential suppression of myeloid-derived suppressor cell subsets by sunitinib is compartmentally constrained.</a> Cancer Res. 70, 3526-3536 (2010).</li><li>Kusmartsev, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Oxidative+stress+regulates+expression+of+VEGFR1+in+myeloid+cells:+link+to+tumor-induced+immune+suppression+in+renal+cell+carcinoma.">Oxidative stress regulates expression of VEGFR1 in myeloid cells: link to tumor-induced immune suppression in renal cell carcinoma.</a> J. Immunol. 181, 346-353 (2008).</li><li>Rocha, F. G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Endostatin+gene+therapy+enhances+the+efficacy+of+IL-2+in+suppressing+metastatic+renal+cell+carcinoma+in+mice.">Endostatin gene therapy enhances the efficacy of IL-2 in suppressing metastatic renal cell carcinoma in mice.</a> Cancer Immunol. Immunother. 59, 1357-1365 (2010).</li><li>Shanker, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Treating+metastatic+solid+tumors+with+bortezomib+and+a+tumor+necrosis+factor-related+apoptosis-inducing+ligand+receptor+agonist+antibody.">Treating metastatic solid tumors with bortezomib and a tumor necrosis factor-related apoptosis-inducing ligand receptor agonist antibody.</a> J. Natl. Cancer Inst. 100, 649-662 (2008).</li><li>VanOosten, R. L., Griffith, T. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Activation+of+tumor-specific+CD8++T+Cells+after+intratumoral+Ad5-TRAIL/CpG+oligodeoxynucleotide+combination+therapy.">Activation of tumor-specific CD8+ T Cells after intratumoral Ad5-TRAIL/CpG oligodeoxynucleotide combination therapy.</a> Cancer Res. 67, 11980-11990 (2007).</li><li>Bibby, M. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Orthotopic+models+of+cancer+for+preclinical+drug+evaluation:+advantages+and+disadvantages.">Orthotopic models of cancer for preclinical drug evaluation: advantages and disadvantages.</a> Eur. J. Cancer. 40, 852-857 (2004).</li><li>Devaud, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tissues+in+different+anatomical+sites+can+sculpt+and+vary+the+tumor+microenvironment+to+affect+responses+to+therapy.">Tissues in different anatomical sites can sculpt and vary the tumor microenvironment to affect responses to therapy.</a> Mol. Ther. 22, 18-27 (2014).</li><li>Devaud, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Differential+potency+of+regulatory+T+cell-mediated+immunosuppression+in+kidney+tumors+compared+to+subcutaneous+tumors.">Differential potency of regulatory T cell-mediated immunosuppression in kidney tumors compared to subcutaneous tumors.</a> Oncoimmunology. 3, 963395 (2014).</li><li>Devaud, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cross-talk+between+tumors+can+affect+responses+to+therapy.">Cross-talk between tumors can affect responses to therapy.</a> Oncoimmunology. 4, 975572 (2015).</li><li>Norian, L. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Eradication+of+metastatic+renal+cell+carcinoma+after+adenovirus-encoded+TNF-related+apoptosis-inducing+ligand+(TRAIL)/CpG+immunotherapy.">Eradication of metastatic renal cell carcinoma after adenovirus-encoded TNF-related apoptosis-inducing ligand (TRAIL)/CpG immunotherapy.</a> PLoS One. 7, 31085 (2012).</li><li>Matin, S. F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Immunological+response+to+renal+cryoablation+in+an+in+vivo+orthotopic+renal+cell+carcinoma+murine+model.">Immunological response to renal cryoablation in an in vivo orthotopic renal cell carcinoma murine model.</a> J. Urol. 183, 333-338 (2010).</li><li>Wilber, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=RNA+as+a+source+of+transposase+for+Sleeping+Beauty-mediated+gene+insertion+and+expression+in+somatic+cells+and+tissues.">RNA as a source of transposase for Sleeping Beauty-mediated gene insertion and expression in somatic cells and tissues.</a> Mol. Ther. 13, 625-630 (2006).</li><li>Lim, E., Modi, K. D., Kim, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+vivo+bioluminescent+imaging+of+mammary+tumors+using+IVIS+spectrum.">In vivo bioluminescent imaging of mammary tumors using IVIS spectrum.</a> J. Vis. Exp. , (2009).</li><li>Skrypnyk, N. I., Harris, R. C., de Caestecker, M. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ischemia-reperfusion+model+of+acute+kidney+injury+and+post+injury+fibrosis+in+mice.">Ischemia-reperfusion model of acute kidney injury and post injury fibrosis in mice.</a> J Vis Exp. , (2013).</li><li>Zimmerman, M., Hu, X., Liu, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Experimental+metastasis+and+CTL+adoptive+transfer+immunotherapy+mouse.">Experimental metastasis and CTL adoptive transfer immunotherapy mouse.</a> J. Vis. Exp. , (2010).</li><li>Wexler, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Accurate+identification+of+experimental+pulmonary+metastases.">Accurate identification of experimental pulmonary metastases.</a> J. Natl. Cancer Inst. 36, 641-645 (1966).</li><li>James, B. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=CpG-mediated+modulation+of+MDSC+contributes+to+the+efficacy+of+Ad5-TRAIL+therapy+against+renal+cell+carcinoma.">CpG-mediated modulation of MDSC contributes to the efficacy of Ad5-TRAIL therapy against renal cell carcinoma.</a> Cancer Immunol. Immunother. 63, 1213-1227 (2014).</li><li>James, B. R., Brincks, E. L., Kucaba, T. A., Boon, L., Griffith, T. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effective+TRAIL-based+immunotherapy+requires+both+plasmacytoid+and+CD8a+DC.">Effective TRAIL-based immunotherapy requires both plasmacytoid and CD8a DC.</a> Cancer Immunol. Immunother. 63, 685-697 (2014).</li><li>James, B. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Diet-induced+obesity+alters+dendritic+cell+function+in+the+presence+and+absence+of+tumor+growth.">Diet-induced obesity alters dendritic cell function in the presence and absence of tumor growth.</a> J. Immunol. 189, 1311-1321 (2012).</li><li>Brincks, E. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Triptolide+enhances+the+tumoricidal+activity+of+TRAIL+against+renal+cell+carcinoma.">Triptolide enhances the tumoricidal activity of TRAIL against renal cell carcinoma.</a> FEBS J. 282, 4747-4765 (2015).</li><li>Anderson, K. G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cutting+edge:+intravascular+staining+redefines+lung+CD8+T+cell+responses.">Cutting edge: intravascular staining redefines lung CD8 T cell responses.</a> J. Immunol. 189, 2702-2706 (2012).</li><li>Anderson, K. G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Intravascular+staining+for+discrimination+of+vascular+and+tissue+leukocytes.">Intravascular staining for discrimination of vascular and tissue leukocytes.</a> Nat. Protocols. 9, 209-222 (2014).</li></ol>

Мы представляем протокол для ортотопической мышиной модели РКЦ. Имплантация мыши почечных опухолевых клеток аденокарциномы в почки мыши, обеспечивает клинически соответствующую модель MRCC. Эта модель приводит к первичной опухоли в почках и отдаленных метастазов в легких, оба из котор...

Почечный - клеточный рак (ПКР) составляет для большинства злокачественных новообразований почек и примерно 3% от всех злокачественных новообразований у взрослых во всем мире 1, 2. Из - за отсутствия симптомов, неправильного диагноза, и недостаточные инструменты скрининга для РКС, почти у 30% пациентов будут представлены с метастатическим ПКР (MRCC) на момент постановки диагноза, с дополнительным 20-30% пациентов , прогрессирующих до метастатической стадии 2. Эти случаи приводят к ~ 13500 смертей в год 1, 3. Хотя ранее обнаружение и лечение первичного RCC улучшилось, скорость РКС-связанной смерти продолжает расти, предполагая , что метастатическое заболевание в значительной степени ответственны за смертностью 3. Развитие терапии ПКР прогрессировало в течение последнего десятилетия с открытием и реализацией целевых методов лечения и иммунотерапии. К сожалению, без прогрессирования survivаль и общая выживаемость запущенных случаев все еще хорошо в 2 -х года для большинства пациентов 4, 5, 6. Эти статистические данные говорят о необходимости дальнейших исследований в выявлении и разработке эффективных методов лечения ПКР. Для адекватного продвижения терапевтических вмешательств для MRCC, сначала необходимо поступательно-соответствующие доклинические модели заболевания. Разработка соответствующей и последовательная модели резюмировать человеческое состояние передового RCC должен решить несколько ключевых вопросов: 1) Является ли модель анатомический отношением; 2) Есть ли прогресс опухоли по аналогии с человеческой патологии; 3) Есть ли метастазы возникают из первичной опухоли; и 4) Может прогрессирование первичного и метастатического опухолевого контролироваться с течением времени? В зависимости от типа лечения исследуется, линии опухолевых клеток мыши РКЦ, линии человеческих опухолевых клеток РКЦ и человека RCC пациента, полученных xenogплоты могут быть использованы в иммунокомпетентных или иммунодефицитных мышей. Хост с интактным и функциональной иммунной системы требуется для этих исследований , оценивающих некоторые аспекты иммунотерапии, что требует использования хорошо описанной клеточной линии , полученной из Ренка спонтанной почечной аденокарциномы BALB / C мышей 7. Большинство исследований впрыснуть Ренок клетки подкожно (SC), который образует простую в меру локальной опухоль, или внутривенно (IV) в мышей BALB / C для получения экспериментальных легких «метастазов» 8, 9, 10, 11, 12. Пользование подкожно имплантированных опухолей Ренка к модели человеческого РКЦ имеет ряд ограничений, в том числе неточной иннервации сосудов 13, различия в микросреде 14, 15, а также отсутствие органа / опухоли сотовой COMMUNICция 13, 16. Кроме того, многие SC опухоли (особенно Ренок) не метастазируют в дистальные органы, ингибируя исследование о событии , которое является общим клинической характеристикой 17. Для изучения MRCC, Ренка клетки могут быть введены внутривенно, чтобы установить бремя опухоли в легких-первичном месте метастазов у ​​больных РСС. IV инъекционный метод инициирования метастатических опухолей, однако, не позволяет исследовать , как, когда и почему клетки мигрировали из первичного органа (т.е. почки) в отдаленном месте. Модель с первичным и метастатическим заболеванием очевидным в том же животном имеет решающее значение для изучения прогрессирования и лечения позднего стадии заболевания, особенно с учетом того, что метастазы обычно являются причиной смертности у этих пациентов. Наша лаборатория разработала мышиную модель MRCC, которая включает в себя все функции, изложенные выше. Чтобы установить прimary, ортотопическая опухоль, клетки Ренка имплантирует непосредственно в почки животного через полупрозрачные брюшины. Небольшой разрез в левом боке позволяет для визуализации селезенки (как ориентир) и левой почки. С помощью небольшой иглы калибра, опухолевые клетки RENCA вводят непосредственно в почку через брюшину для ортотопической имплантации. По сравнению с другими методами имплантации клеток Ренка ниже капсулы 18 почек, этот способ имплантации обеспечивает более высокую пропускную способность , так как это довольно неинвазивным, не требует наложения швов, имеет низкий класс боли, а также занимает много времени эффективным , когда практикуется. Это хорошо охарактеризованы результаты модели в воспроизводимом бремени первичной опухоли (~ 99% скорости отбора) в впрыскиваемого почек, а также метастатической опухолевой нагрузки в легких. Существенные преимущества этой модели включают его сингенный характер, что позволяет иммунотерапии исследованиям; его спонтанные метастазы, изучатьdvanced болезнь; и его ортотопическая имплантация, смоделировать анатомическое влияние на прогрессировании заболеваний и лечение. Методы лечения, направленные на нацеливание RCC бы извлечь большую пользу от использования этой модели в ходе доклинических развития.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" width="420">
	<colgroup>
		<col span="2" />
		<col />
		<col />
	</colgroup>
	<tbody>
		<tr height="52">
			<td height="52" style="height:52px;width:88px;">Artificial tears ophthalmic ointment</td>
			<td style="width:88px;">Akorn</td>
			<td style="width:156px;">NDC 17478-162-35</td>
			<td style="width:88px;"></td>
		</tr>
		<tr height="52">
			<td height="52" style="height:52px;width:88px;">Vetbond Tissue Adhesive</td>
			<td style="width:88px;">3M</td>
			<td style="width:156px;">CBGBIW011019</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="69">
			<td height="69" style="height:69px;width:88px;">Betadine Solution (Povidone-iodine, 5%)</td>
			<td style="width:88px;">Purdue Products, L.P.</td>
			<td style="width:156px;">NDC 67618-155-32</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="69">
			<td height="69" style="height:69px;width:88px;">0.25% Marcaine (bupivavaine HCL injection)</td>
			<td style="width:88px;">Hospira</td>
			<td style="width:156px;">0409-1587-50&#160;</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:88px;">Heating pad</td>
			<td style="width:88px;">Sunbeam</td>
			<td style="width:156px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:88px;">Syringes</td>
			<td style="width:88px;">BD</td>
			<td style="width:156px;">309659</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:88px;">Gauze</td>
			<td style="width:88px;">Venture</td>
			<td style="width:156px;">908291</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="29">
			<td height="51" rowspan="2" style="height:51px;width:88px;">Ketamine</td>
			<td rowspan="2" style="width:88px;">Phoenix Pharmaceuticals</td>
			<td rowspan="2" style="width:156px;">NDC 57319-609-02</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;"></td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:88px;">Xylazine&#160;</td>
			<td style="width:88px;">Akorn</td>
			<td style="width:156px;">NDC 59399-111</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="52">
			<td height="52" style="height:52px;width:88px;">Hank&#8217;s Balanced Salts</td>
			<td style="width:88px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:156px;">H2387</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:88px;">IVIS</td>
			<td style="width:88px;">Caliper</td>
			<td style="width:156px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="52">
			<td height="52" style="height:52px;width:88px;">D-Luciferin, Potassium Salt</td>
			<td style="width:88px;">GoldBio</td>
			<td style="width:156px;">LUCK-1G</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:88px;">India Ink</td>
			<td style="width:88px;">Chartpak Inc</td>
			<td style="width:156px;">44201</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:88px;">Scissors</td>
			<td style="width:88px;"></td>
			<td style="width:156px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:88px;">Forceps</td>
			<td style="width:88px;"></td>
			<td style="width:156px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="69">
			<td height="69" style="height:69px;width:88px;">Sleeping Beauty (SB) transposon system</td>
			<td style="width:88px;">Neuromics</td>
			<td style="width:156px;">SBT0200</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:88px;">Renca</td>
			<td style="width:88px;">ATCC</td>
			<td style="width:156px;">CRL-2947</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

a syngeneic mouse model of metastatic renal cell carcinoma for quantitative and longitudinal assessment of preclinical therapies

Почечно-клеточный рак (ПКР) влияет на&gt; 60000 человек в Соединенных Штатах ежегодно, и ~ 30% больных ПКР имеют множественные метастазы на момент постановки диагноза. Метастатического ПКР (МСКЦ) неизлечим, медиана выживаемости всего 18 месяцев. Иммунные на основе вмешательства (например, интерферон (IFN) и интерлейкин (ИЛ) -2) вызывают длительные реакции у части пациентов MRCC и мультикиназный ингибиторы (например, сунитиниба или сорафениб) или анти-VEGF - рецептор моноклональные антитела (MAB) являются в значительной степени паллиативный, а полные ремиссии редки. Такие недостатки в современной терапии для пациентов MRCC обеспечивают обоснование для разработки новых протоколов лечения. Ключевой компонент в доклинических испытаниях новых методов лечения MRCC является подходящей моделью для животных. Полезные функции, которые перепросматривать человеческое состояние включают первичную опухоль почек, почечный метастаз опухолей, а также интактную иммунную систему, чтобы исследовать любую терапию управляемого иммунные эффекторнымг реакция и образование опухоли, вызванные иммуносупрессивных факторов. Этот отчет описывает ортотопическую мышиную модель MRCC, которая имеет все эти функции. Опишем внутрипочечный технику имплантации с помощью мыши почечной аденокарциномы клеточной линии Ренка, а затем оценки роста опухоли в почках (основной сайт) и легких (метастатическим сайт).

<html> Успешной имплантации клеток Ренка приведет к развитию опухоли в почке и метастазы в легких мышей. После иссечения опухоли подшипнике и контралатеральной почки, вес сырой ткани (г) были измерены для демонстрации опухолевой нагрузки , основанную на увеличении веса <s...

Watch this Scientific Journal Video about A Syngeneic Mouse Model of Metastatic Renal Cell Carcinoma for Quantitative and Longitudinal Assessment of Preclinical Therapies at JoVE.com

A Syngeneic Mouse Model of Metastatic Renal Cell Carcinoma for Quantitative and Longitudinal Assessment of Preclinical Therapies

Осуществление ортотопической модели почечно-клеточной карциномы в иммунокомпетентных мышах дает следователю клинически-соответствующую систему, определяемую наличием первичной опухоли почки и метастазов в легких в том же животном. Эта система может быть использована для доклинического тестирования различных методов лечения в естественных условиях.

Ячейка Карцинома Сингенной Мышь Модели метастатического Почечной для количественных и Продольных оценок доклинических Терапии

Renal cell carcinoma (RCC) affects &#62; 60,000 people in the United States annually, and ~ 30% of RCC patients have multiple metastases at the time of ...

The overall goal of this procedure is to establish mouse orthotopic renal tumors through the intrarenal implantation of tumor cell for the study of tumor growth and metastasis and the efficacy of anti-tumor therapies. This method can be used to answer key questions in the urologic oncology field such as how effective is a novel therapy in a pre-clinical model of kidney cancer. The main advantage of this technique is that intrarenal tumor implantation establishes a primary lung metastasizing renal tumor mimicking clinical renal cell carcinoma pathogenesis.To prepare the Renca tumor cells first detach the cell culture with 0.25%Trypsin and HBSS after rinsing with PBS. Neutralize the reaction after five minutes with Complete RPMI Medium. Transfer the cells to a conical tube for centrifugation and re-suspend the pellet in fresh HBSS.After counting, adjust the volume to a two times ten to the six cells per milliliter concentration in HBSS, and draw the cells into a one milliliter syringe equipped with an 18 gauge needle. Next, place a sterile surgical drape over a heating pad and confirm the appropriate level of sedation by toe pinch. Remove the hair from the left flank of the mouse and apply vet ointment to the eyes.Then swab the implantation site with 5%povidone iodine antiseptic and use a sterile scalpel to make a single one to one and a half centimeter incision on the left flank, taking care not to penetrate the peritoneum. Using scissors, separate the dermis from the peritoneum, dabbing the incision site with sterile cotton gauze to remove any blood. Then grasp the head with the left hand and support the flank with the right hand to locate the spleen through the peritoneum.Using one finger from the right hand, palpate the mouse from underneath. The kidney should become visible. Keeping a firm hold on the animal to provide tension across the peritoneum and kidney, have an assistant slowly deliver 0.1 milliliters of the Renca cells through the intact peritoneum into the center of the kidney.Hold the needle in place for five to 10 seconds to reduce the backflow of the cells. Then, close the incision with a thin layer of cyanoacrylate tissue adhesive. At the experimental end point, use scissors to make a midline incision, starting at the mid-abdomen through the ribcage, neck, and salivary glands.Using scissors and forceps, carefully remove the ribs without compromising the lung tissue, and remove the connective tissue to expose the trachea. Fill a three milliliter syringe equipped with an 18 gauge needle with 10%India Ink and PBS. Then use forceps to carefully thread a silk suture under the trachea and then tie a loose knot.Next, carefully insert the needle into the trachea and slowly inflate the lungs with one to one and a half milliliters of the India Ink solution. Pull the knot tight around the trachea to inhibit the backflow of the ink, then remove the needle and carefully cut away the connective tissue to remove the inflated lungs. Fix the lungs in a 15 milliliter conical tube containing five milliliter of Fekete's solution in a chemical fume hood at room temperature.After 24 to 48 hours, remove the intact de-stained lungs and carefully pull apart the lobes in a 35 by 10 millimeter petri dish. Then count the number of white tumor nodules under a dissecting microscope. A successful mouse intrarenal Renca cell implantation results in tumor development in the kidney and metastasis to the lungs with tumor-bearing animals demonstrating a robust tumor burden as measured by the increased weight of the tumor-implanted kidneys.As observed, Renca tumors can be identified by immunohistochemical staining for Cytokeratin eight and 18. The implantation of a luciferase expressing Renca cell line allows tracking of the tumor burden in the kidney and metastasis to the lung by bioluminescent imaging as further confirmed by india link lung inflation. Once mastered, this technique can be completed in less than five minutes per mouse if performed properly.While attempting this procedure it's important to remember to clearly identify the kidney through the peritoneum to ensure an accurate intrarenal tumor implantation. Following this procedure, other methods, like preclinical drug testing can be performed to answer additional questions, such as to what extent does novel drug effect the growth or metastasis of intrarenal tumors? After watching this video, you should have a good understanding of how to perform intrarenal tumor cell implantation for establishing orthotopic kidney tumors in the mouse.Don't forget that working with live animals and surgical instruments can be hazardous and that precautions, such as following institutional animal handling guidelines and maintaining a sterile surgical area and instruments should always be taken while performing this procedure.

Research

JoVE Journal

Cancer Research

Development and Maintenance of a Preclinical Patient Derived Tumor Xenograft Model for the Investigation of Novel Anti-Cancer Therapies

Разработка и ведение доклинической пациента Derived Опухоль модели ксенотрансплантата для исследования принципиально новых видов лечения рака

Patient derived tumor xenograft (PDTX) models provide a necessary platform in facilitating anti-cancer drug development prior to human trials. Human tumor ...

Surgical Procedures and Methodology for a Preclinical Murine Model of De Novo Mammary Cancer Metastasis

Surgical Procedures and Methodology for a Preclinical Murine Model of De Novo Mammary Cancer Metastasis

Хирургические процедуры и методология для модели доклинической мужи<em&gt; Де Ново</em&gt; Метастазы рака молочной железы

A rate-limiting aspect of transgenic mouse models of mammary adenocarcinoma is that primary tumor burden in mammary tissue typically defines study ...

The Colon-26 Carcinoma Tumor-bearing Mouse as a Model for the Study of Cancer Cachexia

Colon-26 РАК-ОПУХОЛЕНОСИТЕЛЕЙ мышь в качестве модели для изучения рака кахексия

Cancer cachexia is the progressive loss of skeletal muscle mass and adipose tissue, negative nitrogen balance, anorexia, fatigue, inflammation, and ...

A Model for Perineural Invasion in Head and Neck Squamous Cell Carcinoma

Модель для периневральная инвазия в области головы и шеи карцинома роговых клеток

Perineural invasion (PNI) is found in approximately 40% of head and neck squamous cell carcinomas (HNSCC). Despite multimodal treatment with surgery, ...

Therapy Testing in a Spheroid-based 3D Cell Culture Model for Head and Neck Squamous Cell Carcinoma

Терапия, тестирование в модели культуры на основе сфероида 3D клеток для головы и шеи плоскоклеточный рак

Current treatment options for advanced and recurrent head and neck squamous cell carcinoma (HNSCC) enclose radiation and chemo-radiation approaches with ...

A Syngeneic Pancreatic Cancer Mouse Model to Study the Effects of Irreversible Electroporation

Модель мышь сингенных рака поджелудочной железы для изучения последствий необратимой электропорации

Pancreatic cancer (PC), a disease which kills approximately 40,000 patients each year in the US, has successfully evaded several therapeutic approaches ...

A Bioluminescent and Fluorescent Orthotopic Syngeneic Murine Model of Androgen-dependent and Castration-resistant Prostate Cancer

Биолюминесцентных и флуоресцентный ортотопическая сингенных мышиных модель андроген зависимых и кастрация стойкие рака простаты

Orthotopic tumor modeling is a valuable tool for pre-clinical prostate cancer research, as it has multiple advantages over both subcutaneous and ...

A Syngeneic Mouse B-Cell Lymphoma Model for Pre-Clinical Evaluation of CD19 CAR T Cells

Мышь сингенных B-клеточной лимфомы модель для предварительно клинической оценки CD19 автомобилей Т-клеток

The astonishing clinical success of CD19 chimeric antigen receptor (CAR) T-cell therapy has led to the approval of two second generation chimeric antigen ...

Intramucosal Inoculation of Squamous Cell Carcinoma Cells in Mice for Tumor Immune Profiling and Treatment Response Assessment

Intramucosal прививки плоскоклеточный рак клеток мышей для опухоли иммунной профилирования и оценки реакции лечение

Head and neck squamous cell carcinoma (HNSCC) is a debilitating and deadly disease with a high prevalence of recurrence and treatment failure. To develop ...

Micromanipulation of Circulating Tumor Cells for Downstream Molecular Analysis and Metastatic Potential Assessment

Микроманипуляции циркулирующей опухолевой клетки для молекулярного анализа вниз по течению и метастатического потенциального оценивания

Blood-borne metastasis accounts for&#160;most cancer-related deaths and involves circulating tumor cells (CTCs) that are successful in establishing new ...