Name: in utero electroporation approaches to study the excitability of neuronal subpopulations and single-cell connectivity
Uploaded: 2017-02-15T13:00:00
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私たちは、その優れた技術支援のためと編集のためのLAヴァイスにR.・グティエレスとA.モラレスに感謝しています。 CGBはスペインMINISTERIOデCiencia電子Innovación（MICINN）、FPI-BES-2012から056011によって資金を供給されています。この作品はM.ナバレテにBBVA財団とSAF2014-58598-JIN（MINECO）からの助成金によっておよびラモンAreces財団と助成金SAF2014-52119-Rおよび（MINECOから）BFU2014-55738-REDTへの助成金によって賄われていましたM.ニエト。

全ての動物手順は、（PROEX 14分の118; PROEX 15分の331）国内および欧州の法律を遵守して、マドリード動物実験委員会のコミュニティに承認されました。手順中に無菌状態を維持します。 1. 子宮内エレクトロポレーション注：IUEためのこのプロトコルは、以前5、6、7を公表され?...

<ol>
	<li>Dehorter, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tuning+of+fast-spiking+interneuron+properties+by+an+activity-dependent+transcriptional+switch.">Tuning of fast-spiking interneuron properties by an activity-dependent transcriptional switch.</a> Science. 349 (6253), 1216-1220 (2015).</li><li>Rodriguez-Tornos, F. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cux1+Enables+Interhemispheric+Connections+of+Layer+II/III+Neurons+by+Regulating+Kv1-Dependent+Firing.">Cux1 Enables Interhemispheric Connections of Layer II/III Neurons by Regulating Kv1-Dependent Firing.</a> Neuron. 89 (3), 494-506 (2016).</li><li>Matsui, A., Yoshida, A. C., Kubota, M., Ogawa, M., Shimogori, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mouse+in+utero+electroporation:+controlled+spatiotemporal+gene+transfection.">Mouse in utero electroporation: controlled spatiotemporal gene transfection.</a> J Vis Exp. (54), (2011).</li><li>Sonego, M., Zhou, Y., Oudin, M. J., Doherty, P., Lalli, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+vivo+postnatal+electroporation+and+time-lapse+imaging+of+neuroblast+migration+in+mouse+acute+brain+slices.">In vivo postnatal electroporation and time-lapse imaging of neuroblast migration in mouse acute brain slices.</a> J Vis Exp. (81), (2013).</li><li>Baumgart, J., Baumgart, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cortex-,+Hippocampus-,+Thalamus-,+Hypothalamus-,Lateral+Septal+Nucleus-+and+Striatum-specific+In+Utero+Electroporation+in+the+C57BL/6+Mouse.">Cortex-, Hippocampus-, Thalamus-, Hypothalamus-,Lateral Septal Nucleus- and Striatum-specific In Utero Electroporation in the C57BL/6 Mouse.</a> J Vis Exp. (107), (2016).</li><li>Petros, T. J., Rebsam, A., Mason, C. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+utero+and+ex+vivo+electroporation+for+gene+expression+in+mouse+retinal+ganglion+cells.">In utero and ex vivo electroporation for gene expression in mouse retinal ganglion cells.</a> J Vis Exp. (31), (2009).</li><li>Rice, H., Suth, S., Cavanaugh, W., Bai, J., Young-Pearse, T. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+utero+electroporation+followed+by+primary+neuronal+culture+for+studying+gene+function+in+subset+of+cortical+neurons.">In utero electroporation followed by primary neuronal culture for studying gene function in subset of cortical neurons.</a> J Vis Exp. (44), (2010).</li><li>Woodworth, M. B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ctip1+Regulates+the+Balance+between+Specification+of+Distinct+Projection+Neuron+Subtypes+in+Deep+Cortical+Layers.">Ctip1 Regulates the Balance between Specification of Distinct Projection Neuron Subtypes in Deep Cortical Layers.</a> Cell Rep. 15 (5), 999-1012 (2016).</li><li>Wickersham, I. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Monosynaptic+restriction+of+transsynaptic+tracing+from+single,+genetically+targeted+neurons.">Monosynaptic restriction of transsynaptic tracing from single, genetically targeted neurons.</a> Neuron. 53 (5), 639-647 (2007).</li><li>Matsuda, T., Cepko, C. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Controlled+expression+of+transgenes+introduced+by+in+vivo+electroporation.">Controlled expression of transgenes introduced by in vivo electroporation.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 104 (3), 1027-1032 (2007).</li><li>Matsuda, T., Cepko, C. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Electroporation+and+RNA+interference+in+the+rodent+retina+in+vivo+and+in+vitro.">Electroporation and RNA interference in the rodent retina in vivo and in vitro.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 101 (1), 16-22 (2004).</li><li>Saito, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+vivo+electroporation+in+the+embryonic+mouse+central+nervous+system.">In vivo electroporation in the embryonic mouse central nervous system.</a> Nat Protoc. 1 (3), 1552-1558 (2006).</li><li>Bullmann, T., Arendt, T., Frey, U., Hanashima, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+transportable,+inexpensive+electroporator+for+in+utero+electroporation.">A transportable, inexpensive electroporator for in utero electroporation.</a> Dev Growth Differ. , (2015).</li><li>Miller, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Maturation+of+rat+visual+cortex.+I.+A+quantitative+study+of+Golgi-impregnated+pyramidal+neurons.">Maturation of rat visual cortex. I. A quantitative study of Golgi-impregnated pyramidal neurons.</a> J Neurocytol. 10 (5), 859-878 (1981).</li><li>Miller, M., Peters, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Maturation+of+rat+visual+cortex.+II.+A+combined+Golgi-electron+microscope+study+of+pyramidal+neurons.">Maturation of rat visual cortex. II. A combined Golgi-electron microscope study of pyramidal neurons.</a> J Comp Neurol. 203 (4), 555-573 (1981).</li><li>Cubelos, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cux-2+controls+the+proliferation+of+neuronal+intermediate+precursors+of+the+cortical+subventricular+zone.">Cux-2 controls the proliferation of neuronal intermediate precursors of the cortical subventricular zone.</a> Cereb Cortex. 18 (8), 1758-1770 (2008).</li><li>Kang, J. Y., Kawaguchi, D., Wang, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Optical+Control+of+a+Neuronal+Protein+Using+a+Genetically+Encoded+Unnatural+Amino+Acid+in+Neurons.">Optical Control of a Neuronal Protein Using a Genetically Encoded Unnatural Amino Acid in Neurons.</a> J Vis Exp. (109), (2016).</li><li>Mathis, D. M., Furman, J. L., Norris, C. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Preparation+of+acute+hippocampal+slices+from+rats+and+transgenic+mice+for+the+study+of+synaptic+alterations+during+aging+and+amyloid+pathology.">Preparation of acute hippocampal slices from rats and transgenic mice for the study of synaptic alterations during aging and amyloid pathology.</a> J Vis Exp. (49), (2011).</li><li>Maravall, M., Stern, E. A., Svoboda, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Development+of+intrinsic+properties+and+excitability+of+layer+2/3+pyramidal+neurons+during+a+critical+period+for+sensory+maps+in+rat+barrel+cortex.">Development of intrinsic properties and excitability of layer 2/3 pyramidal neurons during a critical period for sensory maps in rat barrel cortex.</a> J Neurophysiol. 92 (1), 144-156 (2004).</li><li>Karadottir, R., Attwell, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Combining+patch-clamping+of+cells+in+brain+slices+with+immunocytochemical+labeling+to+define+cell+type+and+developmental+stage.">Combining patch-clamping of cells in brain slices with immunocytochemical labeling to define cell type and developmental stage.</a> Nat Protoc. 1 (4), 1977-1986 (2006).</li><li>Sakmann, B., Neher, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Patch+clamp+techniques+for+studying+ionic+channels+in+excitable+membranes.">Patch clamp techniques for studying ionic channels in excitable membranes.</a> Annu Rev Physiol. 46, 455-472 (1984).</li><li>Saito, T., Nakatsuji, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Efficient+gene+transfer+into+the+embryonic+mouse+brain+using+in+vivo+electroporation.">Efficient gene transfer into the embryonic mouse brain using in vivo electroporation.</a> Dev Biol. 240 (1), 237-246 (2001).</li></ol>

このプロトコルは、それらの接続とその興奮性を分析するために、C75BL / 6マウスの体性感覚皮質の神経細胞を標識する方法を詳細に説明しています。既存の方法に関しては、そのようなニューロンあたり軸索分岐の数、それらの正確な地形、およびそれらの解剖学的部位として、接続の識別側面を可視化します。電極の位置を変化させることにより、このような帯状皮質（電極と脳との間の?...

樹状突起と軸索構造の開発が大脳皮質を含め、神経系における回路調節の重要な側面です。これは、多様な神経細胞亜集団の選択的な配線の間に重要な役割を果たしています。最近の報告数は、接続に加えて、神経細胞の分子多様性は、焼成の非常に特異的な様式の買収により反射され、ことが示されています。しかし、開発中に明確なニューロンのサブタイプの興奮性と接続性を決定するメカニズムだけでなく、コーディネートの程度は、まだよく、2は 1を理解されています。 生体内 loss-がと機能獲得型に特異的な遺伝子および回路の開発における彼らの影響力の発現レベルとの間の関係の研究を可能に分析します。 子宮内エレクトロポレーションでは （IUE）が広く研究するために使用される技術であり、それらの接続の全体的なパターンを研究するための特定のニューロン集団における目的の遺伝子の機能と。しかし、生きたマウスでは皮質層における軸索と樹状突起の形態学的特性を決定するために、まばらニューロンを標識することが不可欠です。 IUEと組み合わせたCre組換えシステムは、識別された皮質の薄層の個々の細胞によって放出された突起を解決するために、十分に低い密度でニューロンのまばらな集団をマークするために使用することができます。この方法は、電気穿孔脳（ 図1）の合理的な数の分析の後に定量的データを得るために、皮質ニューロン当たりの十分な数のラベル。この原稿は、接続のような微細な分析のための方法を提示しています。また別の実験において、分析するために同様の戦略を提示し、緑色蛍光タンパク質（GFP）の電流 - クランプ記録を行うことにより、ニューロンの電気的特性は、急性皮質切片から細胞を-electroporated。これらのプロトコールは汎用性がありますし、WTおよびトランスジェニック動物のニューロンの、また機能の損失と利益がIUE中に追加のプラスミドによって導入された神経細胞の興奮性と接続性の研究にも適用することができます。 このプロトコルは、胎生日（E）15.5におけるマウスのエレクトロポレーションについて説明したが、この技術は、E9.5 3及び生後（P）2~4の間の任意の年齢で行うことができます。初期段階でのエレクトロポレーションは、ニューロンおよび視床の前駆体および皮質の深層、後段のエレクトロポレーションマークより表面層（ 例えば、E15.5 IUEターゲット層II-IIIニューロン）を標的ながら。要約すると、単一細胞形態学的分析と電気生理学とIUEの組み合わせは、神経系のニューロンの巨大な構造的および機能的多様性の根底にある分子メカニズムを解明するための有用なツールです。

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>pCAG-Cre</td>
			<td>Addgene</td>
			<td>13775</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>pCALNL-GFP</td>
			<td>Addgene</td>
			<td>13770</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>pCAG-DsRed2</td>
			<td>Addgene</td>
			<td>15777</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>pCAG-GFP</td>
			<td>Addgene</td>
			<td>11150</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fast Green</td>
			<td>Carl Roth</td>
			<td>301.1</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>EndoFree Plasmid Maxi Kit</td>
			<td>QIAGEN</td>
			<td>12362</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Carprofen (Rimadyl)</td>
			<td>Pfizer GmbH</td>
			<td>1615 ESP</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Isoflurane (IsoFlo)</td>
			<td>Abbott (Esteve)</td>
			<td>1385 ESP</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ketamine (Imalgene)</td>
			<td>Merial</td>
			<td>2528-ESP</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Xylazine (Xilagesic)</td>
			<td>Calier</td>
			<td>0682-ESP</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Povidone Iodine</td>
			<td>Meda</td>
			<td>694109.6</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Eye Ointment (Lipolac)</td>
			<td>Angelini</td>
			<td>65.277</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hanks&#39; Balanced Salt Solution (HBSS)</td>
			<td>Gibco by Life Technologies</td>
			<td>24020-091</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Penicillin-Streptomycin</td>
			<td>Sigma -Aldrich</td>
			<td>P4333</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Scalpel Handle #3 - 12cm</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>10003-12</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Scalpel Blades #10</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>10010-00</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Adson Forceps-Serrated - Straight 12 cm</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>1106-12</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hardened Fine Scissors - Straight &#160; 11 cm</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>14090-11</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Scissors Mezenbaum-Nelson Curved L=14,5cm</td>
			<td>Teleflex</td>
			<td>PO143281</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Thin curved tips - Style 7 Dumoxel</td>
			<td>Dumont</td>
			<td>0303-7-PO</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dumont #5 Forceps-Inox</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>11251-20</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Mathieu Needle Holder - Serrated</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>12010-14</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>AutoClip Applier</td>
			<td>Braintree scientific, Inc</td>
			<td>ACS&#160;APL</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>9mm AutoClips</td>
			<td>MikRon Precision, Inc.</td>
			<td>205016</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sutures - Polysorb 6-0</td>
			<td>Covidien</td>
			<td>UL-101</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Electric Razor&#160;</td>
			<td>Panasonic</td>
			<td>ER 240</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Borosilicate glass capillaries (100mm, 1.0/0.58 Outer/Inner diameter)</td>
			<td>Wold Precision Instrument Inc.</td>
			<td>1B100F-4</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Aspirator tube assemblies for calibrated microcapillary pipettes</td>
			<td>Sigma -Aldrich</td>
			<td>A5177-5EA</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Gauze (Aposan)</td>
			<td>Laboratorios Indas, S.A.U.</td>
			<td>C.N. 482232.8</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cotton Swabs (Star Cott)</td>
			<td>Albasa</td>
			<td>-</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Needle 25G (BD Microlance 3)</td>
			<td>Becton, Dickinson and Company</td>
			<td>300600</td>
		</tr>
		<tr>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sucrose</td>
			<td>Sigma -Aldrich</td>
			<td>S0389</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Paraformaldehyde</td>
			<td>Sigma -Aldrich</td>
			<td>158127</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>OCT Compound</td>
			<td>Sakura</td>
			<td>4583</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tissue Culture Dish 100 x 20 mm</td>
			<td>Falcon</td>
			<td>353003</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>GFP Tag Polyclonal Antibody</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>A-11122</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Secondary Antibody, Alexa Fluor 488 conjugate</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>A-11008</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DAPI</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>D9542&#160;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fetal Bovine Serum</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>10270106&#160;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Triton X-100</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>X100-500ML</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Electroporator ECM 830&#160;</td>
			<td>BTX Harvard Apparatus</td>
			<td>45-0002</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Platinum electrodes 650P 7 mm</td>
			<td>Nepagene</td>
			<td>CUY650P7</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microscope&#160;for Fluorescent Imaging - MZ10F</td>
			<td>Leica</td>
			<td>-</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>VIP 3000 Isofluorane Vaporizer</td>
			<td>Matrx</td>
			<td>-</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>TCS-SP5 Laser Scanning System</td>
			<td>Leica</td>
			<td>-</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Axiovert 200 Microscope</td>
			<td>Zeiss</td>
			<td>-</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cryostat - CM 1950</td>
			<td>Leica</td>
			<td>-</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>P-97 Micropette Puller</td>
			<td>Sutter Instrument Company</td>
			<td>P-97</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Patch clamp analysis softwarw (p-Clamp Clampfit 10.3)</td>
			<td>Molecular Devices</td>
			<td>-</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Acquisition software (MultiClamp 700B Amplifier)</td>
			<td>Molecular Devices</td>
			<td>DD1440A</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Motorized Micromanipulator + Rotating Base&#160;</td>
			<td>Sutter Instrument</td>
			<td>MP-225</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Air Table</td>
			<td>Newport</td>
			<td>-</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Miniature Peristaltic Pumps</td>
			<td>WPI</td>
			<td>-</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

in utero electroporation approaches to study the excitability of neuronal subpopulations and single-cell connectivity

神経系は、異なる神経細胞の種類の巨大な範囲で構成されています。これらのニューロンの亜集団は、軸索の接続の他の特徴、それらの異なる樹枝状の形態、それらの特定のパターン、およびそれらの選択的な焼成反応の間、ことを特徴とします。開発中の分化のこれらの側面を担当する分子・細胞メカニズムはまだよく理解されていません。 ここでは、標識に結合されたプロトコルを記述し、皮質ニューロンの構造的な接続性と興奮性を特徴づけます。 子宮内エレクトロポレーション（IUE）プロトコルの変更は、ニューロンのまばらな人口の標識化を可能にします。これは、順番に、個々のニューロンの樹状突起と軸索の識別と追跡、正確な軸索突起の層状場所の特性評価、および形態計測分析を可能にします。 IUEはまた、興奮性の変化を調べるために使用することができ野生型（WT）またはエレクトロポレーションの脳の急性スライスからホールセル記録とそれを組み合わせることにより、遺伝的に改変された神経細胞。これら2つの技術が構造的および機能的接続性の及び開発中に神経細胞の多様性を制御する分子機構のカップリングのより良い理解に貢献しています。これらの発生プロセスは、軸索の配線、ニューロンの機能的多様性、および認知障害の生物学上重要な意味を持ちます。

詳細にと開発を通じて神経細胞の形態学的変化を特徴づけるために、まばらニューロンを標識することが不可欠です。この酵素を取り入れるだけのニューロンがGFP（ 図1A）を発現するようのCreリコンビナーゼ希釈システムは、神経細胞のまばらな集団において、目的の遺伝子の発現を可能にします。この戦略を使用して、層II-IIIが標的とE15.5でIUEによって...

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In Utero Electroporation Approaches to Study the Excitability of Neuronal Subpopulations and Single-cell Connectivity

この原稿は、単一細胞レベルおよび蛍光標識された神経細胞の興奮で、ニューロンの構造的接続性を記述するために子宮内エレクトロポレーション（IUE） で使用するプロトコルを提供します。組織学は、樹状突起および軸索突起を特徴付けるために使用されます。急性スライスにおける全細胞記録は、興奮性を調査するために使用されます。

子宮内エレクトロポレーションは、神経部分集団の興奮とシングルセルの接続を研究するためのアプローチ

The nervous system is composed of an enormous range of distinct neuronal types. These neuronal subpopulations are characterized by, among other features, ...

Research

JoVE Journal

Neuroscience

In Utero Electroporation Approaches to Study the Excitability of Neuronal Subpopulations and Single-cell Connectivity

In utero Electroporation followed by Primary Neuronal Culture for Studying Gene Function in Subset of Cortical Neurons

In utero Electroporation followed by Primary Neuronal Culture for Studying Gene Function in Subset of Cortical Neurons

子宮内エレクトロポレーションは、皮質ニューロンのサブセットで、遺伝子機能の研究のために初代神経培養した

In vitro study of primary neuronal cultures allows for quantitative analyses of neurite outgrowth. In order to study how genetic alterations affect ...

Mouse in Utero Electroporation: Controlled Spatiotemporal Gene Transfection

Mouse in Utero Electroporation: Controlled Spatiotemporal Gene Transfection

マウス子宮内でエレクトロポレーション：制御時空間遺伝子導入

In order to understand the function of genes expressed in specific region of the developing brain, including signaling molecules and axon guidance ...

Methods for Study of Neuronal Morphogenesis: Ex vivo RNAi Electroporation in Embryonic Murine Cerebral Cortex

Methods for Study of Neuronal Morphogenesis: Ex vivo RNAi Electroporation in Embryonic Murine Cerebral Cortex

神経形態形成の研究のための方法：<em&gt;エキソビボ</em胎児マウス大脳皮質&gt; RNAiのエレクトロポレーション

The cerebral cortex directs higher cognitive functions. This six layered structure is generated in an inside-first, outside-last manner, in which the ...

Visualization and Genetic Manipulation of Dendrites and Spines in the Mouse Cerebral Cortex and Hippocampus using In utero Electroporation

Visualization and Genetic Manipulation of Dendrites and Spines in the Mouse Cerebral Cortex and Hippocampus using In utero Electroporation

使用して、マウス大脳皮質および海馬における可視化と樹状突起と棘の遺伝子操作<em&gt;子宮内で</em&gt;エレクトロポレーション

In utero electroporation (IUE) has become a powerful technique to study the development of different regions of the embryonic nervous system 1-5. To date ...

Generation of Topically Transgenic Rats by In utero Electroporation and In vivo Bioluminescence Screening

Generation of Topically Transgenic Rats by In utero Electroporation and In vivo Bioluminescence Screening

局所トランスジェニックラットの発生により<em&gt;子宮内</em&gt;エレクトロポレーションおよび<em&gt;インビボ</em&gt;生物発光スクリーニング

 In utero electroporation (IUE) is a technique which allows genetic modification of cells in the brain for investigating neuronal development. So far, the ...

Genetic Manipulation of the Mouse Developing Hypothalamus through In utero Electroporation

Genetic Manipulation of the Mouse Developing Hypothalamus through In utero Electroporation

マウスの遺伝子操作は、視床下部を介して開発<em&gt;子宮内</em&gt;エレクトロポレーション

Genetic  modification of specific regions of the developing mammalian brain is a very  powerful experimental approach. However, generating novel mouse ...

Fast Micro-iontophoresis of Glutamate and GABA: A Useful Tool to Investigate Synaptic Integration

グルタミン酸とGABAの高速マイクロイオン導入：シナプス統合を調査するために便利なツール

One of the fundamental interests in neuroscience is to understand the integration of excitatory and inhibitory inputs along the very complex structure of ...

Genetic Manipulation of Cerebellar Granule Neurons In Vitro and In Vivo to Study Neuronal Morphology and Migration

Genetic Manipulation of Cerebellar Granule Neurons In Vitro and In Vivo to Study Neuronal Morphology and Migration

小脳顆粒ニューロンの遺伝子操作<em&gt;体外</em&gt;と<em&gt;インビボ</em&gt;ニューロンの形態と移行を研究するために、

Developmental events in the brain including neuronal morphogenesis and migration are highly orchestrated processes. In vitro and in vivo analyses allow ...

Preparation of Neuronal Co-cultures with Single Cell Precision

単セルの精度で神経共培養の調製

Microfluidic embodiments of the Campenot chamber have attracted great interest from the neuroscience community. These interconnected co-culture platforms ...

Induction of an Isoelectric Brain State to Investigate the Impact of Endogenous Synaptic Activity on Neuronal Excitability In Vivo

Induction of an Isoelectric Brain State to Investigate the Impact of Endogenous Synaptic Activity on Neuronal Excitability In Vivo

等電点電気泳動脳の状態の誘導は、神経細胞の興奮に内因性シナプス活性の影響を調査するために、<em&gt;インビボ</em

The way neurons process information depends both on their intrinsic membrane properties and on the dynamics of the afferent synaptic network. In ...