Name: in utero electroporation approaches to study the excitability of neuronal subpopulations and single-cell connectivity
Uploaded: 2017-02-15T13:00:00
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우리는 그들의 우수한 기술 지원 및 편집을위한 LA 바이스에 R. 구티에레스와 A. 모랄레스에 감사하고 있습니다. CGB는 스페인 Ministerio 드 Ciencia 전자 Innovación (MICINN), FPI-BES-2012-056011에 의해 투자된다. 이 작품은 M. Navarrete은에 BBVA 재단과 SAF2014-58598-JIN (MINECO)에서 연구비와 라몬 Areces 재단과 보조금 SAF2014-52119-R과 (MINECO에서) BFU2014-55738 - REDT에에서 보조금에 의해 투자되었다 M. 니에 토.

모든 동물의 절차는 국가 및 유럽 법률을 준수 마드리드 동물 관리 및 사용위원회의 지역 사회에 의해 승인되었다 (PROEX의 14분의 118; PROEX 15분의 331 참조). 절차 동안 멸균 상태를 유지한다. 1.에서 자궁 Electroporation에 참고 : IUE에 대한이 프로토콜은 이전에 5, 6, 7 게시 된 다른 사?...

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	<li>Dehorter, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tuning+of+fast-spiking+interneuron+properties+by+an+activity-dependent+transcriptional+switch.">Tuning of fast-spiking interneuron properties by an activity-dependent transcriptional switch.</a> Science. 349 (6253), 1216-1220 (2015).</li><li>Rodriguez-Tornos, F. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cux1+Enables+Interhemispheric+Connections+of+Layer+II/III+Neurons+by+Regulating+Kv1-Dependent+Firing.">Cux1 Enables Interhemispheric Connections of Layer II/III Neurons by Regulating Kv1-Dependent Firing.</a> Neuron. 89 (3), 494-506 (2016).</li><li>Matsui, A., Yoshida, A. C., Kubota, M., Ogawa, M., Shimogori, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mouse+in+utero+electroporation:+controlled+spatiotemporal+gene+transfection.">Mouse in utero electroporation: controlled spatiotemporal gene transfection.</a> J Vis Exp. (54), (2011).</li><li>Sonego, M., Zhou, Y., Oudin, M. J., Doherty, P., Lalli, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+vivo+postnatal+electroporation+and+time-lapse+imaging+of+neuroblast+migration+in+mouse+acute+brain+slices.">In vivo postnatal electroporation and time-lapse imaging of neuroblast migration in mouse acute brain slices.</a> J Vis Exp. (81), (2013).</li><li>Baumgart, J., Baumgart, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cortex-,+Hippocampus-,+Thalamus-,+Hypothalamus-,Lateral+Septal+Nucleus-+and+Striatum-specific+In+Utero+Electroporation+in+the+C57BL/6+Mouse.">Cortex-, Hippocampus-, Thalamus-, Hypothalamus-,Lateral Septal Nucleus- and Striatum-specific In Utero Electroporation in the C57BL/6 Mouse.</a> J Vis Exp. (107), (2016).</li><li>Petros, T. J., Rebsam, A., Mason, C. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+utero+and+ex+vivo+electroporation+for+gene+expression+in+mouse+retinal+ganglion+cells.">In utero and ex vivo electroporation for gene expression in mouse retinal ganglion cells.</a> J Vis Exp. (31), (2009).</li><li>Rice, H., Suth, S., Cavanaugh, W., Bai, J., Young-Pearse, T. 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R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Monosynaptic+restriction+of+transsynaptic+tracing+from+single,+genetically+targeted+neurons.">Monosynaptic restriction of transsynaptic tracing from single, genetically targeted neurons.</a> Neuron. 53 (5), 639-647 (2007).</li><li>Matsuda, T., Cepko, C. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Controlled+expression+of+transgenes+introduced+by+in+vivo+electroporation.">Controlled expression of transgenes introduced by in vivo electroporation.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 104 (3), 1027-1032 (2007).</li><li>Matsuda, T., Cepko, C. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Electroporation+and+RNA+interference+in+the+rodent+retina+in+vivo+and+in+vitro.">Electroporation and RNA interference in the rodent retina in vivo and in vitro.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 101 (1), 16-22 (2004).</li><li>Saito, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+vivo+electroporation+in+the+embryonic+mouse+central+nervous+system.">In vivo electroporation in the embryonic mouse central nervous system.</a> Nat Protoc. 1 (3), 1552-1558 (2006).</li><li>Bullmann, T., Arendt, T., Frey, U., Hanashima, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+transportable,+inexpensive+electroporator+for+in+utero+electroporation.">A transportable, inexpensive electroporator for in utero electroporation.</a> Dev Growth Differ. , (2015).</li><li>Miller, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Maturation+of+rat+visual+cortex.+I.+A+quantitative+study+of+Golgi-impregnated+pyramidal+neurons.">Maturation of rat visual cortex. I. A quantitative study of Golgi-impregnated pyramidal neurons.</a> J Neurocytol. 10 (5), 859-878 (1981).</li><li>Miller, M., Peters, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Maturation+of+rat+visual+cortex.+II.+A+combined+Golgi-electron+microscope+study+of+pyramidal+neurons.">Maturation of rat visual cortex. II. A combined Golgi-electron microscope study of pyramidal neurons.</a> J Comp Neurol. 203 (4), 555-573 (1981).</li><li>Cubelos, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cux-2+controls+the+proliferation+of+neuronal+intermediate+precursors+of+the+cortical+subventricular+zone.">Cux-2 controls the proliferation of neuronal intermediate precursors of the cortical subventricular zone.</a> Cereb Cortex. 18 (8), 1758-1770 (2008).</li><li>Kang, J. Y., Kawaguchi, D., Wang, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Optical+Control+of+a+Neuronal+Protein+Using+a+Genetically+Encoded+Unnatural+Amino+Acid+in+Neurons.">Optical Control of a Neuronal Protein Using a Genetically Encoded Unnatural Amino Acid in Neurons.</a> J Vis Exp. (109), (2016).</li><li>Mathis, D. M., Furman, J. L., Norris, C. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Preparation+of+acute+hippocampal+slices+from+rats+and+transgenic+mice+for+the+study+of+synaptic+alterations+during+aging+and+amyloid+pathology.">Preparation of acute hippocampal slices from rats and transgenic mice for the study of synaptic alterations during aging and amyloid pathology.</a> J Vis Exp. (49), (2011).</li><li>Maravall, M., Stern, E. A., Svoboda, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Development+of+intrinsic+properties+and+excitability+of+layer+2/3+pyramidal+neurons+during+a+critical+period+for+sensory+maps+in+rat+barrel+cortex.">Development of intrinsic properties and excitability of layer 2/3 pyramidal neurons during a critical period for sensory maps in rat barrel cortex.</a> J Neurophysiol. 92 (1), 144-156 (2004).</li><li>Karadottir, R., Attwell, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Combining+patch-clamping+of+cells+in+brain+slices+with+immunocytochemical+labeling+to+define+cell+type+and+developmental+stage.">Combining patch-clamping of cells in brain slices with immunocytochemical labeling to define cell type and developmental stage.</a> Nat Protoc. 1 (4), 1977-1986 (2006).</li><li>Sakmann, B., Neher, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Patch+clamp+techniques+for+studying+ionic+channels+in+excitable+membranes.">Patch clamp techniques for studying ionic channels in excitable membranes.</a> Annu Rev Physiol. 46, 455-472 (1984).</li><li>Saito, T., Nakatsuji, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Efficient+gene+transfer+into+the+embryonic+mouse+brain+using+in+vivo+electroporation.">Efficient gene transfer into the embryonic mouse brain using in vivo electroporation.</a> Dev Biol. 240 (1), 237-246 (2001).</li></ol>

이 프로토콜은 연결과 흥분을 분석하기 위해 C75BL / 6 마우스의 체성 감각 피질의 뉴런 레이블을하는 방법에 대해 자세히 설명합니다. 기존의 방법과 관련하여, 이러한 신경 세포 축삭 당 분기의 수, 정확한 지형 및 해부학 적 위치로 연결성 판별 측면을 가시화. 전극의 위치를 변경함으로써, 예에 cingulate 피질과 같은 다른 신경 세포 집단을 대상 (전극 뇌와 같은 각도를 유지하지만, 자극의 방향 변...

수지상 및 축삭 구조의 개발은 대뇌 피질에서 비롯한 신경계의 조절 회로의 중요한면이다. 또한 다양한 신경 세포 개체군의 선택 배선 동안 중요한 역할을한다. 최근 보고서 다수 연결 이외에 뉴런의 분자 다양성 소성 높은 특정 모드의 획득에 의해 반사되고, 그 보였다. 그러나, 개발 중에 별개 아형 신경의 흥분성 연결성 결정 메커니즘뿐만 아니라 배위 학위 여전히 잘못 2 1 이해된다. 생체 loss- 및 기능 획득하는 발현 유전자의 특정 레벨과 상기 회로의 개발에 대한 영향 사이의 관계에 대한 연구를 허용 분석한다. 자궁의 전기에서 (IUE)는 광범위하게 연구하는 데 사용하는 기술입니다특정 신경 인구에 대한 관심의 유전자의 기능과는 연결의 전체 패턴을 연구합니다. 그러나, 살아있는 생쥐의 대뇌 피질 층의 축삭과 수상 돌기의 형태 학적 특성을 결정하기 위해서는 띄엄 띄엄 뉴런 레이블을하는 것이 필수적이다. IUE와 결합 Cre 호텔 재조합 시스템은 식별 된 피질 박편의 개별 셀에 의해 방사 돌기를 해결하기 위해 충분히 낮은 밀도 뉴런 저밀도 인구를 표시하는데 사용될 수있다. 이 방법은 전기 천공 뇌 (도 1)의 적절한 수의 정량적 분석 후 데이터를 획득 피질 뉴런 당 충분한 수의 라벨. 이 원고는 연결의 미세 분석을위한 방법을 제시한다. 또한 별도의 실험에서, 분석과 유사한 전략을 제공, 녹색 형광 단백질 (GFP)에 전류 클램프 기록을 수행함으로써 신경 세포의 전기적 특성은 급성 대뇌 피질의 조각에서 세포 -electroporated. 이 프로tocols는 손실 함수의 게인이 IUE 동안 추가 플라스미드 도입 된 뉴런과 같은 다목적 및 WT 형질 전환 동물의 신경 세포의 흥분성 연결성 연구에 적용 할 수 있으며. 이 프로토콜은 배아 일 (E) 15.5에서 마우스의 전기를 설명하지만,이 기술은 E9.5 3 및 출생 후의 일 (P)이 4 사이의 나이에 수행 할 수 있습니다. 초기 단계에서 전기는 신경 세포와 시상의 전구체와 피질의 깊은 층, 이후 단계 전기 마크보다 표면 층 (예를 들어, E15.5 IUE 목표 층 II-III 뉴런)를 대상으로하지만. 요약하면, 단일 셀 형태 학적 분석과 함께 전기 생리학 IUE의 조합 신경계 뉴런의 엄청난 구조적 및 기능적 다양성의 기초가되는 분자 메카니즘을 해명하는 유용한 도구이다.

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	<tbody>
		<tr>
			<td>pCAG-Cre</td>
			<td>Addgene</td>
			<td>13775</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>pCALNL-GFP</td>
			<td>Addgene</td>
			<td>13770</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>pCAG-DsRed2</td>
			<td>Addgene</td>
			<td>15777</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>pCAG-GFP</td>
			<td>Addgene</td>
			<td>11150</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fast Green</td>
			<td>Carl Roth</td>
			<td>301.1</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>EndoFree Plasmid Maxi Kit</td>
			<td>QIAGEN</td>
			<td>12362</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Carprofen (Rimadyl)</td>
			<td>Pfizer GmbH</td>
			<td>1615 ESP</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Isoflurane (IsoFlo)</td>
			<td>Abbott (Esteve)</td>
			<td>1385 ESP</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ketamine (Imalgene)</td>
			<td>Merial</td>
			<td>2528-ESP</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Xylazine (Xilagesic)</td>
			<td>Calier</td>
			<td>0682-ESP</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Povidone Iodine</td>
			<td>Meda</td>
			<td>694109.6</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Eye Ointment (Lipolac)</td>
			<td>Angelini</td>
			<td>65.277</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hanks&#39; Balanced Salt Solution (HBSS)</td>
			<td>Gibco by Life Technologies</td>
			<td>24020-091</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Penicillin-Streptomycin</td>
			<td>Sigma -Aldrich</td>
			<td>P4333</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Scalpel Handle #3 - 12cm</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>10003-12</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Scalpel Blades #10</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>10010-00</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Adson Forceps-Serrated - Straight 12 cm</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>1106-12</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hardened Fine Scissors - Straight &#160; 11 cm</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>14090-11</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Scissors Mezenbaum-Nelson Curved L=14,5cm</td>
			<td>Teleflex</td>
			<td>PO143281</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Thin curved tips - Style 7 Dumoxel</td>
			<td>Dumont</td>
			<td>0303-7-PO</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dumont #5 Forceps-Inox</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>11251-20</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Mathieu Needle Holder - Serrated</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>12010-14</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>AutoClip Applier</td>
			<td>Braintree scientific, Inc</td>
			<td>ACS&#160;APL</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>9mm AutoClips</td>
			<td>MikRon Precision, Inc.</td>
			<td>205016</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sutures - Polysorb 6-0</td>
			<td>Covidien</td>
			<td>UL-101</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Electric Razor&#160;</td>
			<td>Panasonic</td>
			<td>ER 240</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Borosilicate glass capillaries (100mm, 1.0/0.58 Outer/Inner diameter)</td>
			<td>Wold Precision Instrument Inc.</td>
			<td>1B100F-4</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Aspirator tube assemblies for calibrated microcapillary pipettes</td>
			<td>Sigma -Aldrich</td>
			<td>A5177-5EA</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Gauze (Aposan)</td>
			<td>Laboratorios Indas, S.A.U.</td>
			<td>C.N. 482232.8</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cotton Swabs (Star Cott)</td>
			<td>Albasa</td>
			<td>-</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Needle 25G (BD Microlance 3)</td>
			<td>Becton, Dickinson and Company</td>
			<td>300600</td>
		</tr>
		<tr>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sucrose</td>
			<td>Sigma -Aldrich</td>
			<td>S0389</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Paraformaldehyde</td>
			<td>Sigma -Aldrich</td>
			<td>158127</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>OCT Compound</td>
			<td>Sakura</td>
			<td>4583</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tissue Culture Dish 100 x 20 mm</td>
			<td>Falcon</td>
			<td>353003</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>GFP Tag Polyclonal Antibody</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>A-11122</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Secondary Antibody, Alexa Fluor 488 conjugate</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>A-11008</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DAPI</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>D9542&#160;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fetal Bovine Serum</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>10270106&#160;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Triton X-100</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>X100-500ML</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Electroporator ECM 830&#160;</td>
			<td>BTX Harvard Apparatus</td>
			<td>45-0002</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Platinum electrodes 650P 7 mm</td>
			<td>Nepagene</td>
			<td>CUY650P7</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microscope&#160;for Fluorescent Imaging - MZ10F</td>
			<td>Leica</td>
			<td>-</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>VIP 3000 Isofluorane Vaporizer</td>
			<td>Matrx</td>
			<td>-</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>TCS-SP5 Laser Scanning System</td>
			<td>Leica</td>
			<td>-</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Axiovert 200 Microscope</td>
			<td>Zeiss</td>
			<td>-</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cryostat - CM 1950</td>
			<td>Leica</td>
			<td>-</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>P-97 Micropette Puller</td>
			<td>Sutter Instrument Company</td>
			<td>P-97</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Patch clamp analysis softwarw (p-Clamp Clampfit 10.3)</td>
			<td>Molecular Devices</td>
			<td>-</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Acquisition software (MultiClamp 700B Amplifier)</td>
			<td>Molecular Devices</td>
			<td>DD1440A</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Motorized Micromanipulator + Rotating Base&#160;</td>
			<td>Sutter Instrument</td>
			<td>MP-225</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Air Table</td>
			<td>Newport</td>
			<td>-</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Miniature Peristaltic Pumps</td>
			<td>WPI</td>
			<td>-</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

in utero electroporation approaches to study the excitability of neuronal subpopulations and single-cell connectivity

신경계의 연결은 별개 형태의 엄청난 범위로 구성된다. 이러한 신경 세포의 소집단 다른 기능, 자신의 고유 한 수지상 형태학, 축삭 연결의 특정 패턴과 선택적 발사 응답 중 특징으로한다. 개발하는 동안 차별화의 이러한 측면을 담당하는 분자 및 세포 메커니즘은 여전히 ​​저조한 이해된다. 여기, 우리는 라벨에 대한 결합 된 프로토콜을 설명하고 대뇌 피질의 신경 세포의 구조적 연결과 흥분을 특성화. 에서 자궁 전기 (IUE) 프로토콜의 수정은 뉴런의 스파 스 인구의 표시를 할 수 있습니다. 이것은, 차례로, 개별 돌기 신경 축색 돌기 층류 위치의 정확한 특성 및 형태 계측 학적 분석 축삭의 식별 및 추적 할 수있다. IUE 또한 흥분성의 변화를 조사하기 위하여 사용될 수있다야생형 (WT) 또는 전기 천공 두뇌의 급성 조각에서 전체 셀 녹음과 결합하여 유전자 변형 뉴런. 이 두 기술은 구조적 및 기능적 연결성의 결합에 대한 이해 및 개발 중에 신경 다이버 시티를 제어하는 ​​분자 메커니즘에 기여한다. 이러한 발달 과정은 축삭 배선, 신경 세포의 기능 다양성,인지 장애의 생물학에 중요한 의미를 가지고있다.

상세 및 개발을 통해 신경 세포의 형태 학적 변화를 특성화하기 위해, 띄엄 띄엄 뉴런 레이블을하는 것이 필수적이다. 이 효소를 통합 만 신경 GFP (그림 1A)를 표현할 수 있도록 Cre 호텔 - 재조합 효소 희석 시스템은 뉴런의 스파 스 인구에 대한 관심의 유전자의 발현을 허용한다. 이 전략을 사용하여 레이어 II-III는 대상과 E15.5에서 IUE에 의해 표시된다. CAG-DsRed2?...

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In Utero Electroporation Approaches to Study the Excitability of Neuronal Subpopulations and Single-cell Connectivity

이 논문은 단일 세포 수준과 형광 표지 된 뉴런의 흥분성 뉴런의 연결 구조를 설명하는 자궁 전기 (IUE)에서 사용하는 프로토콜을 제공한다. 조직학은 수지상 및 축삭 돌기를 특성화하는 데 사용됩니다. 급성 슬라이스 전체 셀 기록 흥분성을 조사하기 위해 사용된다.

자궁 내 일렉트로는 신경 세포의 부분 집단의 흥분 및 단일 세포의 연결을 연구에 접근

The nervous system is composed of an enormous range of distinct neuronal types. These neuronal subpopulations are characterized by, among other features, ...

Research

JoVE Journal

Neuroscience

In Utero Electroporation Approaches to Study the Excitability of Neuronal Subpopulations and Single-cell Connectivity

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utero에서 Electroporation은 두피 뉴런의 하위 집합의 유전자 기능을 학습에 대한 기본의 연결을 문화 뒤에

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연구

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몸에 붙이기 형질 전환 쥐의 발생에 의해<em&gt; 자궁 내</em&gt; 일렉트로 및<em&gt; 생체 내</em&gt; 생물 발광 상영

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Genetic Manipulation of the Mouse Developing Hypothalamus through In utero Electroporation

마우스의 유전자 조작을 통해 시상 하부 개발<em&gt; 자궁 내</em&gt; 일렉트로

Genetic  modification of specific regions of the developing mammalian brain is a very  powerful experimental approach. However, generating novel mouse ...

Fast Micro-iontophoresis of Glutamate and GABA: A Useful Tool to Investigate Synaptic Integration

글루타민산 염과 GABA의 빠른 마이크로 이온 도입 : 시냅틱 통합을 조사하는 유용한 도구

One of the fundamental interests in neuroscience is to understand the integration of excitatory and inhibitory inputs along the very complex structure of ...

Genetic Manipulation of Cerebellar Granule Neurons In Vitro and In Vivo to Study Neuronal Morphology and Migration

Genetic Manipulation of Cerebellar Granule Neurons In Vitro and In Vivo to Study Neuronal Morphology and Migration

소뇌 과립 신경 세포의 유전자 조작<em&gt; 체외</em&gt;와<em&gt; 생체</em&gt; 신경 세포의 형태와 마이그레이션을 연구하는

Developmental events in the brain including neuronal morphogenesis and migration are highly orchestrated processes. In vitro and in vivo analyses allow ...

Preparation of Neuronal Co-cultures with Single Cell Precision

단일 셀의 정밀도와의 연결을 공동 문화의 준비

Microfluidic embodiments of the Campenot chamber have attracted great interest from the neuroscience community. These interconnected co-culture platforms ...

Induction of an Isoelectric Brain State to Investigate the Impact of Endogenous Synaptic Activity on Neuronal Excitability In Vivo

Induction of an Isoelectric Brain State to Investigate the Impact of Endogenous Synaptic Activity on Neuronal Excitability In Vivo

등전위 뇌 상태의 유도는 신경 흥분에 내생 시냅스 활동의 영향을 조사하기<em&gt; 생체</em

The way neurons process information depends both on their intrinsic membrane properties and on the dynamics of the afferent synaptic network. In ...