Name: isolation of endothelial progenitor cells from healthy volunteers and their migratory potential influenced by serum samples after cardiac surgery
Uploaded: 2017-02-14T14:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Isolation of Endothelial Progenitor Cells from Healthy Volunteers and Their Migratory Potential Influenced by Serum Samples After Cardiac Surgery at JoVE.com

الكتاب ليس لديهم الاعترافات.

تم الحصول على الدم لعزل EPCS من المتطوعين الأصحاء بعد الموافقة المسبقة وفقا للجنة الأخلاقيات المحلية. تم الحصول على عينات من مصل الدم المستخدمة في المقايسات الهجرة من المرضى الذين خضعوا لجراحة القلب التقليدية مع استخدام المجازة القلبية الرئوية (بروتوكول قرطاجنة). وكا...

وتضمن الجزء الأول من هذه الدراسة عزل EPCS الإنسان من الدم المحيطي من المتطوعين الأصحاء لتمكين من إجراء تقييم شامل من دم مرضى جراحة القلب. لذلك، تم إجراء الطرد المركزي التدرج الكثافة لفصل جزء PBMC من البلازما، والمحببة وكريات الدم الحمراء. لإزالة معظم الصفائح الدموية تلو...

<html> الخلايا الاصلية البطانية (EPCS) تنتشر في دم الإنسان ولها القدرة على التمايز إلى خلايا بطانة الأوعية الدموية 2. يشاركون في تكون الأوعية وقادرون على التقليل من الأضرار الناجمة عن التهاب ونقص التروية / ضخه (I / R) إصابات بطرق مختلفة 3، 4. على سبيل المثال، EPCS تظهر مستويات مرتفعة من الانزيمات المضادة للأكسدة داخل الخلايا مثل الكاتلاز، البيروكسيديز الجلوتاثيون أو سوبر أكسيد ديسميوتاز المنغنيز (MnSOD) 5. المقاومة مرتفعة ضد الاكسدة تسمح EPCS للعمل في microenvironments مع الأنواع مرتفعة الاكسجين التفاعلية (ROS) بعد الإصابة الدماغية 6. وأشارت دراسات سابقة إلى أن عدد من EPCS قد تكون مرتبطة إلى إصلاح الأوعية الدموية وانخفاض عدد تعميم EPCS يتوقع وقوع أحداث القلب والأوعية الدموية 7،الطبقة = &quot;XREF&quot;&gt; 8. ومع ذلك، لم يتم العثور على تعريف واضح لEPC حتى الان. حتى الآن، ليس هناك أية علامة سطح الخلية المحددة أو النمط الظاهري ثابت لEPCS وهذه الخلايا نادرة جدا في الدم المحيطي 9. وينبغي النظر في EPC الإنسان باعتبارها الخلية تعميم لديهم القدرة على المساهمة في إعادة بناء البطانة الجرحى والهياكل الأوعية الدموية الجديدة. طريقة واحدة لعزل وتوصيف EPCS هي من خلال الانضمام إلى فبرونيكتين. وبالتالي، يتم استخدام قدرة هذه الخلايا لإظهار التصاق متفوقة على الفيبرونكتين أطباق المغلفة مقارنة الكولاجين من صنف 1، على سبيل المثال 3 و 10 و 11. ومع ذلك، وجد آخرون أن خلايا الطلاء وحيدات النوى على الأطباق المغلفة فبرونيكتين دون أي خطوة تنقية السابقة أو يؤدي إلى مزيد من المستعمرات بما في ذلك الخلايا الاولية الدم النخاعي، وحيدات، والخلايا اللمفية تي 12، 13، 14. وعلاوة على ذلك، في هذه الحالة، قد الصفائح الدموية تلوث الخلية وحيدة النواة (MNC) جزء، وبالتالي نقل البروتينات غشاء البلازما إلى أي خلايا ملتصقة 15. وبالاضافة الى توصيف من خلال فحوصات في المختبر الالتصاق، يتم استخدام مزيج من مختلف علامات سطح الخلية لوصف نوع من الخلايا تعتبر الاتفاقية الأوروبية. في هذه الحالة، بعد التصاق بوساطة فبرونيكتين، والخلايا يتم تحليل بشأن سمات مثل البطانية الخاصة بهم. في هذه العملية، وهما البطانية علامات الخلايا المرتبطة، الأسيتيل-البروتين الدهني منخفض الكثافة (acLDL) وعامل النمو البطاني الوعائي مستقبلات 2 (VEGFR-2، KDR)، تلعب دورا في ذلك. وقد تبين أن الخلايا البطانية والبلاعم لاتخاذ خصيصا acLDL في عملية تسمى &quot;طريق خلية زبال&quot; 16. بروتين آخر علامة هو KDR كما مستقبلات عامل نمو بطانة الاوعية الرئيسي على البطانيةخلايا 17. لكن، وكما EPCS بشكل عام يتم تربيتها في وسائل الإعلام تستكمل مع عوامل النمو البطانية والجنين مصل العجل، فمن الممكن أن الضامة، والتي قد أيضا تم عزلها عن طريق الخطأ، يحمل ملف تعريف علامة تشبه البطانية. كما هو موضح سابقا، إذا مثقف في المتوسط مكيفة البطانية، الضامة تعبر عن البروتينات &quot;، البطانية محددة&quot; (18). بشكل عام، هناك نوعان من EPCS ضمن أكثر أنواع فرعية، والتي يمكن أن تكون موجودة في الدم أو يكون المثقف في المختبر. تظهر في وقت متأخر من ثمرة EPCS (في وقت متأخر من EPCS) بعد 2-3 أسابيع من الثقافة. يتم دمج هذه الخلايا بشكل أسرع إلى أحادي الطبقة من الوريد السري الخلايا البطانية الإنسان ويمكن أن تشكل الأنابيب الشعرية (19). الى جانب ذلك، ما يسمى ب &quot;المبكر EPCS&quot; تدور في الدم لمدة أسبوع واحد والتصرف بطريقة أكثر سلبية من خلال تقديم الجزيئات عائية، مثل نمو بطانة الأوعية الدمويةعامل (عامل نمو بطانة الاوعية)، أو CXCL8 19. المرضى الذين يعانون من مرض الشريان التاجي (CAD) وجود كميات أقل بكثير من EPCS المبكرة مقارنة مع مجموعة السيطرة من دون 20 CAD. ومن المثير للاهتمام، وأظهرت نفس المجموعة كميات أكبر من وقت متأخر من EPCS مقارنة مع مجموعة السيطرة. وأظهرت دراسة أخرى أن المبكر EPCS حماية EPCS متباينة من الخلايا تحت ظروف الأكسدة بطريقة نظير الصماوي 6. لذلك، EPCS مبكرة قد توفر آثار وقائية ذات الصلة من خلال هجرة الخلايا الأخرى بطريقة صناعة السيارات في أو نظير الصماوي في الدم المحيطي. يصف هذا البروتوكول وسيلة لتنقية EPCS المبكرة من خلال عزل لأول مرة PBMC-جزء من الدم المحيطي البشري وبالتالي عزل CD34 + الخلايا من PBMC-جزء لمسح هذا تعليق خلية من الخلايا غير المرغوبة. CD34 هو علامة، والذي يستخدم لعزل الخلايا الجذعية المكونة للدم الإنسان 9 </sup&gt;. بعد ذلك، والخلايا CD34 + يتم تربيتها على الأسطح زراعة الأنسجة المغلفة فبرونيكتين. بعد ثلاثة أيام، يتم تغيير المتوسطة، وبالتالي فقدان كل الخلايا غير ملتصقة. وأخيرا، ملطخة EPCS معزولة للتحقق من امتصاص acLDL وجود KDR كما البطانية خلية علامة باستخدام مضان تنشيط الخلايا الفرز (FACS). كما علامة إضافية، قمنا بتحليل الصفائح الدموية البطانية جزيء التصاق الخلية (PECAM-1، CD31)، والذي يحدث أيضا على الخلايا البطانية. ترميم الأنسجة عضلة القلب التالفة أو محتشية خلال تعزيز توظيف EPCS ينتمي إلى استراتيجيات العلاج التحقيق بشكل مكثف في أمراض القلب والأوعية الدموية. ومع ذلك، فإن ترجمة النتائج التجريبية في الممارسة السريرية لا تزال صعبة، نظرا للتفاعل الخلوي تعقيدا في جسم الإنسان خلال مختلف الظروف المرضية. وعلاوة على ذلك، وأنا عضلة القلب / إصابات R تؤدي إلى إفراز مفرط من مختلف السيتوكينات والهرمونات والقوات المسلحة الكونغولية النمو<html> الاختصاصات، التي تسيطر على صاروخ موجه من EPCS إلى مناطق تكوين الأوعية الدموية 13. كما هو مبين بالفعل، CXCL8، المستمدة الخلايا اللحمية عامل 1α (SDF-1α، CXCL12)، وزيادة عامل نمو بطانة الاوعية والبلاعم الهجرة عامل مثبط (MIF) بشكل كبير في عينات مصل التالية عضلة القلب I / R إصابة 1. ومن بين هذه العوامل، MIF هو مثل chemokine خلوى عديد المظاهر ذات الخصائص الغالب الموالية للالتهابات. وعلى النقيض من الاسم التاريخي لها، MIF وظائف المؤيدة للهجرة، بوصفها chemokine صحيح على مختلف أنواع الخلايا 1 و 21 و 22. وقد تم ربط عمليات تجنيد خلية MIF بوساطة لمستقبلات chemokine CXCR2 وCXCR4، الذي يربط MIF لوينشط بطريقة غير المشابهة 21. وتجدر الإشارة، EPCS تعبر عن كل من هذه المستقبلات على سطوحها، والتي أصبحت بالإضافة إلى ذلك يصل ينظم تحت ظروف نقص الأوكسجينالحمار = &quot;XREF&quot;&gt; 23، 24. وعلاوة على ذلك، تشير الأدلة المتراكمة التي MIF له التأثير الكلي القلب واقية أثناء I / R إصابة القلب 22 و 25 و 26. وفي هذا السياق، فقد تبين أيضا أن MIF قد دعم اتساع الأوعية الدموية أثناء الإجهاد ميتة التي هي ذات أهمية خاصة، عند النظر في آليات استرداد محدودة من عضلة القلب المصاب (27). في الدراسات المختبرية والتجارب السابقة في نماذج الماوس ما قبل السريرية قدمت أول دليل حول دور MIF في EPCS توظيف 4. وتجدر الإشارة، MIF أيضا هو بروتين البضائع بارز من EPCS التي قد يتم الافراج خلال تجنيد EPCS داخل مواقع الدماغية 28. ومع ذلك، لا تزال الدراسات في المرافق الصحية ولا سيما في مقارنة مع غيرها (عائية) السيتوكينات المصل بعيد المنال.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" width="803">
	<tbody>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:257px;">Fibronectin</td>
			<td style="width:185px;">Biochrom AG</td>
			<td style="width:155px;">L7117</td>
			<td style="width:207px;">Coating of T-75 flasks</td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:257px;">Aqua ad iniectabilia</td>
			<td style="width:185px;">Fresenius Kabi</td>
			<td style="width:155px;"></td>
			<td style="width:207px;"></td>
		</tr>
		<tr height="43">
			<td height="43" style="height:43px;width:257px;">Endothelial cell growth medium MV2</td>
			<td style="width:185px;">Promo Cell</td>
			<td style="width:155px;">C-22221</td>
			<td style="width:207px;"></td>
		</tr>
		<tr height="43">
			<td height="43" style="height:43px;width:257px;">Endothelial cell growth medium MV2 SupplementMix</td>
			<td style="width:185px;">Promo Cell</td>
			<td style="width:155px;">C-39226</td>
			<td style="width:207px;"></td>
		</tr>
		<tr height="64">
			<td height="64" style="height:64px;width:257px;">Ficoll-Paque plus</td>
			<td style="width:185px;">GE Healthcare</td>
			<td style="width:155px;">17-1440-03</td>
			<td style="width:207px;">Density centrifugation</td>
		</tr>
		<tr height="64">
			<td height="64" style="height:64px;width:257px;">EasySep human CD34 positive Selection Kit</td>
			<td style="width:185px;">Stemcell Technologies</td>
			<td style="width:155px;">18056</td>
			<td style="width:207px;">Isolation of CD34+ cells</td>
		</tr>
		<tr height="64">
			<td height="64" style="height:64px;width:257px;">EasySep magnet</td>
			<td style="width:185px;">Stemcell Technologies</td>
			<td style="width:155px;">18000</td>
			<td style="width:207px;"></td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:257px;">Accutase</td>
			<td style="width:185px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:155px;">A6964-100ML</td>
			<td style="width:207px;">Detachment of cells</td>
		</tr>
		<tr height="43">
			<td height="43" style="height:43px;width:257px;">Corning HTS transwell 96 well permeable supports</td>
			<td style="width:185px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:155px;">CLS3387-8EA</td>
			<td style="width:207px;">Migration system</td>
		</tr>
		<tr height="43">
			<td height="43" style="height:43px;width:257px;">Hoechst solution</td>
			<td style="width:185px;">ThermoFisher</td>
			<td style="width:155px;">33342</td>
			<td style="width:207px;">Staining of migrated cells</td>
		</tr>
		<tr height="64">
			<td height="64" style="height:64px;width:257px;">ImageJ</td>
			<td style="width:185px;">National institutes of health</td>
			<td style="width:155px;">xxx</td>
			<td style="width:207px;">Counting of migrated cells</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

isolation of endothelial progenitor cells from healthy volunteers and their migratory potential influenced by serum samples after cardiac surgery

ويتم تجنيد الخلايا الاصلية البطانية (EPCS) من نخاع العظام في ظل ظروف مرضية مثل نقص الأكسجة وتشارك بشكل حاسم في اتساع الأوعية الدموية في الأنسجة الدماغية. الأصل، وتصنيف وتوصيف EPCS معقدة. بالرغم من ذلك، تم إنشاء اثنين من أبرز أنواع فرعية من EPCS: ما يسمى ب &quot;في وقت مبكر&quot; EPCS (يشار لاحقا إلى المبكرة EPCS ع) EPCS وفي وقت متأخر من ثمرة (أواخر EPCS). ويمكن تصنيفها حسب الخصائص البيولوجية، فضلا عن ظهورها في المختبر خلال الثقافة. في حين تظهر EPCS &quot;الأولى&quot; في أقل من أسبوع بعد ثقافة الخلايا وحيدة النواة المشتقة من الدم الطرفية في EC-محددة وسائل الإعلام، EPCS في وقت متأخر من ثمرة يمكن العثور على بعد 2-3 أسابيع. وقد تم الاعتراف EPCS في وقت متأخر من ثمرة أن تشارك مباشرة في اتساع الأوعية الدموية، وذلك أساسا من خلال قدرتها على التمايز إلى خلايا البطانية ناضجة، في حين أن &quot;في وقت مبكر&quot; EPCS تعبر عن العوامل عائية المختلفة وendogenالبضائع الأوس لتعزيز الأوعية الدموية بطريقة نظير الصماوي. خلال عضلة القلب نقص التروية / ضخه (I / R)، عوامل مختلفة تتحكم صاروخ موجه من EPCS إلى مناطق تكوين الأوعية الدموية. بلعم عامل الهجرة المثبطة (MIF) هو الموالية للالتهابات، وأعرب عن بتواجد مطلق خلوى مثل chemokine وصفت مؤخرا على العمل المنظم الرئيسي اعتبارا من الهجرة EPCS في تركيزات الفسيولوجية 1. ومن المثير للاهتمام، يتم تخزين MIF في برك داخل الخلايا ويمكن بسرعة أن تطلق في مجرى الدم بعد عدة مؤثرات (مثل احتشاء عضلة القلب). يصف هذا البروتوكول وسيلة لعزل موثوقة وثقافة المبكر EPCS من البالغين الدم المحيطي البشري استنادا إلى التحديد-CD34 الإيجابي مع الثقافة اللاحقة في المتوسط تحتوي على عوامل النمو البطانية على لوحات فبرونيكتين المغلفة للاستخدام في فحوصات في المختبر الهجرة ضد عينات مصل من المرضى لعمليات جراحية في القلب. علاوة على ذلك،ويتجلى تأثير الهجرة من MIF على الكيميائي من EPCS مقارنة مع السيتوكينات تحفيز الأوعية الدموية الأخرى المعروفة.

توصيف عزل الخلايا البطانية السلف أولا، تم التحقق من امتصاص acLDL، وكذلك التعبير عن KDR، وCD31 على سطح السكان خلية معزولة. كما يظهر 7A الشكل، أظهرت 85.1٪ من EPCS معزولة على امتصاص acLDL وأعرب CD31. ا...

Watch this Scientific Journal Video about Isolation of Endothelial Progenitor Cells from Healthy Volunteers and Their Migratory Potential Influenced by Serum Samples After Cardiac Surgery at JoVE.com

Isolation of Endothelial Progenitor Cells from Healthy Volunteers and Their Migratory Potential Influenced by Serum Samples After Cardiac Surgery

الخلايا الاصلية البطانية (EPCS) تشارك بشكل حاسم في اتساع الأوعية الدموية في الأنسجة الدماغية. يصف هذا الأسلوب عزلة EPCS الإنسان من الدم المحيطي، وكذلك التعرف على إمكانات المهاجرة ضد عينات مصل الدم من المرضى لعمليات جراحية في القلب.

عزل الخلايا البطانية السلف من المتطوعين الأصحاء وإمكاناتهم الكثيرة تأثر عينات المصل بعد جراحة القلب

Endothelial progenitor cells (EPCs) are recruited from the bone marrow under pathological conditions like hypoxia and are crucially involved in the ...

Research

JoVE Journal

Medicine

Isolation, Characterization and Comparative Differentiation of Human Dental Pulp Stem Cells Derived from Permanent Teeth by Using Two Different Methods

العزلة، وتوصيف المقارن التمييز بين الخلايا الجذعية البشرية الأسنان اللب المستمدة من الأسنان الدائمة باستخدام طريقتين مختلفتين

Developing wisdom teeth are easy-accessible source of stem cells during the adulthood which could be obtained by routine orthodontic treatments. Human ...

Isolation of Cancer Stem Cells From Human Prostate Cancer Samples

عزل الخلايا الجذعية للسرطان من العينات البشرية سرطان البروستاتا

The cancer stem cell (CSC) model has been considerably revisited over the last two decades. During this time CSCs have been identified and directly ...

Isolation of Human Lymphatic Endothelial Cells by Multi-parameter Fluorescence-activated Cell Sorting

عزل خلايا الإنسان اللمفاوي البطانية التي كتبها متعدد المعلمة تنشيط الإسفار الفرز خلية

Lymphatic system disorders such as primary lymphedema, lymphatic malformations and lymphatic tumors are rare conditions that cause significant morbidity ...

Isolation and Culture Expansion of Tumor-specific Endothelial Cells

العزلة وثقافة توسيع ورم محددة الخلايا البطانية

Freshly isolated tumor-specific endothelial cells (TEC) can be used to explore molecular mechanisms of tumor angiogenesis and serve as an in vitro model ...

Isolation and Culture of Primary Endothelial Cells from Canine Arteries and Veins

العزلة والثقافة من الخلايا البطانية الأولية من الشرايين والأوردة الكلاب

Cardiovascular disease is studied in both human and veterinary medicine. Endothelial cells have been used extensively as an in vitro model to study ...

Preparation and In Vitro Characterization of Magnetized miR-modified Endothelial Cells

Preparation and In Vitro Characterization of Magnetized miR-modified Endothelial Cells

إعداد و<em&gt; في المختبر</em&gt; توصيف ممغنط مير تعديل الخلايا البطانية

To date, the available surgical and pharmacological treatments for cardiovascular diseases (CVD) are limited and often palliative. At the same time, gene ...

A Flow Cytometry-based Assay for Measuring Mitochondrial Membrane Potential in Cardiac Myocytes After Hypoxia/Reoxygenation

فحص الخلوي على أساس تدفق لقياس إمكانات غشاء الميتوكوندريا في Myocytes القلب بعد نقص/ريوكسيجينيشن

Timely and efficient reperfusion of the occluded coronary artery is the best strategy for decreasing myocardial infarct size in patients with a ST-segment ...

In Vivo Photolabeling of Cells in the Colon to Assess Migratory Potential of Hematopoietic Cells in Neonatal Mice

In Vivo Photolabeling of Cells in the Colon to Assess Migratory Potential of Hematopoietic Cells in Neonatal Mice

في فيفو فوتولابيلينج الخلايا في القولون لتقييم إمكانية الهجرة من الخلايا المكونة للدم في الفئران حديثي الولادة

Enteric bacterial communities are established early in life and influence immune cell development and function. The neonatal microbiota is susceptible to ...

Isolation of Atrial Myocytes from Adult Mice

عزل الخلايا الماية الأذينية من الفئران البالغة

The electrophysiological properties of atrial myocytes importantly affect overall cardiac function. Alterations in the underlying ionic currents ...

Pre-clinical Model of Cardiac Donation after Circulatory Death

نموذج ما قبل السريرية للتبرع القلبي بعد الوفاة الدورة الدموية

Cardiac transplantation demand is on the rise; nevertheless, organ availability is limited due to a paucity of suitable donors. Organ donation after ...