Name: isolation of endothelial progenitor cells from healthy volunteers and their migratory potential influenced by serum samples after cardiac surgery
Uploaded: 2017-02-14T14:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Isolation of Endothelial Progenitor Cells from Healthy Volunteers and Their Migratory Potential Influenced by Serum Samples After Cardiac Surgery at JoVE.com

יש המחברים לא בתודות.

דם עבור בידוד של EPCs התקבל מתנדבים בריאים לאחר הסכמה מדעת בהתאם ועדת האתיקה המקומית. דגימות סרום המשמש מבחני הגירה התקבלו מחולים שעברו ניתוחי לב קונבנציונלי עם השימוש מכונת לב-ריאה (CPB). קריטריוני הכללה היו פעולות חירום, הריון ידוע או חשוד, המטופלת בגיל פחות מ -18 שנים, ו?...

החלק הראשון של מחקר כלל את הבידוד של EPCs אדם מהדם ההיקפי של מתנדבים בריאים כדי לאפשר הערכה מקיפה של הדם של חולים לאחר ניתוח לב. לכן, צנטריפוגה שיפוע צפיפות בוצעה על מנת להפריד את החלק היחסי PBMC מפלסמה, גרנולוציטים ו אריתרוציטים. כדי להסיר ביותר של טסיות זיהום, שבריר התא ה...

<html> ובתאי אנדותל (EPCs) הם במחזור הדם האנושי ויש להם את היכולת להתמיין לתאי אנדותל 2. הם משתתפים vasculogenesis ומסוגלים מזעור הנזק נגרם על ידי דלקת איסכמיה / reperfusion (I / R) פציעות בדרכים שונות 3, 4. לדוגמה, EPCs מראים רמות גבוהות של אנזימים נוגדי חמצון תוך תאיים כמו catalase, peroxidase גלוטתיון או סופראוקסיד דיסמוטאז מנגן (MnSOD) 5. ההתנגדות המוגבהת מפני סטרס חמצונים מאפשרת EPCs לתפקד microenvironments עם מיני חמצן תגובתי גבוהים (ROS) לאחר פגיעה איסכמית 6. גם מחקרים קודמים הצביעו על כך שמספר EPCs עלול להיות מתואמים תיקון כלי הדם וכי מספר מופחת של מחזורי EPCs מנבא את התרחשותם של אירועים קרדיווסקולריים 7,class = &quot;Xref&quot;&gt; 8. עם זאת, הגדרה ברורה של EPC לא נמצאה עדיין. עד עכשיו, אין סמן משטח תאים ספציפי או פנוטיפ עקבית EPCs ותאים אלה הם נדירים מאוד בדם ההיקפי 9. EPC אדם צריך להיחשב כתא במחזור עם יכולת שיקומה של האנדותל נפצע ומבנים וסקולרית חדשים. אחת הדרכים לבודד ולאפיין EPCs היא באמצעות הדבקה על פיברונקטין. ובכך, את היכולת של תאים אלה משמשת להראות הידבקות מעולה כדי פיברונקטין מנות צופה לעומת להקליד 1 קולגן, למשל 3, 10, 11. עם זאת, אחרים מצאו כי תאי ציפוי mononuclear על מנות מצופות פיברונקטין וללא שום צעד טיהור קודם או יותר מובילים מושבות כוללות ובתאים מיאלואידית, מונוציטים, ו- T לימפוציטים 12, 13, 14. יתר על כן, במקרה זה, טסיות עלול לזהם את תא mononuclear (MNC) החלק ובכך להעביר חלבונים בממברנה פלזמה לכל תאים חסידים 15. מלבד אפיון באמצעות מבחני הידבקות במבחנה, שילוב של סמנים פני תא שונים משמש לתיאור סוג תא נחשב כסוג של EPC. במקרה זה, לאחר הידבקות בתיווך פיברונקטין, התאים מנותחים בדבר תכונות אנדותל דמוי שלהם. בתהליך זה, סמנים האנדותל שני הקשורים התא, ליפופרוטאין בצפיפות acetylated-נמוך (acLDL) ו הקולטן לגורם הצמיחה של אנדותל כלי הדם 2 (VEGFR-2, KDR), לשחק תפקיד. תאי מקרופאגים האנדותל הוכחו תופסי acLDL במיוחד בתהליך הנקרא &quot;מסלול תא נבלות&quot; 16. חלבון סמן נוסף הוא KDR בשם רצפטור VEGF העיקרי על האנדותלתאים 17. עם זאת, כפי EPCs בכלל בתרבית התקשורת השלימה עם גורמי גדילת האנדותל נסיוב עגל עוברי, יתכן כי מקרופאגים, אשר ייתכן גם שהוא מבודד בטעות, תערוכת פרופיל סמן אנדותל הדמוי. כפי שהוצג קודם, אם תורבתו בינוני אנדותל ממוזג, מקרופאגים להביע חלבונים &quot;ספציפי האנדותל&quot; 18. באופן כללי, ישנן שתי קטגוריות של EPCs בתוך תת יותר, אשר ניתן למצוא בדם או להיות מתורבת במבחנה. EPCs מאוחרת-תולדה (סוף-EPCs) מופיעים לאחר 2-3 שבועות של תרבות. תאים אלה משולבים מהר לתוך monolayer של בתאי האנדותל וריד אדם הטבור והוא יכול ליצור צינורות נימי 19. חוץ מזה, מה שנקרא &quot;מוקדם EPCs&quot; לזרום בדם במשך כשבוע ולפעול בצורה פסיבית יותר באמצעות מולקולות angiogenic ומספק, כגון צמיחה אנדותל כלי הדםגורם (VEGF), או CXCL8 19. חולים עם מחלת עורקים כליליים (CAD) הראו כמויות נמוכות משמעותית של מוקדם EPCs בהשוואה לקבוצת ביקורת ללא CAD 20. מעניין לציין, כי אותה הקבוצה הראתה כמויות גדולות יותר של EPCs מאוחר בהשוואה לקבוצת ביקורת. מחקר אחר הראה כי מוקדם EPCs להגן EPCs הבדיל מן אפופטוזיס בתנאים חמצוני באופן paracrine 6. לכן, EPCs מוקדם עשוי לספק השפעות מגנות רלוונטיות באמצעות ההגירה של תאים אחרים בצורה וקישוט רכב או paracrine בתוך הדם ההיקפי. פרוטוקול זה מתאר שיטה לטהר מוקדם EPCs על ידי הבידוד הראשון-שבריר PBMC מדם היקפי אדם ובהמשך לבודד CD34 + תאים מן-שבריר PBMC כדי לנקות השעית תא זה תאים לא רצויים. CD34 הוא סמן, המשמש לבידוד של תאי גזע hematopoietic אדם 9 </sup&gt;. לאחר מכן, CD34 + תאים בתרבית על משטחים בתרבית רקמה מצופה פיברונקטין. אחרי שלושה ימים, את המדיום משתנה, ובכך לאבד את כל התאים שאינם חסידים. לבסוף, EPCs מבודד מגואלות לאמת את הספיגה של acLDL ואת הנוכחות של KDR כמו אנדותל תא סמן באמצעות תא קרינת מיון מופעל (FACS). כסמן נוסף, ניתחנו מולקולה הידבקות התא טסיות האנדותל (PECAM-1, CD31), אשר מתרחשת גם על תאי האנדותל. שיקום של רקמת שריר הלב פגום או אוטם ידי גיוס משופרת של EPCs שייך אסטרטגיות טיפול נחקר באינטנסיביות במחלות לב וכלי דם. עם זאת, התרגום של תוצאות ניסוי לתוך פרקטיקה קלינית עדיין מאתגר, בהתחשב הגומלין הסלולר מורכב בגוף האדם במהלך תנאי pathophysiological שונים. יתר על כן, אני הלבבי / פציעות R לעורר הפרשת יתר של ציטוקינים שונים, הורמוני fac הצמיחה<html> tors, השולט על הביות של EPCs לאזורים של היווצרות כלי דם 13. כפי שמוצגות, CXCL8, סטרומה תא הנגזרות 1α גורם (SDF-1α, CXCL12), VEGF גורם מעכבות הגירה מקרופאג (MIF) עולה במידה ניכרת בדגימות הבא אני לבבי / R פציעה 1. בין גורמים אלה, MIF הוא ציטוקין pleiotropic chemokine דמוי עם מאפיינים פרו-דלקתיים בעיקרה. בניגוד השם ההיסטורי שלה, MIF יש פונקציות פרו-נודדות, מתנהג כמו chemokine נכון על סוגי תאים שונים 1, 21, 22. MIF בתיווך תהליכי גיוס תא קושרו אל CXCR2 קולטנים chemokine ו CXCR4, אשר MIF נקשר, ומפעיל באופן שאינו מאותו מקור 21. מן הראוי לציין כי EPCs מבטאות הן של קולטנים אלה על פני השטח שלהם, אשר בנוסף להיות למעלה מוסדר בתנאים היפוקסיהתחת = &quot;Xref&quot;&gt; 23, 24. יתר על כן, הראיות המצטברות עולה כי יש MIF השפעה קרדיו-מגן הכוללת במהלך I / R פציעה של הלב 22, 25, 26. בהקשר זה, מוכיח עוד כי MIF עשוי לתמוך נאווסקולריזציה במהלך מתח היפוקסי חשוב ורלוונטי במיוחד, כאשר בוחנים את מנגנוני התאוששות המוגבלים של שריר הלב הפגוע 27. מחקרים קודמים במבחנה וניסויים בעכברי מודל הפרה-קליני ספקו ראיות ראשונות על תפקידו של MIF ב EPCs גיוס 4. ראוי לציין, MIF גם הוא חלבון מטען בולט של EPCs העשויים להתפרסם במהלך גיוס EPCs בתוך אתרים איסכמי 28. עם זאת, מחקרים במסגרות קליניות בפרט בהשוואה אחר (אנגיוגנזה) ציטוקינים בסרום להישאר חמקמקים.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" width="803">
	<tbody>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:257px;">Fibronectin</td>
			<td style="width:185px;">Biochrom AG</td>
			<td style="width:155px;">L7117</td>
			<td style="width:207px;">Coating of T-75 flasks</td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:257px;">Aqua ad iniectabilia</td>
			<td style="width:185px;">Fresenius Kabi</td>
			<td style="width:155px;"></td>
			<td style="width:207px;"></td>
		</tr>
		<tr height="43">
			<td height="43" style="height:43px;width:257px;">Endothelial cell growth medium MV2</td>
			<td style="width:185px;">Promo Cell</td>
			<td style="width:155px;">C-22221</td>
			<td style="width:207px;"></td>
		</tr>
		<tr height="43">
			<td height="43" style="height:43px;width:257px;">Endothelial cell growth medium MV2 SupplementMix</td>
			<td style="width:185px;">Promo Cell</td>
			<td style="width:155px;">C-39226</td>
			<td style="width:207px;"></td>
		</tr>
		<tr height="64">
			<td height="64" style="height:64px;width:257px;">Ficoll-Paque plus</td>
			<td style="width:185px;">GE Healthcare</td>
			<td style="width:155px;">17-1440-03</td>
			<td style="width:207px;">Density centrifugation</td>
		</tr>
		<tr height="64">
			<td height="64" style="height:64px;width:257px;">EasySep human CD34 positive Selection Kit</td>
			<td style="width:185px;">Stemcell Technologies</td>
			<td style="width:155px;">18056</td>
			<td style="width:207px;">Isolation of CD34+ cells</td>
		</tr>
		<tr height="64">
			<td height="64" style="height:64px;width:257px;">EasySep magnet</td>
			<td style="width:185px;">Stemcell Technologies</td>
			<td style="width:155px;">18000</td>
			<td style="width:207px;"></td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:257px;">Accutase</td>
			<td style="width:185px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:155px;">A6964-100ML</td>
			<td style="width:207px;">Detachment of cells</td>
		</tr>
		<tr height="43">
			<td height="43" style="height:43px;width:257px;">Corning HTS transwell 96 well permeable supports</td>
			<td style="width:185px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:155px;">CLS3387-8EA</td>
			<td style="width:207px;">Migration system</td>
		</tr>
		<tr height="43">
			<td height="43" style="height:43px;width:257px;">Hoechst solution</td>
			<td style="width:185px;">ThermoFisher</td>
			<td style="width:155px;">33342</td>
			<td style="width:207px;">Staining of migrated cells</td>
		</tr>
		<tr height="64">
			<td height="64" style="height:64px;width:257px;">ImageJ</td>
			<td style="width:185px;">National institutes of health</td>
			<td style="width:155px;">xxx</td>
			<td style="width:207px;">Counting of migrated cells</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

isolation of endothelial progenitor cells from healthy volunteers and their migratory potential influenced by serum samples after cardiac surgery

ובתאי אנדותל (EPCs) מגויס ממח העצם בתנאים פתולוגיים כמו היפוקסיה ומעורב באופן מכריע על נאווסקולריזציה של רקמות איסכמי. מקורו, סיווג ואפיון של EPCs הם מורכבים; יחד עם זאת, שני סוגי המשנה הבולטים של EPCs הוקמו: מה שנקרא &quot;מוקדם&quot; EPCs (המכונה לאחר מכן כבר-EPCs) ומאוחר-תולדה EPCs (מאוחרת EPCs). הם יכולים להיות מסווגים לפי מאפיינים ביולוגיים כמו גם לפי המראה שלהם במהלך בתרבות חוץ גופית. בעוד &quot;מוקדם&quot; EPCs מופיעים פחות משבוע אחרי התרבות של תאים mononuclear היקפי הנגזרות דם במדיה EC-ספציפי, בסוף-תוצאה ניתן למצוא EPCs לאחר 2-3 שבועות. EPCs מאוחרת-תולדה הוכרו להיות מעורבים ישירות נאווסקולריזציה, בעיקר באמצעות יכולתם להתמיין לתאי אנדותל בוגרים, ואילו &quot;מוקדם&quot; EPCs להביע גורמים angiogenic שונים כמו endogenמטען מפוקפק לקדם אנגיוגנזה באופן paracrine. במהלך איסכמיה לבבית / reperfusion (I / R), גורמים שונים לשלוט ביות של EPCs לאזורים של היווצרות כלי דם. מקרופאג גורם הגירה מעכבת (MIF) הוא ציטוקין פרו-דלקתי דמוי chemokine ו ubiquitously הביע תואר לאחרונה לתפקד רגולטור מפתח כמו הגירת EPCs בריכוזים פיסיולוגיים 1. מעניין, MIF מאוחסן ברכות תאיות ניתן לשחרר במהירות לתוך זרם הדם לאחר כמה גירויים (למשל אוטם שריר לב). פרוטוקול זה מתאר שיטה לבידוד האמין והתרבות של מוקדם EPCs מדם היקפי אדם בוגר המבוסס על מבחר CD34 חיובי עם תרבות עוקבת במדיום המכיל גורמי גדילה האנדותל על צלחות מצופות פיברונקטין לשימוש מבחני הגירה במבחנה נגד דגימות סרום חולי הכירורגיים לב. יתר על כן,שפעת נדידה של MIF על chemotaxis של EPCs לעומת ציטוקינים ממגר אנגיוגנזה ידועה אחרים באה לידי ביטוי.

אפיון של ובתאי אנדותל מבודדים ראשית, את הספיגה של acLDL אומתה, כמו גם את הביטוי של KDR, ו CD31 על פני השטח של אוכלוסיית התא המבודדת. כפי שמראה איור 7 א, 85.1% של EPCs המבודד הראו ספיגה של acLDL והביעו CD31. ...

Watch this Scientific Journal Video about Isolation of Endothelial Progenitor Cells from Healthy Volunteers and Their Migratory Potential Influenced by Serum Samples After Cardiac Surgery at JoVE.com

Isolation of Endothelial Progenitor Cells from Healthy Volunteers and Their Migratory Potential Influenced by Serum Samples After Cardiac Surgery

ובתאי אנדותל (EPCs) מעורבים באופן מכריע על נאווסקולריזציה של רקמות איסכמי. שיטה זו מתארת ​​את הבידוד של EPCs אדם מדם היקפי, כמו גם זיהוי של פוטנציאל הנדידה שלהם נגד דגימות סרום חולי הכירורגיים לב.

בידוד של ובתאים אנדותל מן הבריאה מתנדבת ופוטנציאל הנדידה שלהם בהשפעת דגימות סרום לאחר ניתוח הלב

Endothelial progenitor cells (EPCs) are recruited from the bone marrow under pathological conditions like hypoxia and are crucially involved in the ...

Research

JoVE Journal

Medicine

Isolation, Characterization and Comparative Differentiation of Human Dental Pulp Stem Cells Derived from Permanent Teeth by Using Two Different Methods

בידוד, אפיון והשוואתי התמיינות של תאי גזע אנושיים שיניים זולות נגזרה שיניים קבועות על ידי שימוש בשתי שיטות שונות

Developing wisdom teeth are easy-accessible source of stem cells during the adulthood which could be obtained by routine orthodontic treatments. Human ...

Isolation of Cancer Stem Cells From Human Prostate Cancer Samples

בידוד של תאי גזע סרטני מדגימות אדם סרטן הערמונית

The cancer stem cell (CSC) model has been considerably revisited over the last two decades. During this time CSCs have been identified and directly ...

Isolation of Human Lymphatic Endothelial Cells by Multi-parameter Fluorescence-activated Cell Sorting

בידוד של תאי האנדותל אדם הלימפה על ידי מיון תא הקרינה המופעל Multi-פרמטר

Lymphatic system disorders such as primary lymphedema, lymphatic malformations and lymphatic tumors are rare conditions that cause significant morbidity ...

Isolation and Culture Expansion of Tumor-specific Endothelial Cells

הרחבת בידוד והתרבות של תאי האנדותל גידול ספציפי

Freshly isolated tumor-specific endothelial cells (TEC) can be used to explore molecular mechanisms of tumor angiogenesis and serve as an in vitro model ...

Isolation and Culture of Primary Endothelial Cells from Canine Arteries and Veins

בידוד והתרבות של תאי האנדותל ראשיים מן העורקים וורידים לכלבים

Cardiovascular disease is studied in both human and veterinary medicine. Endothelial cells have been used extensively as an in vitro model to study ...

Preparation and In Vitro Characterization of Magnetized miR-modified Endothelial Cells

Preparation and In Vitro Characterization of Magnetized miR-modified Endothelial Cells

הכנה<em&gt; במבחנה</em&gt; אפיון ממוגנטים miR-modified לתאי אנדותל

To date, the available surgical and pharmacological treatments for cardiovascular diseases (CVD) are limited and often palliative. At the same time, gene ...

A Flow Cytometry-based Assay for Measuring Mitochondrial Membrane Potential in Cardiac Myocytes After Hypoxia/Reoxygenation

וזמינותו מבוססי Cytometry זרימה מודדים פוטנציאל ממברנה מיטוכונדריאלי של תאי שריר הלב לאחר היפוקסיה/Reoxygenation

Timely and efficient reperfusion of the occluded coronary artery is the best strategy for decreasing myocardial infarct size in patients with a ST-segment ...

In Vivo Photolabeling of Cells in the Colon to Assess Migratory Potential of Hematopoietic Cells in Neonatal Mice

In Vivo Photolabeling of Cells in the Colon to Assess Migratory Potential of Hematopoietic Cells in Neonatal Mice

אין ויוו Photolabeling של תאים במעי הגס כדי להעריך את פוטנציאל הנדידה של תאים Hematopoietic בעכברים Neonatal

Enteric bacterial communities are established early in life and influence immune cell development and function. The neonatal microbiota is susceptible to ...

Isolation of Atrial Myocytes from Adult Mice

בידוד של פרפור מיוציטים מעכברים למבוגרים

The electrophysiological properties of atrial myocytes importantly affect overall cardiac function. Alterations in the underlying ionic currents ...

Pre-clinical Model of Cardiac Donation after Circulatory Death

מודל טרום קליני של תרומת הלב לאחר מוות הדם

Cardiac transplantation demand is on the rise; nevertheless, organ availability is limited due to a paucity of suitable donors. Organ donation after ...