Name: murine aortic crush injury: an efficient in vivo model of smooth muscle cell proliferation and endothelial function
Uploaded: 2017-06-11T14:00:00
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Agradecemos a Hsia Ru-ching PhD, de la Facultad de Microscopía Electrónica de la Facultad de Medicina de la Universidad de Maryland, por su apoyo técnico en el procesamiento de las muestras de microscopía electrónica de barrido.

Declaración de Ética: Los protocolos para el manejo de animales fueron aprobados por el Comité de Cuidado y Uso de Animales Institucionales (IACUC) de la Universidad de Maryland (protocolo número 0416009) y conducido de acuerdo con los estándares de AAALAC-International. 1. Procedimiento Quirúrgico <ol><li> Técnica Anestésica <ol><li> Esterilizar todos los instrumentos utilizados en la cirugía de supervivencia con esterilización a vapor a 121 ° C durante 30 min....

<ol>
	<li>Carmeliet, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mechanisms+of+angiogenesis+and+arteriogenesis.">Mechanisms of angiogenesis and arteriogenesis.</a> Nat Med. 6 (4), 389-395 (2000).</li><li>Carmeliet, P., Moons, L., Collen, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mouse+models+of+angiogenesis,+arterial+stenosis,+atherosclerosis+and+hemostasis.">Mouse models of angiogenesis, arterial stenosis, atherosclerosis and hemostasis.</a> Cardiovasc Res. 39 (1), 8-33 (1998).</li><li>Baker, A. B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Heparanase+Alters+Arterial+Structure,+Mechanics,+and+Repair+Following+Endovascular+Stenting+in+Mice.">Heparanase Alters Arterial Structure, Mechanics, and Repair Following Endovascular Stenting in Mice.</a> Circ Res. 104 (3), 380-387 (2009).</li><li>Petrov, L., Laurila, H., Hayry, P., Vamvakopoulos, J. 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Hemos caracterizado los efectos de un modelo de lesión aórtica murina que resulta en hiperplasia medial y disfunción de la barrera endotelial. Desprendimiento parcial de la EC a lo largo de la aorta íntima acompañó a la pérdida de contacto célula-célula y la mejora de las protrusiones celulares. De manera correspondiente, la función de la barrera endotelial se deterioró significativamente, lo que estimuló las vías de señalización sensibles a mitógenos, dando lugar a la proliferación de VSMC y el engrosa...

Restenosis Después de los procedimientos cardiovasculares (cirugía de bypass, angioplastia o stent) es un problema significativo que reduce la durabilidad de estos procedimientos. Todos los procedimientos de revascularización están plagados de reestenosis. Las estrategias actuales para prevenir la reestenosis (stents liberadores de fármacos y globos revestidos con fármacos) inhiben tanto la célula muscular lisa vascular (CMLV) como la proliferación de células endoteliales (EC). En consecuencia, estas intervenciones previenen la reestenosis mediada por VSMC, pero también previenen la regeneración del endotelio. Sin un endotelio intacto, se requiere que los pacientes estén en potentes agentes antiplaquetarios para disminuir el riesgo de trombosis in situ con riesgo de complicaciones hemorrágicas. Una terapia ideal inhibiría la proliferación de VSMC mientras que promovía la regeneración del endotelio. Por lo tanto, existe la necesidad de estudiar simultáneamente la proliferación VSMC y la función de barrera endotelial in vivo . En la actualidad, hayModelos de ratón de restenosis 1 . Estos modelos incluyen la ligadura de la carótida y la lesión del hilo de la arteria femoral 2 . Los modelos aórticos incluyen la colocación del stent 3 , lesión por globo 4 y aloinjerto aórtico 5 . Todos los modelos actuales son limitados. La ligadura carotídea genera una lesión neoíntima mediada por flujo y no tiene lesión endotelial. Además, las arterias carótida y femoral tienen muchas capas de células plegadas menos que los vasos humanos, limitando su valor de traducción. La aorta del ratón, de aproximadamente 1,3 mm de diámetro, es el único vaso que se aproxima a una arteria humana (coronaria) clínicamente relevante (3). A pesar del potencial de traslación de los modelos aórticos murinos de la enfermedad, los modelos actuales tienen limitaciones. Estos modelos requieren habilidades microquirúrgicas avanzadas y equipos especializados tales como globos de angioplastia y stents. Aquí presentamosUna técnica nueva y reproducible para inducir simultáneamente la proliferación de VSMC y alterar la función de la barrera endotelial.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" width="920">
	<tbody>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:351px;">Ocular lubricant</td>
			<td style="width:160px;">Dechra</td>
			<td style="width:163px;">17033-211-38</td>
			<td style="width:247px;">Pharmaceutical agents</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:351px;">Isoflurane</td>
			<td>VetOne</td>
			<td>502017</td>
			<td>Pharmaceutical agents</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Carprofen</td>
			<td>Zoetis</td>
			<td>26357</td>
			<td>Pharmaceutical agents</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:351px;">Precision vaporizer</td>
			<td>Summit Medical</td>
			<td>10675</td>
			<td>Surgical supplies</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:351px;">Charcoal scavenger</td>
			<td>Bickford Inc.</td>
			<td>80120</td>
			<td>Surgical supplies</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:351px;">Isothermal pad</td>
			<td>Harvard Apparatus</td>
			<td>50-7053-R</td>
			<td>Surgical supplies</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:351px;">Sterile cotton-tipped applicator</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>23-400-124</td>
			<td>Surgical supplies</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:351px;">4-0 absorbable monofilament suture&#160;</td>
			<td>Ethicon, Inc</td>
			<td>J310</td>
			<td>Surgical supplies</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:351px;">5-0 non-absorbable monofilament suture</td>
			<td>Ethicon,Inc</td>
			<td>1666</td>
			<td>Surgical supplies</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:351px;">21-gauge x 1 inch needle</td>
			<td>BD Biosciences</td>
			<td>305165</td>
			<td>Surgical supplies</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">25-gauge x 1 inch&#160; needle</td>
			<td>BD Biosciences</td>
			<td>305125</td>
			<td>Surgical supplies</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Dry sterilizer</td>
			<td>Cellpoint&#160;</td>
			<td>7770</td>
			<td>Surgical supplies</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Fine scissors</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>14058-09</td>
			<td>Surgical instruments</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Adson forceps</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>11006-12</td>
			<td>Surgical instruments</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:351px;">Dumont #5 fine forceps</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>11254-20</td>
			<td>Surgical instruments</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:351px;">Vannas Spring Scissors 3mm cutting edge</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>15000-00</td>
			<td>Surgical instruments</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Needle driver</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>91201-13</td>
			<td>Surgical instruments</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Scalpel handle #4</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>10004-13</td>
			<td>Surgical instruments</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Scalpel blades #10</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>10010-00</td>
			<td>Surgical instruments</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">PBS&#160;</td>
			<td>Lonza</td>
			<td>17-516F</td>
			<td>Reagents for tissue processing</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:351px;">Evans Blue</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>E2129</td>
			<td>Reagents for tissue processing</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:351px;">Paraformaldehyde</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>P6148</td>
			<td>Reagents for tissue processing</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:351px;">Modeling wax</td>
			<td>Bego</td>
			<td>40001</td>
			<td>Reagents for tissue processing</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">OCT compound</td>
			<td>Tissue-Tek Sakura</td>
			<td>4583</td>
			<td>Reagents for tissue processing</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Mayer&#39;s hematoxylin solution</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>MHS16</td>
			<td>Reagents for immunohistological analysis</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Eosin Y solution alcoholic&#160;</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>HT110316</td>
			<td>Reagents for immunohistological analysis</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:351px;">Elastin stain kit</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:163px;">HT25A</td>
			<td>Reagents for immunohistological analysis</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Click-it Edu Alexa-488 Imaging Kit</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>C10337</td>
			<td>Reagents for immunohistological analysis</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:351px;">Anti-Erk1/2 antibody</td>
			<td>Cell Signaling Technology</td>
			<td>4695</td>
			<td>Reagents for immunohistological analysis</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:351px;">Anti-phospho-Erk1/2 antibody</td>
			<td>Cell Signaling Technology</td>
			<td>4370</td>
			<td>Reagents for immunohistological analysis</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:351px;">Anti-p27kip1 antibody</td>
			<td>Cell Signaling Technology</td>
			<td>3698</td>
			<td>Reagents for immunohistological analysis</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:351px;">Trichloroacetic acid</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>T9159</td>
			<td>Reagents for immunohistological analysis</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

murine aortic crush injury: an efficient in vivo model of smooth muscle cell proliferation and endothelial function

La reconstrucción arterial, ya sea angioplastia o cirugía de derivación, implica un traumatismo iatrogénico que causa disrupción endotelial y proliferación de células de músculo liso vascular (VSMC). Los modelos murinos comunes estudian vasos pequeños tales como las arterias carótida y femoral. Aquí se describe un sistema in vivo en el que tanto la proliferación VSMC y la función de la barrera endotelial pueden ser evaluados simultáneamente en un vaso grande. Se estudió la respuesta aórtica infrarrenal a la lesión en C57BL / 6 ratones. La aorta se lesionó de la vena renal izquierda a la bifurcación aórtica por 30 trituraciones transmurales de 5 segundos de duración con un aplicador con punta de algodón. Los cambios morfológicos se evaluaron con histología convencional. El grosor de la pared de la aorta se midió desde la superficie luminal hasta la adventicia. EdU integración y contador tinción con DAPI y alfa-actina se utilizó para demostrar VSMC proliferación. La activación de ERK1 / 2, un moderador conocido de la formación de hiperplasia intimal, fue disuadidaExtraído por Western Blot. El efecto de la inflamación se determinó mediante inmunohistoquímica para células B, células T y macrófagos . Se visualizaron secciones frontales de endotelio con microscopía electrónica de barrido (SEM). La función de la barrera endotelial se determinó con tinción con Evans Blue. La lesión transmural resultó en un espesamiento de la pared aórtica. Esta lesión inducida por la proliferación VSMC, más prominentemente a los 3 días después de la lesión, y la activación temprana de ERK1 / 2 y disminución de p27 kip1 expresión. La lesión no resultó en aumento de células B, células T o infiltración de macrófagos en la pared del vaso. La lesión causó la desnudación parcial de las células endoteliales y la pérdida del contacto célula-célula. La lesión resultó en una pérdida significativa de la función de la barrera endotelial, que regresó a la línea de base después de siete días. El modelo transmural de lesión aórtica romana transmural proporciona un sistema eficiente para estudiar simultáneamente tanto la proliferación VSMC como la función de la barrera endotelial en un vaso grande.

Se seccionaron las secciones transversales aorta incrustadas en PTU y se tiñeron con hematoxilina y eosina luego se tiñeron con tinción de Verhoeff-Van Gieson (VVG) para identificar la lámina elástica interna y externa 7 . La lesión por aplastamiento indujo el espesamiento de la pared aórtica en comparación con las aortas de los animales tratados con un procedimiento simulado (laparotomía y movilización del intestino delgado solo). El grosor de la pared,...

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Murine Aortic Crush Injury: An Efficient In Vivo Model of Smooth Muscle Cell Proliferation and Endothelial Function

La reestenosis después de los procedimientos cardiovasculares (cirugía de bypass, angioplastia o stent) es un problema significativo que reduce la durabilidad de estos procedimientos. Una terapia ideal inhibiría la proliferación de células de músculo liso (VSMC) mientras promovía la regeneración del endotelio. Describimos un modelo para la evaluación simultánea de la proliferación VSMC y la función endotelial in vivo.

Lesión por aplastamiento aórtico murino: una eficacia<em&gt; In Vivo</em&gt; Modelo de proliferación de células musculares lisas y función endotelial

Arterial reconstruction, whether angioplasty or bypass surgery, involves iatrogenic trauma causing endothelial disruption and vascular smooth muscle cell ...

Research

JoVE Journal

Biology

Murine Aortic Crush Injury: An Efficient In Vivo Model of Smooth Muscle Cell Proliferation and Endothelial Function

Focal Ca2+ Transient Detection in Smooth Muscle

Focal Ca2+ Transient Detection in Smooth Muscle

Focal Ca 2 + Detección de transitorios en el músculo liso

Ca2+ imaging of smooth muscle provides insight into cellular mechanisms that may not result in changes of membrane potential, such as the release of Ca2+ ...

Investigación

Biología

Isolation of Human Umbilical Arterial Smooth Muscle Cells (HUASMC)

Isolation of Human Umbilical Arterial Smooth Muscle Cells HUASMC

El aislamiento de los Derechos Humanos de la arteria umbilical células musculares lisas (HUASMC)

The human umbilical cord (UC) is a biological sample that can be easily obtained just after birth. This biological sample is, most of the time, discarded ...

Exploring Arterial Smooth Muscle Kv7 Potassium Channel Function using Patch Clamp Electrophysiology and Pressure Myography

Exploración del músculo liso arterial KV7 función del canal de potasio mediante electrofisiología Patch Clamp y miografía presión

Contraction  or relaxation of smooth muscle cells within the walls of resistance arteries  determines the artery diameter and thereby controls flow of ...

Evaluation of Muscle Function of the Extensor Digitorum Longus Muscle Ex vivo and Tibialis Anterior Muscle In situ in Mice

Evaluation of Muscle Function of the Extensor Digitorum Longus Muscle Ex vivo and Tibialis Anterior Muscle In situ in Mice

Evaluación de la función muscular del músculo extensor largo digitorum<em&gt; Ex vivo</em&gt; Y tibial anterior del músculo<em&gt; In situ</em&gt; En ratones

Body  movements are mainly provided by mechanical function of skeletal muscle. Skeletal  muscle is composed of numerous bundles of myofibers that are ...

Measurement of Smooth Muscle Function in the Isolated Tissue Bath-applications to Pharmacology Research

La medición de la función del músculo liso en el tejido aislado Bath-aplicaciones en Farmacología Investigación

Isolated tissue bath assays are a classical pharmacological tool for evaluating concentration-response relationships in a myriad of contractile tissues.  ...

Two-photon Imaging of Intracellular Ca2+ Handling and Nitric Oxide Production in Endothelial and Smooth Muscle Cells of an Isolated Rat Aorta

Two-photon Imaging of Intracellular Ca2+ Handling and Nitric Oxide Production in Endothelial and Smooth Muscle Cells of an Isolated Rat Aorta

De dos fotones de imágenes de Ca intracelular<sup&gt; 2 +</sup&gt; Manejo y producción de óxido nítrico en el endotelio y las células del músculo liso de la aorta de rata aislada

Calcium is a very important regulator of many physiological processes in vascular tissues. Most endothelial and smooth muscle functions highly depend on ...

Isolation and Primary Culture of Mouse Aortic Endothelial Cells

Aislamiento y cultivo primario de células endoteliales aórticas de ratón

The vascular endothelium is essential to normal vascular homeostasis. Its dysfunction participates in various cardiovascular disorders. The mouse is an ...

Isolation of Murine Coronary Vascular Smooth Muscle Cells

Aislamiento de murino coronaria células musculares lisas vasculares

While the isolation and culture of vascular smooth muscle cells (VSMCs) from large vessels is well established, we sought to isolate and culture VSMCs ...

The Murine Choline-Deficient, Ethionine-Supplemented (CDE) Diet Model of Chronic Liver Injury

The Murine Choline-Deficient, Ethionine-Supplemented CDE Diet Model of Chronic Liver Injury

El murino colina deficientes, suplementada con Ethionine (CDE) dieta de modelo de la lesión hepática crónica

Chronic liver diseases, such as viral hepatitis, alcoholic liver disease, or non-alcoholic fatty liver disease, are characterized by continual ...

Measuring Proliferation of Vascular Smooth Muscle Cells Using Click Chemistry

Medición de la proliferación de células musculares lisas vasculares mediante la química de clics

The ability of a cell to proliferate is integral to the normal function of most cells, and dysregulation of proliferation is at the heart of many disease ...