Name: quantification of drosophila grooming behavior
Uploaded: 2017-07-19T12:30:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Quantification of Drosophila Grooming Behavior at JoVE.com

نود أن نشكر براين شيبيرد، تات أودومريتثيروج، آرون ويلي، روبي فروم، إليز بيتمون، وروز هدرين للعمل المبكر في اختبار ووضع هذه المنهجية وتصاميم الغرفة. نشكر كيلي تليز وجراهام بوكان لقراءة وتحرير المخطوطة. نشكر أندرو البذور وجولي سيمبسون لعملهم الرائد والمشورة والدعم في اقتراح استخدام الصبغة الصفراء الرائعة (سيغما). ويدعم هذا العمل جزئيا من قبل ماري E. غروف الجراحية والبحوث الطبية والتعليم الخيرية الثقة، ومركز العلوم برونفمان، وبرنامج الزملاء هلمان.

1. إعداد <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إعداد الشافطة لتحريك ذبابة الفاكهة الحية من قارورة ثقافة إلى غرفة الاستمالة. تسمح الشافطات بنقل الحيوانات الواعية إلى الغرف السلوكية للتأكد من أن التخدير لا يؤثر على الملاحظة السلوكية اللاحقة. ...

<ol>
	<li>Szebenyi, A. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cleaning+Behaviour+in+Drosophila-Melanogaster.">Cleaning Behaviour in Drosophila-Melanogaster.</a> Animal. Behaviour. 17, (1969).</li><li>Corfas, G., Dudai, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Habituation+and+dishabituation+of+a+cleaning+reflex+in+normal+and+mutant+Drosophila.">Habituation and dishabituation of a cleaning reflex in normal and mutant Drosophila.</a> J Neurosci. 9 (1), 56-62 (1989).</li><li>Yanagawa, A., Guigue, A. M. A., Marion-Poll, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hygienic+grooming+is+induced+by+contact+chemicals+in+Drosophila+melanogaster.">Hygienic grooming is induced by contact chemicals in Drosophila melanogaster.</a> Frontiers in Behavioral Neuroscience. 8, (2014).</li><li>Dawkins, R., Dawkins, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hierarchical+Organization+and+Postural+Facilitation+-+Rules+for+Grooming+in+Flies.">Hierarchical Organization and Postural Facilitation - Rules for Grooming in Flies.</a> Animal Behaviour. 24 (Nov), 739-755 (1976).</li><li>Seeds, A. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+suppression+hierarchy+among+competing+motor+programs+drives+sequential+grooming+in+Drosophila.">A suppression hierarchy among competing motor programs drives sequential grooming in Drosophila.</a> Elife. 3, e02951 (2014).</li><li>King, L. B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Neurofibromin+Loss+of+Function+Drives+Excessive+Grooming+in+Drosophila.">Neurofibromin Loss of Function Drives Excessive Grooming in Drosophila.</a> G3-Genes Genomes Genetics. 6 (4), 1083-1093 (2016).</li><li>Tauber, J. M., Vanlandingham, P. A., Zhang, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Elevated+Levels+of+the+Vesicular+Monoamine+Transporter+and+a+Novel+Repetitive+Behavior+in+the+Drosophila+Model+of+Fragile+X+Syndrome.">Elevated Levels of the Vesicular Monoamine Transporter and a Novel Repetitive Behavior in the Drosophila Model of Fragile X Syndrome.</a> Plos One. 6 (11), e27100 (2011).</li><li>Kaur, K., Simon, A. F., Chauhan, V., Chauhan, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effect+of+bisphenol+A+on+Drosophila+melanogaster+behavior--a+new+model+for+the+studies+on+neurodevelopmental+disorders.">Effect of bisphenol A on Drosophila melanogaster behavior--a new model for the studies on neurodevelopmental disorders.</a> Behav Brain Res. 284, 77-84 (2015).</li><li>Chang, H. Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Overexpression+of+the+Drosophila+vesicular+monoamine+transporter+increases+motor+activity+and+courtship+but+decreases+the+behavioral+response+to+cocaine.">Overexpression of the Drosophila vesicular monoamine transporter increases motor activity and courtship but decreases the behavioral response to cocaine.</a> Molecular Psychiatry. 11 (1), 99-113 (2006).</li><li>Yellman, C., Tao, H., He, B., Hirsh, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Conserved+and+sexually+dimorphic+behavioral+responses+to+biogenic+amines+in+decapitated+Drosophila.">Conserved and sexually dimorphic behavioral responses to biogenic amines in decapitated Drosophila.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 94 (8), 4131-4136 (1997).</li><li>Feng, G. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cloning+and+functional+characterization+of+a+novel+dopamine+receptor+from+Drosophila+melanogaster.">Cloning and functional characterization of a novel dopamine receptor from Drosophila melanogaster.</a> Journal of Neuroscience. 16 (12), 3925-3933 (1996).</li><li>Gotzes, F., Balfanz, S., Baumann, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Primary+Structure+and+Functional-Characterization+of+a+Drosophila+Dopamine-Receptor+with+High+Homology+to+Human+D(1/5).">Primary Structure and Functional-Characterization of a Drosophila Dopamine-Receptor with High Homology to Human D(1/5).</a> Receptors. Receptors &amp; Channels. 2 (2), 131-141 (1994).</li><li>Han, K. A., Millar, N. S., Grotewiel, M. S., Davis, R. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=DAMB,+a+novel+dopamine+receptor+expressed+specifically+in+Drosophila+mushroom+bodies.">DAMB, a novel dopamine receptor expressed specifically in Drosophila mushroom bodies.</a> Neuron. 16 (6), 1127-1135 (1996).</li><li>Sugamori, K. S., Demchyshyn, L. L., Mcconkey, F., Forte, M. A., Niznik, H. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+Primordial+Dopamine+D1-Like+Adenylyl+Cyclase-Linked+Receptor+from+Drosophila-Melanogaster+Displaying+Poor+Affinity+for+Benzazepines.">A Primordial Dopamine D1-Like Adenylyl Cyclase-Linked Receptor from Drosophila-Melanogaster Displaying Poor Affinity for Benzazepines.</a> Febs Letters. 362 (2), 131-138 (1995).</li><li>Pitmon, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+D1+family+dopamine+receptor,+DopR,+potentiates+hind+leg+grooming+behavior+in+Drosophila.">The D1 family dopamine receptor, DopR, potentiates hind leg grooming behavior in Drosophila.</a> Genes Brain and Behavior. 15 (3), 327-334 (2016).</li><li>Phillis, R. W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Isolation+of+mutations+affecting+neural+circuitry+required+for+grooming+behavior+in+Drosophila+melanogaster.">Isolation of mutations affecting neural circuitry required for grooming behavior in Drosophila melanogaster.</a> Genetics. 133 (3), 581-592 (1993).</li><li>Hampel, S., Franconville, R., Simpson, J. H., Seeds, A. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+neural+command+circuit+for+grooming+movement+control.">A neural command circuit for grooming movement control.</a> Elife. 4, e08758 (2015).</li><li>Kays, I., Cvetkovska, V., Chen, B. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Structural+and+functional+analysis+of+single+neurons+to+correlate+synaptic+connectivity+with+grooming+behavior.">Structural and functional analysis of single neurons to correlate synaptic connectivity with grooming behavior.</a> Nature Protocols. 9 (1), 1-10 (2014).</li></ol>

المقايسة هي واضحة نسبيا، ولكننا نحرص المجربين على إيلاء اهتمام خاص إلى القضايا التالية. الحفاظ على ختم ضيق عن طريق تشديد مسامير على أعلى وأسفل لوحات بعد إدخال الذباب وصبغ ضروري للنتائج استنساخه. الصبغة الصفراء الرائعة هي غرامة جدا والمفاصل فضفاضة تسمح خسائر الصبغة ?...

الاستمالة في ذبابة الفاكهة ميلانوغاستر ( D. ميلانوغاستر ) هو السلوك الفطري قوية التي تنطوي على تنسيق برامج المحركات المستقلة متعددة 1 . الفاكهة الذباب تنظيف أجسادهم من الغبار والميكروبات، ومسببات الأمراض الأخرى التي يمكن أن تمنع وظيفة فسيولوجية طبيعية مثل الرؤية والطيران، أو تؤدي إلى تحديات مناعية كبيرة. في الاستشعار والاستجابة لكل من الميكانيكية 2 والتنشيط المناعي 3 ، الذباب تتكاثر ساقيه بشكل متكرر أو على منطقة الجسم المستهدف حتى أنها نظيفة بما فيه الكفاية والاستمالة تقدم إلى جزء آخر من الجسم. الذباب أداء الحركات الاستمالة في نوبات متميزة التي تحدث إلى حد كبير في أنماط نمطية 1 ، 4 . ويظهر التسلسل الهرمي السلوكي كما يتم إعطاء الأولوية لإشارات التهيأ. وقد تم تحديد الدوائر وأنماط النشاط في دعم oفا نموذج أن برامج الاستمالة في الجزء العلوي من التسلسل الهرمي تحدث أولا وقمع إشارات موازية من مناطق الجسم التي يتم إعدادها في وقت لاحق 5 . وتعطى أولوية قصوى للرأس، ثم البطن، والأجنحة، وأخيرا الصدر 5 . برنامج الاستمالة في D. ميلانوغاستر هو نظام مثالي لدراسة الدوائر العصبية، والإشارات الجزيئية مودولاتوري، والناقلات العصبية. على سبيل المثال، حل وسط من وظيفة النيوروفيبرومين 6 ، وفقدان ذبابة الفاكهة هشة X التخلف العقلي البروتين ( dfmr1 ) 7 ، والتعرض لالبسفينول A (ببا) 8 كل سبب الاستمالة المفرطة والسلوكيات الأخرى التي هي مماثلة لأعراض بشرية منفصلة من الورم العصبي الليفي، والمتلازمة، وجوانب اضطرابات طيف التوحد واضطراب فرط الحركة ونقص الانتباه (أدهد)، على التوالي. السلوك الاستمالة يمكن أيضا أن يكون هابيتواتيد تفاضليا عبر سلالات متحولة 2 ، والإقراض هذا البرنامج الحركي لدراسات اللدونة السلوكية. اتساع الظواهر العصبية التي يمكن أن تكون نموذجا من قبل ذبابة الفاكهة يتطلب نهجا مقارنة جديدة لقياس قدرة الذباب على العريس أنفسهم. وقد تبين العمل المشترك من الناقلين أحادي الأمين الحويصلة وفرة النسبية من الدوبامين والأمينات الحيوية الأخرى في الجسم للتوسط ذبابة الفاكهة السلوك الاستمالة 9 ، 10 . أوكتوبامين والدوبامين تحفز نشاط الاستمالة هيندليغ مماثلة في الذباب ديكابيتاتد، في حين أن تيرامين، السلائف من أوكتوبامين، يؤدي أيضا الاستمالة إلى حد أقل 7 . تم التعرف على أربعة مستقبلات الدوبامين في D. ميلانوغاستر 11 ، 12 ، 13 ، 14 </sup&gt;. باستخدام طريقة الفحص الاستمالة وصفها في هذا البروتوكول، قررنا دورا لنوع الأول دوبامين الأسرة مستقبلات دوبر ( دوبر، DDA1، البكم ) في السلوك الاستمالة هيندليغ 15 . الاستمالة يمكن أن يكون كميا بشكل غير مباشر من خلال النظر في مدى النظافة التي الحيوان يمكن أن العريس تماما بعد غبار الجسم كله مع صبغ علامة أو غبار الفلورسنت 5 ، 16 . ما تبقى من الغبار اليسار على الجسم يمكن أن تستخدم علامة النسبية للسلوك العام. الذباب الغبار بعد إعطاء الوقت الكافي للعريس قد يظهر عجزا محددا في سلوك الاستمالة. كما أصبحت الاستمالة التحقيقات أكثر اتساعا، وأدرجت بروتوكولات مثل ممارسات قطع الرأس لإضافة العلاجات الدوائية على الرقبة الأعصاب الضامة 10 ، التحفيز عن طريق اللمس من شعيرات لانتزاع استجابة الاستمالة 2 ،وتسجيل الفيديو من السلوك 15 . الملاحظة المباشرة من الاستمالة يمكن دراستها بسهولة باستخدام المراقبة البصرية وتسجيل يدويا وتيرة ومدة الأحداث الاستمالة محددة 4 . قمنا بتصميم غرفة الاستمالة خمسة عشر جيدا التي يمكن بناؤها مع طابعة 3D أو الليزر القاطع، وتصاميم المخطط متوفرة للاستنساخ 15 . تصميم يستخدم اثنين من لوحات الوسطى انضم مع فتحات المتطابقة وفصلها عن طريق شبكة واثنين من انزلاق لوحات أعلى وأسفل إضافية، والتي يتم تحميل الذباب و / أو الصبغة، على التوالي. بعد السماح للذباب الذباب الوقت العريس، ونحن إيداعها في الإيثانول لذوبان الصبغة وقياس امتصاص هذا الحل في الطول الموجي للصبغة. قارئ لوحة يمكن استخدامها لعينات موازية متعددة أو مقياس واحد قراءة يمكن استخدامها لعينات الفردية. هذا الأسلوب يقلل من الخطأ الناجم عن المناولة و آلانخفاض مستويات المقايسات التي يتم تشغيلها على نطاق أصغر، وكفاءة من حيث التكلفة. يتم اشتقاق هذه الطريقة وتعديلها من أساليب رائدة من قبل جولي سيمبسون وأندرو البذور، الذين يستخدمون غرف الاستمالة أكبر مع عناصر التدفئة لدرجات الحرارة الحساسة التلاعب 5 . بروتوكول التالية يعرض الكمي من الاستمالة من الجسم كله، فضلا عن عرض أساليب بديلة لكميات تراكم الصبغة على أجزاء الجسم الفردية. كما نقدم عينة من بيانات المقارنة بين المسوخ وت ودوبر ، وكذلك طرق لحساب مؤشر أداء بسيط لسلوك الاستمالة.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>High-Flex Tygon PVC Clear Tubing</td>
			<td>McMaster-Carr</td>
			<td>5229K54</td>
			<td>ID 1/8&#34;, OD 1/4&#34;, used with micropipettor tips and mesh to construct mouth aspirators</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Micropipette tips (1ml and 200ul)</td>
			<td>Genesee Scientific</td>
			<td>24-165, 24-150R</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Nylon Mesh Screen, 2&#34; x 2.6&#34;</td>
			<td>McMaster-Carr</td>
			<td>9318T44</td>
			<td>Used to construct grooming chamber and mouth aspirators</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dumont #5 Forceps</td>
			<td>Roboz Surgical Instrument</td>
			<td>RS-5050</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Brilliant Yellow Dye</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>201375-25G</td>
			<td>we recommend use of nitrile gloves while handling this product</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Vortexer</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>12-812</td>
			<td>set to &#34;touch&#34;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ethanol</td>
			<td>Carolina Biological Supply</td>
			<td>86-1282</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>1.5 ml microcentrifuge tubes</td>
			<td>VWR International</td>
			<td>10025-726</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>0.65 ml microcentrifuge tubes</td>
			<td>VWR International</td>
			<td>20170-293</td>
			<td>tubes can be reused with successive assays</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>UV 96 well plate</td>
			<td>Corning</td>
			<td>26014017</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BioTek Synergy HTX Platereader</td>
			<td>BioTek</td>
			<td>need to download catalog to access product number</td>
			<td>http://www.biotek.com/products/microplate_detection/synergy_htx_multimode_microplate_reader.html?tab=overview</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Gen5 Microplate Reader and Imager Software</td>
			<td>BioTek</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microsoft Excel</td>
			<td>Microsoft</td>
			<td></td>
			<td>https://www.microsoftstore.com/store/msusa/en_US/pdp/Excel-2016/productID.323021400?tduid=(65d098c0e83b86c952bdff5b0719c83f)(256380)(2459594)(SRi0yYDlqd0-LI..ql4M2LoZBEhcBljvIA)()</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Drosophila Incubator</td>
			<td>Tritech</td>
			<td>DT2-CIRC-TK</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>1/4&#34; acrylic plastic</td>
			<td>McMaster-Carr</td>
			<td>8473K341</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>8-32 nuts</td>
			<td>McMaster-Carr</td>
			<td>90257A009</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>8-32 x 1&#34; hex cap screws</td>
			<td>McMaster-Carr</td>
			<td>92185A199</td>
			<td>the bottom plate needs to be tapped for this size screw</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>8-32 x 1/2&#34; hex cap screws</td>
			<td>McMaster-Carr</td>
			<td>92185A194</td>
			<td>the second plate from the top needs to be tapped</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>2-56 3/8&#34; flat head phillips machine screws</td>
			<td>McMaster-Carr</td>
			<td>91500A088</td>
			<td>these hold the two middle plates together</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>0.175&#34; ID, 1/4&#34; OD, 0.34&#34; aluminum pipe</td>
			<td>McMaster-Carr</td>
			<td>92510A044</td>
			<td>Manufactured in-house; product listed is approximately the same dimensions and should work for size 8 screws.&#160; These act as sheaths for the 1&#34; screws and set the hex cap up slightly from the surface of the top plate</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

quantification of drosophila grooming behavior

سلوك الاستمالة ذبابة الفاكهة هو برنامج حركي متعدد الخطوات المعقدة التي تتطلب حركة منسقة من كل من الأفرع و هيندليغس. هنا نقدم بروتوكول الفحص الاستمالة وتصميم غرفة الرواية التي هي فعالة من حيث التكلفة وقابلة للدراسات الصغيرة أو الكبيرة على نطاق واسع من الاستمالة ذبابة الفاكهة . يتم غبار الذباب في جميع أنحاء الجسم مع صبغ أصفر باهر وإعطاء الوقت لإزالة الصبغة من أجسادهم داخل الغرفة. ثم تودع الذباب في حجم مجموعة من الإيثانول لذوبان الصبغة. يتم قياس وتسجيل الامتصاصية الطيفية النسبية لعينات الصبغة الإيثانول للحيوانات المستعد مقابل الحيوانات غير المستغلة. بروتوكول ينتج بيانات كمية من تراكم الصبغة للذباب الفردية، والتي يمكن بسهولة متوسط ​​ومقارنة عبر العينات. وهذا يسمح التصاميم التجريبية لتقييم بسهولة القدرة الاستمالة للدراسات الحيوانية متحولة أو التلاعب الدائرة. هذا الإجراء الفعال على حد سواء تنوعا وقابلة للتطوير. نظهر wأورك تدفق البروتوكول والبيانات المقارنة بين الحيوانات وت الحيوانات المتحولة لنوع ذبابة الفاكهة I مستقبلات الدوبامين ( دوبر ).

اختبار الاستمالة ينتج بيانات كمية لتقييم الأداء السلوكي على أساس المتبقية النسبية من الصبغة المتراكمة المتبقية على أجسام الذباب بعد وقت محدد من القياس للاستمالة (30 دقيقة). يتم تسليط الضوء على الصور عينة من انزلاق تصميم غرفة الاستمالة والخطوات الرئ...

Watch this Scientific Journal Video about Quantification of Drosophila Grooming Behavior at JoVE.com

Quantification of Drosophila Grooming Behavior

يصف هذا البروتوكول تقنية التحجيم الفردي الاستجالة قابلة للتحلل في ذبابة الفاكهة التي تعطي بيانات قوية، كمية لقياس السلوك الاستمالة. ويستند هذا الأسلوب على مقارنة الفرق في تراكم الصبغة على جثث الحيوانات غير مستعد مقابل الحيوانات على مدى فترة محددة من الزمن.

الكمي للسلوك الاستمالة ذبابة الفاكهة

Drosophila grooming behavior is a complex multi-step locomotor program that requires coordinated movement of both forelegs and hindlegs. Here we present a ...

The overall goal of this method is to measure the grooming behavior of Drosophila by quantifying and comparing the remainder of colored brilliant yellow dye on the body of the animals in groomed and ungroomed conditions. This method can help answer key questions in the field of neurobiology and behavioral genetics such as the coordination of fine locomotive skills and the associated molecular regulators and circuits. The main advantage is as of this technique, are that it's rapid, robust and easy to perform by many experimentalists and students at a variety of skill levels.Demonstrating this procedure will be Frankie Barradale, a student in my laboratory. To begin the experiment, prepare an aspirator to move live Drosophila from a culture vial to the grooming chamber. Using scissors, cut 1.5 feet of Tygon tubing.Cut at least one inch of the tip of a one milliliter disposable micro-pipette tip and hold the one centimeter square piece of mesh over the 196 inch opening of the cut tip. Snugly place a fresh, one milliliter micro-pipette tip over the mesh and cut tip to create a holding chamber for flies. Cut the extreme tip of the new micro-pipette tip to widen the opening enough to allow the passage of a single fly.The hole will roughly match the opening of the grooming chamber. Snugly fit the nested tips onto the end of the Tygon tubing. Push the tips into the tube to ensure a tight fit to allow for vacuum pressure.On the other end of the tubing, cut the tip of a 200 milliliter micro-pipette tip and fit the narrow cut end into the tubing to form the mouth side of the aspirator. To prepare dust aliquot tubes, weigh five milligrams of brilliant yellow dye on weighing paper. Pour the dust into a 8 milliliter micro-centrifuge tube and tightly close the cap.Next, to prepare ethanol tubes, pipette one milliliter of 100%ethanol into 15 milliliter micro-centrifuge tubes. Label the tubes, cap and save the ethanol tubes for completion of the grooming assay. Also include at least one blank sample with only one milliliter of ethanol without a fly for negative controls.Assemble each grooming chamber by screwing the sliding top plate with the smaller holes, but leaving the bottom plate with the larger holes removed for the addition of the dust. Place each necessary grooming chamber flat on a table with the top face-down. Load five milligrams of brilliant yellow dye aliquot into each chamber, by tapping the tube against the surface of the chamber above the desired well.Tap the chamber against the table to ensure that all the dust falls through the mesh to the top of the plate. Then screw the bottom plate onto each chamber, so the wider ends of the conical openings face outward and the holes do not rest over the wells. Secure the bottom plate tightly, so that it does not slide and release dye.Flip the chamber over and knock it flat against the table a few times so that the dust falls through the mesh to rest on the bottom plate. Slide the top plate of the chamber into the open positions that the small holes align with the 15 wells, allowing the introduction of flies into the individual wells. Load one fly into the mouth aspirator by gently sucking through one end of the aspirator as if using a straw.Deposit the flies by lightly blowing and directing the opening toward the target. After loading a well, slide the top plate so that the fly is trapped in the chamber and place tape over the opening of the well during the loading of the hole chamber, to prevent the fly's escape while loading the other wells. If multiple flies are aspirated into a single well, leave that opening uncovered until only one fly remains.After all of the necessary wells are filled with flies, flip the chamber so that the bottom plate is upward and the dust has the potential to coat the flies by falling through the mesh. Tightly secure the top and bottom plates by tightening the screws and vortex the chamber to dust the flies for four seconds. Knock the chamber, top plate face-down against the table twice, so that the dye falls through the other side.Then, flip the chamber over, top plate face-up and knock the chamber twice, to ensure dye settles on the floor of the bottom chamber, away from the fly, held in the top chamber. For control flies, which are not allowed to groom, immediately proceed to sample preparation. Rest the chamber flat on the table or countertop, with the top plate upward for 30 minutes to allow the flies to groom.Place the chamber in a noise vibration free space, to keep your environment constant for all grooming experiments. Keeping the chamber level with the top plate upward, gently unscrew the bottom plate and remove it from the chamber, taking care not to lose any dye. Place the chamber on a CO2 pad with low air flow until the flies are anesthetized.Unscrew the top plate from the chamber, carefully use forceps to grab a leg and remove one dusted fly from each chamber and deposit it in a 1.5 milliliter micro-centrifuge tube containing ethanol. Once each micro-centrifuge tube contains one fly, close the cap and invert the tubes three times to agitate and mix the solution of dye and ethanol. Incubate the tubes containing ethanol and flies for five hours at room temperature to ensure full removal of the dye from the fly into solution.After five hours, briefly vortex each tube for two seconds to ensure clearance of the dyes from the flies. Aliquot 50 microliters of the experimental 1.5 milliliter tube into a well of a 96 well plate, taking note of the location of each sample on the plate. Add 200 microliters of ethanol to dilute the sample five times to avoid sealing effects of heavily dusted flies or large grooming defects.Use a plate reader to analyze each sample at 397 nanometers. Record the sample through the plate reader and save the spreadsheet with the recording samples on the plate. We used this method to study DopR by comparing the grooming performance of a strong hypomorph and to null DopR mutants to a wild type strain.The DopR mutants retained significantly more dye than their wild type of rescued counterparts, indicating that the DopR mutants were less efficient at grooming behavior. In a parallel experiment of Rutabaga flies, mutants display the higher dye accumulation levels than DopR mutants, suggesting a significant role of DopR in grooming behavior. After watching this video, you should have a good understanding of how to handle flies for behavioral assays and also measure the grooming behavior.

Research

JoVE Journal

Neuroscience

Single Sensillum Recordings in the Insects Drosophila melanogaster and Anopheles gambiae

Single Sensillum Recordings in the Insects Drosophila melanogaster and Anopheles gambiae

تسجيلات Sensillum واحدة في الحشرات ذبابة الفاكهة السوداء البطن و الأنوفيلة الغامبية</em

The sense of smell is essential for insects to find foods, mates, predators, and oviposition sites3. Insect olfactory sensory neurons (OSNs) are enclosed ...

Simultaneous Recording of Calcium Signals from Identified Neurons and Feeding Behavior of Drosophila melanogaster

Simultaneous Recording of Calcium Signals from Identified Neurons and Feeding Behavior of Drosophila melanogaster

في وقت واحد من تسجيل إشارات الكالسيوم من الخلايا العصبية التي تم تحديدها وسلوك التغذية من ذبابة الفاكهة السوداء البطن</em

To study neuronal networks in terms of their function in behavior, we must analyze how neurons operate when each behavioral pattern is generated.  Thus, ...

Methods to Assay Drosophila Behavior

Methods to Assay Drosophila Behavior

طرق الفحص ذبابة الفاكهة سلوك

Drosophila melanogaster, the fruit fly, has been used to study molecular mechanisms of a wide range of human diseases such as cancer, cardiovascular ...

Optogenetic Stimulation of Escape Behavior in Drosophila melanogaster

Optogenetic Stimulation of Escape Behavior in Drosophila melanogaster

Optogenetic تحفيز السلوك في الهروب<em&gt; ذبابة الفاكهة الدروسوفيلا</em

A  growing number of genetically encoded tools are becoming available that allow non-invasive  manipulation of the neural activity of specific neurons in ...

A Single-fly Assay for Foraging Behavior in Drosophila

A Single-fly Assay for Foraging Behavior in Drosophila

واحدة ذبابة الفحص لسلوك البحث عن الطعام في<em&gt; ذبابة الفاكهة</em

For many animals, hunger promotes changes in the olfactory system in a manner that facilitates the search for appropriate food sources. In this video ...

Straightforward Assay for Quantification of Social Avoidance in Drosophila melanogaster

Straightforward Assay for Quantification of Social Avoidance in Drosophila melanogaster

الفحص مباشرة للالكمي لتجنب الاجتماعي في<em&gt; ذبابة الفاكهة السوداء</em

Drosophila melanogaster is an emerging model to study different aspects of social interactions. For example, flies avoid areas previously occupied by ...

Dyeing Insects for Behavioral Assays: the Mating Behavior of Anesthetized Drosophila

Dyeing Insects for Behavioral Assays: the Mating Behavior of Anesthetized Drosophila

الصباغة الحشرات لفحوصات السلوكية: في سلوك التزاوج من تخدير<em&gt; ذبابة الفاكهة</em

Mating experiments using Drosophila have contributed greatly to the understanding of sexual selection and behavior. Experiments often require simple, easy ...

High-resolution Quantification of Odor-guided Behavior in Drosophila melanogaster Using the Flywalk Paradigm

High-resolution Quantification of Odor-guided Behavior in Drosophila melanogaster Using the Flywalk Paradigm

عالية الدقة الكمي للسلوك رائحة الموجهة في<em&gt; ذبابة الفاكهة السوداء البطن</em&gt; استخدام<em&gt; Flywalk</em&gt; بارادايم

In their natural environment, insects such as the vinegar fly Drosophila melanogaster are bombarded with a huge amount of chemically distinct odorants. To ...

Using Linear Agarose Channels to Study Drosophila Larval Crawling Behavior

Using Linear Agarose Channels to Study Drosophila Larval Crawling Behavior

عن طريق القنوات الخطي الاغاروز لدراسة<em&gt; ذبابة الفاكهة</em&gt; اليرقات الزحف السلوك

Drosophila larval crawling is emerging as a powerful model to study neural control of sensorimotor behavior. However, larval crawling behavior on flat ...