Name: preparation of non-human primate brain tissue for pre-embedding immunohistochemistry and electron microscopy
Uploaded: 2017-04-03T13:00:00
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इस अध्ययन प्राकृतिक विज्ञान और (मध्य प्रदेश के NSERC, 401,848-2011) कनाडा के इंजीनियरिंग अनुसंधान परिषद द्वारा समर्थित किया गया। सांसद Fonds डे Recherche du Québec-Santé (FRQ-एस) से एक कैरियर पुरस्कार प्राप्त किया। ले FRQ-S (FRQ-एस 14D 29,441) से एक डॉक्टरल फेलोशिप से सम्मानित किया गया। हम तकनीकी सहायता के लिए मैरी-जोस Wallman धन्यवाद।

आचार कथन: जानवरों से जुड़े सभी प्रोटोकॉल Comité डी संरक्षण des Animaux डे ल Université Laval द्वारा अनुमोदित किया गया और देखभाल और उपयोग प्रायोगिक पशु की (सं 2।) करने के लिए पशु की देखभाल की गाइड पर कनाडा परिषद के अनुसार किए ग?...

इस अनुच्छेद में, हम गैर मानव प्राइमेट और ईएम नमूना परीक्षा के लिए उपयुक्त पूर्व एम्बेडिंग इम्युनोहिस्टोकैमिस्ट्री के transcardiac छिड़काव के लिए एक विश्वसनीय प्रोटोकॉल प्रस्तुत करते हैं। हालांकि ठेठ क्रा?...

कोंफोकल और दो फोटॉन माइक्रोस्कोपी सहित प्रकाश माइक्रोस्कोपी,, विवो न्यूरोनल प्रक्रियाओं में अध्ययन, अन्य बातों के 1 के बीच 2 के लिए एक कुशल उपकरण साबित हो गया है। हालांकि प्रकाश सूक्ष्म (एल एम) के स्तर पर ठेठ स्थानिक संकल्प लगभग 200 एनएम, हाल ही में तकनीकी विकास इस तरह के चरम पराबैंगनी और नरम एक्स-रे माइक्रोस्कोपी के रूप में विभिन्न प्रकाश स्रोतों, उपयोग कर रहा है, विशेष रूप से एक लगभग 10 एनएम स्थानिक संकल्प 3 को यह संकल्प में वृद्धि हुई है , 4, 5। इमेजिंग में अन्य तकनीकी विकास संयुक्त ऊतक विज्ञान के साथ चुंबकीय अनुनाद इमेजिंग और विवो में माइलिन आवरण, एक पैरामीटर है कि केवल इलेक्ट्रॉन सूक्ष्म (EM) स्तर 6, 7 में पारंपरिक रूप से औसत दर्जे का था की मोटाई मापने के लिए एक उपन्यास विधि प्रदान करना शामिल है। Although एल एम स्तर पर इन अग्रिमों ऐसे synaptic संपर्कों के रूप में रहने वाले प्रक्रियाओं, संरचनाओं का एक विस्तृत विवरण और लक्षण वर्णन, अध्ययन के लिए एक उत्कृष्ट उपकरण प्रदान करते हैं केवल ईएम, एक प्रस्ताव है कि 0.5 एनएम तक पहुँच सकते हैं प्रदान करता है जो के साथ प्राप्त किया जा सकता है। हालांकि, ईएम स्तर पर अवलोकन मर चुका है और बदल दिया, रासायनिक fixatives और निर्जलीकरण प्रक्रियाओं के साथ, कुछ मायनों में होने के लिए cytoarchitecture बचाने के लिए नमूनों की आवश्यकता है। इस प्रकार, उच्च संकल्प पर जैविक नमूनों की जांच इलेक्ट्रॉन बीम से विकिरण क्षति, कम विपरीत, झिल्ली की संरचनात्मक विचलन, या यहाँ तक कि कलाकृतियों कि निम्नलिखित निर्जलीकरण और epoxy 8, 9, 10 embedding हो सकता है की उपस्थिति के कारण चुनौतीपूर्ण हो सकता है। संरचनात्मक विश्लेषण के लिए अपने मूल रूप में नमूनों संरक्षण &quot;vitrified अनुभागों का क्रायो ईएम&quot; का उपयोग कर या CEMOVIS, एक सेक्शनिंग दृष्टिकोण से प्राप्त किया जा सकता है कितेजी से ठंड और कांच का बर्फ में नमूना एम्बेड करने और एक क्रायोजेनिक तापमान 11, 12 पर ईएम के तहत वर्गों की जांच शामिल है। यह प्रक्रिया इस प्रकार निर्जलीकरण की वजह से कलाकृतियों को नष्ट प्रक्रियाओं 13 वे अभी भी ठोस और पूरी तरह से हाइड्रेटेड हैं, जबकि नमूनों की जांच के लिए अनुमति देता है। हालांकि, इस विधि क्रम बहुत कम तापमान, जो महत्वपूर्ण अतिरिक्त लागत उत्पन्न पर इस अवलोकन अनुमति देने के लिए, क्रायो-ultramicrotomy के लिए अतिरिक्त उपकरणों, साथ ही मानक ईएम पर अतिरिक्त उपकरणों शामिल है। इसके अलावा, CEMOVIS दृष्टिकोण तकनीक immunolabeling, क्योंकि एंटीबॉडी आमतौर पर आर टी पर इनक्यूबेट किया जाना है के उपयोग के निवारण होता है। वैकल्पिक रूप से, यह एक फ्रीज प्रतिस्थापन दृष्टिकोण है, जिसके दौरान क्रायो-तय नमूनों धीरे धीरे जबकि क्रायो-सुरक्षात्मक रसायनों में immerged और वें हैं thawed हैं का उपयोग करके प्रतिरक्षाऊतकरसायन प्रक्रियाओं के साथ ultrastructural विश्लेषण गठबंधन करने के लिए संभव हैएन इस तरह के Lowicryls के रूप में विशेष रेजिन, में एम्बेडेड। पोस्ट-embedding immunolabeling तो ऐसी सामग्री 12 पर किया जा सकता। हालांकि, फ्रीज प्रतिस्थापन और क्रायो-निर्धारण तकनीक समय लगता है। वे अतिरिक्त उपकरणों की स्थापना की आवश्यकता है और अभी भी नमूने जैविक विलायक और रासायनिक बंधक कि cytoarchitecture को बदल सकते हैं को उजागर किया है, एक कम तापमान 14, 15 के उपयोग के बावजूद आवश्यकता होती है। इसलिए, दोनों एल एम और ईएम स्तर, मस्तिष्क के ऊतकों की रासायनिक निर्धारण, विशेष रूप से एक्रोलिन साथ सब पर तकनीकी विकास के बावजूद, ईएम 16 के साथ इम्युनोहिस्टोकैमिस्ट्री गठबंधन करने के लिए एक कम लागत और समय कुशल पद्धति बनी हुई है। पिछले दशकों में, कई प्रयासों के एल्डीहाइड है कि सबसे अच्छा ऊतक संरक्षण प्रदान का एक मिश्रण खोजने के लिए किए गए थे। 1960 के दशक से पहले, केवल रासायनिक बंधक कि ईएम के लिए स्वीकार्य परिणाम दे दी है आज़मियम tetroxide था। हालांकि, आज़मियम tetroxide, बेहद जहरीला और महंगा है इस तरह के मस्तिष्क के रूप में अंगों को ठीक करने के नाड़ी तंत्र के माध्यम से इसके उपयोग प्रतिबंधित। Acrolein पशु ऊतक सेलुलर संरचनाओं 17 के ईएम अवलोकन के लिए उपयुक्त संरक्षण के लिए एक विश्वसनीय पद्धति के रूप में 1950 के दशक में शुरू की गई थी। यह ऊतक और अधिक गहराई से प्रवेश और अन्य एल्डीहाइड जब विसर्जन द्वारा निर्धारण के लिए इस्तेमाल किया और cytoplasmic घटकों का अच्छा संरक्षण, ऊतक 17 के न्यूनतम संकोचन के साथ की अनुमति देता है तुलना में अधिक तेजी से प्रतिक्रिया करता है। इस तरह की एक विशेषता यह है जब ताजा ऊतक में प्रयोग किया जाता है, इस तरह के एंजाइम और अन्य प्रोटीन 18 के रूप में आणविक यौगिकों, जीने की एक और अधिक सटीक स्थानीयकरण अनुमति देकर एक्रोलिन निर्धारण अन्य एल्डीहाइड पर एक स्पष्ट लाभ देता है। वास्तव में, यह के रूप में यह कुशलतापूर्वक stabili, एक, आसान, कुशल और कम लागत उभयचर और कृन्तकों सहित कई प्रजातियों, में ईएम स्तर पर दृश्य के लिए निर्धारण की पद्धति के रूप में वर्षों के माध्यम से मान्य किया गया हैमाहिर पेप्टाइड और प्रोटीन, प्रतिजनकता को बरकरार रखे हुए है और जब एक और एल्डिहाइड साथ संयोजन में उपयोग लगानेवाला 16, 18, 19, 20, 21 अपेक्षाकृत बरकरार फैटी प्रदान करता है। कृन्तकों में एक्रोलिन निर्धारण के लिए प्रोटोकॉल तब से मानकीकृत और बड़े पैमाने पर इस्तेमाल, विशेष रूप से पिकेल समूह द्वारा, ईएम 16, 22 के लिए दोहरी immunolabeling लागू करने के लिए किया गया है। कुछ समूहों गैर मानव पशु मस्तिष्क के ऊतकों 23 में एक्रोलिन निर्धारण का इस्तेमाल किया है। हालांकि, हमारे ज्ञान करने के लिए, वहाँ केवल एक ही प्रकाशित प्रोटोकॉल कुशलतापूर्वक गैर मानव प्राइमेट में एक्रोलिन कि ईएम immunolabeling 24 के साथ संगत है के साथ रासायनिक निर्धारण का वर्णन है। इस अनुच्छेद में, हम एक आसान और विश्वसनीय तरीका कुशलता से रासायनिक गैर हम ठीक करने के लिए प्रदान करते हैंएक्रोलिन के साथ एक प्राइमेट दिमाग, पूर्व embedding immunolabeling और पारेषण ईएम परीक्षा के साथ-साथ एक संभावित लंबी अवधि के संरक्षण के लिए अनुमति देता है।

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" width="634">
	<tbody>
		<tr height="46">
			<td height="46" style="height:46px;width:216px;">Dibasic anhydrous sodium phosphate (Na2HPO4)</td>
			<td style="width:123px;">Fisher scientific</td>
			<td style="width:119px;">S374-500</td>
			<td style="width:177px;"></td>
		</tr>
		<tr height="67">
			<td height="67" style="height:67px;width:216px;">Monobasic monohydrate sodium phosphate (NaH2PO4.H2O)</td>
			<td style="width:123px;">EM Science</td>
			<td style="width:119px;">SX0710-1</td>
			<td style="width:177px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Sodium chloride (NaCl)</td>
			<td style="width:123px;">Fisher scientific</td>
			<td style="width:119px;">S271-3</td>
			<td style="width:177px;"></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">Hydroxymethyl aminomethane (THAM)</td>
			<td style="width:123px;">Fisher scientific</td>
			<td style="width:119px;">T370-500</td>
			<td style="width:177px;"></td>
		</tr>
		<tr height="63">
			<td height="63" style="height:63px;width:216px;">HCl&#160;</td>
			<td style="width:123px;">EMD</td>
			<td style="width:119px;">HX0603-3</td>
			<td style="width:177px;">1N dilution. Product is corrosive. Use with appropriate potection.</td>
		</tr>
		<tr height="63">
			<td height="63" style="height:63px;width:216px;">NaOH</td>
			<td style="width:123px;">EMD</td>
			<td style="width:119px;">SX0590-1</td>
			<td style="width:177px;">5N dilution. Product is corrosive. Use with appropriate protection.</td>
		</tr>
		<tr height="147">
			<td height="147" style="height:147px;width:216px;">Paraformaldehyde</td>
			<td style="width:123px;">Sigma</td>
			<td style="width:119px;">P6148</td>
			<td style="width:177px;">4% dilution. Product is highly volatile in its powder form and highly toxic. Use with caution under a venting hood with appropriate protection.</td>
		</tr>
		<tr height="84">
			<td height="84" style="height:84px;width:216px;">Acrolein (90%)</td>
			<td style="width:123px;">sigma</td>
			<td align="right" style="width:119px;">110221</td>
			<td style="width:177px;">3% dilution. Product is highly toxic. Use under a venting hood with appropriate protection.</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Autopsy venting table</td>
			<td style="width:123px;">Mopec</td>
			<td style="width:119px;">CE400</td>
			<td style="width:177px;"></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">Electronic perfusion pump</td>
			<td style="width:123px;">cole parmer</td>
			<td style="width:119px;">masterflex L/S 7523-90</td>
			<td style="width:177px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Needle (perfusion)</td>
			<td style="width:123px;">terumo&#160;</td>
			<td style="width:119px;">NN-1838R</td>
			<td style="width:177px;">18G 1 1/2</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Needle</td>
			<td style="width:123px;">terumo&#160;</td>
			<td style="width:119px;">NN-2713R</td>
			<td style="width:177px;">21G 1/2</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Ketamine</td>
			<td style="width:123px;"></td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td style="width:177px;">20 mg/kg</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Xylazine</td>
			<td style="width:123px;"></td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td style="width:177px;">4 mg/kg</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Acepromazine</td>
			<td style="width:123px;"></td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td style="width:177px;">0.5 mg/kg</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Scalpel</td>
			<td style="width:123px;"></td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td style="width:177px;"></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">Scalpel blades</td>
			<td style="width:123px;">Feather&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160; lance</td>
			<td style="width:119px;">201011&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160; J9913</td>
			<td style="width:177px;">No.22 for surgery and&#160;&#160;&#160; No. 11 for EM</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Surgical scissors</td>
			<td style="width:123px;"></td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td style="width:177px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Rongeurs</td>
			<td style="width:123px;"></td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td style="width:177px;"></td>
		</tr>
		<tr height="63">
			<td height="63" style="height:63px;width:216px;">Vibratome</td>
			<td style="width:123px;">Leica</td>
			<td style="width:119px;">VT 1200S</td>
			<td style="width:177px;">Calibrate blade before each use, when the device allows it</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Vibratome razor blade</td>
			<td style="width:123px;">Gillette</td>
			<td style="width:119px;">GIN 642107</td>
			<td style="width:177px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Glycerol</td>
			<td style="width:123px;">Fisher scientific</td>
			<td style="width:119px;">G33-4</td>
			<td style="width:177px;">30% dilution</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Ethylene glycol</td>
			<td style="width:123px;">Fisher scientific</td>
			<td style="width:119px;">E178-4</td>
			<td style="width:177px;">30% dilution</td>
		</tr>
		<tr height="25">
			<td height="25" style="height:25px;width:216px;">Sodium borohydride (NaBH4)</td>
			<td style="width:123px;">sigma</td>
			<td style="width:119px;">S-9125</td>
			<td style="width:177px;"></td>
		</tr>
		<tr height="63">
			<td height="63" style="height:63px;width:216px;">Normal horse serum</td>
			<td style="width:123px;">Jackson immunoResearch Laboratories</td>
			<td>008-000-121</td>
			<td style="width:177px;">2% dilution</td>
		</tr>
		<tr height="63">
			<td height="63" style="height:63px;width:216px;">Cold-fish gelatin</td>
			<td style="width:123px;">Aurion</td>
			<td style="width:119px;">900.033</td>
			<td style="width:177px;">0.5% dilution. Original product is concentrated at 40%</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">Primary antibody, SERT</td>
			<td style="width:123px;">Santa Cruz biotechnology</td>
			<td style="width:119px;">SC-1458</td>
			<td style="width:177px;">1/500 dilution</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">Primary antibody, ChAT</td>
			<td style="width:123px;">Chemicon (Millipore)</td>
			<td style="width:119px;">AB144P</td>
			<td style="width:177px;">1/25 dilution</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Primary antibody, TH</td>
			<td style="width:123px;">ImmunoStar</td>
			<td style="width:119px;">22941</td>
			<td style="width:177px;">1/1000 dilution</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">Biotinylated secondary antibody, goat</td>
			<td style="width:123px;">Vector laboratories</td>
			<td style="width:119px;">BA-9500</td>
			<td style="width:177px;">1/1000 dilution</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">Biotinylated secondary antibody, mouse</td>
			<td style="width:123px;">Vector laboratories</td>
			<td style="width:119px;">BA-2000</td>
			<td style="width:177px;">1/1000 dilution</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">Vectastain elite ABC kit</td>
			<td style="width:123px;">Vector laboratories</td>
			<td style="width:119px;">PK6100</td>
			<td style="width:177px;">8.8 &#181;L/mL of A and B each</td>
		</tr>
		<tr height="105">
			<td height="105" style="height:105px;width:216px;">3&#39;3 diaminobenzidine (DAB)</td>
			<td style="width:123px;">Sigma</td>
			<td style="width:119px;">D5637</td>
			<td style="width:177px;">0,05% dilution. Product is highly volatile in its powder form and toxic. Do not throw waste in the sink.</td>
		</tr>
		<tr height="25">
			<td height="25" style="height:25px;width:216px;">Peroxide (H2O2) 30%</td>
			<td style="width:123px;">Fisher scientific</td>
			<td style="width:119px;">H-323</td>
			<td style="width:177px;">0,005% dilution</td>
		</tr>
		<tr height="212">
			<td height="212" style="height:212px;width:216px;">Osmium tetroxide (OsO4)</td>
			<td style="width:123px;">Electron microscopic science</td>
			<td style="width:119px;">2% 19152&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160; 4% 19150&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;</td>
			<td style="width:177px;">Original solution can be either 2% ou 4%. Keep attention to which one is used to calculate the final 1% dilution. Product is very sensitive to light. Osmium is highly toxic. Use only under a venting hood with appropriate protection.</td>
		</tr>
		<tr height="189">
			<td height="189" style="height:189px;width:216px;">Durcupan water-repellent epoxy resin</td>
			<td style="width:123px;">sigma</td>
			<td style="width:119px;">A: M epoxy resin (44611)&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160; B: hardener 964 (44612)&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160; C: accelerator 960 (DY 060)&#160; (44613)&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160; D: plasticizer (44614)&#160;</td>
			<td style="width:177px;">Polymerize 48h at 58 &#176;C before throwing in waste.</td>
		</tr>
		<tr height="63">
			<td height="63" style="height:63px;width:216px;">Alumium cups</td>
			<td style="width:123px;">Electron microscopic science</td>
			<td style="width:119px;">70048-01</td>
			<td style="width:177px;"></td>
		</tr>
		<tr height="63">
			<td height="63" style="height:63px;width:216px;">Ethanol</td>
			<td style="width:123px;">commercial alcohols</td>
			<td style="width:119px;">1019C</td>
			<td style="width:177px;">Dilute in distilled water with appropriate concentration</td>
		</tr>
		<tr height="63">
			<td height="63" style="height:63px;width:216px;">Propylene oxide</td>
			<td style="width:123px;">Electron microscopic science</td>
			<td style="width:119px;">20401</td>
			<td style="width:177px;">Organic solvent. Highly volatile and toxic. Use under a venting hood.</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">Non-coated medium glass slides</td>
			<td style="width:123px;">brain research laboratories</td>
			<td style="width:119px;">3875-FR</td>
			<td style="width:177px;">Grease surface with mineral oil</td>
		</tr>
		<tr height="63">
			<td height="63" style="height:63px;width:216px;">Plastic film (Aclar embedding film)</td>
			<td style="width:123px;">Electron microscopic science</td>
			<td style="width:119px;">50425-25</td>
			<td style="width:177px;">Grease surface with mineral oil</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Ultramicrotome</td>
			<td style="width:123px;">Leica UC7</td>
			<td style="width:119px;">EM UC7</td>
			<td style="width:177px;"></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">Diamond trimming tool (ultratrim)</td>
			<td style="width:123px;">Diatome&#160;</td>
			<td style="width:119px;">UT 1081</td>
			<td style="width:177px;">Can use glass knife alternatively</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">Ultra 45&#176; Diatome Diamond knife</td>
			<td style="width:123px;">Diatome&#160;</td>
			<td style="width:119px;">MC13437</td>
			<td style="width:177px;">equipped with a boat</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Xylenes</td>
			<td style="width:123px;">Fisher scientific</td>
			<td style="width:119px;">X5SK-4</td>
			<td style="width:177px;"></td>
		</tr>
		<tr height="63">
			<td height="63" style="height:63px;width:216px;">150-mesh copper grids</td>
			<td style="width:123px;">Electron microscopic science</td>
			<td style="width:119px;">G150-cu</td>
			<td style="width:177px;"></td>
		</tr>
		<tr height="63">
			<td height="63" style="height:63px;width:216px;">grid-box</td>
			<td style="width:123px;">Electron microscopic science</td>
			<td style="width:119px;">71138</td>
			<td style="width:177px;">Can store up to 100 grids</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Sodium citrate</td>
			<td style="width:123px;">Anachemia</td>
			<td style="width:119px;">81983</td>
			<td style="width:177px;"></td>
		</tr>
		<tr height="336">
			<td height="336" style="height:336px;width:216px;">Lead nitrate</td>
			<td style="width:123px;">sigma</td>
			<td style="width:119px;">L-6258</td>
			<td style="width:177px;">Make a stock solution of lead citrate made of 1.33 g of lead nitrate and 1.76g of sodium citrate diluted in 42 mL of pre-boiled and cooled distilled water to which 8 mL of 1N NaOH are added after the conversion from lead nitrate to lead citrate is complete. pH should be approximately 12. Store solution in a hermetic plastic bottle and protect from light.</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Syringe</td>
			<td style="width:123px;">terumo&#160;</td>
			<td style="width:119px;">SS-05L</td>
			<td style="width:177px;">5 mL</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Syringe filter</td>
			<td style="width:123px;">corning</td>
			<td style="width:119px;">431222</td>
			<td style="width:177px;">0.2 &#181;m</td>
		</tr>
		<tr height="63">
			<td height="63" style="height:63px;width:216px;">Absorbing paper (bibulous paper)</td>
			<td style="width:123px;">Electron microscopic science</td>
			<td style="width:119px;">70086-1</td>
			<td style="width:177px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Parafilm</td>
			<td style="width:123px;">Laboratory film</td>
			<td style="width:119px;">PM-999</td>
			<td style="width:177px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Mineral oil</td>
			<td style="width:123px;">Sigma</td>
			<td style="width:119px;">M5904</td>
			<td style="width:177px;"></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

preparation of non-human primate brain tissue for pre-embedding immunohistochemistry and electron microscopy

प्रकाश माइक्रोस्कोपी स्तर पर सभी तकनीकी प्रगति के बावजूद, इलेक्ट्रॉन माइक्रोस्कोपी की जांच करने और इस तरह के synaptic संपर्कों के रूप में न्यूरॉन्स, की ultrastructural और रूपात्मक विवरण चिह्नित करने के लिए तंत्रिका विज्ञान में केवल उपकरण बना रहता है। इलेक्ट्रॉन माइक्रोस्कोपी के लिए मस्तिष्क के ऊतकों की अच्छा संरक्षण कठोर क्रायो-निर्धारण के तरीकों के द्वारा प्राप्त किया जा सकता है लेकिन इन तकनीकों बल्कि महंगी हैं और immunolabeling का उपयोग, जो पहचान न्यूरोनल सिस्टम की कनेक्टिविटी को समझने के लिए महत्वपूर्ण है की सीमा। फ्रीज प्रतिस्थापन तरीकों immunolabeling साथ क्रायो-निर्धारण के संयोजन अनुमति देने के लिए विकसित किया गया है। हालांकि, इन प्रणाली वैज्ञानिक दृष्टिकोण के reproducibility आमतौर पर महंगा ठंड उपकरणों पर निर्भर करता है। इसके अलावा, इस तकनीक के साथ विश्वसनीय परिणाम प्राप्त करने बहुत समय लेने वाली और कौशल चुनौतीपूर्ण है। इसलिए, पारंपरिक रासायनिक निश्चित मस्तिष्क, विशेष रूप से एक्रोलिन बंधक के साथ, इलेक्ट्रॉन गठबंधन करने के लिए एक समय कुशल और कम लागत वाली विधि बनी हुई हैइम्युनोहिस्टोकैमिस्ट्री साथ माइक्रोस्कोपी। यहाँ, हम एक विश्वसनीय प्रयोगात्मक प्रोटोकॉल रासायनिक एक्रोलिन निर्धारण कि प्राइमेट मस्तिष्क के ऊतकों के संरक्षण की ओर जाता है और पूर्व embedding इम्युनोहिस्टोकैमिस्ट्री और संचरण इलेक्ट्रॉन सूक्ष्म परीक्षण के साथ संगत है का उपयोग कर सकते हैं।

इस खंड में, हम प्रतिनिधि परिणाम है कि, अवलोकन निम्नलिखित प्राप्त किया गया संचरण ईएम स्तर पर, immunostained प्राइमेट मस्तिष्क के ऊतकों रासायनिक 3% एक्रोलिन का एक मिश्रण और 4% पीएफए ​​के साथ तय की प्रस्?...

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Preparation of Non-human Primate Brain Tissue for Pre-embedding Immunohistochemistry and Electron Microscopy

यहाँ, हम एक आसान, कम लागत प्रदान करते हैं और समय कुशल प्रोटोकॉल रासायनिक एक्रोलिन बंधक के साथ प्राइमेट मस्तिष्क के ऊतकों को ठीक करने, लंबी अवधि के संरक्षण कि संचरण इलेक्ट्रॉन माइक्रोस्कोपी के लिए पूर्व embedding इम्युनोहिस्टोकैमिस्ट्री के साथ संगत है के लिए अनुमति देता है।

पूर्व embedding Immunohistochemistry और इलेक्ट्रॉन माइक्रोस्कोपी के लिए गैर मानव प्राइमेट मस्तिष्क के ऊतकों की तैयारी

Despite all the technological advances at the light microscopy&#160;level, electron microscopy remains the only tool in neuroscience to examine and ...

Research

JoVE Journal

Neuroscience

Preparation of Mouse Brain Tissue for Immunoelectron Microscopy

माउस मस्तिष्क के ऊतकों के Immunoelectron माइक्रोस्कोपी के लिए तैयार

Transmission electron microscopy (TEM) is extremely useful for visualizing microglial, oligodendrocytic, astrocytic, and neuronal subcellular compartments ...

DiOLISTIC Labeling of Neurons from Rodent and Non-human Primate Brain Slices

कृंतक से न्यूरॉन्स और गैर मानव प्राइमेट मस्तिष्क स्लाइसें के DiOLISTIC लेबल

DiOLISTIC staining uses the gene gun to introduce fluorescent dyes, such as DiI, into neurons of brain slices (Gan et al., 2009; O'Brien and Lummis, 2007; ...

Focussed Ion Beam Milling and Scanning Electron Microscopy of Brain Tissue

ध्यान केंद्रित आयन बीम मिलिंग और मस्तिष्क के ऊतकों के इलेक्ट्रॉन माइक्रोस्कोपी स्कैनिंग

This protocol describes how biological samples, like brain tissue, can be imaged in three dimensions using the focussed ion beam/scanning electron ...

Wholemount Immunohistochemistry for Revealing Complex Brain Topography

खुलासा परिसर मस्तिष्क टोपोग्राफी के लिए wholemount immunohistochemistry

The repeated and well-understood cellular architecture of the cerebellum make it an ideal model system for exploring brain topography. Underlying its ...

Functional Neuroimaging Using Ultrasonic Blood-brain Barrier Disruption and Manganese-enhanced MRI

कार्यात्मक न्यूरोइमेजिंग अल्ट्रासोनिक रक्त मस्तिष्क बाधा विघटन और मैंगनीज बढ़ाकर एमआरआई का उपयोग

Although mice are the dominant model system for studying the genetic and molecular underpinnings of neuroscience, functional neuroimaging in mice remains ...

Genetic Manipulation of Cerebellar Granule Neurons In Vitro and In Vivo to Study Neuronal Morphology and Migration

Genetic Manipulation of Cerebellar Granule Neurons In Vitro and In Vivo to Study Neuronal Morphology and Migration

अनुमस्तिष्क ग्रेन्युल न्यूरॉन्स की आनुवंशिक हेरफेर<em&gt; इन विट्रो</em&gt; और<em&gt; में Vivo</em&gt; Neuronal आकृति विज्ञान और प्रवास का अध्ययन करने के लिए

Developmental events in the brain including neuronal morphogenesis and migration are highly orchestrated processes. In vitro and in vivo analyses allow ...

The Olfactory System as a Model to Study Axonal Growth Patterns and Morphology In Vivo

The Olfactory System as a Model to Study Axonal Growth Patterns and Morphology In Vivo

एक मॉडल के रूप घ्राण प्रणाली axonal विकास पैटर्न और आकृति विज्ञान का अध्ययन करने के लिए<em&gt; Vivo</em

The olfactory system has the unusual capacity to generate new neurons throughout the lifetime of an organism. Olfactory stem cells in the basal portion of ...

Primer for Immunohistochemistry on Cryosectioned Rat Brain Tissue: Example Staining for Microglia and Neurons

Microglia और न्यूरॉन्स के लिए उदाहरण धुंधला: Cryosectioned चूहे के मस्तिष्क के ऊतकों पर immunohistochemistry के लिए प्राइमर

Immunohistochemistry is a widely used technique for detecting the presence, location, and relative abundance of antigens in situ. This introductory level ...

Analysis of Brain Mitochondria Using Serial Block-Face Scanning Electron Microscopy

ब्रेन माइटोकॉन्ड्रिया के विश्लेषण सीरियल ब्लॉक-फेस स्कैनिंग इलेक्ट्रॉन माइक्रोस्कोपी का उपयोग

Human brain is a high energy consuming organ that mainly relies on glucose as a fuel source. Glucose is catabolized by brain mitochondria via glycolysis, ...