Name: preparation of non-human primate brain tissue for pre-embedding immunohistochemistry and electron microscopy
Uploaded: 2017-04-03T13:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Preparation of Non-human Primate Brain Tissue for Pre-embedding Immunohistochemistry and Electron Microscopy at JoVE.com

Denne studien ble støttet av naturvitenskap og Engineering Research Council of Canada (NSERC, 401848-2011 til MP). MP fikk en karriere utmerkelse fra Fonds de recherche du Québec-Santé (FRQ-S). LE var mottakeren av en doc fra FRQ-S (FRQ-S 14D 29441). Vi takker Marie-Josée Wallman for teknisk assistanse.

Etikk Uttalelse: Alle protokoller som involverer dyr ble godkjent av Comité de Protection des Animaux de l&#39;Université Laval og ble gjort i samsvar med den kanadiske Council on Animal Care Guide til omsorg og bruk av forsøksdyr (Ed 2.). Protokollen er beskrevet her ble optimalisert for voksne dyr på ca 800 g. Volumene av fikseringsmiddel bør justeres i forhold til dyrets størrelse. 1. Fremstilling av oppløsninger for transkardiakperfusjon <ol><li> Fremstill en l av en 50 mM natri...

I denne artikkelen presenterer vi en pålitelig protokoll for transkardiakperfusjon hos ikke-humane primater og pre-forankring immunhistokjemi egnet for EM prøve undersøkelse. Selv om typiske cryo-EM, slik som CEMOVIS, gir en god bevaring av hjernen ultrastrukturen, begrenser også bruken av immunhistokjemi 12. Andre teknikker, inkludert kryo-substitusjon og Tokuyaso teknikk, lar etter innbygging immunhistokjemi, men disse metoder er kostbare på grunn av ytterligere anordninger som er nødvend...

Lysmikroskopering inklusive konfokal og to-foton mikroskopi, har vist seg å være et effektivt verktøy for å studere in vivo nerveprosesser, blant annet 1, 2. Selv om typiske romlig oppløsning ved lysmikroskopi (LM) nivå er tilnærmet 200 nm, de siste teknologiske fremskritt ved hjelp av ulike lyskilder, for eksempel ekstrem ultrafiolett og bløtt røntgenmikroskopi, har spesielt økt denne oppløsning til en nesten 10 nm romlig oppløsning 3 , 4, 5. Andre teknologiske fremskritt innen avbildning innbefatter felles magnetisk resonans imaging med histologi og tilveiebringe en ny fremgangsmåte for å måle tykkelsen på myelinlaget in vivo, en parameter som tradisjonelt var målbar bare ved elektronmikros (EM) nivå 6, 7. although disse fremskrittene på LM-nivå gir et utmerket verktøy for å studere levende prosesser, et detaljriss og karakterisering av strukturer, slik som synaptiske kontakter, kan bare oppnås med EM, som gir en oppløsning som kan nå 0,5 nm. Imidlertid observasjon ved EM nivå krever prøvene å være død og endres på mange måter, med fiksativer kjemiske og dehydrering prosesser, for å bevare den cytoarchitecture. Således undersøke biologiske prøver med høy oppløsning som kan være vanskelig på grunn av stråleskader fra elektronstrålen, lav kontrast, strukturelle avvik av membraner, eller til og med tilstedeværelse av gjenstander som kan forekomme etter dehydrering og epoksy innstøping 8, 9, 10. Bevaring prøver i sin native form for strukturell analyse kan oppnås ved å bruke &quot;Cryo EM av forglasset §§&quot; eller CEMOVIS, en snitte tilnærming sominnebærer hurtig nedfrysing og innstøping av prøven i glasslegemet is og undersøkelse av seksjonene under EM ved en kryogen temperatur 11, 12. Denne fremgangsmåten gjør det mulig for undersøkelse av prøver, mens de fremdeles er fast og fullstendig hydrert, og dermed eliminere artifakter forårsaket av dehydrering prosesser 13. Imidlertid innebærer denne metoden flere enheter for kryo-ultramicrotomy, samt tilleggsenheter på standard EM, for å tillate denne observasjon ved meget lave temperaturer, noe som skaper betydelige tilleggskostnader. I tillegg utelukker CEMOVIS tilnærming ved bruk av immunmerking teknikker, ettersom antistoffer må vanligvis inkubert ved RT. Alternativt er det mulig å kombinere ultra analyse med immunohistokjemiske prosedyrer ved anvendelse av en fryse-substitusjon tilnærming, der Cryo-fikserte prøver blir langsomt opptint mens immerged i cryo-beskyttende kjemikalier og er then innebygd i spesialiserte harpikser, såsom Lowicryls. Post-embedding immunmerking kan da utføres på slikt materiale 12. Imidlertid fryse-substitusjon og kryo-fikseringsteknikker er arbeidskrevende. De krever installasjon av tilleggsutstyr og krever fortsatt prøver som skal eksponeres for organisk løsningsmiddel og kjemisk fikseringsmiddel som kan endre den cytoarchitecture, til tross for bruk av en lav temperatur 14, 15. Derfor, til tross for alle de teknologiske fremskritt både på LM og EM nivå, kjemisk fiksering av hjernevev, spesielt med akrolein, forblir en lav kostnad og tidsbesparende metode for å kombinere immunohistokjemi med EM-16. I de siste tiårene, ble mange forsøk gjort for å finne en blanding av aldehyder som gir best vev bevaring. Før 1960-tallet, den eneste kjemiske fiksativ som ga akseptable resultater for EM var osmiumtetroksidet. Imidlertid er osmiumtetroksyd svært giftig og kostbart, hvilket utelukker bruken gjennom det vaskulære system til å feste organer som hjernen. Akrolein ble introdusert i 1950 som en pålitelig metode for animalsk vev konservering egnet for EM observasjon av cellestrukturer 17. Den trenger inn i vevet dypere og reagerer raskere enn andre aldehyder når det brukes for fiksering ved nedsenkning og tillater god bevaring av cytoplasmiske bestanddeler, med minimal krymping av vevet 17. Et slikt trekk gir akrolein fiksering en klar fordel sammenlignet med andre aldehyder når det brukes i frisk vev, ved å tillate en mer nøyaktig lokalisering av levende molekylære forbindelser, slik som enzymer og andre proteiner 18. Faktisk har det blitt bekreftet gjennom årene som en enkel, effektiv og rimelig metode for fiksering for visualisering ved EM nivå i mange arter, inkludert amfibier og gnagere, som det effektivt stabiliseringzes peptider og proteiner, bibeholder antigenisitet og gir forholdsvis intakt ultrastruktur når de anvendes i kombinasjon med et annet aldehyd fikseringsmiddel 16, 18, 19, 20, 21. Protokoller for akrolein fiksering i gnagere har siden da blitt standardisert og brukt i stor utstrekning, spesielt ved Pickel gruppe, for å implementere dobbeltimmunmerking for EM-16, 22. Noen grupper har anvendt acrolein fiksering i ikke-menneskelige primater hjernevev 23. Men til vår kunnskap, er det bare én publisert protokoll effektivt beskriver kjemisk fiksering med acrolein i ikke-menneskelige primater som er kompatibel med EM immunmerking 24. I denne artikkelen gir vi en enkel og pålitelig metode for å effektivt kjemisk fikse non-humen primat-hjerne med akrolein, slik at for en potensielt langvarig konservering sammen med pre-immunmerking innebygging og overføring EM-undersøkelse.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" width="634">
	<tbody>
		<tr height="46">
			<td height="46" style="height:46px;width:216px;">Dibasic anhydrous sodium phosphate (Na2HPO4)</td>
			<td style="width:123px;">Fisher scientific</td>
			<td style="width:119px;">S374-500</td>
			<td style="width:177px;"></td>
		</tr>
		<tr height="67">
			<td height="67" style="height:67px;width:216px;">Monobasic monohydrate sodium phosphate (NaH2PO4.H2O)</td>
			<td style="width:123px;">EM Science</td>
			<td style="width:119px;">SX0710-1</td>
			<td style="width:177px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Sodium chloride (NaCl)</td>
			<td style="width:123px;">Fisher scientific</td>
			<td style="width:119px;">S271-3</td>
			<td style="width:177px;"></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">Hydroxymethyl aminomethane (THAM)</td>
			<td style="width:123px;">Fisher scientific</td>
			<td style="width:119px;">T370-500</td>
			<td style="width:177px;"></td>
		</tr>
		<tr height="63">
			<td height="63" style="height:63px;width:216px;">HCl&#160;</td>
			<td style="width:123px;">EMD</td>
			<td style="width:119px;">HX0603-3</td>
			<td style="width:177px;">1N dilution. Product is corrosive. Use with appropriate potection.</td>
		</tr>
		<tr height="63">
			<td height="63" style="height:63px;width:216px;">NaOH</td>
			<td style="width:123px;">EMD</td>
			<td style="width:119px;">SX0590-1</td>
			<td style="width:177px;">5N dilution. Product is corrosive. Use with appropriate protection.</td>
		</tr>
		<tr height="147">
			<td height="147" style="height:147px;width:216px;">Paraformaldehyde</td>
			<td style="width:123px;">Sigma</td>
			<td style="width:119px;">P6148</td>
			<td style="width:177px;">4% dilution. Product is highly volatile in its powder form and highly toxic. Use with caution under a venting hood with appropriate protection.</td>
		</tr>
		<tr height="84">
			<td height="84" style="height:84px;width:216px;">Acrolein (90%)</td>
			<td style="width:123px;">sigma</td>
			<td align="right" style="width:119px;">110221</td>
			<td style="width:177px;">3% dilution. Product is highly toxic. Use under a venting hood with appropriate protection.</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Autopsy venting table</td>
			<td style="width:123px;">Mopec</td>
			<td style="width:119px;">CE400</td>
			<td style="width:177px;"></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">Electronic perfusion pump</td>
			<td style="width:123px;">cole parmer</td>
			<td style="width:119px;">masterflex L/S 7523-90</td>
			<td style="width:177px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Needle (perfusion)</td>
			<td style="width:123px;">terumo&#160;</td>
			<td style="width:119px;">NN-1838R</td>
			<td style="width:177px;">18G 1 1/2</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Needle</td>
			<td style="width:123px;">terumo&#160;</td>
			<td style="width:119px;">NN-2713R</td>
			<td style="width:177px;">21G 1/2</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Ketamine</td>
			<td style="width:123px;"></td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td style="width:177px;">20 mg/kg</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Xylazine</td>
			<td style="width:123px;"></td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td style="width:177px;">4 mg/kg</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Acepromazine</td>
			<td style="width:123px;"></td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td style="width:177px;">0.5 mg/kg</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Scalpel</td>
			<td style="width:123px;"></td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td style="width:177px;"></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">Scalpel blades</td>
			<td style="width:123px;">Feather&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160; lance</td>
			<td style="width:119px;">201011&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160; J9913</td>
			<td style="width:177px;">No.22 for surgery and&#160;&#160;&#160; No. 11 for EM</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Surgical scissors</td>
			<td style="width:123px;"></td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td style="width:177px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Rongeurs</td>
			<td style="width:123px;"></td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td style="width:177px;"></td>
		</tr>
		<tr height="63">
			<td height="63" style="height:63px;width:216px;">Vibratome</td>
			<td style="width:123px;">Leica</td>
			<td style="width:119px;">VT 1200S</td>
			<td style="width:177px;">Calibrate blade before each use, when the device allows it</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Vibratome razor blade</td>
			<td style="width:123px;">Gillette</td>
			<td style="width:119px;">GIN 642107</td>
			<td style="width:177px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Glycerol</td>
			<td style="width:123px;">Fisher scientific</td>
			<td style="width:119px;">G33-4</td>
			<td style="width:177px;">30% dilution</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Ethylene glycol</td>
			<td style="width:123px;">Fisher scientific</td>
			<td style="width:119px;">E178-4</td>
			<td style="width:177px;">30% dilution</td>
		</tr>
		<tr height="25">
			<td height="25" style="height:25px;width:216px;">Sodium borohydride (NaBH4)</td>
			<td style="width:123px;">sigma</td>
			<td style="width:119px;">S-9125</td>
			<td style="width:177px;"></td>
		</tr>
		<tr height="63">
			<td height="63" style="height:63px;width:216px;">Normal horse serum</td>
			<td style="width:123px;">Jackson immunoResearch Laboratories</td>
			<td>008-000-121</td>
			<td style="width:177px;">2% dilution</td>
		</tr>
		<tr height="63">
			<td height="63" style="height:63px;width:216px;">Cold-fish gelatin</td>
			<td style="width:123px;">Aurion</td>
			<td style="width:119px;">900.033</td>
			<td style="width:177px;">0.5% dilution. Original product is concentrated at 40%</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">Primary antibody, SERT</td>
			<td style="width:123px;">Santa Cruz biotechnology</td>
			<td style="width:119px;">SC-1458</td>
			<td style="width:177px;">1/500 dilution</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">Primary antibody, ChAT</td>
			<td style="width:123px;">Chemicon (Millipore)</td>
			<td style="width:119px;">AB144P</td>
			<td style="width:177px;">1/25 dilution</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Primary antibody, TH</td>
			<td style="width:123px;">ImmunoStar</td>
			<td style="width:119px;">22941</td>
			<td style="width:177px;">1/1000 dilution</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">Biotinylated secondary antibody, goat</td>
			<td style="width:123px;">Vector laboratories</td>
			<td style="width:119px;">BA-9500</td>
			<td style="width:177px;">1/1000 dilution</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">Biotinylated secondary antibody, mouse</td>
			<td style="width:123px;">Vector laboratories</td>
			<td style="width:119px;">BA-2000</td>
			<td style="width:177px;">1/1000 dilution</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">Vectastain elite ABC kit</td>
			<td style="width:123px;">Vector laboratories</td>
			<td style="width:119px;">PK6100</td>
			<td style="width:177px;">8.8 &#181;L/mL of A and B each</td>
		</tr>
		<tr height="105">
			<td height="105" style="height:105px;width:216px;">3&#39;3 diaminobenzidine (DAB)</td>
			<td style="width:123px;">Sigma</td>
			<td style="width:119px;">D5637</td>
			<td style="width:177px;">0,05% dilution. Product is highly volatile in its powder form and toxic. Do not throw waste in the sink.</td>
		</tr>
		<tr height="25">
			<td height="25" style="height:25px;width:216px;">Peroxide (H2O2) 30%</td>
			<td style="width:123px;">Fisher scientific</td>
			<td style="width:119px;">H-323</td>
			<td style="width:177px;">0,005% dilution</td>
		</tr>
		<tr height="212">
			<td height="212" style="height:212px;width:216px;">Osmium tetroxide (OsO4)</td>
			<td style="width:123px;">Electron microscopic science</td>
			<td style="width:119px;">2% 19152&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160; 4% 19150&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;</td>
			<td style="width:177px;">Original solution can be either 2% ou 4%. Keep attention to which one is used to calculate the final 1% dilution. Product is very sensitive to light. Osmium is highly toxic. Use only under a venting hood with appropriate protection.</td>
		</tr>
		<tr height="189">
			<td height="189" style="height:189px;width:216px;">Durcupan water-repellent epoxy resin</td>
			<td style="width:123px;">sigma</td>
			<td style="width:119px;">A: M epoxy resin (44611)&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160; B: hardener 964 (44612)&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160; C: accelerator 960 (DY 060)&#160; (44613)&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160; D: plasticizer (44614)&#160;</td>
			<td style="width:177px;">Polymerize 48h at 58 &#176;C before throwing in waste.</td>
		</tr>
		<tr height="63">
			<td height="63" style="height:63px;width:216px;">Alumium cups</td>
			<td style="width:123px;">Electron microscopic science</td>
			<td style="width:119px;">70048-01</td>
			<td style="width:177px;"></td>
		</tr>
		<tr height="63">
			<td height="63" style="height:63px;width:216px;">Ethanol</td>
			<td style="width:123px;">commercial alcohols</td>
			<td style="width:119px;">1019C</td>
			<td style="width:177px;">Dilute in distilled water with appropriate concentration</td>
		</tr>
		<tr height="63">
			<td height="63" style="height:63px;width:216px;">Propylene oxide</td>
			<td style="width:123px;">Electron microscopic science</td>
			<td style="width:119px;">20401</td>
			<td style="width:177px;">Organic solvent. Highly volatile and toxic. Use under a venting hood.</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">Non-coated medium glass slides</td>
			<td style="width:123px;">brain research laboratories</td>
			<td style="width:119px;">3875-FR</td>
			<td style="width:177px;">Grease surface with mineral oil</td>
		</tr>
		<tr height="63">
			<td height="63" style="height:63px;width:216px;">Plastic film (Aclar embedding film)</td>
			<td style="width:123px;">Electron microscopic science</td>
			<td style="width:119px;">50425-25</td>
			<td style="width:177px;">Grease surface with mineral oil</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Ultramicrotome</td>
			<td style="width:123px;">Leica UC7</td>
			<td style="width:119px;">EM UC7</td>
			<td style="width:177px;"></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">Diamond trimming tool (ultratrim)</td>
			<td style="width:123px;">Diatome&#160;</td>
			<td style="width:119px;">UT 1081</td>
			<td style="width:177px;">Can use glass knife alternatively</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">Ultra 45&#176; Diatome Diamond knife</td>
			<td style="width:123px;">Diatome&#160;</td>
			<td style="width:119px;">MC13437</td>
			<td style="width:177px;">equipped with a boat</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Xylenes</td>
			<td style="width:123px;">Fisher scientific</td>
			<td style="width:119px;">X5SK-4</td>
			<td style="width:177px;"></td>
		</tr>
		<tr height="63">
			<td height="63" style="height:63px;width:216px;">150-mesh copper grids</td>
			<td style="width:123px;">Electron microscopic science</td>
			<td style="width:119px;">G150-cu</td>
			<td style="width:177px;"></td>
		</tr>
		<tr height="63">
			<td height="63" style="height:63px;width:216px;">grid-box</td>
			<td style="width:123px;">Electron microscopic science</td>
			<td style="width:119px;">71138</td>
			<td style="width:177px;">Can store up to 100 grids</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Sodium citrate</td>
			<td style="width:123px;">Anachemia</td>
			<td style="width:119px;">81983</td>
			<td style="width:177px;"></td>
		</tr>
		<tr height="336">
			<td height="336" style="height:336px;width:216px;">Lead nitrate</td>
			<td style="width:123px;">sigma</td>
			<td style="width:119px;">L-6258</td>
			<td style="width:177px;">Make a stock solution of lead citrate made of 1.33 g of lead nitrate and 1.76g of sodium citrate diluted in 42 mL of pre-boiled and cooled distilled water to which 8 mL of 1N NaOH are added after the conversion from lead nitrate to lead citrate is complete. pH should be approximately 12. Store solution in a hermetic plastic bottle and protect from light.</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Syringe</td>
			<td style="width:123px;">terumo&#160;</td>
			<td style="width:119px;">SS-05L</td>
			<td style="width:177px;">5 mL</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Syringe filter</td>
			<td style="width:123px;">corning</td>
			<td style="width:119px;">431222</td>
			<td style="width:177px;">0.2 &#181;m</td>
		</tr>
		<tr height="63">
			<td height="63" style="height:63px;width:216px;">Absorbing paper (bibulous paper)</td>
			<td style="width:123px;">Electron microscopic science</td>
			<td style="width:119px;">70086-1</td>
			<td style="width:177px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Parafilm</td>
			<td style="width:123px;">Laboratory film</td>
			<td style="width:119px;">PM-999</td>
			<td style="width:177px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Mineral oil</td>
			<td style="width:123px;">Sigma</td>
			<td style="width:119px;">M5904</td>
			<td style="width:177px;"></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

preparation of non-human primate brain tissue for pre-embedding immunohistochemistry and electron microscopy

Til tross for alle de teknologiske fremskritt ved lysmikroskopi nivå, forblir elektronmikroskopi den eneste verktøy i nevro for å undersøke og karakterisere ultra og morfologiske detaljer av nerveceller, slik som synaptiske kontakter. God bevaring av hjernevev for elektronmikroskopi kan oppnås ved rigorøse kryo-fikseringsmetoder, men disse teknikkene er ganske kostbare og begrenser bruken av immunmerking, som er avgjørende for å forstå tilkobling av identifiserte neuronale systemer. Fryse-substitusjonsmetoder er blitt utviklet for å tillate kombinasjonen av cryo-fiksering med immunmerking. Men reproduserbarhet av disse metodiske tilnærminger avhengig vanligvis på kostbare frysing enheter. Videre oppnå pålitelige resultater med denne teknikken er svært tidkrevende og dyktighet-utfordrende. Derfor er den tradisjonelle kjemisk faste hjernen, spesielt med akrolein fikseringsmiddel, forblir en tidsbesparende og rimelig metode for å kombinere elektronmikroskopi med immunhistokjemi. Her gir vi en pålitelig eksperimentelle protokoll ved anvendelse av kjemisk akrolein fiksering som fører til bevaring av primat vev i hjernen og er kompatibel med pre-innstøping immunhistokjemi og transmisjonselektronmikroskopisk undersøkelse.

I denne delen presenterer vi representative resultater som ble oppnådd etter den observasjon, i sende EM-nivå, av immunfarget primat hjernevev kjemisk fiksert med en blanding av 3% akrolein og 4% PFA. Vi oppnådde god bevaring av ultrastruktur, som angitt ved den forholdsvis intakt myelinlaget og ryddig visualisering av doble membraner (figur 2A). Synaptiske kontakter, sammen med neuronale elementer fra mikromiljøet, kan lett bli identifisert (figur 2B).</stro...

Watch this Scientific Journal Video about Preparation of Non-human Primate Brain Tissue for Pre-embedding Immunohistochemistry and Electron Microscopy at JoVE.com

Preparation of Non-human Primate Brain Tissue for Pre-embedding Immunohistochemistry and Electron Microscopy

Her gir vi en enkel, billig, og tidsbesparende protokoll for kjemisk å feste primat hjernevev med acrolein fiksativ, slik at for langtidskonservering som er kompatibel med forhånds innleiring immunhistokjemi for transmisjonselektronmikroskopi.

Utarbeidelse av ikke-menneskelige primater hjernevev for Pre-embedding Immunohistokjemi og elektronmikroskopi

Despite all the technological advances at the light microscopy&#160;level, electron microscopy remains the only tool in neuroscience to examine and ...

Research

JoVE Journal

Neuroscience

Preparation of Mouse Brain Tissue for Immunoelectron Microscopy

Transmission electron microscopy (TEM) is extremely useful for visualizing microglial, oligodendrocytic, astrocytic, and neuronal subcellular compartments ...

DiOLISTIC Labeling of Neurons from Rodent and Non-human Primate Brain Slices

DiOLISTIC staining uses the gene gun to introduce fluorescent dyes, such as DiI, into neurons of brain slices (Gan et al., 2009; O'Brien and Lummis, 2007; ...

Focussed Ion Beam Milling and Scanning Electron Microscopy of Brain Tissue

This protocol describes how biological samples, like brain tissue, can be imaged in three dimensions using the focussed ion beam/scanning electron ...

Wholemount Immunohistochemistry for Revealing Complex Brain Topography

Wholemount Immunhistokjemi for å avdekke Complex Brain Topografi

The repeated and well-understood cellular architecture of the cerebellum make it an ideal model system for exploring brain topography. Underlying its ...

Functional Neuroimaging Using Ultrasonic Blood-brain Barrier Disruption and Manganese-enhanced MRI

Funksjonell Bildediagnostiske Bruke Ultrasonic blod-hjerne barrieren avbrudd og mangan forbedret MR

Although mice are the dominant model system for studying the genetic and molecular underpinnings of neuroscience, functional neuroimaging in mice remains ...

Genetic Manipulation of Cerebellar Granule Neurons In Vitro and In Vivo to Study Neuronal Morphology and Migration

Genetic Manipulation of Cerebellar Granule Neurons In Vitro and In Vivo to Study Neuronal Morphology and Migration

Genetisk manipulering av Lillehjernen Granule Neuroner<em&gt; In Vitro</em&gt; Og<em&gt; I Vivo</em&gt; Å studere nevrale morfologi og migrasjon

Developmental events in the brain including neuronal morphogenesis and migration are highly orchestrated processes. In vitro and in vivo analyses allow ...

The Olfactory System as a Model to Study Axonal Growth Patterns and Morphology In Vivo

The Olfactory System as a Model to Study Axonal Growth Patterns and Morphology In Vivo

Luktsystemet som en modell for å studere aksonal vekst mønstre og morfologi<em&gt; In Vivo</em

The olfactory system has the unusual capacity to generate new neurons throughout the lifetime of an organism. Olfactory stem cells in the basal portion of ...

Primer for Immunohistochemistry on Cryosectioned Rat Brain Tissue: Example Staining for Microglia and Neurons

Primer for Immunhistokjemi på Cryosectioned Rat hjernevev: Eksempel Farging for Microglia og Nevroner

Immunohistochemistry is a widely used technique for detecting the presence, location, and relative abundance of antigens in situ. This introductory level ...

Analysis of Brain Mitochondria Using Serial Block-Face Scanning Electron Microscopy

Analyse av Brain Mitokondrier Bruke Serial Block-Face Scanning elektronmikroskopi

Human brain is a high energy consuming organ that mainly relies on glucose as a fuel source. Glucose is catabolized by brain mitochondria via glycolysis, ...