Name: using in vitro live-cell imaging to explore chemotherapeutics delivered by lipid-based nanoparticles
Uploaded: 2017-11-01T13:00:00
Duration: 10 min 26 s
Description: Watch this Scientific Journal Video about Using In Vitro Live-cell Imaging to Explore Chemotherapeutics Delivered by Lipid-based Nanoparticles at JoVE.com

مرافق الفحص المجهري المستخدمة جزء من مركز التصوير الضوئي إيراسموس، ونود أن نشكر موظفي منظمة المؤتمر الإسلامي لخدماتها.

1-إعداد <ol><li>تجميع قاعة التصوير، الذي يتألف من جزأين.
	وضع زجاج الغطاء 25 مم ( الشكل 1A-1) في الجزء السفلي من الدائرة ( الشكل 1A-2) <ol><li>والمسمار في الجزء العلوي إلى الجزء السفلي ( الشكل 1A-3). لا تشديد صعباً للغاية، كما يمكن كسر الزجاج. اﻷوتوكﻻف الدائرة بأكملها ( الشكل 1A-4)-</li>
	</ol></li> <li>إعداد خلية الثقافة المتوسطة بتكميل دولبيكو &#39; s التعديل النسر &#39; s المتوسطة (دميم) دون الأحمر الفينول مع 10% مصل العجل الجنين إبطال الحرارة (FCS) ومم 1 لتر-الجلوتامين تحت ظروف معقمة. مخزن في 4 درجات مئوية والحارة إلى 37 درجة مئوية قبل الاستخدام.</li>
	<li>الحفاظ على الخلايا مع خلية الثقافة المتوسطة في استزراع قوارير باستخدام تقنيات استزراع الخلايا القياسية. 
	ملاحظة: هنا، اثنين من خطوط الخلية الماوس وسرطان الجلد B16BL6 11 ولويس الرئة سرطان (LLC)، والأورام الخبيثة البشرية اثنين، بلم و 1F6 12، استخدمت.</li>
	<li>جعل الجيلاتين 0.1% من وزنها وتذويب الجيلاتين في مخزنة الفوسفات المالحة (PBS) عند 37 درجة مئوية بين عشية وضحاها. تعقيم الحل عن طريق تصفية فإنه من خلال عامل تصفية 0.22 ميكرومتر وتخزينها في 4 ° C.</li>
</ol> 2. لوحة الخلايا <ol><li>إزالة قاعة التصوير من الحقيبة التعقيم في تدفق الصفحي مجلس الوزراء، بعناية تشديد الدائرة، ووضعه في طبق بتري. 
	ملاحظة: لتفادي التلوث، الحفاظ على قاعة التصوير في طبق بتري حتى يمكن وضع الدائرة تحت المجهر.</li>
	<li>معطف الزجاج في دائرة التصوير مع 1 مل من 0.1% الجيلاتين المعقم لمدة 20 دقيقة في 37 درجة مئوية و 5% CO 2- 
	ملاحظة: هذا سوف يسمح مرفق خلية أفضل.</li>
	<li>إزالة المتوسطة من قوارير الثقافة الخلية (انظر الخطوات 1.2 و 1.3) ويغسل مرة واحدة مع برنامج تلفزيوني 1 x، وفصل الخلايا باستخدام التربسين 0.25%. إلغاء تنشيط التربسين بإضافة خلية الثقافة المتوسطة وجمع الخلايا وتدور عليهم إلى أسفل في 1,100 س ز لمدة 5 دقائق وريسوسبيند بيليه في 5 مل مستنبت الخلية.</li>
	<li>تمييع 20 ميليلتر من تعليق خلية مع 20 ميليلتر من تريبان الأزرق (التي سيتم تناولها بالخلايا الميتة). حساب عدد الخلايا الحية والميتة باستخدام هيموسيتوميتير؛ يجب أن لا يتجاوز عدد الخلايا الميتة 10%-</li>
	<li>نضح الجيلاتين ولوحة الخلايا في تمييع يسمح بأقصى قدر تغطية 70% خلال 24 ساعة. على سبيل المثال، استخدام إضعاف 5 × 10 4 أو 10 × 10 4 خلايا في 1 مل. السماح للخلايا للانضمام في 5% CO 2 و 37 درجة مئوية ل 24 h.</li>
</ol> 3. الوقت الفاصل بين الفحص المجهري ( الشكل 2) ملاحظة: هنا، يستخدم مجهر [كنفوكل] مع حامل مرحلة حسب الطلب، على الرغم من أن معظم المصنوعات تقدم مجموعة من الحاضنات لخلية يعيش التصوير التي مناسبة أيضا للتحقيق في إيصال الأدوية نانوبارتيكولاتيد-
<ol><li>تقييم الخلايا تحت مجهر كونفلوينسي ومورفولوجيا الخلوية، والتلوث. ضع الدائرة مرة أخرى في الحاضنة 2 CO. 
	ملاحظة: كونفلوينسي ينبغي أن لا تتجاوز 70%. إذا مورفولوجيا الخلوية هو غير متناسقة (أي، لا تتقيد الخلايا) أو الكشف عن التلوث، تجاهل قاعة التصوير.</li>
	<li>التبديل على المجهر [كنفوكل] ( 1E الشكل-1)، في ضوء الفلورسنت ( 1E الشكل-2)، وجهاز الكمبيوتر ( الشكل 1E-3)-</li>
	<li>توصيل المسخن العدسة للهدف وتعيينها إلى 35 درجة مئوية ( الشكل 1E-4 + insert).</li>
	<li>إعداد وحدة الحضانة، كما هو مبين في الشكل 1. 
	ملاحظة: هذه الوحدة تتألف من مرحلة ساخنة ( الشكل 1 باء-1)، مرحلة تدفق مع موصل لأنابيب 2 CO ( الشكل 1 باء-2) وأول أكسيد الكربون 2 مسبار ( 1B الشكل -3)، وتصحيح إغلاق أحمر ( الشكل 1 باء-4). يتم استخدام هذا التصحيح لإغلاق الوحدة مؤقتاً حتى يتم وضعها في دائرة التصوير-</li>
	ضع وحدة الحضانة في مرحلة مجهر <li>والاتصال في--وخارج-flow CO 2 الأنابيب ( 1E الشكل-5). فتح صمام 2 CO الرئيسي ( 1E الشكل-6)، والتبديل على وحدة تحكم 2 CO ( 1E الشكل-7). تحقق من أن يتم تعيين وحدة التحكم إلى 5% CO 2- 
	ملاحظة: للرطوبة، يمر CO 2 مرطب ( 1E الشكل-8). لإجراء التجارب على نقص، يتم تضمين منظم 2 س منفصلة ( 1E الشكل-9) في الإعداد-</li>
	<li>تعيين المرحلة درجة الحرارة إلى 37 درجة مئوية ( 1E الشكل-10). للتجارب هايبرثيرميا، وضبط درجة الحرارة إلى 42 درجة جيم السماح وحدة الحضانة للوصول إلى درجة الحرارة المحددة وأول أكسيد الكربون 2 النسبة المئوية-</li>
	<li>تأخذ الدائرة التصوير من شركة الرئيسي 2 حاضنة والنقل الدائرة في طبق بتري إلى غرفة الفحص المجهري.</li>
	<li>في دائرة التصوير ( الشكل 1A-4) في مصنوعة خصيصا، 35 مم-المرحلة حامل ( الشكل 1A-5) وإغلاق الدائرة مع غطاء ختم مصنوعة خصيصا ( الشكل 1A-6)- 
	ملاحظة: الغطاء يسمح CO 2 بالمرور ويمنع التبخر والتلوث.
	<ol><li>فتح وحدة الحضانة واستبدال التصحيح الأحمر مع غرفة التصوير، وإغلاق الوحدة ( الشكل 1). القيام بذلك في أسرع وقت ممكن للحيلولة دون تهدئة الخلايا. تأكد من أن لا كبلات عالقون بين المرحلة والمجهر.</li>
	</ol></li> <li>مغادرة الوحدة إلى التأقلم للحد الأدنى 30</li>
	فتح البرنامج <li>والتبديل في الليزر- 
	ملاحظة: هنا، 488 نانومتر الأرجون، 543 نانومتر الهليوم-نيون وليزر الهليوم-نيون 633 نانومتر واستخدمت-</li>
	<li>جعل قاعدة بيانات جديدة بواسطة النقر فوق &#34; الجديدة &#34; تحت علامة التبويب ملف اسم وحفظ قاعدة البيانات.</li>
	<li>تعيين التكوين بواسطة النقر فوق &#34; التهيئة &#34; تحت علامة التبويب الحصول على تحديد &#34; وضع القناة &#34; و &#34; مسار واحد &#34; لتقييم فلوروفوري واحد أو &#34; المسار متعدد &#34; لعدة فلوروفوريس. حدد عوامل التصفية المناسبة الفرقة-تمرير مطابقة fluorophore (مثلاً، 560 إلى 615 نانومتر الفرقة تمرير مرشح دوكس والتي أرستها دوكس؛ انظر نتائج ممثلة لمزيد من الأمثلة). قم بتحديد القناة مشرق الحقل في أحد المسارات.</li>
	<li>تعيين مسح عنصر التحكم بالنقر فوق &#34; مسح &#34; تحت علامة التبويب الحصول على تعيين حجم الإطار (1,024 x 1,024)، سرعة المسح الضوئي (الأمثل)، مسح الاتجاه (8-بت، واحد)، والمسح الضوئي في المتوسط (4) بواسطة النقر فوق &#34; الوضع. &#34; تعيين الثقب (200 ميكرومتر)، واكتساب وإزاحة ( على سبيل المثال، 580 700 و 835؛ انظر الشكل 3)، والليزر الطاقة (488 = 10 543 = 100 ٪ ٪، 633 = 100%) بواسطة النقر فوق &#34; القنوات. &#34;</li> <li>حفظ هذه الإعدادات بالنقر فوق &#34; التكوين &#34; في التكوين علامة التبويب وحفظها في قاعدة بيانات التكوين.</li>
	<li>تعيين مرور الوقت عن طريق النقر فوق &#34; X الوقت متعدد &#34; ( الشكل 1) في علامة التبويب الماكرو انقر &#34; واحد الموقع &#34;.</li>
	حدد <li>للحفاظ على الخلايا في التركيز، والتركيز الآلي في الماكرو بواسطة النقر فوق &#34; السيارات التركيز. &#34; 
	ملاحظة: ضبط تلقائي للصورة يتحقق مع الليزر 633 نانومتر باستخدام انعكاس الزجاج كنقطة مرجعية.</li>
	<li>تطبيق التكوين المحفوظ بواسطة النقر فوق &#34; مسار واحد &#34; أو &#34; المسار متعدد، &#34; التمرير إلى التكوين المطلوب في قاعدة بيانات التكوين، تحديد الفترة الزمنية (مثلاً، 15 دقيقة)، عدد عمليات التفحص (مثلاً، 97) و النقر فوق &#34; تحميل الملف Config. &#34; ملاحظة: باستخدام هذه الإعدادات، سيتم سلسلة زمنية من 97 × 15 دقيقة = 24 ح.</li>
	<li>الاسم مرور الزمن في &#34; "اسم ملف قاعدة" &#34; وحدد قاعدة البيانات (تم في الخطوة 3.11) بواسطة النقر فوق &#34; "قاعدة بيانات الصورة" &#34; لإنقاذ مرور الزمن. تعيين مجلد مؤقت بالنقر فوق &#34; صورة Tmp المجلد. &#34; ملاحظة: إذا توقف النظام أو تعطل لأي سبب من الأسباب، الصور الموجودة في هذا المجلد.</li>
	<li>فتح وحدة تحضين ورفع الطوق التصوير وإضافة قطره زيت الغمر بالهدف وإغلاق الوحدة بأسرع وقت ممكن. التركيز وتحديد مكانة في قاعة التصوير. 
	ملاحظة: هذا الموقف يحتوي على خلايا في أحادي الطبقة، مع حد أدنى من 70% كونفلوينسي، مما يسمح لتصوير الخلايا الفردية-</li>
	تحقق من إعدادات التكوين للخلفية <li>وتصحيحها إذا لزم الأمر. 
	ملاحظة: يمكن تصحيح الخلفية بتقليل قوة الربح أو الليزر. أي تغيير في التكوين تحتاج إلى حفظ (راجع الخطوة 3.17) وتحميلها (راجع الخطوة 3.18) مرة أخرى في الماكرو-</li>
	<li>في التدفق الصفحي مجلس الوزراء، تضعف الأدوية المجانية أو جسيمات نانوية في تركيز من 5 ميكروغرام/مل المخدرات أو µmol 0.05 من الدهون في الخلية الثقافة المتوسطة. التصفية من خلال عامل تصفية حقنه 0.22 ميكرومتر إذا كانت المخدرات/جسيمات نانوية غير معقمة.</li>
	<li>فتح قاعة تحضين ورفع الغطاء الختم وإزالة المتوسطة من الخلايا، وإضافة 1 مل من المخدرات/جسيمات نانوية المخفف وإغلاق الوحدة بأسرع وقت ممكن.</li>
	<li>التركيز على الخلايا وابدأ مرور الوقت عن طريق النقر فوق &#34; "وقت البدء" &#34; في ماكرو متعدد الوقت س.</li>
	<li>التحقق بشكل منتظم معرفة ما إذا كانت الخلايا لا يزال في التركيز أو استخدام التركيز التلقائي (راجع الخطوة 3، 16). البرنامج يحفظ تلقائياً مرور الوقت في قاعدة البيانات؛ لا تقم بإغلاق قاعدة البيانات أثناء تشغيل البرنامج.</li>
</ol> 4. تحليل بيانات <ol><li>اعتماداً على مسألة البحث الأصلي، استخدام برامج مثل إيماجيج لتحليل البيانات (انظر الفرع النتائج للحصول على أمثلة).</li></ol>

<ol>
	<li>Duggan, S. T., Keating, G. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pegylated+liposomal+doxorubicin:+a+review+of+its+use+in+metastatic+breast+cancer,+ovarian+cancer,+multiple+myeloma+and+AIDS-related+Kaposi's+sarcoma.">Pegylated liposomal doxorubicin: a review of its use in metastatic breast cancer, ovarian cancer, multiple myeloma and AIDS-related Kaposi's sarcoma.</a> Drugs. 71 (18), 2531-2558 (2011).</li><li>Gabizon, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Prolonged+circulation+time+and+enhanced+accumulation+in+malignant+exudates+of+doxorubicin+encapsulated+in+polyethylene-glycol+coated+liposomes.">Prolonged circulation time and enhanced accumulation in malignant exudates of doxorubicin encapsulated in polyethylene-glycol coated liposomes.</a> Cancer Res. 54 (4), 987-992 (1994).</li><li>Ten Hagen, T. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Low-dose+tumor+necrosis+factor-alpha+augments+antitumor+activity+of+stealth+liposomal+doxorubicin+(DOXIL)+in+soft+tissue+sarcoma-bearing+rats.">Low-dose tumor necrosis factor-alpha augments antitumor activity of stealth liposomal doxorubicin (DOXIL) in soft tissue sarcoma-bearing rats.</a> Int J Cancer. 87, 829-837 (2000).</li><li>Hoving, S., Seynhaeve, A. L., van Tiel, S. T., Eggermont, A. M., Ten Hagen, T. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Addition+of+low-dose+tumor+necrosis+factor-alpha+to+systemic+treatment+with+STEALTH+liposomal+doxorubicin+(Doxil)+improved+anti-tumor+activity+in+osteosarcoma-bearing+rats.">Addition of low-dose tumor necrosis factor-alpha to systemic treatment with STEALTH liposomal doxorubicin (Doxil) improved anti-tumor activity in osteosarcoma-bearing rats.</a> Anticancer Drugs. 16 (6), 667-674 (2005).</li><li>Gabizon, A. A., Lyass, O., Berry, G. J., Wildgust, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cardiac+safety+of+pegylated+liposomal+doxorubicin+(Doxil/Caelyx)+demonstrated+by+endomyocardial+biopsy+in+patients+with+advanced+malignancies.">Cardiac safety of pegylated liposomal doxorubicin (Doxil/Caelyx) demonstrated by endomyocardial biopsy in patients with advanced malignancies.</a> Cancer Invest. 22 (5), 663-669 (2004).</li><li>Muggia, F. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Liposomal+encapsulated+anthracyclines:+new+therapeutic+horizons.">Liposomal encapsulated anthracyclines: new therapeutic horizons.</a> Curr Oncol Rep. 3 (2), 156-162 (2001).</li><li>Li, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Triggered+content+release+from+optimized+stealth+thermosensitive+liposomes+using+mild+hyperthermia.">Triggered content release from optimized stealth thermosensitive liposomes using mild hyperthermia.</a> J Control Release. 143 (2), 274-279 (2010).</li><li>Lu, T., Lokerse, W. J., Seynhaeve, A. L., Koning, G. A., ten Hagen, T. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Formulation+and+optimization+of+idarubicin+thermosensitive+liposomes+provides+ultrafast+triggered+release+at+mild+hyperthermia+and+improves+tumor+response.">Formulation and optimization of idarubicin thermosensitive liposomes provides ultrafast triggered release at mild hyperthermia and improves tumor response.</a> J Control Release. 220, 425-437 (2015).</li><li>Seynhaeve, A. L., Dicheva, B. M., Hoving, S., Koning, G. A., Ten Hagen, T. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Intact+Doxil+is+taken+up+intracellularly+and+released+doxorubicin+sequesters+in+the+lysosome:+Evaluated+by+in+vitro/in+vivo+live+cell+imaging.">Intact Doxil is taken up intracellularly and released doxorubicin sequesters in the lysosome: Evaluated by in vitro/in vivo live cell imaging.</a> J Control Release. 172 (1), 330-340 (2013).</li><li>Dicheva, B. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cationic+Thermosensitive+Liposomes:+A+Novel+Dual+Targeted+Heat-Triggered+Drug+Delivery+Approach+for+Endothelial+and+Tumor+Cells.">Cationic Thermosensitive Liposomes: A Novel Dual Targeted Heat-Triggered Drug Delivery Approach for Endothelial and Tumor Cells.</a> Nano Lett. 13 (6), 2324-2331 (2012).</li><li>Brouckaert, P. G., Leroux-Roels, G. G., Guisez, Y., Tavernier, J., Fiers, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+vivo+anti-tumour+activity+of+recombinant+human+and+murine+TNF,+alone+and+in+combination+with+murine+IFN-gamma,+on+a+syngeneic+murine+melanoma.">In vivo anti-tumour activity of recombinant human and murine TNF, alone and in combination with murine IFN-gamma, on a syngeneic murine melanoma.</a> Int J Cancer. 38 (5), 763-769 (1986).</li><li>Van Muijen, G. N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Antigen+expression+of+metastasizing+and+non-metastasizing+human+melanoma+cells+xenografted+into+nude+mice.">Antigen expression of metastasizing and non-metastasizing human melanoma cells xenografted into nude mice.</a> Clin Exp Metastasis. 9 (3), 259-272 (1991).</li><li>Das, A. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Differential+TIMP3+expression+affects+tumor+progression+and+angiogenesis+in+melanomas+through+regulation+of+directionally+persistent+endothelial+cell+migration.">Differential TIMP3 expression affects tumor progression and angiogenesis in melanomas through regulation of directionally persistent endothelial cell migration.</a> Angiogenesis. 17 (1), 163-177 (2013).</li><li>Brouckaert, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tumor+necrosis+factor-alpha+augmented+tumor+response+in+B16BL6+melanoma-bearing+mice+treated+with+stealth+liposomal+doxorubicin+(Doxil)+correlates+with+altered+Doxil+pharmacokinetics.">Tumor necrosis factor-alpha augmented tumor response in B16BL6 melanoma-bearing mice treated with stealth liposomal doxorubicin (Doxil) correlates with altered Doxil pharmacokinetics.</a> Int J Cancer. 109 (3), 442-448 (2004).</li><li>Chen, V. Y., Posada, M. M., Zhao, L., Rosania, G. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Rapid+doxorubicin+efflux+from+the+nucleus+of+drug-resistant+cancer+cells+following+extracellular+drug+clearance.">Rapid doxorubicin efflux from the nucleus of drug-resistant cancer cells following extracellular drug clearance.</a> Pharm Res. 24 (11), 2156-2167 (2007).</li><li>Parslow, A., Cardona, A., Bryson-Richardson, R. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Sample+drift+correction+following+4D+confocal+time-lapse+imaging.">Sample drift correction following 4D confocal time-lapse imaging.</a> J Vis Exp. (86), (2014).</li><li>Li, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mild+hyperthermia+triggered+doxorubicin+release+from+optimized+stealth+thermosensitive+liposomes+improves+intratumoral+drug+delivery+and+efficacy.">Mild hyperthermia triggered doxorubicin release from optimized stealth thermosensitive liposomes improves intratumoral drug delivery and efficacy.</a> J Control Release. 168 (2), 142-150 (2013).</li><li>Pedrosa, L. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Improving+intracellular+Doxorubicin+delivery+through+nanoliposomes+equipped+with+selective+tumor+cell+membrane+permeabilizing+short-chain+sphingolipids.">Improving intracellular Doxorubicin delivery through nanoliposomes equipped with selective tumor cell membrane permeabilizing short-chain sphingolipids.</a> Pharm Res. 30 (7), 1883-1895 (2013).</li><li>Pedrosa, L. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Short-chain+glycoceramides+promote+intracellular+mitoxantrone+delivery+from+novel+nanoliposomes+into+breast+cancer+cells.">Short-chain glycoceramides promote intracellular mitoxantrone delivery from novel nanoliposomes into breast cancer cells.</a> Pharm Res. 32 (4), 1354-1367 (2015).</li></ol>

الكتاب ليس لها علاقة بالكشف عن.

كما لوحظ في الماضي، التثبيت يمكن أن تدمر نانوكاريرس الاسمافرون على الفور تقريبا ودكسر صدر النموذج هذه الدهنية المدمرة لا يزال لديه الوقت لإدخال النواة، مما يجعل تفسير البيانات صعبة للغاية وحتى مضللة. مع بعض التعديلات المجهرية، يمكن التحقيق مصير العلاج الكيميائي في الخلايا الحية والأنسجة بشكل روتيني لتأكيد أو الإطاحة بالملاحظات النسيجي. وأظهرت ورقة صدرت مؤخرا الإقبال، الإصدار، وتوطين دكسر الخلايا تعامل مع دوكس مجاناً ومغلفة باستخدام خلية يعيش الوقت الفاصل بين التصوير9. ويصف هذا العمل الإعداد التجريبية بمزيد من التفصيل. باستخدام هذا النموذج، فإنه من الممكن تصور النقل الفوري دوكس للنواة، حيث أنها تتراكم باستمرار حتى الخلية يموت في نهاية المطاف. على النقيض من ذلك، عندما يتم استخدام NP دوكس، تم العثور على كميات صغيرة فقط من دوكس المفرج عنهم في النواة. على الرغم من أن التعرض المستمر يؤدي إلى تراكم دكسر المستمر، إشارة الفلورسنت أقل بكثير في دوكس-NP-مقابل دوكس تعامل الخلايا، مما يشير إلى اختلاف في تركيز الخلايا وسيتوتوكسيسيتي لاحقاً. وعلاوة على ذلك، باستخدام علامات خلية يعيش، اتضح أنه عند تعريض الخلايا التي أرستها دوكس، دكسر وفي nanocarrier تقع في يحلول. يشير هذا إلى أن الحويصلية كاملة بالخلية ويوضح تورط طريقا اندوسيتيك أثناء امتصاص هذه الجسيمات النانوية. من الواضح أن دكسر في النواة من دوكس المفرج عنهم. باستخدام هذا الأسلوب، كما دكسر والناقل المشترك تعريب ويبدو أن يكون الشرك في lysosomes، غير لا تزال غير حاسمة عما إذا كان هذا يتم تغليف أو صدر دوكس. فمن الممكن أن يمنع استقرار جوهري نانوحبيبات دوكس الإصدار عند المترجمة في يحلول.
في هذا البروتوكول، يتجلى تصوير الخلية تعيش باستخدام إعداد مجهرية معينة، مع حامل مرحلة مصنوعة خصيصا (المواصفات يمكن أن تعطي عند الطلب). ومع ذلك، معظم المصنوعات مجهر [كنفوكل] نقدم مجموعة من الحاضنات التي تقوم بتصوير خلية يعيش. المحافظة على شروط ثقافة الخلية (أي درجة الحرارة، CO2، درجة الحموضة، والرطوبة، والعقم) هو المعيار الرئيسي لهذه الحاضنات ويتطلب إجراء بعض التجارب الأولية لتحديد الشروط المناسبة، التي يرد مزيد من الشرح. يمكن أيضا تسليم البيانات الآلي اقتناء البرامج التي تصنع نفس. خيار "موقع متعدد" يجعل من الممكن الصورة عدة مناصب في الدائرة نفسها، صقل التحليل الإحصائي. ومع ذلك، يتطلب هذا الخيار في الماكرو المذكورة في هذه المخطوطة مواقع XYZ ثابتة، الذي يضيع إمكانية لتصحيح Z-الانجراف. مسح Z-البعد يمكن إدراجها في هذا الماكرو واستخدامات الطائرة تركيز للتحليل. ومع ذلك، وهذا يتطلب فحص إضافي، وزيادة إمكانية الضيائية وتبيض.
كما هو الحال مع جميع القياسات الفلورسنت، التعرض المفرط مشكلة، خاصة عند مقارنة مجمعين مع امتصاص خلوية مختلفة. كثافة الفلورسنت لا يتوقف عند إشارة المتأصلة في المجمع، ولكن أيضا على معدل الامتصاص والتركيز ووقت التعرض للمخدرات فقط. محتوى الخلايا تعامل دوكس دكسر النووية كما هو موضح في الشكل 3، بالفعل مرئياً، بينما يعتبر أي إشارة في دوكس-NP-تعامل الخلايا. إلا بزيادة الربح يمكن دكسر في الخلايا دوكس NP-المعالجة بتصور، مما يؤدي إلى التعرض المفرط في الخلايا تعامل دوكس. وعلاوة على ذلك، حتى إينتراسيلولارلي، التي أرستها دوكس بين توزع، الذي يمكن أن ينتج أمرا لا مفر منه في ظل-أو التعرض المفرط. خاصة عند التحقيق في فخ دكسر الخلوية، الكسب خفضت إلى حد كبير إلى التمييز بين العضيات الفردية (5B الأرقام و 5 ج). وهكذا، يجب أن تقترن القياسات ممثلة بكثافة بكسل بالصور التمثيلية للتفسير الصحيح للنتائج.
الضيائية، وتبيض، ونسبة الإشارة إلى الضجيج منخفض أيضا قضايا هامة في الفحص المجهري نيون، ويجب وضع حل وسط بين جودة الصورة والحصول على الصورة. ومع ذلك، حتى عند إعداد المجهر الأمثل، جودة الصورة أيضا تحددها إلى حد كبير نوعية الخلايا والمجمع وأضاف. دكسر يعطي إشارة قوية، ومع الاحتياطات المناسبة، تبيض لم يلاحظ، حتى بعد فترات أطول (ما يصل إلى 72 ساعة). ومع ذلك، يمكن الحد إشارة الفلورسنت أيضا نتيجة افلوكس. افلوكس ظاهرة هامة في مقاومة المخدرات15 ويحدث عندما الخلايا لضخ الدواء من موقع العمل داخل الخلايا. ولذلك يمكن أيضا أن انخفاض إشارة مضيئة على مر الزمن نتيجة دوكس افلوكس9. مقارنة إشارة الفلورسنت من موقع غير الممسوحة ضوئياً في نهاية التجربة مع الصورة الأخيرة من سلسلة الوقت الفاصل بين سوف تثبت تبيض (أي الإشارة سوف يكون أعلى في الموقع غير الممسوحة ضوئياً) أو افلوكس (أي، على حد سواء إشارات ستكون متطابقة). وتتوفر العديد من الخيارات الإصلاحية (مثلاً، الخلفية، والانجراف، وتبيض، إلخ) في برامج مثل إيماجيج16. أيضا، كما يزيد من شدة الفلورسنت مع مرور الوقت، يمكن أن إعدادات التكوين قبل تقييم تجربة رائدة للتقليل من التعرض المفرط في نهاية الوقت الفاصل بين (الخطوة 3.21). بدلاً من ذلك، يمكن استخدام دائرة لتصوير مع الخلايا تتعرض فعلا للمخدرات للفترة الزمنية المطلوبة لتهيئة الإعدادات. أخيرا، لهذا النوع من التحليل، ينبغي تجنب تركيزات المخدرات السامة (الخطوة 3.22) وأنشئت قبل استخدام الاختبارات الحيوية التقليدية.
الخلايا بشكل مستمر مثقف وصيانتها في المتوسط دون الأحمر الفينول. فلوريسسيس في الجزء الأحمر من الطيف الأحمر الفينول ويمكن ملاحظتها في العضيات الخلوية، ليسوسوميس على الأرجح، تقديم معلومات إيجابية كاذبة (الخطوة 1، 2). للسماح لرصد خلايا فردية، وينبغي أن لا تتجاوز التقاء الخلية 70% (الخطوة 3.1.). أول أكسيد الكربون2 -سرعة التدفق (الخطوة 3، 5) يحتاج إلى أن ينظم في تجربة التحقق من صحة عندما يتم شراء المعدات أو بعد الصيانة. عندما تكون السرعة عالية جداً، وسوف تتبخر المتوسطة. عند السرعة منخفضة جداً، سيتم زيادة الرقم الهيدروجيني للوسط، التي يمكن أن تؤثر على نمو الخلايا. كما المتوسط دون التغييرات مؤشر الرقم الهيدروجيني الفينول الحمراء في درجة الحموضة لا يمكن ملاحظة وذلك التغاضي عنها بسهولة. حالما يتم التحقق من تدفق2 أول أكسيد الكربون، يمكن أن يتم استخدام هذه الإعدادات في كل التجارب المستقبلية.
باستخدام الطريقة الموضحة هنا، مصير جسيمات نانوية يمكن بسهولة التحقيق باستخدام التصوير خلية يعيش والوقت الفاصل بين الفحص المجهري. في هذا الإجراء، تستخدم جسيمات نانوية المتاحة تجارياً. ولكن مصير ثيرموسينسيتيفي17،10من الدهنية الأيوني؛ الدهنية المخصب مع سلسلة قصيرة شينجوليبيدس18؛ وجسيمات نانوية تغليف المخدرات الأخرى8،19 تم أيضا التحقيق بهذه الطريقة في الورم والخلايا الطبيعية.

القدرة على متابعة عملية بيولوجية، مثل التفاعلات خلية خلية، في جملة-والنقل داخل الخلايا والإقبال مجمع السامة للخلايا، والبروتين-بروتين تفاعل الجزيئات واحدة في الخلايا الحية والأنسجة، وقد اكتسب أهمية كبيرة على مر آخر العقد، كما أنه يوفر بعدا إضافيا من "الوقت الحقيقي". في هذه المخطوطة، أسلوب لمتابعة مصير داخل الخلايا الحرة دوكس ودوكس إدراج في جسيمات نانوية (دوكس-NP) وصف.
جسيمات نانوية قد استخدمت على مدى عقود لعلاج أنواع معينة من السرطان. وقد وافق NP دوكس لعلاج الإيدز ساركوما كابوزي، المتقدمة المبيض والثدي السرطان، والورم النخاعي المتعدد1. أنها واحدة من جسيمات نانوية الاسمافرون الأولى واستحداث في الإعداد السريرية. يتم مسح النموذج الحر، دوكس، إلى حد كبير من الدورة الدموية، ويحد من قدرتها على الوصول إلى موقع الورم بكميات كافية. وعلاوة على ذلك، يرافقه العلاج آثار جانبية حادة والحد من الجرعات، مثل التهاب الفم وفشل القلب. عندما مغلفة في سي الاسمافرون جسيمات نانوية يزيد وقت الدورة الدموية من دقائق إلى أيام2. هذا النوع من المحتوية على الكوليسترول الحويصلية مستقر تماما، ويحدد هذا الاستقرار الدوائية للمخدرات مغلفة.
بيد أن هذا الجمود له جانب سلبي. السامة للخلايا قدرة مركب نحو الخلايا السرطانية الأولى المقيمة في المختبر، وقد ثبت أن دوكس أقوى من فحوصات دوكس-NP في السامة للخلايا3،4. كان الافتراض بأن استقرار الناقل يمنع الإفراج والخلوية الإقبال على المخدرات، وأنه من المفيد للتحقيق في هذه الظاهرة كذلك. خصائص الاسمافرون الجوهرية، بنيت لآخر العناصر العدوانية في مجرى الدم وتصل إلى موقع الورم سليمة، أسفرت عن التوافر الأحيائي البصر من المكونات السامة للخلايا (أي دوكس) في موقع الهدف (أي ورم نواة الخلية). على الرغم من تحسن NP دوكس هارديلي الاستجابة مقارنة بالنموذج الحر، كانت لا تزال ذات قيمة السريرية، كما تغليف إلى حد كبير الآثار كارديوتوكسيك5. في السنوات التالية، تم تغليف المركبات الأخرى في ناقلات نانو6. أيضا، تعديل الناقلين أسفرت عن الإفراج عن المخدرات المشغلة (أي، في موقع الورم) لكنها حافظت على استقرار في7،دوران الدم8. ورغم سنوات من التحقيق والاستخدام السريري، مصائر intratumoral نانوكاريرس مثل دوكس-NP لا تزال غير واضحة تماما. في منشور صدر مؤخرا، فقد ظهر اتخاذ نانوحبيبات ككل بينما دوكس تظل حبيسة lysosomes9.
امتصاص الخلوية لبيان نانوحبيبات والمخدرات هي العمليات الدينامية التي يمكن رصد أفضل استخدام التصوير خلية يعيش. وعلاوة على ذلك، علم الأنسجة الكلاسيكية، في الخلايا التي هي المحتضنة وإصلاحها بعد ذلك، يمكن أن يعطي نتائج خاطئة إذا كان التثبيت يدمر الناقل الاسمافرون ويدخل القطع الأثرية. هو الشرط الرئيسي لتصوير خلية يعيش التصور، ويفضل أن يكون ذلك قبل الأسفار، للعملية المطلوبة. مركبات معينة، مثل دوكس، يكون الأسفار حمراء مضمنة. أيضا، يمكن إدخال علامات مضيئة إلى الناقل، ويمكن تصور العضيات الخلية باستخدام علامات خلية يعيش. وبهذه الطريقة، يمكن تصويرها صفيف المعلمات، مثل الإقبال على الناقل، والإفراج عن المخدرات، والتعريب الخلوية للناقل، والمخدرات، وتحليلها. هنا، يتم وصف أسلوب الذي يتبع مصير بين الخلايا دوكس وأرستها دوكس في العديد من الخلايا السرطانية في الوقت الحقيقي. أيضا، هذا الأسلوب يمكن تكييفها بسهولة لخلق الظروف المثالية المستهدفة (مثلاً، اتهم جسيمات نانوية10) وآثار الإفراج عن المخدرات (مثلاً، hyperthermia7).

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" width="1013">
	<tbody>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:252px;">DMEM (no phenol-red)</td>
			<td style="width:263px;">Sigma</td>
			<td style="width:115px;">D1145</td>
			<td style="width:384px;">Supplemented with 1 mM L-glutamine and 10 % FCS</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:252px;">Trypsin-versene (EDTA)</td>
			<td style="width:263px;">Lonza</td>
			<td style="width:115px;">BE17-161E</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:252px;">Fetal calf serum</td>
			<td style="width:263px;">Sigma</td>
			<td>F7524</td>
			<td>Heat inactivate for 30 min at 55 &#186;C</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:252px;">L-Glutamin</td>
			<td style="width:263px;">Lonza</td>
			<td>BE17-605E</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:252px;">Gelatin from bovine skin</td>
			<td style="width:263px;">Sigma</td>
			<td style="width:115px;">G9391</td>
			<td>Make a 0,1% solution in PBS, sterile</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:252px;">Phosphate buffered saline (PBS)</td>
			<td style="width:263px;">Sigma</td>
			<td>D8537</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:252px;">Stericup 0,22 &#181;m filter - 500 ml&#160;</td>
			<td style="width:263px;">Millipore</td>
			<td style="width:115px;">SCGPU05RE</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:252px;">Trypan-blue</td>
			<td style="width:263px;">Sigma</td>
			<td>T8154</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:21px;width:252px;">Cells: Lewis lung carcimoma</td>
			<td style="width:263px;">ATCC</td>
			<td>CRL-1642</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:21px;width:252px;">Cells: B16BL6</td>
			<td style="width:263px;">Dr. P. Brouckaert, Ghent University</td>
			<td>donated</td>
			<td>Ref.10</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:21px;width:252px;">Cells: BLM and 1F6</td>
			<td style="width:263px;">Dr. van Muijen, University of Nijmegen</td>
			<td>donated</td>
			<td>Ref.11</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:252px;">Petri dish</td>
			<td style="width:263px;">Greiner</td>
			<td style="width:115px;">664160</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:252px;">Doxorubicin</td>
			<td style="width:263px;">Actavis&#160;</td>
			<td style="width:115px;"></td>
			<td>mentioned as dox in the manuscript</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:252px;">Doxil/Caelyx</td>
			<td style="width:263px;">Janssen-Cilag</td>
			<td style="width:115px;"></td>
			<td>mentioned as Dox-NP in the manuscript</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:252px;">Syringe filter 0.2 &#181;m</td>
			<td style="width:263px;">VWR international</td>
			<td style="width:115px;">10462200</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:252px;">Lysotracker-green DND-26</td>
			<td style="width:263px;">Invitrogen</td>
			<td style="width:115px;">L7526</td>
			<td>mentioned as lyosomal marker (LM)-green in manuscript</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:252px;">Lysotracker-red DND-99</td>
			<td style="width:263px;">Invitrogen</td>
			<td style="width:115px;">L7528</td>
			<td>mentioned as lyosomal marker (LM)-red in manuscript</td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:252px;">Attofluor cell ring</td>
			<td style="width:263px;">Invitrogen</td>
			<td style="width:115px;">A7816</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:252px;">Cover glass 25 mm #1</td>
			<td style="width:263px;">Thermo scientific</td>
			<td style="width:115px;">CB00250RA1</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:252px;">Stage holder + sealing lid</td>
			<td style="width:263px;">Custom made</td>
			<td style="width:115px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">ZEISS LSM 510 microscope</td>
			<td style="width:263px;">Zeiss</td>
			<td style="width:115px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Software LSM 510 version 3.2 SP2</td>
			<td style="width:263px;">Zeiss</td>
			<td style="width:115px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:252px;">Image J</td>
			<td style="width:263px;">NIH</td>
			<td style="width:115px;"></td>
			<td>https://imagej.nih.gov/ij/index.html</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

using in vitro live-cell imaging to explore chemotherapeutics delivered by lipid-based nanoparticles

تقنيات التصوير التقليدية يمكن أن توفر معلومات مفصلة عن العمليات الخلوية. بيد أن هذه المعلومات تستند إلى صور ثابتة في نظام ديناميكي وإلا، والتغاضي عن مراحل متعاقبة أو يساء تفسيرها بسهولة. ولذلك تصوير خلية يعيش والوقت الفاصل بين الفحص المجهري، فيها الخلايا الحية يمكن اتباعها لساعات أو حتى أيام على نحو مستمر أكثر أو أقل، مفيدة للغاية. يسمح البروتوكول هو موضح هنا لتحقيق مصير جسيمات نانوية العلاج الكيميائي بعد تسليم ميتوتريكسات (دوكس) في الخلايا الحية. دوكس هو عامل إينتيركالاتينج الذي يجب أن يصدر من به nanocarrier لتصبح نشاطا بيولوجيا. وعلى الرغم من تسجيل السريرية لأكثر من عقدين، امتصاص وتوزيع المخدرات الإفراج عن هي لا تزال غير مفهومة تماما. ويستكشف هذا المقال فرضية أن جسيمات نانوية القاعدة الدهنية يتم تناولها بالخلايا السرطانية وهي تتحلل ببطء. دوكس المفرج عنهم هو ثم ذوبانها إلى النواة. لمنع تثبيت القطع الأثرية، تصوير خلية يعيش والوقت الفاصل بين الفحص المجهري، هو موضح في هذا الإجراء التجريبي، يمكن تطبيقها.

Watch this Scientific Journal Video about Using In Vitro Live-cell Imaging to Explore Chemotherapeutics Delivered by Lipid-based Nanoparticles at JoVE.com

Using In Vitro Live-cell Imaging to Explore Chemotherapeutics Delivered by Lipid-based Nanoparticles

تصوير خلية يعيش أداة قوية لتصور العمليات الحيوية. فحص الخلايا الثابتة يوفر الصور الثابتة فقط، الذي يمكن أن يؤدي إلى سوء الفهم والالتباس حول هذه العملية. ويعرض هذا العمل وسيلة لدراسة الامتصاص والإفراج عن المخدرات والتعريب داخل الخلايا من جسيمات نانوية الاسمافرون في الخلايا الحية.

استخدام في المختبر خلية يعيش التصوير لاستكشاف تشريعات تسليمها بالقاعدة الدهنية جسيمات نانوية

Conventional imaging techniques can provide detailed information about cellular processes. However, this information is based on static images in an ...

Research

JoVE Journal

Medicine

Using In Vitro Live-cell Imaging to Explore Chemotherapeutics Delivered by Lipid-based Nanoparticles

Evaluation of Cancer Stem Cell Migration Using Compartmentalizing Microfluidic Devices and Live Cell Imaging

تقييم الخلية الجذعية السرطانية الهجرة عن طريق أجهزة ميكروفلويديك Compartmentalizing والتصوير لايف الخليوي

In the last 40 years, the United States invested over 200 billion dollars on cancer research, resulting in only a 5% decrease in death rate. A major ...

MAME Models for 4D Live-cell Imaging of Tumor: Microenvironment Interactions that Impact Malignant Progression

نماذج مامي لتصوير الخلايا الحية 4D من ورم: التفاعلات المكروية أن التقدم تأثير الخبيثة

We have developed 3D coculture models, which we term MAME (mammary architecture and microenvironment engineering), and used them for live-cell imaging in ...

The Use of Pharmacological-challenge fMRI in Pre-clinical Research: Application to the 5-HT System

استعمال الدوائي، التحدي الرنين المغناطيسي الوظيفي في مرحلة ما قبل السريرية للبحوث: بالتطبيق على النظام 5-HT

Pharmacological MRI (phMRI) is a new and promising method to study the effects of substances on brain function that can ultimately be used to unravel ...

Multi-modal Imaging of Angiogenesis in a Nude Rat Model of Breast Cancer Bone Metastasis Using Magnetic Resonance Imaging, Volumetric Computed Tomography and Ultrasound

ومتعددة الوسائط التصوير من الأوعية الدموية في نموذج الفئران عاري من سرطان الثدي الإنبثاث العظام باستخدام التصوير بالرنين المغناطيسي، الحجمي التصوير المقطعي والموجات فوق الصوتية

Angiogenesis is an essential feature of cancer growth and metastasis formation. In bone metastasis, angiogenic factors are pivotal for tumor cell ...

Three-Dimensional Culture Assay to Explore Cancer Cell Invasiveness and Satellite Tumor Formation

ثلاثي الأبعاد ثقافة الفحص لاستكشاف سرطان الغازية خلية والأقمار الصناعية ورم تشكيل

Mammalian cell culture in monolayers is widely used to study various physiological and molecular processes. However, this approach to study growing cells ...

Quantitative Visualization of Leukocyte Infiltrate in a Murine Model of Fulminant Myocarditis by Light Sheet Microscopy

التصور الكمي من التسلل الكريات البيض في نموذج الفئران من التهاب عضلة القلب مداهم من قبل ورقة ضوء المجهري

Light-sheet fluorescence microscopy (LSFM), in combination with chemical clearing protocols, has become the gold standard for analyzing fluorescently ...

Dry Powder and Nebulized Aerosol Inhalation of Pharmaceuticals Delivered to Mice Using a Nose-only Exposure System

مسحوق جاف ومرذذ الهباء استنشاق الصيدلة تسليمها الى الفئران باستخدام فقط الأنف نظام التعرض

Obstructive respiratory diseases like asthma and chronic obstructive pulmonary disease (COPD) are currently treated by inhaled anti-inflammatory and ...

Using Retinal Imaging to Study Dementia

باستخدام تصوير الشبكية لدراسة الخرف

The retina offers a unique &#8220;window&#8221; to study pathophysiological processes of dementia in the brain, as it is an extension of the central ...

Quantification of Levator Ani Hiatus Enlargement by Magnetic Resonance Imaging in Males and Females with Pelvic Organ Prolapse

التحديد الكمي لتوسيع الفرجة العاني عضلة رافعة بالتصوير بالرنين المغناطيسي في الذكور والإناث مع انسدال الجهاز الحوض

Here we present a protocol to examine the levator ani hiatus in males and females with pelvic organ prolapse, during the Valsalva maneuver and while ...

Polyethyleneimine-coated Iron Oxide Nanoparticles as a Vehicle for the Delivery of Small Interfering RNA to Macrophages In Vitro and In Vivo

Polyethyleneimine-coated Iron Oxide Nanoparticles as a Vehicle for the Delivery of Small Interfering RNA to Macrophages In Vitro and In Vivo

جسيمات نانوية المغلفة بولييثيلينيميني أكسيد الحديد كوسيلة لإيصال الحمض النووي الريبي التدخل الصغيرة إلى الضامة في المختبر و في فيفو

Because of their critical role in regulating immune responses, macrophages have continuously been the subject of intensive research and represent a ...