Name: a device for performing cell migration/wound healing in a 96-well plate
Uploaded: 2017-03-07T15:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about A Device for Performing Cell Migration/Wound Healing in a 96-Well Plate at JoVE.com

Forfatterne ønsker å takke Mr. Tam Po Leung, Mr. Wong Chi Kin og den tekniske staben av teknisk- naturvitenskapelige fakultet Workshop, Hong Kong Baptist University, for sine tekniske ferdigheter og råd i å lage prototypen på dette wounder.

1. Introduksjon til Deler av wounder (figur 1) <ol><li> Forbered pinneholderen ved å feste såret pinnene i samme avstand. Hold pipettespissene og justere tuppen høyden ved å flytte de justerbare såret pinnene opp og ned. </li><li> Monter den justerbare guiding-bar på forskjellige merker av 96-brønners kulturplater og sørge for at såret området er i en fast stilling. </li><li> Fest den justerbare såret pinnen ved å stramme sekskantskruen. Fest guiding-bar i posisjon ved å stramme hodet caps hex socket på ...

<ol>
	<li>Friedl, P., Wolf, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tumour-cell+invasion+and+migration:+diversity+and+escape+mechanisms.">Tumour-cell invasion and migration: diversity and escape mechanisms.</a> Nat Rev Cancer. 3 (5), 362-374 (2003).</li><li>Friedl, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Prespecification+and+plasticity:+shifting+mechanisms+of+cell+migration.">Prespecification and plasticity: shifting mechanisms of cell migration.</a> Curr Opin Cell Biol. 16 (1), 14-23 (2004).</li><li>Lampugnani, M. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cell+migration+into+a+wounded+area+in+vitro.">Cell migration into a wounded area in vitro.</a> Methods Mol Biol. 96, 177-182 (1999).</li><li>Sholley, M. M., Gimbrone, M. A., Cotran, R. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cellular+migration+and+replication+in+endothelial+regeneration:+a+study+using+irradiated+endothelial+cultures.">Cellular migration and replication in endothelial regeneration: a study using irradiated endothelial cultures.</a> Lab Invest. 36 (1), 18-25 (1977).</li><li>Gotlieb, A. I., Spector, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Migration+into+an+in+vitro+experimental+wound:+a+comparison+of+porcine+aortic+endothelial+and+smooth+muscle+cells+and+the+effect+of+culture+irradiation.">Migration into an in vitro experimental wound: a comparison of porcine aortic endothelial and smooth muscle cells and the effect of culture irradiation.</a> Am J Pathol. 103 (2), 271-282 (1981).</li><li>Chen, Y. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Single-cell+migration+chip+for+chemotaxis-based+microfluidic+selection+of+heterogeneous+cell+populations.">Single-cell migration chip for chemotaxis-based microfluidic selection of heterogeneous cell populations.</a> Sci Rep. 18 (5), 9980 (2015).</li><li>Yarrow, J. C., Periman, Z. E., Westwood, N. J., Mitchison, T. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+high-throughput+cell+migration+assay+using+scratch+wound+healing,+a+comparsion+of+image-based+readout+methods.">A high-throughput cell migration assay using scratch wound healing, a comparsion of image-based readout methods.</a> BMC Biotechnol. 4, 21 (2004).</li><li>Lauder, H., Frost, E. E., Hiley, C. R., Fan, T. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Quantification+of+the+repair+process+involved+in+the+repair+of+a+cell+monolayer+using+an+in+vitro+model+of+mechanical+injury.">Quantification of the repair process involved in the repair of a cell monolayer using an in vitro model of mechanical injury.</a> Angiogenesis. 2 (1), 67-80 (1998).</li><li>Yue, P. Y. K., Leung, E. P. Y., Mak, N. K., Wong, R. N. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+simplified+method+for+quantifying+cell+migration/+wound+healing+in+96-well+plates.">A simplified method for quantifying cell migration/ wound healing in 96-well plates.</a> J. Biomol Screen. 15 (4), 427-433 (2010).</li><li>Yue, P. Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Elucidation+of+the+mechanisms+underlying+the+angiogenic+effects+of+ginsenoside+Rg(1)+in+vivo+and+in+vitro.">Elucidation of the mechanisms underlying the angiogenic effects of ginsenoside Rg(1) in vivo and in vitro.</a> Angiogenesis. 8 (3), 205-216 (2005).</li><li>Kwok, H. H., Chan, L. S., Poon, P. Y., Yue, P. Y., Wong, R. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ginsenoside-Rg1+induces+angiogenesis+by+the+inverse+regulation+of+MET+tyrosine+kinase+receptor+expression+through+miR-23a.">Ginsenoside-Rg1 induces angiogenesis by the inverse regulation of MET tyrosine kinase receptor expression through miR-23a.</a> Toxicol Appl Pharmacol. 287 (3), 276-283 (2015).</li></ol>

Vår celle wounder har flere unike funksjoner i å løse problemene med tradisjonelle celle migrasjon analyser. Den 8-kanals mekanisk celle wounder er laget av høy klasse rustfritt stål (stål 304) med lang levetid som kan steriliseres ved autoklavering. Nesten alle kommersielle merkevarer av 96-brønners kulturplater på markedet kan brukes med denne mekaniske celle wounder på grunn av den justerbare guiding bar. Utformingen av den justerbare guiding bar sikrer også at skrape området er i midten av hver brønn. S?...

Celle migrasjon spiller en viktig rolle i cellulære prosesser, slik som embryogenesen neurogenesis, angiogenese, sårheling, mucosal reparasjon, epiteliale-mesenchymale-overganger ved normal utvikling og sykdom situasjon 1. Det er en komplisert prosess som innebærer samordning av en rekke inter- og intra-cellulære hendelser, inkludert signalmolekyl interaksjoner, celle polarisering, cytoskeletal omorganisering, matrix ombygging, membran protrusion og dynamisk celle-celle adhesjon modulasjon to. Ved å studere celle migrasjon, kan oppdagelsen og validering av kjemikalier eller biomolekyler som fører til celle bevegelse og relaterte biokjemiske mekanismer bestemmes. Denne grunnleggende prosessen kan med fordel brukes som en proxy for ulike programmer, for eksempel sykdom behandling og narkotika målretting. Den såret analysen er en av de cellemigrerings analysene 3. Her, enindividuell prøve av cellene blir delvis fjernet ved mekaniske midler for å fremstille en ribbet område hvor cellene vil migrere til å dekke området. Prosentandelen gjenvinning på et bestemt tidspunkt vil bli overvåket. Ved håndtering av stort antall prøver, kan spørsmål som eksperimentell kostnader og krysskontaminering innenfor prøvene være problematisk. Selv om mange kommersielle verktøy og analyser er tilgjengelige for å studere cellemigrering 4, 5, 6, mange av dem som kreves kostbart og avansert utstyr og forbedringer er fortsatt nødvendig. Av disse grunner er en 8-kanals mekanisk celle wounder (figur 1) som er utviklet. Våre 8-kanals mekanisk celle wounder har innarbeidet flere unike trekk i å løse de ovennevnte problemer. Det gir fleksibilitet til å utføre cellemigrasjon / såret analyser i 96-brønn kultur plate format. Den justerbare guiding bar design sikrer at grunnen området er i den sentrale plasseringen av hver brønn. Dessuten kan høyden på guiding barer justeres slik at wounder gjelder for ulike merker av kulturplater. Til slutt, den justerbare såret pin design gir en jevn kontakt pipettespissene med kulturen plate overflaten for å oppnå samtidig og reproduserbar såret syv, åtte.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>96-well cell culture plate</td>
			<td>Nunc</td>
			<td>167008</td>
			<td>Other brands of 96-well cell culture plate can also be used</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>P10 pipette tips</td>
			<td>Axygen</td>
			<td>301-03-051</td>
			<td>Short P10 pipette tip is more easy to create a clear wound</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Wounder</td>
			<td>R&#38;P Technology Limited</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Medium 199</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>M2520-1L</td>
			<td>For cell culture of human umbilical vein endothelial cells. 
			Use appropirate culture medium and condition for other type of cells.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fetal bovine serum</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>26140079</td>
			<td>For cell culture of human umbilical vein endothelial cells. 
			Use appropirate culture medium and condition for other type of cells.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Penicillin/Streptomycin</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>15140122</td>
			<td>For cell culture of human umbilical vein endothelial cells. 
			Use appropirate culture medium and condition for other type of cells.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Heparin sodium salt from porcine intestinal mucosa</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>H3393</td>
			<td>For cell culture of human umbilical vein endothelial cells. 
			Use appropirate culture medium and condition for other type of cells.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Gelatin from bovine skin</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>G9391</td>
			<td>For cell culture of human umbilical vein endothelial cells. 
			Use appropirate culture medium and condition for other type of cells.</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

a device for performing cell migration/wound healing in a 96-well plate

Den cellemigrering / såre-analysen er en vanlig brukt metode for å studere cellemigrering og andre biologiske prosesser, slik som angiogenese og tumormetastase. I denne analysen blir celler dyrket for å danne et konfluent monolag, og en mekanisk sår er skapt ved å skrape med en enhet. Da migrasjonsrate av cellene mot ribbet området kan bli overvåket ved avbildning. Våre 8-kanals mekanisk wounder er utformet for å håndtere de fleste av de problemer som er forbundet med cellemigrering analysen. For det første, kan vår wounder være lett steriliseres ved autoklave eller med vanlige desinfeksjonsmidler. For det andre, de individuelle justerbare pinnene tillater jevn kontakt med cellekulturplaten, slik at skarpe og reproduserbare sår kan opprettes. For det tredje, de veiledende barer på begge sider av wounder sikre konsekvent såret posisjon i hver brønn. Bruk av engangs plast pipetter for såret kan videre gi bedre håndtering av wounder samt å redusere risikoen for kryss contamination. Som konklusjon kan vår celle wounder tilveie forskere med et brukervennlig og reproduserbar anordning for å utføre cellemigrering analyse ved bruk av standard 96-brønners kulturplate.

Dette 8-kanals mekanisk wounder er konstruert for å skrape en celle monolag for å utføre cellemigrering analysen. Det er en brukervennlig enhet som kan utføre celle skrape analyser i 96-brønners plater på mindre enn et minutt uten spesiell opplæring. Dette wounder kan innføre viklede områder på cellemonolagene med en ensartet bredde på omtrent 600 um og med skarpe kanter (figurene 5 og 6). Bredden på sårene avhenger helt av pipetter og bruke...

Watch this Scientific Journal Video about A Device for Performing Cell Migration/Wound Healing in a 96-Well Plate at JoVE.com

A Device for Performing Cell Migration/Wound Healing in a 96-Well Plate

Her presenterer vi en protokoll for å utføre en semi høy gjennomstrømning cellemigrasjon analyse på en 96-brønners cellekulturplate. Denne protokollen er en rask, enkel og økonomisk metode for å lage konsistente skrape sår på en celle monolag.

En enhet for utøvende Cell migrasjon / Wound Healing i en 96-brønns plate

The cell migration/wounding assay is a commonly used method to study cell migration and other biological processes, such as angiogenesis and tumor ...

Research

JoVE Journal

Developmental Biology

Understanding Early Organogenesis Using a Simplified In Situ Hybridization Protocol in Xenopus

Understanding Early Organogenesis Using a Simplified In Situ Hybridization Protocol in Xenopus

Forstå Tidlig organogenesis hjelp av en forenklet<em&gt; In Situ</em&gt; Hybridisering Protocol i<em&gt; Xenopus</em

Organogenesis is the study of how organs are specified and then acquire their specific shape and functions during development.  The Xenopuslaevis embryo ...

Automated Quantification of Hematopoietic Cell &#8211; Stromal Cell Interactions in Histological Images of Undecalcified Bone

Automated Quantification of Hematopoietic Cell ÃƒÂ¢Ã¢â€šÂ¬Ã¢â‚¬Å“ Stromal Cell Interactions in Histological Images of Undecalcified Bone

Automatisert Kvantifisering av Hematopoietiske Cell - stromal Cell Samhandling i Histologiske Bilder av Undecalcified Bone

Confocal microscopy is the method of choice for the analysis of localization of multiple cell types within complex tissues such as the bone marrow. ...

Scalable 96-well Plate Based iPSC Culture and Production Using a Robotic Liquid Handling System

Scalable 96-brønns plate Basert IPSC Culture and Production Bruke en Robotic Liquid Handling System

Continued advancement in pluripotent stem cell culture is closing the gap between bench and bedside for using these cells in regenerative medicine, drug ...

Establishment of a Clinically Relevant Ex Vivo Mock Cataract Surgery Model for Investigating Epithelial Wound Repair in a Native Microenvironment

Establishment of a Clinically Relevant Ex Vivo Mock Cataract Surgery Model for Investigating Epithelial Wound Repair in a Native Microenvironment

Etablering av en klinisk relevant<em&gt; Ex Vivo</em&gt; Mock Cataract Surgery Modell for Gransker Epithelial Wound Reparasjon i Native mikromiljøet

The major impediment to understanding how an epithelial tissue executes wound repair is the limited availability of models in which it is possible to ...

Microinjection for Transgenesis and Genome Editing in Threespine Sticklebacks

Mikroinjeksjon for transgenesis og Genome redigering i Threespine Sticklebacks

The threespine stickleback fish has emerged as a powerful system to study the genetic basis of a wide variety of morphological, physiological, and ...

Adenoviral Gene Therapy for Diabetic Keratopathy: Effects on Wound Healing and Stem Cell Marker Expression in Human Organ-cultured Corneas and Limbal Epithelial Cells

Adenoviral Gene Therapy for diabetiker keratopathy: Effekter på sårtilheling og stamcelle Marker uttrykk i Menneskerettighets Organ-dyrkede hornhinner og limbale Epitelceller

The goal of this protocol is to describe molecular alterations in human diabetic corneas and demonstrate how they can be alleviated by adenoviral gene ...

Rapid Isolation of BMPR-IB+ Adipose-Derived Stromal Cells for Use in a Calvarial Defect Healing Model

Rapid Isolering av BMPR-IB + adipose-avledet stromale celler for bruk i en Calvarial Defect Healing Model

Invasive cancers, major injuries, and infection can cause bone defects that are too large to be reconstructed with preexisting bone from the patient's own ...

A Novel Mammary Fat Pad Transplantation Technique to Visualize the Vessel Generation of Vascular Endothelial Stem Cells

En ny mammarfettpute-transplantasjonsteknikk for å visualisere fartøygenerering av vaskulære endotelceller

Endothelial cells (ECs) are the fundamental building blocks of the vascular architecture and mediate vascular growth and remodeling to ensure proper ...

Generation of Scaffold-free, Three-dimensional Insulin Expressing Pancreatoids from Mouse Pancreatic Progenitors In Vitro

Generation of Scaffold-free, Three-dimensional Insulin Expressing Pancreatoids from Mouse Pancreatic Progenitors In Vitro

Generasjon av stillaset-fri, tredimensjonale Insulin uttrykke Pancreatoids fra musen bukspyttkjertelen Progenitors In Vitro

The pancreas is a complex organ composed of many different cell types that work together to regulate blood glucose homeostasis and digestion. These cell ...

Visualizing the Node and Notochordal Plate In Gastrulating Mouse Embryos Using Scanning Electron Microscopy and Whole Mount Immunofluorescence

Visualisere Node og Notochordal Plate i Gastrulating Mouse embryoer skanning elektronmikroskop og hele Mount Immunofluorescence

The post-implantation mouse embryo undergoes major shape changes after the initiation of gastrulation and morphogenesis. A hallmark of morphogenesis is ...