Name: peptide scanning-assisted identification of a monoclonal antibody-recognized linear b-cell epitope
Uploaded: 2017-03-24T14:00:00
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The authors thank Miss Ching-Chun Lin and Miss Diana Lin of the Core Facility of the Institute of Cellular and Organismic Biology (ICOB) of Academia Sinica for offering their expertise on peptide synthesis and DNA sequencing, respectively. This study was supported by Academia Sinica.

1. मोनोक्लोनल एंटीबॉडी की तैयारी <ol><li> संस्कृति आरजी M56 माउस मोनोक्लोनल हाइब्रिडोमा के साथ 5% सीओ 2 के पूरक 37 डिग्री सेल्सियस पर 175T बोतल में सीरम मुक्त माध्यम में कोशिकाओं 2। सतह पर तैरनेवाला ली?...

<ol>
	<li>Milstein, C., Kohler, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Clonal+variations+of+myelomatous+cells+(proceedings).">Clonal variations of myelomatous cells (proceedings).</a> Minerva Med. 68 (50), 3453 (1977).</li><li>Lai, Y. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+vitro+neutralization+by+monoclonal+antibodies+against+yellow+grouper+nervous+necrosis+virus+(YGNNV)+and+immunolocalization+of+virus+infection+in+yellow+grouper+Epinephelus+awoara+(Temminck+&amp;+Schlegel).">In vitro neutralization by monoclonal antibodies against yellow grouper nervous necrosis virus (YGNNV) and immunolocalization of virus infection in yellow grouper Epinephelus awoara (Temminck &amp; Schlegel).</a> J Fish Dis. 24 (4), 237-244 (2001).</li><li>Chen, C. W., Wu, M. S., Huang, Y. J., Cheng, C. 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S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Propagation+of+yellow+grouper+nervous+necrosis+virus+(YGNNV)+in+a+new+nodavirus-susceptible+cell+line+from+yellow+grouper,+Epinephelus+awoara+(Temminck+&amp;+Schlegel),+brain+tissue.">Propagation of yellow grouper nervous necrosis virus (YGNNV) in a new nodavirus-susceptible cell line from yellow grouper, Epinephelus awoara (Temminck &amp; Schlegel), brain tissue.</a> J Fish Dis. 24 (5), 299-309 (2001).</li><li>Lougee, E., Morjaria, S., Shaw, O., Collins, R., Vaughan, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+new+approach+to+HLA+typing+designed+for+solid+organ+transplantation:+epityping+and+its+application+to+the+HLA-A+locus.">A new approach to HLA typing designed for solid organ transplantation: epityping and its application to the HLA-A locus.</a> Int J Immunogenet. 40 (6), 445-452 (2013).</li><li>Radulovich, N., Leung, L., Tsao, M. 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Their determination has revealed important aspects of immune recognition and generated strategies for synthetic mimicking of protein binding sites.</a> Eur J Biochem. 145 (1), 1-20 (1984).</li><li>Opuni, K. F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mass+spectrometric+epitope+mapping.">Mass spectrometric epitope mapping.</a> Mass Spectrom Rev. , (2016).</li><li>Chang, C. Y., Chiu, C. C., Christopher John, J. A., Liao, I. C., Lea&#241;o, E. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> The Aquaculture of Groupers. , 207-224 (2008).</li><li>Conti-Tronconi, B. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Alpha-bungarotoxin+and+the+competing+antibody+WF6+interact+with+different+amino+acids+within+the+same+cholinergic+subsite.">Alpha-bungarotoxin and the competing antibody WF6 interact with different amino acids within the same cholinergic subsite.</a> Biochemistry. 30 (10), 2575-2584 (1991).</li><li>Briggs, S., Price, M. R., Tendler, S. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fine+specificity+of+antibody+recognition+of+carcinoma-associated+epithelial+mucins:+antibody+binding+to+synthetic+peptide+epitopes.">Fine specificity of antibody recognition of carcinoma-associated epithelial mucins: antibody binding to synthetic peptide epitopes.</a> Eur J Cancer. 29 (2), 230-237 (1993).</li><li>Chen, N. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Crystal+Structures+of+a+Piscine+Betanodavirus:+Mechanisms+of+Capsid+Assembly+and+Viral+Infection.">Crystal Structures of a Piscine Betanodavirus: Mechanisms of Capsid Assembly and Viral Infection.</a> PLoS Pathog. 11 (10), e1005203 (2015).</li><li>Badani, H., Garry, R. F., Wimley, W. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Peptide+entry+inhibitors+of+enveloped+viruses:+The+importance+of+interfacial+hydrophobicity.">Peptide entry inhibitors of enveloped viruses: The importance of interfacial hydrophobicity.</a> Biochim Biophys Acta. , (2014).</li><li>Qureshi, N. M., Coy, D. H., Garry, R. F., Henderson, L. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Characterization+of+a+putative+cellular+receptor+for+HIV-1+transmembrane+glycoprotein+using+synthetic+peptides.">Characterization of a putative cellular receptor for HIV-1 transmembrane glycoprotein using synthetic peptides.</a> AIDS. 4 (6), 553-558 (1990).</li></ol>

इस प्रोटोकॉल एक एमएबी स्तर पर मान्यता प्राप्त रैखिक मिलान की पहचान करने के लिए एक तेजी से और सरल तकनीक प्रदान करता है। ध्यान में पेप्टाइड संश्लेषण और synthesizing पेप्टाइड्स की उत्पादन क्षमता की लागत ले रहा ह?...

प्रतिरक्षा प्रणाली में, वी, डी, और जम्मू क्षेत्रों के पुनर्संयोजन एंटीबॉडी विभिन्न एंटीजन के लिए बाध्य रोगजनक संक्रमण से मेजबान की रक्षा के लिए पूरकता का निर्धारण क्षेत्रों (सीडीआर) की जबरदस्त रूपों बनाने के लिए अनुमति देता है। एंटीजन के खिलाफ एंटीबॉडी के उदासीन रक्षा एंटीबॉडी के सीडीआर और एंटीजन की epitopes के बीच स्थानिक पूरकता पर निर्भर करता है। इसलिए, इस आणविक बातचीत की समझ के रोगनिरोधी वैक्सीन डिजाइन और चिकित्सीय पेप्टाइड दवा के विकास में मदद करेंगे। हालांकि, इस निराकरण बातचीत दोनों एक ही प्रतिजन से कई प्रतिजनी डोमेन और एंटीबॉडी के कई सीडीआर, जिसके फलस्वरूप मिलान निर्धारण प्रक्रिया को और अधिक जटिल बनाने से प्रभावित किया जा सकता है। सौभाग्य से, हाइब्रिडोमा प्रौद्योगिकी के विकास, जो मायलोमा कोशिकाओं के साथ अलग-अलग एंटीबॉडी उत्पादक कोशिकाओं फ़्यूज़, सेकंड के लिए कोशिकाओं का एक लगातार विभाजित बैच के लिए अनुमति देता हैजाल एक विशिष्ट एंटीबॉडी, एक मोनोक्लोनल एंटीबॉडी (एमएबी) के रूप में जाना जाता है 1। हाइब्रिडोमा कोशिकाओं को एक विशिष्ट प्रतिजन का एक भी प्रतिजनी डोमेन के लिए बाध्य करने के लिए इन शुद्ध, उच्च आत्मीयता MABS का उत्पादन। प्रतिजन प्रतिरक्षी की स्थापना की, पेप्टाइड स्कैनिंग सहित कई दृष्टिकोण के संबंध के साथ, एक प्रतिजन अपनी इसी एमएबी का उपयोग करने का मिलान निर्धारित करने के लिए इस्तेमाल किया जा सकता है। सिंथेटिक पेप्टाइड प्रौद्योगिकी के क्षेत्र में हाल के घटनाक्रम पेप्टाइड स्कैनिंग तकनीक को और अधिक सुलभ और अधिक प्रदर्शन करने के लिए सुविधाजनक बना दिया है। संक्षेप में, ओवरलैपिंग सिंथेटिक पेप्टाइड्स का एक सेट के लक्ष्य प्रतिजन अनुक्रम के अनुसार उत्पादन कर रहे हैं और एमएबी संकरण के लिए एक ठोस समर्थित झिल्ली से जुड़े हुए हैं। पेप्टाइड स्कैनिंग न केवल एंटीबॉडी बाध्यकारी क्षेत्र नक्शा करने के लिए एक आसान तरीका प्रदान करता है, लेकिन यह भी अवशेषों स्कैनिंग या प्रतिस्थापन के माध्यम से अमीनो एसिड (एए) mutagenesis की सुविधा मिलान पेप्टाइड का प्रत्येक हूँ अवशेषों और एंटीबॉडी की सीडीआर के बीच बाध्यकारी बातचीत का मूल्यांकन करने के लिए। 2, 3, 4 का उपयोग कर के रैखिक मिलान के कुशल पहचान के लिए एक प्रोटोकॉल का वर्णन है। प्रोटोकॉल एमएबी तैयारी, निर्माण और क्रमानुसार छोटा पुनः संयोजक प्रोटीन की अभिव्यक्ति, सिंथेटिक ओवरलैपिंग पेप्टाइड डिजाइन, डॉट-धब्बा संकरण, alanine स्कैनिंग, और प्रतिस्थापन म्युटाजेनेसिस भी शामिल है। पेप्टाइड संश्लेषण की उच्च लागत को देखते हुए, क्रमानुसार एक वांछित लक्ष्य प्रोटीन की पुनः संयोजक प्रोटीन को काटे के कदम संशोधित किया गया था, और प्रतिजनी क्षेत्र के आसपास 100 से 200 हूँ अवशेषों के लिए नीचे संकुचित था इससे पहले कि सिंथेटिक पेप्टाइड सरणी डॉट धब्बा विश्लेषण किया गया था।

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>Hybrid-SFM medium</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>12045-076</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dulbeccos&#39;s Phophate-Buffered Saline (PBS)</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>21600-069</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pfu DNA Polymerase&#160;</td>
			<td>Thermo Scientific&#160;</td>
			<td>EP0502&#160;</td>
			<td>Including buffers</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>T4 DNA Ligase</td>
			<td>Roche</td>
			<td>10799009001</td>
			<td>Including buffers</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>NdeI&#160;</td>
			<td>New England Biolabs</td>
			<td>R0111S</td>
			<td>Including buffers</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>XhoI&#160;</td>
			<td>New England Biolabs</td>
			<td>R0146S</td>
			<td>Including buffers</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>pET-20b(+) vector</td>
			<td>Novagen, Merck Millipore</td>
			<td>69739</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>E.coli DH-5&#945; competent cell</td>
			<td>RBC Bioscience</td>
			<td>RH617</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>E.coli BL-21(DE3) competent cell</td>
			<td>RBC Bioscience</td>
			<td>RH217</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ampicillin</td>
			<td>Amresco</td>
			<td>0339-25G</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>LB broth&#160;</td>
			<td>Invitrongen</td>
			<td>12780-052</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Isopropylthio-&#946;-D-thiogalactoside (IPTG)</td>
			<td>MDBio, Inc.</td>
			<td>101-367-93-1</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Methanol</td>
			<td>Merck Millipore</td>
			<td>106009</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Polyoxyethylene 20 Sorbitan Monolaurate (Tween-20)</td>
			<td>J.T.Baker</td>
			<td>X251-07</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dimethyl sulfoxide (DMSO)</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>D2650</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Glycine</td>
			<td>Amresco</td>
			<td>0167-5KG</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tris</td>
			<td>Affymetrix, USB</td>
			<td>75825</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>NaCl</td>
			<td>Amresco</td>
			<td>0241-1KG</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>EDTA</td>
			<td>Amresco</td>
			<td>0105-1KG</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Glycerol</td>
			<td>Amresco</td>
			<td>0854-1L</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>NaN3</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>S2002-500G</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BCIP/NBT</td>
			<td>PerkinElmer</td>
			<td>NEL937001PK</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Goat Anti-Mouse IgG, Fc fragment antibody</td>
			<td>Jackson ImmunoResearch</td>
			<td>115-055-008</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Immobilon-P (Polyvinylidene fluoride, PVDF)</td>
			<td>Merck Millipore</td>
			<td>IPVH00010</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Protein G Agarose Fast Flow</td>
			<td>Merck Millipore</td>
			<td>16-266</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>QIAquick PCR Purification kit</td>
			<td>Qiagen</td>
			<td>28106</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>UVP BioSpectrum 600 Image System</td>
			<td>UVP</td>
			<td>n/a</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>VisionWorks LS Analysis Software Ver 6.8</td>
			<td>UVP</td>
			<td>n/a</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MyCycler thermal cycler</td>
			<td>BioRad</td>
			<td>1709713</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

peptide scanning-assisted identification of a monoclonal antibody-recognized linear b-cell epitope

प्रतिरक्षा प्रणाली द्वारा एक प्रतिजनी मिलान की पहचान एंटीबॉडी कि टीकों और पेप्टाइड दवाओं के विकास की सुविधा हो सकती निष्क्रिय करने की सुरक्षा व्यवस्था को समझने के लिए अनुमति देता है। पेप्टाइड स्कैनिंग एक सरल और कारगर तरीका है कि सीधी रेखीय मिलान एक मोनोक्लोनल एंटीबॉडी (एमएबी) द्वारा मान्यता प्राप्त नक्शे है। इधर, लेखकों एक मिलान दृढ़ संकल्प एक निष्क्रिय एमएबी का उपयोग करते हुए नर्वस नेक्रोसिस वायरस कोट प्रोटीन की प्रतिजनी मान्यता के लिए क्रमानुसार छोटा पुनः संयोजक प्रोटीन, सिंथेटिक पेप्टाइड डिजाइन, और डॉट धब्बा संकरण से जुड़े कार्यप्रणाली प्रस्तुत करते हैं। इस तकनीक में एक polyvinylidene फ्लोराइड (PVDF) झिल्ली पर सिंथेटिक पेप्टाइड्स और MABS के डॉट-धब्बा संकरण पर निर्भर करता है। एक वायरल कोट प्रोटीन आरजी M56 एमएबी द्वारा मान्यता प्राप्त की न्यूनतम प्रतिजनी क्षेत्र कदम-दर-कदम से नीचे संकुचित किया जा सकता है कि एक 6-मेर पेप्टाइड मिलान पर पेप्टाइड मानचित्रण छंटनी की। इसके अलावा, alanine स्कैनिंग mutagenesis और अवशेषों उपstitution प्रत्येक अमीनो एसिड मिलान को बनाने के अवशेषों के बंधन महत्व को चिह्नित करने के लिए किया जा सकता है। मिलान साइट flanking अवशेषों पेप्टाइड रचना नियमन में महत्वपूर्ण भूमिका निभाने के लिए पाए गए। पहचान मिलान पेप्टाइड एक एक्स-रे विवर्तन अध्ययन और कार्यात्मक प्रतियोगिता, या चिकित्सा विज्ञान के लिए के लिए मिलान पेप्टाइड एंटीबॉडी परिसरों के क्रिस्टल फार्म का उपयोग किया जा सकता है।

इस प्रयोग के लक्ष्य एमएबी का उपयोग कर सोख्ता डॉट के माध्यम से एक मिलान की पहचान करने के लिए किया गया था। तेजी से और कुशलता से नीचे प्रतिजनी क्षेत्र एमएबी द्वारा मान्यता प्राप्त संकीर्ण करन...

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Peptide Scanning-assisted Identification of a Monoclonal Antibody-recognized Linear B-cell Epitope

Here, the authors present a simple and efficient protocol to define a linear antigenic epitope using a purified monoclonal antibody and peptide scanning through dot-blot hybridization. The identified epitope can then be used in therapeutic and diagnostic applications.

पेप्टाइड स्कैनिंग की मदद से एक मोनोक्लोनल एंटीबॉडी मान्यता प्राप्त लीनियर बी-सेल मिलान की पहचान

The identification of an antigenic epitope by the immune system allows for the understanding of the protective mechanism of neutralizing antibodies that ...

The overall goal of this protocol is to identify a monoclonal antibody-recognized linear B-cell epitope using serially truncated recombinant proteins and peptide scanning by dot-blot hybridization. This method can help answer key questions concerning the molecule interaction between antigen and the antibody. The main advantages of this technique are its simplicity and efficiency.The identifying epitope can then be used in fuller investigations such as in therapeutical and diagnostic applications. Demonstrating the procedure will be Chien-Wen Chen, a post doctorate from my laboratory. To begin, grow RGM56 mouse monoclonal hybridoma cells in a hybrid serum free medium.Maintain cell cultures in 175 T flasks at 37 degrees Celsius 5%carbon dioxide. After five days of incubation, collect the culture medium after it has turned yellow and centrifuge the supernatant at 4, 500 times G for 30 minutes at four degrees Celsius. Then, discard the pelleted cell debris to obtain the antibody in solution.Next, add two milliliters of 50%protein G agro slurry to a five milliliter column and equilibrate the resin with 10 milliliters of ice cold PBS, equaling 10 volumes of preloaded resin. Load 200 milliliters of the previously prepared antibody solution onto the equilibrated column and discard the fraction that passes through the column. Using 10 milliliters of ice cold PBS, wash the column twice.Finally, to loot the antibody from the resin, add 10 milliliters of millimolar glycerin solution at pH 2.7 to the column. Collect 900 microliter fractions in microcentrifuge tubes previously filled with 100 microliters of 10X neutralization buffer. Store the purified antibody in 50%glycerol solution supplemented with sodium azide at minus 20 degrees Celsius.Prepare the constructs and transform E.coli BL21 cells as described in the text protocol. Then, transfer a single colony into a 15 milliliter tube containing three milliliters of LB broth supplemented with 100 micrograms per milliliter ampicillin and loosely cap the tube. Incubate the culture at 37 degrees Celsius with 150 RPM shaking.Monitor the optical density of the culture at 600 nanometers. When it reaches about 0.6, cool the culture to 25 degrees Celsius. Then, add IPTG at a final concentration of 0.4 millimolar to induce the expression of the recombinant protein.Incubate the culture for another four hours at 25 degrees Celsius with 200 RPM shaking. After incubation, transfer one milliliter of the bacterial culture into a microcentrifuge tube. Centrifuge the cells at 12, 000 times G for one minute and discard the supernatant.Pipetting up and down with a micropipette, resuspend the cell pellet in 100 microliters of denaturation buffer. And mix the resulting suspension by vigorous vortexing to obtain a ready to use recombinant protein sample. To proceed with dot-blot hybridization, dissolve each synthetic peptide in DMSO to obtain 10 milligram per milliliter solutions.Then, activate the PVDF membrane in methanol for two minutes and equilibrate it with modified Towbin buffer for another two minutes. Rinse a piece of chromatography paper with modified Towbin buffer and lay the equilibrated PVDF membrane on it. Let the membrane sit until the buffer disappears from its surface.Using a 10 microliter tip, add two microliters of each peptide or recombinant protein sample onto the membrane and let it air dry for 10 minutes. Spotting a symbol onto the membrane is the most critical step in this protocol. Loading a precise amount of a sample onto a small area of the PVDF membrane needs careful attention.Next, block the membrane in TBST buffer supplemented with 5%nonfat milk for 30 minutes at room temperature with gentle shaking. Dilute the RGM56 monoclonal antibody in TBST buffer supplemented with 5%nonfat milk. And add the antibody solution to the membrane.Incubate the membrane at 37 degrees Celsius for one hour with gentle shaking. After incubation, remove the antibody solution. And wash the membrane twice in TBST buffer for five minutes with gentle shaking.Then, add to the membrane the solution of the secondary antibody diluted in TBST buffer with 5%nonfat milk. Incubate the membrane for one hour at 37 degrees Celsius with gentle shaking. Upon incubation, discard the antibody solution and wash the membrane in TBST buffer twice for five minutes with gentle shaking.Then, develop the membrane with the substrate solution at room temperature for 15 minutes in the dark. When the signal appears, stop the reaction by washing the membrane with doubly distilled water. After air drying the membrane, capture the dot-blot image using an imaging system.Finally, using image analysis software measure the intensity of each dot-blot. Presented here is the full length nervous necrosis virus code protein comprising amino acids one through 338 along with its serially truncated variants. To confirm the expression of the proteins in the transformed bacterial cells, dot-blot analysis using anti-6XHis antibody was performed showing the presence of all the proteins under investigation.Then, the recombinant proteins were analyzed by dot-blot hybridization in which the RG-M56 monoclonal antibody was used. The analysis revealed that the protein epitope recognized by the antibody is found in peptide 195 to 338. Finally, an epitope consisting of 20 or eight amino acid residues was identified by peptide scanning.Alanine scanning showed that substitutions of valine residues at positions 197 and 199 as well as a cystine at 201 abolished the epitope's binding capability and dot-blot hybridization. Similarly, the decreased binding affinity was observed in binding intensity analysis confirming that the identified residues are essential for the epitope's binding to the RGM56 monoclonal antibody. This peptide identification technique can be used to develop therapeutical peptide drugs or peptide medicines.

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

Peptide:MHC Tetramer-based Enrichment of Epitope-specific T cells

मिलान विशेष टी कोशिकाओं की MHC tetramer आधारित संवर्धन: पेप्टाइड

A  basic necessity for researchers studying adaptive immunity with in vivo experimental models is an  ability to identify T cells based on their T cell ...

Peptide-based Identification of Functional Motifs and their Binding Partners

कार्यात्मक रूपांकनों और उनके बंधन पार्टनर्स के पेप्टाइड आधारित पहचान

Specific short  peptides derived from motifs found in full-length proteins, in our case HIV-1  Nef, not only retain their biological function, but can ...

Isolation of Precursor B-cell Subsets from Umbilical Cord Blood

अग्रदूत बी सेल सबसेट के गर्भनाल रक्त से अलगाव

Umbilical cord blood is highly enriched for hematopoietic progenitor cells at different lineage commitment stages. We have developed a protocol for ...

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अलगाव, पहचान, और murine Thymic उपकला कोशिकाओं के शोधन

The thymus is a vital organ for T lymphocyte development. Of thymic stromal cells, thymic epithelial cells (TECs) are particularly crucial at multiple ...

Generation of Murine Monoclonal Antibodies by Hybridoma Technology

हाइब्रिडोमा प्रौद्योगिकी द्वारा Murine मोनोक्लोनल एंटीबॉडी की पीढ़ी

Monoclonal antibodies are universal binding molecules and are widely used in biomedicine and research. Nevertheless, the generation of these binding ...

Analysis of Simian Immunodeficiency Virus-specific CD8+ T-cells in Rhesus Macaques by Peptide-MHC-I Tetramer Staining

Analysis of Simian Immunodeficiency Virus-specific CD8+ T-cells in Rhesus Macaques by Peptide-MHC-I Tetramer Staining

सिमीयन इम्यूनो वायरस-विशिष्ट CD8 का विश्लेषण<sup&gt; +</sup&gt; रीसस मकाक में टी-कोशिकाओं पेप्टाइड MHC-मैं tetramer धुंधला द्वारा

Peptide-major histocompatibility complex class I (pMHC-I) tetramers have been an invaluable tool to study CD8+ T-cell responses. Because these reagents ...

Generation of Escape Variants of Neutralizing Influenza Virus Monoclonal Antibodies

बचने इंफ्लूएंजा वायरस मोनोक्लोनल एंटीबॉडी के भागने के वेरिएंट की पीढ़ी

Influenza viruses exhibit a remarkable ability to adapt and evade the host immune response. One way is through antigenic changes that occur on the surface ...

Purification of Viral DNA for the Identification of Associated Viral and Cellular Proteins

एसोसिएटेड वायरल और सेलुलर प्रोटीन की पहचान के लिए वायरल डीएनए का शुद्धिकरण

The goal of this protocol is to isolate herpes simplex virus type 1 (HSV-1) DNA from infected cells for the identification of associated viral and ...

Overlapping Peptide Library to Map Qa-1 Epitopes in a Protein

अतिव्यापी पेप्टाइड लाइब्रेरी एक प्रोटीन में क्यूए-1 Epitopes नक्शा करने के लिए

Qa-1 (HLA-E in human) belongs to a group of non-classical major histocompatibility complex 1b (MHC-Ib) molecules. Recent data suggest that Qa-1 molecules ...

Zika Virus Specific Diagnostic Epitope Discovery

Zika वायरस विशिष्ट नैदानिक Epitope डिस्कवरी

High-density peptide microarrays allow screening of more than six thousand peptides on a single standard microscopy slide. This method can be applied for ...