Name: invasive behavior of human breast cancer cells in embryonic zebrafish
Uploaded: 2017-04-25T15:00:00
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TGF-β परिवार के सदस्यों पर अध्ययन कैंसर जीनोमिक्स केंद्र नीदरलैंड द्वारा समर्थित हैं। सिजिया लिउ और जियांग रेन लीडेन विश्वविद्यालय में अध्ययन के 4 साल के लिए चीन छात्रवृत्ति परिषद द्वारा समर्थित हैं। हम MCF10A सेल लाइनों के लिए डॉ फ्रेड मिलर (बारबरा एन Karmanos कैंसर संस्थान, डेट्रॉइट, MI, संयुक्त राज्य अमरीका) धन्यवाद।

ट्रांसजेनिक फ्लोरोसेंट zebrafish टीजी (fli: EGFP) का उपयोग करते हुए सभी शोध तनाव है, जो हरी फ्लोरोसेंट प्रोटीन में इजाफा किया है (EGFP) अंतरराष्ट्रीय दिशा निर्देशों के अनुसार वाहिका 20 -labeled, आवास और प्रयोगों सहित बा...

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	<li>Wan, L., Pantel, K., Kang, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tumor+metastasis:+moving+new+biological+insights+into+the+clinic.">Tumor metastasis: moving new biological insights into the clinic.</a> Nat. Med. 19 (11), 1450-1464 (2013).</li><li>Obenauf, A. C., Massagu&#233;, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Surviving+at+a+distance:+Organ-specific+metastasis.">Surviving at a distance: Organ-specific metastasis.</a> Trends Cancer. 1 (1), 76-91 (2015).</li><li>Saxena, M., Christofori, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Rebuilding+cancer+metastasis+in+the+mouse.">Rebuilding cancer metastasis in the mouse.</a> Mol. Oncol. 7 (2), 283-296 (2013).</li><li>Teng, Y., Xie, X., Walker, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Evaluating+human+cancer+cell+metastasis+in+zebrafish.">Evaluating human cancer cell metastasis in zebrafish.</a> BMC cancer. 13 (1), 453 (2013).</li><li>Konantz, M., Balci, T. B., Hartwig, U. F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Zebrafish+xenografts+as+a+tool+for+in+vivo+studies+on+human+cancer.">Zebrafish xenografts as a tool for in vivo studies on human cancer.</a> Ann N Y Acad Sci. 1266 (1), 124-137 (2012).</li><li>Zhao, S., Huang, J., Ye, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+fresh+look+at+zebrafish+from+the+perspective+of+cancer+research.">A fresh look at zebrafish from the perspective of cancer research.</a> J Exp Clin Cancer Res. 34 (1), 80 (2015).</li><li>Stanton, M. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Diethylnitrosamine-induced+hepatic+degeneration+and+neoplasia+in+the+aquarium+fish,+Brachydanio+rerio.">Diethylnitrosamine-induced hepatic degeneration and neoplasia in the aquarium fish, Brachydanio rerio.</a> J. Natl. Cancer Inst. 34 (1), 117-130 (1965).</li><li>Lam, S. H., Wu, Y. L., Vega, V. B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Conservation+of+gene+expression+signatures+between+zebrafish+and+human+liver+tumors+and+tumor+progression.">Conservation of gene expression signatures between zebrafish and human liver tumors and tumor progression.</a> Nat. Biotechnol. 24 (1), 73-75 (2006).</li><li>Spitsbergen, J. M., Kent, M. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+state+of+the+art+of+the+zebrafish+model+for+toxicology+and+toxicologic+pathology+research-advantages+and+current+limitations.">The state of the art of the zebrafish model for toxicology and toxicologic pathology research-advantages and current limitations.</a> Toxicol. Pathol. 31, 62-87 (2003).</li><li>Stoletov, K., Klemke, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Catch+of+the+day:+zebrafish+as+a+human+cancer+model.">Catch of the day: zebrafish as a human cancer model.</a> Oncogene. 27 (33), 4509-4520 (2008).</li><li>Lee, L. M., Seftor, E. A., Bonde, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+fate+of+human+malignant+melanoma+cells+transplanted+into+zebrafish+embryos:+assessment+of+migration+and+cell+division+in+the+absence+of+tumor+formation.">The fate of human malignant melanoma cells transplanted into zebrafish embryos: assessment of migration and cell division in the absence of tumor formation.</a> Dev. Dynam. 233 (4), 1560-1570 (2005).</li><li>Mizgirev, I., Revskoy, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Generation+of+clonal+zebrafish+lines+and+transplantable+hepatic+tumors.">Generation of clonal zebrafish lines and transplantable hepatic tumors.</a> Nat. Protoc. 5 (3), 383-394 (2010).</li><li>Mizgireuv, I. V., Revskoy, S. Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Transplantable+tumor+lines+generated+in+clonal+zebrafish.">Transplantable tumor lines generated in clonal zebrafish.</a> Cancer Res. 66 (6), 3120-3125 (2006).</li><li>Stoletov, K., Montel, V., Lester, R. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=High-resolution+imaging+of+the+dynamic+tumor+cell-vascular+interface+in+transparent+zebrafish.">High-resolution imaging of the dynamic tumor cell-vascular interface in transparent zebrafish.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 104 (44), 17406-17411 (2007).</li><li>Rouhi, P., Jensen, L. D., Cao, Z., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hypoxia-induced+metastasis+model+in+embryonic+zebrafish.">Hypoxia-induced metastasis model in embryonic zebrafish.</a> Nat. Protoc. 5 (12), 1911-1918 (2010).</li><li>Drabsch, Y., He, S., Zhang, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Transforming+growth+factor-&#946;+signalling+controls+human+breast+cancer+metastasis+in+a+zebrafish+xenograft+model.">Transforming growth factor-&#946; signalling controls human breast cancer metastasis in a zebrafish xenograft model.</a> Breast Cancer Res. 15 (6), R106 (2013).</li><li>He, S., Lamers, G. E., Beenakker, J. W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Neutrophil-mediated+experimental+metastasis+is+enhanced+by+VEGFR+inhibition+in+a+zebrafish+xenograft+model.">Neutrophil-mediated experimental metastasis is enhanced by VEGFR inhibition in a zebrafish xenograft model.</a> J. Pathol. 227 (4), 431-445 (2012).</li><li>Nicoli, S., Presta, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+zebrafish/tumor+xenograft+angiogenesis+assay.">The zebrafish/tumor xenograft angiogenesis assay.</a> Nat. Protoc. 2 (11), 2918-2923 (2007).</li><li>de Boeck, M., Cui, C., Mulder, A. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Smad6+determines+BMP-regulated+invasive+behaviour+of+breast+cancer+cells+in+a+zebrafish+xenograft+model.">Smad6 determines BMP-regulated invasive behaviour of breast cancer cells in a zebrafish xenograft model.</a> Sci. Rep. 6, 24968 (2016).</li><li>Lawson, N. D., Weinstein, B. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+vivo+imaging+of+embryonic+vascular+development+using+transgenic+zebrafish.">In vivo imaging of embryonic vascular development using transgenic zebrafish.</a> Dev. Biol. 248 (2), 307-318 (2002).</li><li>Stewart, S. A., Dykxhoorn, D. M., Palliser, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Lentivirus-delivered+stable+gene+silencing+by+RNAi+in+primary+cells.">Lentivirus-delivered stable gene silencing by RNAi in primary cells.</a> RNA. 9 (4), 493-501 (2003).</li><li>Dull, T., Zufferey, R., Kelly, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+third-generation+lentivirus+vector+with+a+conditional+packaging+system.">A third-generation lentivirus vector with a conditional packaging system.</a> J. Virol. 72 (11), 8463-8471 (1998).</li><li>Rosen, J. N., Sweeney, M. F., Mably, J. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Microinjection+of+zebrafish+embryos+to+analyze+gene+function.">Microinjection of zebrafish embryos to analyze gene function.</a> J. Vis. Exp. (25), e1115 (2009).</li><li>Lawson, N. D., Weinstein, B. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Arteries+and+veins:+making+a+difference+with+zebrafish.">Arteries and veins: making a difference with zebrafish.</a> Nat. Rev. Genet. 3 (9), 674-682 (2002).</li><li>Zon, L. I., Peterson, R. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+vivo+drug+discovery+in+the+zebrafish.">In vivo drug discovery in the zebrafish.</a> Nat. Rev. Drug Discov. 4 (1), 35-44 (2005).</li></ol>

Zebrafish भ्रूण, perivitelline अंतरिक्ष और डॉक्टर इंजेक्शन के साथ: यहाँ, हम टीजी (EGFP fli1) में स्तन कैंसर की कोशिकाओं के आक्रामक व्यवहार की जांच के लिए दो विधियों का वर्णन किया। रासायनिक डाई या ट्रांसजेनिक zebrafish भ्रू?...

क्लिनिक में प्रकट कैंसर मेटास्टेसिस &quot;मेटास्टेटिक झरना&quot; के रूप में जाना जटिल और बहु-चरण घटनाओं की एक श्रृंखला शामिल है। झरना बड़े पैमाने पर समीक्षा की गई है और लगातार चरणों में विच्छेदित किया जा सकता है: स्थानीय आक्रमण, intravasation, प्रसार, गिरफ्तारी, तरल पदार्थ का स्त्राव, और उपनिवेशन 1, 2। कैंसर मेटास्टेसिस के रोगजनन और विवो में संभावित उपचार रणनीतियों के विकास का एक बेहतर समझ कैंसर कोशिका प्रसार की मजबूत मेजबान मॉडल की आवश्यकता है। कृंतक मॉडल अच्छी तरह से स्थापित कर रहे हैं और व्यापक रूप से मेटास्टेसिस 3 मूल्यांकन करने के लिए उपयोग किया जाता है, लेकिन इन तरीकों कम दक्षता और नैतिक सीमाएं हैं और एक मामले में सबसे आगे मॉडल निर्धारित करने के लिए एक विशेष हेरफेर मेटास्टेटिक फेनोटाइप को प्रभावित कर सकता है कि क्या के रूप में महंगा है। अन्य कुशल, विश्वसनीय, कम लागत वाली मॉडल जल्दी से (एपि) आनुवंशिक परिवर्तन या Pharmacolog के संभावित प्रभावों का उपयोग करने की जरूरत हैiCal यौगिकों। मनुष्य के लिए अपने उच्च आनुवंशिक अनुरूपता और उनके भ्रूण zebrafish (Danio rerio) की पारदर्शिता के कारण एक महत्वपूर्ण हड्डीवाला मॉडल के रूप में उभरा है और तेजी से विकास प्रक्रियाओं, सूक्ष्म जीव मेजबान बातचीत, मानव रोगों, दवा स्क्रीनिंग, आदि के अध्ययन के लिए लागू किया जा रहा । 4। कैंसर मेटास्टेसिस zebrafish में स्थापित मॉडल कृंतक मॉडल 5, 6 की कमियों का उत्तर दे सकते हैं। हालांकि सहज रसौली शायद ही जंगली zebrafish 7 में देखा जाता है, वहाँ zebrafish में वांछित कैंसर प्रेरित करने के लिए कई लम्बे समय से की तकनीक है। कैसरजन-प्रेरित जीन म्यूटेशन या संकेतन मार्ग सक्रियण Histologically और molecularly मॉडल कैंसरजनन, zebrafish 7, 8, 9 में मानव रोग नकल उतार सकते हैं। तक तकविविध का लाभ ing आगे और ओंकोजीन या ट्यूमर शामक की आनुवंशिक जोड़तोड़ रिवर्स (ट्रांसजेनिक) zebrafish भी कैंसर के गठन और रखरखाव 6, 10 की क्षमता के अध्ययन सक्षम है। Zebrafish में प्रेरित कैंसर मॉडल पाचन, प्रजनन, रक्त, तंत्रिका तंत्र, और उपकला 6 सहित एक व्यापक स्पेक्ट्रम, कवर किया। कैंसर अनुसंधान में zebrafish के उपयोग हाल ही में इस जीव में मानव ट्यूमर कोशिका जेनोग्राफ्ट मॉडल की स्थापना की वजह से विस्तार किया गया है। यह पहला मानव मेटास्टेटिक मेलेनोमा कोशिकाओं है कि सफलतापूर्वक 2005 11 में ब्लासटुला चरण में zebrafish भ्रूण में engrafted रहे थे के साथ सूचना मिली थी। कई स्वतंत्र प्रयोगशालाओं विभिन्न साइटों और विकास के चरणों में zebrafish में स्तनधारी कैंसर की कोशिकाओं को लाइनों की एक विविध रेंज शुरू करने से इस अग्रणी काम करने की व्यवहार्यता की पुष्टि की है 5 &lt;/ Sup&gt;। उदाहरण के लिए, blastodisc और ब्लासटुला चरण के ब्लास्टोसिस्ट के पास इंजेक्शन; जर्दी थैली, perivitelline अंतरिक्ष, Cuvier (डॉक्टर) की वाहिनी, और 6-एच के पीछे कार्डिनल नस 5 दिन की उम्र में भ्रूण के लिए में इंजेक्शन; और 30 दिन की उम्र में immunosuppressed लार्वा के पेरिटोनियल गुहा में इंजेक्शन 5 प्रदर्शन किया गया है, 12। साथ ही, अनुवांशिक रूप से भिन्न ट्यूमर प्रत्यारोपण भी zebrafish 12, 13 में सूचित किया गया। xenografts का उपयोग कर के महान लाभ यह है engrafted कैंसर की कोशिकाओं को आसानी से fluorescently लेबल और सामान्य कोशिकाओं से प्रतिष्ठित किया जा सकता है। इसलिए, microtumor गठन 14, सेल आक्रमण और मेटास्टेसिस 15, 16, 17, ट्यूमर प्रेरित एंजियोजिनेसिस 15, 1 की गतिशील व्यवहार की जांच8, और कैंसर की कोशिकाओं और मेजबान के बीच संपर्क के कारकों 17 स्पष्ट रूप से जीवित मछली शरीर में देखे जा सकते हैं, खासकर जब ट्रांसजेनिक zebrafish लाइनों लागू किए जाते हैं 5। डॉक्टर इंजेक्शन 16 के माध्यम से zebrafish भ्रूण: zebrafish जेनोग्राफ्ट मॉडल की उच्च क्षमता से प्रेरित होकर मेटास्टेसिस मूल्यांकन करने के लिए, हम टीजी (EGFP fli) की टेलफिन क्षेत्र में विभिन्न स्तन कैंसर कोशिका लाइनों के transvascular परिस्त्राव गुणों का प्रदर्शन। विकास कारक-β (TGF-β) 16 और हड्डी morphogenetic प्रोटीन बदलने की भूमिका (बीएमपी) प्रो- / विरोधी स्तन कैंसर कोशिका आक्रमण और मेटास्टेसिस में 19 संकेत रास्ते भी इस मॉडल में जांच की गई। इसके अलावा, हम भी intravasation perivitelline अंतरिक्ष इंजेक्शन के साथ जेनोग्राफ्ट zebrafish मॉडल का उपयोग कर संचलन में विभिन्न स्तन कैंसर कोशिका लाइनों की क्षमता recapitulated। <p claएस एस = &quot;jove_content&quot;&gt; यह लेख zebrafish जेनोग्राफ्ट perivitelline अंतरिक्ष या दस्तावेज़ में मानव स्तन कैंसर की कोशिकाओं के इंजेक्शन पर आधारित मॉडल के लिए विस्तृत प्रोटोकॉल प्रस्तुत करता है। उच्च संकल्प प्रतिदीप्ति इमेजिंग का उपयोग करना, हम रक्त वाहिकाओं में intravasation और विभिन्न मानव स्तन कैंसर की कोशिकाओं, जो avascular टेलफिन क्षेत्र में रक्त वाहिकाओं से स्थानांतरित की आक्रामक व्यवहार के प्रतिनिधि प्रक्रिया दिखा।

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	<tbody>
		<tr>
			<td>Agarose</td>
			<td>MP Biomedicals</td>
			<td>AGAF0500</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Borosilicate glass capillary</td>
			<td>Harvard Apparatus</td>
			<td>300038</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cholera enterotoxin&#160;</td>
			<td>Calbiochem</td>
			<td>227035</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Confocal microscope</td>
			<td>Leica</td>
			<td>SP5 STED</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DMEM-high glucose media containing L-glutamine</td>
			<td>ThermoFisher Scientific</td>
			<td>11965092</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DMEM/F-12 media containing L-glutamine</td>
			<td>ThermoFisher Scientific</td>
			<td>21041025</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dumont #5 forceps</td>
			<td>Fine Science Tools Inc</td>
			<td>11252-20</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Epidermal growth factor</td>
			<td>Merck Millipore</td>
			<td>01-107</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fetal bovine serum&#160;</td>
			<td>ThermoFisher Scientific</td>
			<td>16140071</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fluorescent stereo microscope</td>
			<td>Leica</td>
			<td>M165 FC</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>HEK293T cell line</td>
			<td>American Type Culture Collection</td>
			<td>CRL-1573</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hydrocortisone</td>
			<td>SigmaAldrich</td>
			<td>227035</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Horse serum</td>
			<td>ThermoFisher Scientific</td>
			<td>26050088</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Insulin</td>
			<td>SigmaAldrich</td>
			<td>I-6634</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MCF10A (M1) cell line</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>Kindly provided by Dr. Fred Miller (Barbara Ann Karmanos Cancer Institute, Detroit, MI, USA)&#160;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MCF10Aras (M2) cell line</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>Kindly provided by Dr. Fred Miller (Barbara Ann Karmanos Cancer Institute, Detroit, MI, USA)&#160;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MDA-MB-231 cell line</td>
			<td>American Type Culture Collection</td>
			<td>CRM-HTB-26</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Manual micromanipulator&#160;</td>
			<td>World Precision Instruments</td>
			<td>M3301R</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Micropipette puller</td>
			<td>Sutter Instruments</td>
			<td>P-97&#160;</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Wide-tip Pasteur pipette (0,5-20 ul)</td>
			<td>Eppendorf</td>
			<td>F276456I</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>pCMV-VSVG plasmid</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>Kindly provided by Prof. Dr. Rob Hoeben (Leiden University Medical Center, Leiden, The Netherlands)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Penicillin-Streptomycin (10,000 U/mL)</td>
			<td>ThermoFisher Scientific</td>
			<td>15140122</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PLV-mCherry plasmid</td>
			<td>Addgene</td>
			<td>36084</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>pMDLg-RRE (gag/pol) plasmid</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>Kindly provided by Prof. Dr. Rob Houben (Leiden University Medical Center, Leiden, The Netherlands)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pneumatic picoPump</td>
			<td>World Precision Instruments</td>
			<td>SYS-PV820</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Polybrene</td>
			<td>SigmaAldrich</td>
			<td>107689</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Prism 4 software</td>
			<td>GraphPad Software</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>pRSV-REV plasmid</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>Kindly provided by Prof. Dr. Rob Hoeben (Leiden University Medical Center, Leiden, The Netherlands)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Stereo microscope</td>
			<td>Leica</td>
			<td>MZ16FA</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tg (fli:EGFP) zebrafish strain</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>Kindly provided by Dr. Ewa Snaar-Jagalska (Institute of Biology, Leiden University, Leiden, The Netherlands)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tris-base&#160;</td>
			<td>SigmaAldrich</td>
			<td>11814273001</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tricaine (3-aminobenzoic acid)</td>
			<td>SigmaAldrich</td>
			<td>A-5040</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Trypsin-EDTA (0.5%)</td>
			<td>ThermoFisher Scientific</td>
			<td>15400054</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Petri dishes, polystyrene (60 &#215; 15 mm)</td>
			<td>SigmaAldrich</td>
			<td>P5481-500EA</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Polystyrene dish with glass bottom</td>
			<td>WillCo</td>
			<td>GWST-5040</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

invasive behavior of human breast cancer cells in embryonic zebrafish

कई मामलों में, कैंसर रोगियों एक प्राथमिक ट्यूमर के मर जाते हैं, बल्कि मेटास्टेसिस की वजह से। हालांकि कई कृंतक मॉडल विवो में कैंसर मेटास्टेसिस के अध्ययन के लिए उपलब्ध हैं, अन्य कुशल, विश्वसनीय, कम लागत वाली मॉडल जल्दी से (एपि) आनुवंशिक परिवर्तन या औषधीय यौगिकों के संभावित प्रभावों का उपयोग करने की जरूरत है। जैसे, हम उदाहरण देकर स्पष्ट करना और मानव स्तन कैंसर zebrafish भ्रूण में इंजेक्ट इस लक्ष्य को समर्थन करने के लिए कोशिकाओं का उपयोग कर जेनोग्राफ्ट मॉडल की व्यवहार्यता की व्याख्या। माइक्रोस्कोप के तहत, फ्लोरोसेंट प्रोटीन या रासायनिक लेबल मानव स्तन कैंसर की कोशिकाओं ट्रांसजेनिक zebrafish भ्रूण में प्रत्यारोपित कर रहे हैं, टीजी (fli: EGFP), perivitelline अंतरिक्ष या Cuvier (डॉक्टर) की वाहिनी 48 ज निषेचन के बाद में। शीघ्र ही बाद में, कैंसर कोशिका आक्रमण, प्रसार, और रहने वाले मछली शरीर में मेटास्टेसिस के अस्थायी स्थानिक प्रक्रिया एक फ्लोरोसेंट खुर्दबीन के नीचे कल्पना है। अलग इंजेक्शन साइटों, यानी का उपयोग कर मॉडल, प्रतिivitelline अंतरिक्ष या डॉक्टर एक-दूसरे के पूरक हैं, प्रारंभिक चरण (intravasation कदम) और अंतिम चरण की घटनाओं की multistep मेटास्टेटिक झरना (परिस्त्राव कदम) को दर्शाती है। इसके अलावा, peritumoral और intratumoral एंजियोजिनेसिस perivitelline अंतरिक्ष में इंजेक्शन के साथ मनाया जा सकता है। पूरे प्रयोगात्मक अवधि 8 दिन से अधिक नहीं है। इन दो मॉडल, सेल लेबलिंग, सूक्ष्म प्रत्यारोपण, और प्रतिदीप्ति इमेजिंग तकनीक गठबंधन आनुवंशिक और औषधीय जोड़तोड़ के जवाब में कैंसर मेटास्टेसिस के तेजी से मूल्यांकन सक्षम करने से।

एक perivitelline अंतरिक्ष इंजेक्शन के साथ भ्रूण जेनोग्राफ्ट zebrafish मॉडल में, मछली के शरीर में लेबल कैंसर कोशिकाओं के प्रसार hematogenous सक्रिय माइग्रेशन के रूप में माना जाता है। इस प्रक्रिया का पता चला और इ?...

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Invasive Behavior of Human Breast Cancer Cells in Embryonic Zebrafish

यहाँ, हम दो अलग-अलग इंजेक्शन साइटों, यानी, perivitelline अंतरिक्ष और कुवियर की वाहिनी का उपयोग कर, आक्रामक व्यवहार की जांच के लिए और मानव स्तन कैंसर की कोशिकाओं की intravasation और तरल पदार्थ का स्त्राव संभावित आकलन करने के लिए क्रमश: जेनोग्राफ्ट zebrafish मॉडल का वर्णन।

भ्रूणीय Zebrafish में मानव स्तन कैंसर की कोशिकाओं के आक्रामक व्यवहार

In many cases, cancer patients do not die of a primary tumor, but rather because of metastasis. Although numerous rodent models are available for studying ...

The overall goal of this microinjection of human breast cancer cells into embryonic zebrafish is to investigate the invasive behavior and assess the metastatic potential of human breast cancer cells. This method can help to answer key questions regarding intravasation and extravasation to critical processes in cancer metastasis. The main advantage of this technique is that it provides an elegant, rapid, and cheap in vivo model to measure the ability of cancer cells to invade and metastasize.The implications of this technique extend towards the development of new pharmacological compounds with anti-metastatic activity. Though this measure can provide insight into cancer emission and the metastasis, it can also be applied to study some other phenomena, such as peritumoral angiogenesis and cancer cell dormancy. To begin, culture transduced human breast cancer MDA-MB-231 cells, breast epithelial MCF10A cells, and breast epithelial MCF10A-Ras cells in a T75 flask.Once the transduced cells reach 80%confluence, remove the medium from the T75 flask, wash the cells with phosphate-buffered saline, and detach the cells with 0.5%Trypsin-EDTA solution. Then neutralize the Trypsin with medium. Next, centrifuge the cells at 1, 000 RPM for five minutes to remove the medium, wash them with PBS, and centrifuge the sample one more time.After washing, resuspend the cells in approximately 200 microliters of PBS to obtain a suspension of no more than 1 x 10 to the eighth cells per milliliter. Store the cell suspension in four degrees Celsius for no longer than five hours. To prepare zebrafish embryos for implantation, incubate approximately 60 embryos in a petri dish filled with egg water, supplemented with 60 micrograms per milliliter of sea salts at 28 degrees Celsius.Then, using fine tweezers, remove the coriands from the embryos at 48 hours post-fertilization. To anesthetize the embryos for the implantation procedure, transfer them to a 40 microgram per milliliter solution of tricaine in egg water. Prior to the implantation, prepare injection needles.To do this, load a borosilicate microcapillary tube into a micro-pipette puller and pull the needle. Store the prepared needles in a needle-holder plate until needed. Aspirate 15 microliters of the prepared cell suspension into an injection needle.Next, attach the needle to a micromanipulator, and, using fine tweezers, break its tip to five to 10 microns. Adjust the pneumatic PICO pump and inject cells onto the petri dish pre-coated with sterile 1%agarose. Then, transfer approximately 10 anesthetized embryos at two to three days post-fertilization onto a flat injecting plate coated with 1%agarose.Arrange the position of the embryos with a hair loop tool so that they are oriented in the same direction. While injecting, manually adjust the injection plate position to place the embryos in a diagonal orientation, which is preferred for a precise needle insertion. Direct the needle tip at the injection site and gently insert it into the perivitelline space localized between the yolk sac and the paraderm of the zebrafish embryo.Lastly, inject approximately 400 tumor cells labeled with mCherry. Make sure not to rupture the yolk sac to avoid a misplaced implantation. To inject the cells into the duct of Cuvier, approach the vein from the dorsal side of the embryo with the needle kept at a 45-degree angle.Insert the needle at the starting point of the duct of Cuvier, localized dorsally to the point where the duct starts broadening over the yolk sac. Then, inject approximately 400 cells. Finally, transfer the injected zebrafish embryos to the egg water, and incubate them at 33 degrees Celsius until further analysis.To visualize metastasis, with a Pasteur pipette, transfer the injected zebrafish embryo to a glass-bottom polystyrene dish and remove excess egg water. Image the whole body of the embryo with a confocal microscope set to low magnification to obtain a general pattern of tumor cell dissemination. Use a 488 nanometer laser to visualize the zebrafish embryo vasculature, and a 543 nanometer laser to visualize implanted tumor cells labeled with red fluorescent marker.Next, scan the embryo in eight to 10 steps to acquire a high-quality image. Presented here are photographs of zebrafish embryos that were taken with a confocal microscope three days after perivitelline injection of MDA-MB-231 cells. MDA-MB-231 cells widely disseminated within the zebrafish body, manifesting highly invasive potential.MCF10A-Ras cells, when implanted to zebrafish embryos, revealed moderate invasive capacity with only a few cells spread to distant parts of the body. Upon transplantation, MCF10A cells remained non-invasive and concentrated within the injection site, confirming that all studied cells reveal different invasive potential. The highly invasive character of MDA-MB-231 cells was reflected in their enhanced migration capacity observed within the perivitelline space.To some extent, such migration was also observed for MCF10A-Ras cells. On the contrary, MCF10A cells did not migrate in the perivitelline space. Distinct metastatic behavior of MDA-MB-231 and MCF10A-Ras cells was also observed when both cell types were implanted into the embryos'duct of Cuvier.As shown, MDA-MB-231 cells migrated independently of one another, while MCF10A-Ras were prone to migrate in clusters. Following this procedure, other measures like immunofluorescence can be performed in order to answer additional questions, such as how cancer cells proliferate in the zebrafish, and how they affect the surrounding host of cells. After watching this video, you will have a good understanding of how to use zebrafish model to study an invasive behavior and assize intravasation and extravasation capacity of human breast cancer cells.

Research

JoVE Journal

Cancer Research

Utilizing Functional Genomics Screening to Identify Potentially Novel Drug Targets in Cancer Cell Spheroid Cultures

उपयोग कार्यात्मक जीनोमिक्स स्क्रीनिंग कैंसर सेल उपगोल संस्कृतियों में संभावित उपन्यास ड्रग लक्ष्यों की पहचान करने के लिए

The identification of functional driver events in cancer is central to furthering our understanding of cancer biology and indispensable for the discovery ...

Ultrasonographic Evaluation of Breast Cancer-related Lymphedema

स्तन कैंसर से संबंधित lymphedema के Ultrasonographic मूल्यांकन

Lymphedema is one of the most common complications after breast cancer surgery. There are many diagnostic tools for lymphedema, but no standard method yet ...

Testing the Vascular Invasive Ability of Cancer Cells in Zebrafish (Danio Rerio)

Testing the Vascular Invasive Ability of Cancer Cells in Zebrafish Danio Rerio

परीक्षण संवहनी इनवेसिव (Zebrafish में कैंसर कोशिकाओं की क्षमता<em&gt; Danio rerio</em&gt;)

Cancer cell vascular invasion and extravasation is a hallmark of metastatic progression.  Traditional in vitro models of cancer cell invasion of ...

Longitudinal Intravital Imaging of Brain Tumor Cell Behavior in Response to an Invasive Surgical Biopsy

एक इनवेसिव सर्जिकल बायोप्सी के जवाब में मस्तिष्क ट्यूमर सेल व्यवहार के दीर्घकालिक Intravital इमेजिंग

Biopsies are standard of care for cancer treatment and are clinically beneficial as they allow solid tumor diagnosis, prognosis, and personalized ...

Studying Triple Negative Breast Cancer Using Orthotopic Breast Cancer Model

ऑर्थोटोपिक स्तन कैंसर मॉडल का उपयोग कर ट्रिपल नकारात्मक स्तन कैंसर का अध्ययन

Triple-negative breast cancer (TNBC) is an aggressive breast cancer subtype with limited therapeutic options. When compared to patients with less ...

In Vivo Targeting of Xenografted Human Cancer Cells with Functionalized Fluorescent Silica Nanoparticles in Zebrafish

वीवो में ज़ेब्राफ़िश में कार्यात्मक फ्लोरोसेंट सिलिका नैनोकणों के साथ Xenografted मानव कैंसर कोशिकाओं का लक्ष्यीकरण

Developing nanoparticles capable of detecting, targeting, and destroying cancer cells is of great interest in the field of nanomedicine. In vivo animal ...

In Vitro Evaluation of Oncogenic Transformation in Human Mammary Epithelial Cells

मानव स्तन एपिथेलियल कोशिकाओं में ओंकोजेनिक परिवर्तन का विट्रो मूल्यांकन

Tumorigenesis is a multi-step process in which cells acquire capabilities&#160;that allow their growth, survival, and dissemination under hostile ...

Isolation and Functional Assessment of Human Breast Cancer Stem Cells from Cell and Tissue Samples

सेल और ऊतक नमूने से मानव स्तन कैंसर स्टेम कोशिकाओं का अलगाव और कार्यात्मक मूल्यांकन

Breast cancer stem cells (BCSCs) are cancer cells with inherited or acquired stem cell-like characteristics. Despite their low frequency, they are major ...

Modeling Breast Cancer in Human Breast Tissue using a Microphysiological System

एक माइक्रोफिजियोलॉजिकल सिस्टम का उपयोग कर मानव स्तन ऊतक में स्तन कैंसर मॉडलिंग

Breast cancer (BC) remains a leading cause of death for women. Despite more than $700 million invested in BC research annually, 97% of candidate BC drugs ...

Modeling Brain Metastasis Via Tail-Vein Injection of Inflammatory Breast Cancer Cells

भड़काऊ स्तन कैंसर कोशिकाओं के टेल-वेन इंजेक्शन के माध्यम से मस्तिष्क मेटास्टेसिस मॉडलिंग

Metastatic spread to the brain is a common and devastating manifestation of many types of cancer. In the United States alone, about 200,000 patients are ...