Name: using a whole-mount immunohistochemical method to study the innervation of the biliary tract in suncus murinus
Uploaded: 2017-06-15T12:30:00
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Les auteurs n&#39;ont aucune reconnaissance.

Toutes les procédures expérimentales ont été approuvées par le Comité institutionnel des soins et de l&#39;utilisation des animaux de l&#39;Université métropolitaine de Tokyo (IACUC). Les animaux ont été logés et manipulés conformément au Guide pour le soin et l&#39;utilisation des animaux de laboratoire et le Guide pour la prise en charge et l&#39;utilisation des animaux expérimentaux du Conseil canadien sur les soins des animaux. Nous avons utilisé des animaux élevés et entretenus au...

<ol>
	<li>Kuratani, S., Tanaka, S., Ishikawa, Y., Zukeran, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Early+development+of+the+hypoglossal+nerve+in+the+chick+embryo+as+observed+by+the+whole-mount+nerve+staining+method.">Early development of the hypoglossal nerve in the chick embryo as observed by the whole-mount nerve staining method.</a> Am. J. Anat. 182 (2), 155-168 (1988).</li><li>Kuratani, S., Tanaka, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Peripheral+development+of+the+avian+vagus+nerve+with+special+reference+to+the+morphological+innervation+of+heart+and+lung.">Peripheral development of the avian vagus nerve with special reference to the morphological innervation of heart and lung.</a> Anat. Embryol. (Berl). 182 (5), 435-445 (1990).</li><li>Kuratani, S., Tanaka, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Peripheral+development+of+avian+trigeminal+nerves.">Peripheral development of avian trigeminal nerves.</a> Am. J. Anat. 187 (1), 65-80 (1990).</li><li>Yi, S. Q., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=House+musk+shrew,+Suncus+murinus:+a+novel+and+natural+obesity-resistant+animal+model.">House musk shrew, Suncus murinus: a novel and natural obesity-resistant animal model.</a> Obes. Metab. 6, 22-28 (2010).</li><li>Yi, S. Q., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Surgical+anatomy+of+innervation+of+the+gallbladder+in+humans+and+Suncus+murinus+with+special+reference+to+morphological+understanding+of+gallstone+formation+after+gastrectomy.">Surgical anatomy of innervation of the gallbladder in humans and Suncus murinus with special reference to morphological understanding of gallstone formation after gastrectomy.</a> World J. Gastroenterol. 13 (14), 2066-2071 (2007).</li><li>Yi, S. Q., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Anatomical+study+of+the+pancreas+in+the+house+musk+shrew,+Suncus+murinus,+with+special+reference+to+the+blood+supply+and+innervation.">Anatomical study of the pancreas in the house musk shrew, Suncus murinus, with special reference to the blood supply and innervation.</a> Anat. Rec. A Discov. Mol. Cell Evol. Biol. 273 (1), 630-635 (2003).</li><li>Yi, S. Q., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Surgical+anatomy+of+the+innervation+of+the+major+duodenal+papilla+in+humans+and+Suncus+murinus,+from+the+perspective+of+preserving+innervation+in+organ-saving+procedures.">Surgical anatomy of the innervation of the major duodenal papilla in humans and Suncus murinus, from the perspective of preserving innervation in organ-saving procedures.</a> Pancreas. 30 (3), 211-217 (2005).</li><li>Yi, S. Q., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Surgical+anatomy+of+the+innervation+of+the+pylorus+in+humans+and+Suncus+murinus,+in+relation+to+the+surgical+technique+for+pylorus-preserving+pancreatoduodenectomy.">Surgical anatomy of the innervation of the pylorus in humans and Suncus murinus, in relation to the surgical technique for pylorus-preserving pancreatoduodenectomy.</a> World J. Gastroenterol. 12 (14), 2209-2216 (2006).</li><li>Yi, S. Q., Ren, K., Kinoshita, M., Takano, N., Itoh, M., Ozaki, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Innervation+of+Extrahepatic+Biliary+Tract,+With+Special+Reference+to+the+Direct+Bidirectional+Neural+Connections+of+the+Gall+Bladder,+Sphincter+of+Oddi+and+Duodenum+in+Suncus+murinus,+in+Whole-Mount+Immunohistochemical+Study.">Innervation of Extrahepatic Biliary Tract, With Special Reference to the Direct Bidirectional Neural Connections of the Gall Bladder, Sphincter of Oddi and Duodenum in Suncus murinus, in Whole-Mount Immunohistochemical Study.</a> Anat. Histol. Embryol. 45 (3), 184-188 (2016).</li><li>Wang, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Neurofilament+proteins+in+axonal+regeneration+and+neurodegenerative+diseases.">Neurofilament proteins in axonal regeneration and neurodegenerative diseases.</a> Neural Regen. Res. 7 (8), 620-626 (2012).</li><li>Wyatt, A. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+relationship+of+the+sphincter+of+Oddi+to+the+stomach,+duodenum+and+gall-bladder.">The relationship of the sphincter of Oddi to the stomach, duodenum and gall-bladder.</a> J. Physiol. 193 (2), 225-243 (1967).</li><li>Mawe, G. M., Kennedy, A. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Duodenal+neurons+provide+nicotinic+fast+synaptic+input+to+sphincter+of+Oddi+neurons+in+guinea+pig.">Duodenal neurons provide nicotinic fast synaptic input to sphincter of Oddi neurons in guinea pig.</a> Am. J. Physiol. 277, G226-G234 (1999).</li><li>Seo, J. H., Cho, S. S., Lee, I. S., Lee, H. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Anatomical+and+neuropeptidergic+properties+of+the+duodenal+neurons+projecting+to+the+gallbladder+in+the+golden+hamster.">Anatomical and neuropeptidergic properties of the duodenal neurons projecting to the gallbladder in the golden hamster.</a> Arch. Histol. Cytol. 65 (4), 317-321 (2002).</li><li>Padbury, R. T., Furness, J. B., Baker, R. A., Toouli, J., Messenger, J. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Projections+of+nerve+cells+from+the+duodenum+to+the+sphincter+of+Oddi+and+gallbladder+of+the+Australian+possum.">Projections of nerve cells from the duodenum to the sphincter of Oddi and gallbladder of the Australian possum.</a> Gastroenterology. 104 (1), 130-136 (1993).</li><li>White, J. J., Reeber, S. L., Hawkes, R., Sillitoe, R. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Wholemount+immunohistochemistry+for+revealing+complex+brain+topography.">Wholemount immunohistochemistry for revealing complex brain topography.</a> J. Vis. Exp. (62), e4042 (2012).</li></ol>

Ce travail décrit la procédure expérimentale pour la visualisation de l&#39;innervation du tractus biliaire extra-hépatique en utilisant un anticorps contre la protéine neurofilamentaire. Ce protocole a été adapté du protocole décrit par Kuratani et Tanaka 1 , 2 , 3 . Pour cette expérience, planifiez le calendrier pour chacune des expériences, car l&#39;approche de coloration intégrale s...

La maison muske shrew, Suncus murinus , appartient à l&#39;ordre Insectivora et à la famille Soricidae. Ce petit mammifère est distribué dans tout le sud-est asiatique et habite des maisons et des zones herbeuses situées à proximité d&#39;habitations humaines ou de enclos pour bétail 4 . Cette espèce présente des caractéristiques morphologiques générales plus semblables aux humains que les autres animaux de laboratoire, comme la souris, le rat et le lapin 5 . Auparavant, on utilisait l&#39;immunocoloration totale avec un marqueur de neurone périphérique pour la protéine de neurofilament de S. murinus (NFP) pour étiqueter les nerfs périphériques dans le pancréas 6 , la papille duodénale majeure 7 , le pylore 8 , la vésicule biliaire 5 et les voies biliaires extrahépatiques 9 . Le PFN est un complexe macromoléculaire qui fait partie du cytosquelette neuronal mature. Protéine liée au neurofilamentS intermédiaires les interactions entre le NFP et le zygosome. La fonction enzymatique et la structure des protéines de liaison sont régulées par NFP 10 . Le complexe NFP est constitué de trois polypeptides: NF-L (70 kDa), NF-M (150-160 kDa) et NF-H (200 kDa). Les PFN peuvent être trouvés dans les axones neuronaux dans le système nerveux central et périphérique. L&#39;anticorps anti-NFP humain a été montré pour étiqueter les axones du système nerveux central et périphérique. Des études anatomiques et électrophysiologiques ont démontré que le sphincter, la vésicule biliaire et le tractus gastro-intestinal proximal sont reliés 11 , 12 , 13 , 14 . Cependant, les caractéristiques morphologiques de leurs connexions neuronales n&#39;ont pas encore été définies. Ce travail démontre l&#39;utilisation d&#39;une méthode de coloration immunohistochimique à l&#39;ensemble de la matière pour étiqueter l&#39;innervation des S. murinus bilAvec un anticorps NFP.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" width="573">
	<tbody>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">orthoperiodic acid</td>
			<td style="width:71px;">Wako</td>
			<td style="width:119px;">162-00732</td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">papain</td>
			<td style="width:71px;">Wako</td>
			<td style="width:119px;">164-00172</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">bovine serum albumin (BSA)</td>
			<td style="width:71px;">Wako</td>
			<td style="width:119px;">010-15131</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">sodium azide</td>
			<td style="width:71px;">Nacalai Tesque</td>
			<td style="width:119px;">312-33</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">neurofilament protein (NFP) antibody</td>
			<td style="width:71px;">Dako</td>
			<td style="width:119px;">M0762, lot 089, clone: 2F11</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="63">
			<td height="63" style="height:63px;width:216px;">peroxidase-conjugated affinity-purified sheep anti-mouse IgG-HRP</td>
			<td style="width:71px;">MBL</td>
			<td style="width:119px;">Code 330</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">3,3&#39;-diaminobenzidine tetrahydrochloride (DAB)</td>
			<td style="width:71px;">Wako</td>
			<td style="width:119px;">349-00903</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">imidazole</td>
			<td style="width:71px;">Sigma</td>
			<td style="width:119px;">I-0125</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

using a whole-mount immunohistochemical method to study the innervation of the biliary tract in suncus murinus

Ce travail décrit en détail la méthode de coloration de l&#39;immunohistochimie à l&#39;aide d&#39;anticorps protéiniques de neurofilaments pour étiqueter l&#39;innervation du tractus biliaire chez Suncus murinus ( S. murinus &#160; ). Tout d&#39;abord, l&#39;échantillon a été disséqué à partir de S. murinus et fixé dans du paraformaldéhyde à 4% (PFA). Deuxièmement, un traitement enzymatique et une inactivation potentielle de la peroxydase endogène ont été effectués. L&#39;échantillon a ensuite été exposé à l&#39;anticorps primaire, anticorps anti-protéines anti-neurofilament, pendant 3 à 6 jours. Il a ensuite été incubé avec l&#39;anticorps secondaire conjugué à la peroxydase de raifort. La réaction de couleur a été révélée en faisant réagir l&#39;échantillon avec un substrat de 3,3&#39;-diaminobenzidine (DAB). Cette méthode peut être appliquée pour analyser l&#39;innervation de tous les organes viscéraux. En outre, ce protocole peut également être adapté pour tester d&#39;autres anticorps neuronaux, mais l&#39;optimisation de l&#39;anticorpsEs devrait être fait en premier. Cette méthode a été initialement introduite par Kuratani et Tanaka 1 , 2 , 3 .

Les figures 1 à 4 montrent des résultats typiques pour les fibres nerveuses NFP positives dans le tractus biliaire extra-hépatique de S. murinus . L&#39;anticorps contre le NFP a reproduit de façon reproductible l&#39;innervation dans l&#39;image entière du tractus biliaire extra-hépatique ( Figure 1 ), de la vésicule biliaire ( Figure 2 ), de la voie biliaire supérieure ( <stro...

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Using a Whole-mount Immunohistochemical Method to Study the Innervation of the Biliary Tract in Suncus murinus

Une approche immunohistochimique intégrale, pour visualiser l&#39;expression de la protéine de neurofilament dans le tractus biliaire extrahépatique chez Suncus murinus. Est présenté ici. Ce protocole peut être utilisé pour analyser l&#39;innervation de tous les organes viscéraux dans S. murinus ou d&#39;autres espèces.

Utilisation d&#39;une méthode immunohistochimique intégrale pour étudier l&#39;inervation du tractus biliaire dans<em&gt; Suncus murinus</em

This work describes the whole-mount immunohistochemistry staining method in detail, using neurofilament protein antibody to label the innervation of the ...

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Using a Whole-mount Immunohistochemical Method to Study the Innervation of the Biliary Tract in Suncus murinus

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