Name: using a whole-mount immunohistochemical method to study the innervation of the biliary tract in suncus murinus
Uploaded: 2017-06-15T12:30:00
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すべての実験手順は、東京都大学機関動物管理委員会（IACUC）によって承認された。動物は、実験動物のケアおよび使用のためのガイドおよびカナダ動物飼育評議会の実験動物のケアおよび使用のためのガイドに従って収容および処理された。東京都大学フロンティアヘルスサイエンス学科Functional Morphology Laboratoryで飼育維持されている動物を使用しました。 <p c...

<ol>
	<li>Kuratani, S., Tanaka, S., Ishikawa, Y., Zukeran, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Early+development+of+the+hypoglossal+nerve+in+the+chick+embryo+as+observed+by+the+whole-mount+nerve+staining+method.">Early development of the hypoglossal nerve in the chick embryo as observed by the whole-mount nerve staining method.</a> Am. J. Anat. 182 (2), 155-168 (1988).</li><li>Kuratani, S., Tanaka, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Peripheral+development+of+the+avian+vagus+nerve+with+special+reference+to+the+morphological+innervation+of+heart+and+lung.">Peripheral development of the avian vagus nerve with special reference to the morphological innervation of heart and lung.</a> Anat. Embryol. (Berl). 182 (5), 435-445 (1990).</li><li>Kuratani, S., Tanaka, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Peripheral+development+of+avian+trigeminal+nerves.">Peripheral development of avian trigeminal nerves.</a> Am. J. Anat. 187 (1), 65-80 (1990).</li><li>Yi, S. Q., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=House+musk+shrew,+Suncus+murinus:+a+novel+and+natural+obesity-resistant+animal+model.">House musk shrew, Suncus murinus: a novel and natural obesity-resistant animal model.</a> Obes. Metab. 6, 22-28 (2010).</li><li>Yi, S. Q., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Surgical+anatomy+of+innervation+of+the+gallbladder+in+humans+and+Suncus+murinus+with+special+reference+to+morphological+understanding+of+gallstone+formation+after+gastrectomy.">Surgical anatomy of innervation of the gallbladder in humans and Suncus murinus with special reference to morphological understanding of gallstone formation after gastrectomy.</a> World J. Gastroenterol. 13 (14), 2066-2071 (2007).</li><li>Yi, S. Q., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Anatomical+study+of+the+pancreas+in+the+house+musk+shrew,+Suncus+murinus,+with+special+reference+to+the+blood+supply+and+innervation.">Anatomical study of the pancreas in the house musk shrew, Suncus murinus, with special reference to the blood supply and innervation.</a> Anat. Rec. A Discov. Mol. Cell Evol. Biol. 273 (1), 630-635 (2003).</li><li>Yi, S. Q., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Surgical+anatomy+of+the+innervation+of+the+major+duodenal+papilla+in+humans+and+Suncus+murinus,+from+the+perspective+of+preserving+innervation+in+organ-saving+procedures.">Surgical anatomy of the innervation of the major duodenal papilla in humans and Suncus murinus, from the perspective of preserving innervation in organ-saving procedures.</a> Pancreas. 30 (3), 211-217 (2005).</li><li>Yi, S. Q., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Surgical+anatomy+of+the+innervation+of+the+pylorus+in+humans+and+Suncus+murinus,+in+relation+to+the+surgical+technique+for+pylorus-preserving+pancreatoduodenectomy.">Surgical anatomy of the innervation of the pylorus in humans and Suncus murinus, in relation to the surgical technique for pylorus-preserving pancreatoduodenectomy.</a> World J. Gastroenterol. 12 (14), 2209-2216 (2006).</li><li>Yi, S. Q., Ren, K., Kinoshita, M., Takano, N., Itoh, M., Ozaki, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Innervation+of+Extrahepatic+Biliary+Tract,+With+Special+Reference+to+the+Direct+Bidirectional+Neural+Connections+of+the+Gall+Bladder,+Sphincter+of+Oddi+and+Duodenum+in+Suncus+murinus,+in+Whole-Mount+Immunohistochemical+Study.">Innervation of Extrahepatic Biliary Tract, With Special Reference to the Direct Bidirectional Neural Connections of the Gall Bladder, Sphincter of Oddi and Duodenum in Suncus murinus, in Whole-Mount Immunohistochemical Study.</a> Anat. Histol. Embryol. 45 (3), 184-188 (2016).</li><li>Wang, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Neurofilament+proteins+in+axonal+regeneration+and+neurodegenerative+diseases.">Neurofilament proteins in axonal regeneration and neurodegenerative diseases.</a> Neural Regen. Res. 7 (8), 620-626 (2012).</li><li>Wyatt, A. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+relationship+of+the+sphincter+of+Oddi+to+the+stomach,+duodenum+and+gall-bladder.">The relationship of the sphincter of Oddi to the stomach, duodenum and gall-bladder.</a> J. Physiol. 193 (2), 225-243 (1967).</li><li>Mawe, G. M., Kennedy, A. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Duodenal+neurons+provide+nicotinic+fast+synaptic+input+to+sphincter+of+Oddi+neurons+in+guinea+pig.">Duodenal neurons provide nicotinic fast synaptic input to sphincter of Oddi neurons in guinea pig.</a> Am. J. Physiol. 277, G226-G234 (1999).</li><li>Seo, J. H., Cho, S. S., Lee, I. S., Lee, H. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Anatomical+and+neuropeptidergic+properties+of+the+duodenal+neurons+projecting+to+the+gallbladder+in+the+golden+hamster.">Anatomical and neuropeptidergic properties of the duodenal neurons projecting to the gallbladder in the golden hamster.</a> Arch. Histol. Cytol. 65 (4), 317-321 (2002).</li><li>Padbury, R. T., Furness, J. B., Baker, R. A., Toouli, J., Messenger, J. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Projections+of+nerve+cells+from+the+duodenum+to+the+sphincter+of+Oddi+and+gallbladder+of+the+Australian+possum.">Projections of nerve cells from the duodenum to the sphincter of Oddi and gallbladder of the Australian possum.</a> Gastroenterology. 104 (1), 130-136 (1993).</li><li>White, J. J., Reeber, S. L., Hawkes, R., Sillitoe, R. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Wholemount+immunohistochemistry+for+revealing+complex+brain+topography.">Wholemount immunohistochemistry for revealing complex brain topography.</a> J. Vis. Exp. (62), e4042 (2012).</li></ol>

この研究は、ニューロフィラメントタンパク質に対する抗体を用いて肝外胆道の神経支配を視覚化するための実験手順を説明している。このプロトコルは、KurataniおよびTanaka 1,2,3によって記述されたプロトコルから適合させた。 この実験では、全マウント染色法が2〜3週間続くので、各実験のタイムラインを計画します。組織を入れた容器は、凍結/解凍プロセスを除いて...

家のムスクシュル、 Suncus murinusは、InsectivoraとSoricidae目に属する。この小さな哺乳類は東南アジア全域に分布しており、人間の住居や牛のペンの近くにある家や草地に生息しています4 。この種は、マウス、ラット、ウサギのような他の実験動物と比べてヒトに類似した一般的な形態学的特徴を示す。以前、膵臓6 、大十二指腸乳頭7 、幽門8 、胆嚢5 、および肝外胆道9の末梢神経を標識するために、 S.ムリナスニューロフィラメントタンパク質（NFP）に対する末梢ニューロンマーカーを用いた全マウント免疫染色を用いた。 NFPは、成熟した神経細胞骨格の一部である巨大分子複合体である。神経フィラメント関連タンパク質NFPとザイソソームとの間の相互作用を媒介する。酵素機能およびリンカータンパク質の構造はいずれもNFP 10によって調節される。 NFP複合体は、NF-L（70kDa）、NF-M（150-160kDa）、およびNF-H（200kDa）の3つのポリペプチドからなる。 NFPは、中枢神経系および末梢神経系の両方におけるニューロンの軸索に見出され得る。抗ヒトNFP抗体は、中枢神経系および末梢神経系の軸索を標識することが示されている。解剖学的および電気生理学的研究により、括約筋、胆嚢および近位胃腸管が11,12,13,14に接続されていることが示された。しかしながら、それらのニューロン結合の形態学的特徴はまだ定義されていない。 この研究は、 S. murinus bilの神経支配を標識するための全マウント免疫組織化学的染色法の使用を実証しているNFP抗体を用いたiary tract。

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" width="573">
	<tbody>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">orthoperiodic acid</td>
			<td style="width:71px;">Wako</td>
			<td style="width:119px;">162-00732</td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">papain</td>
			<td style="width:71px;">Wako</td>
			<td style="width:119px;">164-00172</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">bovine serum albumin (BSA)</td>
			<td style="width:71px;">Wako</td>
			<td style="width:119px;">010-15131</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">sodium azide</td>
			<td style="width:71px;">Nacalai Tesque</td>
			<td style="width:119px;">312-33</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">neurofilament protein (NFP) antibody</td>
			<td style="width:71px;">Dako</td>
			<td style="width:119px;">M0762, lot 089, clone: 2F11</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="63">
			<td height="63" style="height:63px;width:216px;">peroxidase-conjugated affinity-purified sheep anti-mouse IgG-HRP</td>
			<td style="width:71px;">MBL</td>
			<td style="width:119px;">Code 330</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">3,3&#39;-diaminobenzidine tetrahydrochloride (DAB)</td>
			<td style="width:71px;">Wako</td>
			<td style="width:119px;">349-00903</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">imidazole</td>
			<td style="width:71px;">Sigma</td>
			<td style="width:119px;">I-0125</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

using a whole-mount immunohistochemical method to study the innervation of the biliary tract in suncus murinus

この研究は、 Suncus murinus（ S. murinus）における胆道の神経支配を標識するためにニューロフィラメントタンパク質抗体を使用して、全マウント免疫組織化学染色方法を詳細に説明する&#160; ）。最初に、検体をS. murinusから解剖し、4％パラホルムアルデヒド（PFA）で固定した。第2に、酵素処理および潜在的な内因性ペルオキシダーゼ不活性化を行った。次いで、試験片を一次抗体である抗神経フィラメントタンパク質抗体に3-6日間曝露した。その後、西洋ワサビペルオキシダーゼと結合した二次抗体とインキュベートした。呈色反応は、検体を3,3&#39;-ジアミノベンジジン（DAB）基質と反応させることによって明らかにした。この方法は、すべての内臓器官の神経支配を分析するために適用することができる。さらに、このプロトコールは、他のニューロン抗体を試験するために適合させることもできるが、抗体の最適化最初に行う必要があります。この方法はもともとKuratani and Tanaka 1,2,3によって導入された。

図1〜4は、 S. murinusの肝外胆管におけるNFP陽性神経線維の典型的な結果を示す。 （ 図1 ）、胆嚢（ 図2 ）、上部胆管（ 図3 ）、および十二指腸乳頭領域（ 図4 ）の画像全体において、NFPに対する抗体は高い特異性および最小限度を再現可能に標識したバック?...

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Using a Whole-mount Immunohistochemical Method to Study the Innervation of the Biliary Tract in Suncus murinus

Suncus murinusの肝外胆管における神経フィラメントタンパク質の発現を視覚化するための全身免疫組織化学的アプローチ。ここに表示されます。このプロトコルは、 S. murinusまたは他の種のすべての内臓器官の神経支配を分析するために使用することができる。

全身免疫組織化学的方法を用いて胆道の内腔を調べる<em&gt; Suncus murinus</em

This work describes the whole-mount immunohistochemistry staining method in detail, using neurofilament protein antibody to label the innervation of the ...

Research

JoVE Journal

Biology

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