Name: using a whole-mount immunohistochemical method to study the innervation of the biliary tract in suncus murinus
Uploaded: 2017-06-15T12:30:00
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모든 실험 절차는 도쿄 도립 대학 동물 애호 관리위원회 (IACUC)의 승인을 받았습니다. 실험실 동물 의 관리와 사용을위한 안내서와 동물 보호에 관한 캐나다위원회 의 실험 동물 의 관리와 사용 안내서에 따라 동물을 수용하고 취급했습니다. 우리는 일본 동경 메트로폴리탄 대학교 (Functional Morphology Laboratory) 프런티어 보건 과학부에서 사육되고 유지 된 동물들을 사용했?...

<ol>
	<li>Kuratani, S., Tanaka, S., Ishikawa, Y., Zukeran, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Early+development+of+the+hypoglossal+nerve+in+the+chick+embryo+as+observed+by+the+whole-mount+nerve+staining+method.">Early development of the hypoglossal nerve in the chick embryo as observed by the whole-mount nerve staining method.</a> Am. J. Anat. 182 (2), 155-168 (1988).</li><li>Kuratani, S., Tanaka, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Peripheral+development+of+the+avian+vagus+nerve+with+special+reference+to+the+morphological+innervation+of+heart+and+lung.">Peripheral development of the avian vagus nerve with special reference to the morphological innervation of heart and lung.</a> Anat. Embryol. (Berl). 182 (5), 435-445 (1990).</li><li>Kuratani, S., Tanaka, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Peripheral+development+of+avian+trigeminal+nerves.">Peripheral development of avian trigeminal nerves.</a> Am. J. Anat. 187 (1), 65-80 (1990).</li><li>Yi, S. Q., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=House+musk+shrew,+Suncus+murinus:+a+novel+and+natural+obesity-resistant+animal+model.">House musk shrew, Suncus murinus: a novel and natural obesity-resistant animal model.</a> Obes. Metab. 6, 22-28 (2010).</li><li>Yi, S. Q., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Surgical+anatomy+of+innervation+of+the+gallbladder+in+humans+and+Suncus+murinus+with+special+reference+to+morphological+understanding+of+gallstone+formation+after+gastrectomy.">Surgical anatomy of innervation of the gallbladder in humans and Suncus murinus with special reference to morphological understanding of gallstone formation after gastrectomy.</a> World J. Gastroenterol. 13 (14), 2066-2071 (2007).</li><li>Yi, S. Q., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Anatomical+study+of+the+pancreas+in+the+house+musk+shrew,+Suncus+murinus,+with+special+reference+to+the+blood+supply+and+innervation.">Anatomical study of the pancreas in the house musk shrew, Suncus murinus, with special reference to the blood supply and innervation.</a> Anat. Rec. A Discov. Mol. Cell Evol. Biol. 273 (1), 630-635 (2003).</li><li>Yi, S. Q., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Surgical+anatomy+of+the+innervation+of+the+major+duodenal+papilla+in+humans+and+Suncus+murinus,+from+the+perspective+of+preserving+innervation+in+organ-saving+procedures.">Surgical anatomy of the innervation of the major duodenal papilla in humans and Suncus murinus, from the perspective of preserving innervation in organ-saving procedures.</a> Pancreas. 30 (3), 211-217 (2005).</li><li>Yi, S. Q., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Surgical+anatomy+of+the+innervation+of+the+pylorus+in+humans+and+Suncus+murinus,+in+relation+to+the+surgical+technique+for+pylorus-preserving+pancreatoduodenectomy.">Surgical anatomy of the innervation of the pylorus in humans and Suncus murinus, in relation to the surgical technique for pylorus-preserving pancreatoduodenectomy.</a> World J. Gastroenterol. 12 (14), 2209-2216 (2006).</li><li>Yi, S. Q., Ren, K., Kinoshita, M., Takano, N., Itoh, M., Ozaki, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Innervation+of+Extrahepatic+Biliary+Tract,+With+Special+Reference+to+the+Direct+Bidirectional+Neural+Connections+of+the+Gall+Bladder,+Sphincter+of+Oddi+and+Duodenum+in+Suncus+murinus,+in+Whole-Mount+Immunohistochemical+Study.">Innervation of Extrahepatic Biliary Tract, With Special Reference to the Direct Bidirectional Neural Connections of the Gall Bladder, Sphincter of Oddi and Duodenum in Suncus murinus, in Whole-Mount Immunohistochemical Study.</a> Anat. Histol. Embryol. 45 (3), 184-188 (2016).</li><li>Wang, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Neurofilament+proteins+in+axonal+regeneration+and+neurodegenerative+diseases.">Neurofilament proteins in axonal regeneration and neurodegenerative diseases.</a> Neural Regen. Res. 7 (8), 620-626 (2012).</li><li>Wyatt, A. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+relationship+of+the+sphincter+of+Oddi+to+the+stomach,+duodenum+and+gall-bladder.">The relationship of the sphincter of Oddi to the stomach, duodenum and gall-bladder.</a> J. Physiol. 193 (2), 225-243 (1967).</li><li>Mawe, G. M., Kennedy, A. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Duodenal+neurons+provide+nicotinic+fast+synaptic+input+to+sphincter+of+Oddi+neurons+in+guinea+pig.">Duodenal neurons provide nicotinic fast synaptic input to sphincter of Oddi neurons in guinea pig.</a> Am. J. Physiol. 277, G226-G234 (1999).</li><li>Seo, J. H., Cho, S. S., Lee, I. S., Lee, H. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Anatomical+and+neuropeptidergic+properties+of+the+duodenal+neurons+projecting+to+the+gallbladder+in+the+golden+hamster.">Anatomical and neuropeptidergic properties of the duodenal neurons projecting to the gallbladder in the golden hamster.</a> Arch. Histol. Cytol. 65 (4), 317-321 (2002).</li><li>Padbury, R. T., Furness, J. B., Baker, R. A., Toouli, J., Messenger, J. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Projections+of+nerve+cells+from+the+duodenum+to+the+sphincter+of+Oddi+and+gallbladder+of+the+Australian+possum.">Projections of nerve cells from the duodenum to the sphincter of Oddi and gallbladder of the Australian possum.</a> Gastroenterology. 104 (1), 130-136 (1993).</li><li>White, J. J., Reeber, S. L., Hawkes, R., Sillitoe, R. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Wholemount+immunohistochemistry+for+revealing+complex+brain+topography.">Wholemount immunohistochemistry for revealing complex brain topography.</a> J. Vis. Exp. (62), e4042 (2012).</li></ol>

이 작품은 neurofilament 단백질에 대한 항체를 사용하여 extrahepatic 담즙 관의 innervation의 시각화를위한 실험 절차를 설명합니다. 이 프로토콜은 쿠라 타니 (Kuratani)와 다나카 (Tanaka) 1 , 2 , 3 에 의해 기술 된 프로토콜로부터 수정되었습니다. 이 실험에서는 전체 마운트 염색 접근법이 2 ~ 3 주 동안 계속되므로 ?...

집 사향 갈기 , Suncus murinus , 주문 Insectivora과 가족 Soricidae에 속한다. 이 작은 포유 동물은 동남 아시아 전역에 분포하며 인간의 거주지 또는 소 펜 4 근처에 위치한 잔디와 풀밭에 서식합니다. 이 종은 마우스, 쥐 및 토끼와 같은 다른 실험 동물보다 인간과 더 유사한 일반적인 형태학적인 특성을 나타낸다. 이전에, S. murinus neurofilament protein (NFP)에 대한 말초 신경 마커를 이용한 whole-mount immunostaining은 췌장 6 , 주요 십이지장 유두 7 , 유두 8 , 담낭 5 및 간외 담도 9 에서 말초 신경을 표지하기 위해 사용되었습니다. NFP는 성숙한 신경 세포 뼈대의 일부인 거대 분자 복합체입니다. 신경 필라멘트 관련 단백질NFP와 접합체 사이의 상호 작용을 매개한다. 효소 기능과 링커 단백질의 구조는 NFP 10 에 의해 조절됩니다. NFP 복합체는 NF-L (70 kDa), NF-M (150-160 kDa) 및 NF-H (200 kDa)의 세 가지 폴리 펩타이드로 이루어져 있습니다. NFP는 중추 신경계와 말초 신경계에서 신경 세포의 축색 돌기에서 발견 될 수 있습니다. 항 인간 NFP 항체는 중추 신경계와 말초 신경계의 축삭을 표지하는 것으로 나타났습니다. 해부학 적 및 전기 생리 학적 연구 결과에 의하면 괄약근, 담낭 및 근위부 위장관은 11 , 12 , 13 , 14 로 연결되어 있음이 입증되었습니다. 그러나, 그들의 연결 연결의 형태 학적 특징은 아직 정의되지 않았다. 이 연구는 S. murinus bil의 innervation을 표시하기 위해 whole-mount immunohistochemical 염색법을 사용하는 방법을 보여줍니다NFP 항체가있는 iary tract.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" width="573">
	<tbody>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">orthoperiodic acid</td>
			<td style="width:71px;">Wako</td>
			<td style="width:119px;">162-00732</td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">papain</td>
			<td style="width:71px;">Wako</td>
			<td style="width:119px;">164-00172</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">bovine serum albumin (BSA)</td>
			<td style="width:71px;">Wako</td>
			<td style="width:119px;">010-15131</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">sodium azide</td>
			<td style="width:71px;">Nacalai Tesque</td>
			<td style="width:119px;">312-33</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">neurofilament protein (NFP) antibody</td>
			<td style="width:71px;">Dako</td>
			<td style="width:119px;">M0762, lot 089, clone: 2F11</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="63">
			<td height="63" style="height:63px;width:216px;">peroxidase-conjugated affinity-purified sheep anti-mouse IgG-HRP</td>
			<td style="width:71px;">MBL</td>
			<td style="width:119px;">Code 330</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">3,3&#39;-diaminobenzidine tetrahydrochloride (DAB)</td>
			<td style="width:71px;">Wako</td>
			<td style="width:119px;">349-00903</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">imidazole</td>
			<td style="width:71px;">Sigma</td>
			<td style="width:119px;">I-0125</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

using a whole-mount immunohistochemical method to study the innervation of the biliary tract in suncus murinus

이 작품은 전체 마운트 immunohistochemistry 얼룩 방법을 자세하게 설명합니다, 신경 섬유 단백질 항체를 사용하여 Suncus murinus ( S. murinus 의 담즙 기관의 innervation을 표시하기 위해 &#160; ). 먼저 표본을 S. murinus 에서 해부시키고 4 % 파라 포름 알데히드 (PFA)에 고정시켰다. 둘째, 효소 처리 및 잠재적 인 내재적 퍼 옥시 다제 불 활성화가 수행되었다. 그 다음, 시험편을 1 차 항체, 항 - 신경 필라멘트 단백질 항체에 3-6 일 동안 노출시켰다. 이어서, 양 고추 냉이 과산화 효소가 접합 된 2 차 항체와 함께 항온 배양 하였다. 표적을 3,3&#39;- 디아 미노 벤지딘 (DAB) 기질과 반응시켜 발색 반응을 나타내었다. 이 방법은 모든 내장 기관의 신경 분포 분석에 적용 할 수 있습니다. 또한,이 프로토콜은 다른 뉴런 항체를 테스트하기 위해 적응할 수 있지만, 항체의 최적화es가 먼저 수행되어야합니다. 이 방법은 원래 Kuratani와 Tanaka 1 , 2 , 3 에 의해 도입되었습니다.

그림 1 - 4 는 S. murinus의 간외 담관에서 NFP 양성 신경 섬유에 대한 전형적인 결과를 보여줍니다. NFP에 대한 항체는 간외 담도 ( 그림 1 ), 담낭 ( 그림 2 ), 상부 담관 ( 그림 3 ) 및 십이지장 유두 부위 ( 그림 4 )의 전체 이미지에서 높은 특이도 및 최소 배?...

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Using a Whole-mount Immunohistochemical Method to Study the Innervation of the Biliary Tract in Suncus murinus

Suncus murinus 의 외 간성 담도계에서 neurofilament 단백질 발현을 시각화하기위한 whole-mount immunohistochemical 접근법 . 여기에 제시됩니다. 이 프로토콜은 S. murinus 또는 다른 종의 모든 내장 기관의 innervation을 분석하는 데 사용할 수 있습니다.

담관의 보행을 연구하기위한 Whole-mount Immunohistochemical method의 사용<em&gt; Suncus murinus</em

This work describes the whole-mount immunohistochemistry staining method in detail, using neurofilament protein antibody to label the innervation of the ...

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