Name: using a whole-mount immunohistochemical method to study the innervation of the biliary tract in suncus murinus
Uploaded: 2017-06-15T12:30:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Using a Whole-mount Immunohistochemical Method to Study the Innervation of the Biliary Tract in Suncus murinus at JoVE.com

У авторов нет подтверждений.

Все экспериментальные процедуры были одобрены Комитетом по уходу и использованию животных в Токийском столичном университете (IACUC). Животных размещали и обрабатывали в соответствии с Руководством по уходу и использованию лабораторных животных и Руководством по уходу и ис...

<ol>
	<li>Kuratani, S., Tanaka, S., Ishikawa, Y., Zukeran, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Early+development+of+the+hypoglossal+nerve+in+the+chick+embryo+as+observed+by+the+whole-mount+nerve+staining+method.">Early development of the hypoglossal nerve in the chick embryo as observed by the whole-mount nerve staining method.</a> Am. J. Anat. 182 (2), 155-168 (1988).</li><li>Kuratani, S., Tanaka, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Peripheral+development+of+the+avian+vagus+nerve+with+special+reference+to+the+morphological+innervation+of+heart+and+lung.">Peripheral development of the avian vagus nerve with special reference to the morphological innervation of heart and lung.</a> Anat. Embryol. (Berl). 182 (5), 435-445 (1990).</li><li>Kuratani, S., Tanaka, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Peripheral+development+of+avian+trigeminal+nerves.">Peripheral development of avian trigeminal nerves.</a> Am. J. Anat. 187 (1), 65-80 (1990).</li><li>Yi, S. Q., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=House+musk+shrew,+Suncus+murinus:+a+novel+and+natural+obesity-resistant+animal+model.">House musk shrew, Suncus murinus: a novel and natural obesity-resistant animal model.</a> Obes. Metab. 6, 22-28 (2010).</li><li>Yi, S. Q., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Surgical+anatomy+of+innervation+of+the+gallbladder+in+humans+and+Suncus+murinus+with+special+reference+to+morphological+understanding+of+gallstone+formation+after+gastrectomy.">Surgical anatomy of innervation of the gallbladder in humans and Suncus murinus with special reference to morphological understanding of gallstone formation after gastrectomy.</a> World J. Gastroenterol. 13 (14), 2066-2071 (2007).</li><li>Yi, S. Q., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Anatomical+study+of+the+pancreas+in+the+house+musk+shrew,+Suncus+murinus,+with+special+reference+to+the+blood+supply+and+innervation.">Anatomical study of the pancreas in the house musk shrew, Suncus murinus, with special reference to the blood supply and innervation.</a> Anat. Rec. A Discov. Mol. Cell Evol. Biol. 273 (1), 630-635 (2003).</li><li>Yi, S. Q., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Surgical+anatomy+of+the+innervation+of+the+major+duodenal+papilla+in+humans+and+Suncus+murinus,+from+the+perspective+of+preserving+innervation+in+organ-saving+procedures.">Surgical anatomy of the innervation of the major duodenal papilla in humans and Suncus murinus, from the perspective of preserving innervation in organ-saving procedures.</a> Pancreas. 30 (3), 211-217 (2005).</li><li>Yi, S. Q., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Surgical+anatomy+of+the+innervation+of+the+pylorus+in+humans+and+Suncus+murinus,+in+relation+to+the+surgical+technique+for+pylorus-preserving+pancreatoduodenectomy.">Surgical anatomy of the innervation of the pylorus in humans and Suncus murinus, in relation to the surgical technique for pylorus-preserving pancreatoduodenectomy.</a> World J. Gastroenterol. 12 (14), 2209-2216 (2006).</li><li>Yi, S. Q., Ren, K., Kinoshita, M., Takano, N., Itoh, M., Ozaki, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Innervation+of+Extrahepatic+Biliary+Tract,+With+Special+Reference+to+the+Direct+Bidirectional+Neural+Connections+of+the+Gall+Bladder,+Sphincter+of+Oddi+and+Duodenum+in+Suncus+murinus,+in+Whole-Mount+Immunohistochemical+Study.">Innervation of Extrahepatic Biliary Tract, With Special Reference to the Direct Bidirectional Neural Connections of the Gall Bladder, Sphincter of Oddi and Duodenum in Suncus murinus, in Whole-Mount Immunohistochemical Study.</a> Anat. Histol. Embryol. 45 (3), 184-188 (2016).</li><li>Wang, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Neurofilament+proteins+in+axonal+regeneration+and+neurodegenerative+diseases.">Neurofilament proteins in axonal regeneration and neurodegenerative diseases.</a> Neural Regen. Res. 7 (8), 620-626 (2012).</li><li>Wyatt, A. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+relationship+of+the+sphincter+of+Oddi+to+the+stomach,+duodenum+and+gall-bladder.">The relationship of the sphincter of Oddi to the stomach, duodenum and gall-bladder.</a> J. Physiol. 193 (2), 225-243 (1967).</li><li>Mawe, G. M., Kennedy, A. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Duodenal+neurons+provide+nicotinic+fast+synaptic+input+to+sphincter+of+Oddi+neurons+in+guinea+pig.">Duodenal neurons provide nicotinic fast synaptic input to sphincter of Oddi neurons in guinea pig.</a> Am. J. Physiol. 277, G226-G234 (1999).</li><li>Seo, J. H., Cho, S. S., Lee, I. S., Lee, H. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Anatomical+and+neuropeptidergic+properties+of+the+duodenal+neurons+projecting+to+the+gallbladder+in+the+golden+hamster.">Anatomical and neuropeptidergic properties of the duodenal neurons projecting to the gallbladder in the golden hamster.</a> Arch. Histol. Cytol. 65 (4), 317-321 (2002).</li><li>Padbury, R. T., Furness, J. B., Baker, R. A., Toouli, J., Messenger, J. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Projections+of+nerve+cells+from+the+duodenum+to+the+sphincter+of+Oddi+and+gallbladder+of+the+Australian+possum.">Projections of nerve cells from the duodenum to the sphincter of Oddi and gallbladder of the Australian possum.</a> Gastroenterology. 104 (1), 130-136 (1993).</li><li>White, J. J., Reeber, S. L., Hawkes, R., Sillitoe, R. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Wholemount+immunohistochemistry+for+revealing+complex+brain+topography.">Wholemount immunohistochemistry for revealing complex brain topography.</a> J. Vis. Exp. (62), e4042 (2012).</li></ol>

В этой работе описывается экспериментальная процедура визуализации иннервации внепеченочного желчного тракта с использованием антитела против нейрофиламентного белка. Этот протокол был адаптирован из протокола, описанного Куратани и Танакой 1 , 2 ,<...

Домашний мускусник , Suncus murinus , принадлежит к ордену Insectivora и семье Soricidae. Это крошечное млекопитающее распространяется по всей Юго-Восточной Азии и обитает в домах и травянистых районах, которые расположены вблизи человеческих обитателей или скотков 4 . Этот вид имеет общие морфологические характеристики, более похожие на человека, чем у других лабораторных животных, таких как мышь, крыса и кролик 5 . Ранее для выявления периферических нервов в поджелудочной железе 6 , крупном дуоденальном сосочке 7 , пилорусе 8 , желчном пузыре 5 и экстрапекальном билиарном тракте 9 использовалось иммуноокрашивание с полным расположением с маркером периферических нейронов для белка нейрофиламента S. murinus (NFP). NFP представляет собой макромолекулярный комплекс, который является частью зрелого нейронового цитоскелета. Нейрофиламент-связанный белокS посреднические взаимодействия между NFP и zygosome. Как ферментная функция, так и структура линкерных белков регулируются NFP 10 . Комплекс NFP состоит из трех полипептидов: NF-L (70 кДа), NF-M (150-160 кДа) и NF-H (200 кДа). NFP можно найти в нейронных аксонах как в центральной, так и в периферической нервной системе. Было показано, что анти-человеческое антитело NFP обозначает аксоны центральной и периферической нервной системы. Анатомические и электрофизиологические исследования показали, что сфинктер, желчный пузырь и проксимальный желудочно-кишечный тракт связаны с 11 , 12 , 13 , 14 . Однако морфологические особенности их нейронных соединений еще не определены. Эта работа демонстрирует использование метода иммуногистохимического окрашивания с полным креплением для маркировки иннервации S. murinus bilIary с NFP-антителом.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" width="573">
	<tbody>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">orthoperiodic acid</td>
			<td style="width:71px;">Wako</td>
			<td style="width:119px;">162-00732</td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">papain</td>
			<td style="width:71px;">Wako</td>
			<td style="width:119px;">164-00172</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">bovine serum albumin (BSA)</td>
			<td style="width:71px;">Wako</td>
			<td style="width:119px;">010-15131</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">sodium azide</td>
			<td style="width:71px;">Nacalai Tesque</td>
			<td style="width:119px;">312-33</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">neurofilament protein (NFP) antibody</td>
			<td style="width:71px;">Dako</td>
			<td style="width:119px;">M0762, lot 089, clone: 2F11</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="63">
			<td height="63" style="height:63px;width:216px;">peroxidase-conjugated affinity-purified sheep anti-mouse IgG-HRP</td>
			<td style="width:71px;">MBL</td>
			<td style="width:119px;">Code 330</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">3,3&#39;-diaminobenzidine tetrahydrochloride (DAB)</td>
			<td style="width:71px;">Wako</td>
			<td style="width:119px;">349-00903</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">imidazole</td>
			<td style="width:71px;">Sigma</td>
			<td style="width:119px;">I-0125</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

using a whole-mount immunohistochemical method to study the innervation of the biliary tract in suncus murinus

В этой работе подробно описывается метод полного окрашивания иммуногистохимическим методом, с использованием антител против нейрофиламентного белка для обозначения иннервации желчного тракта у Suncus murinus ( S. murinus &#160; ). Во-первых, образец рассекали из S. murinus и фиксировали в 4% параформальдегиде (PFA). Во-вторых, проводилась ферментативная обработка и потенциальная эндогенная инактивация пероксидазы. Затем образец подвергали воздействию первичного антитела, антитела против нейрофиламентного белка, в течение 3-6 дней. Затем его инкубировали с вторичным антителом, конъюгированным с пероксидазой хрена. Цветовая реакция была обнаружена путем взаимодействия образца с субстратом 3,3&#39;-диаминобензидина (DAB). Этот метод может быть применен для анализа иннервации всех висцеральных органов. Кроме того, этот протокол также может быть адаптирован для тестирования других нейронных антител, но оптимизация антителДолжны быть выполнены в первую очередь. Этот метод был первоначально представлен Куратани и Танакой 1 , 2 , 3 .

На рисунках 1 - 4 показаны типичные результаты для NFP-положительных нервных волокон в внепеченочном желчном тракте у S. murinus . Антитело против NFP воспроизводимо помечено иннервацией во всем изображении внепеченочного желчного тракта ( р...

Watch this Scientific Journal Video about Using a Whole-mount Immunohistochemical Method to Study the Innervation of the Biliary Tract in Suncus murinus at JoVE.com

Using a Whole-mount Immunohistochemical Method to Study the Innervation of the Biliary Tract in Suncus murinus

Универсальный иммуногистохимический подход для визуализации экспрессии белка нейрофиламента в внепеченочном желчном тракте у Suncus murinus. Представлен здесь. Этот протокол может быть использован для анализа иннервации всех висцеральных органов у S. murinus или других видов.

Использование иммуногистохимического метода цельного монтирования для изучения иннервации билиарного тракта в<em&gt; Солнце</em

This work describes the whole-mount immunohistochemistry staining method in detail, using neurofilament protein antibody to label the innervation of the ...

Research

JoVE Journal

Biology

Using a Whole-mount Immunohistochemical Method to Study the Innervation of the Biliary Tract in Suncus murinus

Testing Visual Sensitivity to the Speed and Direction of Motion in Lizards

Тестирование зрительной чувствительности к скорости и направления движения в Ящерицы

Testing visual sensitivity in any species provides basic information regarding behaviour, evolution, and ecology. However, testing specific features of ...

Double Whole Mount in situ Hybridization of Early Chick Embryos

Дважды Всего горе на месте гибридизация раннего куриных эмбрионов

The chick embryo is a valuable tool in the study of early embryonic development. Its transparency, accessibility and ease of manipulation, make it an ...

Method for Whole Mount Antibody Staining in Chick

Метод полного окрашивания антител горе в Чик

Zebrafish Whole Mount High-Resolution Double Fluorescent In Situ Hybridization

Zebrafish Whole Mount High-Resolution Double Fluorescent In Situ Hybridization

Данио рерио Всего горе высокого разрешения двумя люминесцентными В Ситу Гибридизация

Whole mount in situ hybridization is one of the most widely used techniques in developmental biology.  Here, we present a high-resolution double ...

Hi-C: A Method to Study the Three-dimensional Architecture of Genomes.

Привет-C: метод изучения трехмерной архитектуры геномов.

The three-dimensional folding of chromosomes compartmentalizes the genome and and can bring distant functional elements, such as promoters and enhancers, ...

Using Whole Mount in situ Hybridization to Link Molecular and Organismal Biology

Using Whole Mount in situ Hybridization to Link Molecular and Organismal Biology

Использование Всего горе На месте Гибридизация в ссылку молекулярной биологии и организменном

Whole mount in situ hybridization (WISH) is a common technique in molecular biology laboratories used to study gene expression through the localization of ...

Whole-mount Immunohistochemical Analysis for Embryonic Limb Skin Vasculature: a Model System to Study Vascular Branching Morphogenesis in Embryo

Всего монтажа иммуногистохимического анализа для Эмбриональные сосудистой кожи конечностей: модельная система для исследования сосудистой Ветвление Морфогенез в зародыше

Whole-mount immunohistochemical analysis for imaging the entire vasculature is pivotal for understanding the cellular mechanisms of branching ...

Whole Mount in Situ Hybridization of E8.5 to E11.5 Mouse Embryos

Whole Mount in Situ Hybridization of E8.5 to E11.5 Mouse Embryos

Всего горы<em&gt; На месте</em&gt; Гибридизация E8.5 в E11.5 эмбрионов мыши

Whole mount in situ hybridization is a very informative approach for defining gene expression patterns in embryos. The in situ hybridization procedures ...

A High Throughput in situ Hybridization Method to Characterize mRNA Expression Patterns in the Fetal Mouse Lower Urogenital Tract

A High Throughput in situ Hybridization Method to Characterize mRNA Expression Patterns in the Fetal Mouse Lower Urogenital Tract

Высокая пропускная способность На месте Гибридизация метод для характеристики Шаблоны экспрессии мРНК в фетальных Мышь Нижняя урогенитального тракта

Development of the lower urogenital tract (LUT) is an intricate process. This complexity is evidenced during formation of the prostate from the fetal male ...

High Resolution Whole Mount In Situ Hybridization within Zebrafish Embryos to Study Gene Expression and Function

High Resolution Whole Mount In Situ Hybridization within Zebrafish Embryos to Study Gene Expression and Function

Высокое разрешение Всего горе<em&gt; В Ситу</em&gt; Гибридизация в Эмбрионы рыбок данио изучить экспрессию генов и функции

This article focuses on whole-mount in situ hybridization (WISH) of zebrafish embryos. The WISH technology facilitates the assessment of gene expression ...