Name: detection of microrna expression in peritoneal membrane of rats using quantitative real-time pcr
Uploaded: 2017-06-27T14:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Detection of microRNA Expression in Peritoneal Membrane of Rats Using Quantitative Real-time PCR at JoVE.com

Мы хотели бы поблагодарить Мияко Шигету за отличную техническую поддержку. Эта работа была частично поддержана JSPS KAKENHI (грант № 25461252).

Все экспериментальные протоколы животных были одобрены комитетом по этике животных Медицинского университета Джичи и были выполнены в соответствии с Руководством по использованию и уходу за экспериментальными животными из Руководства медицинских лабораторий Jichi для лабораторных ж...

<ol>
	<li>Krol, J., Loedige, I., Filipowicz, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+widespread+regulation+of+microRNA+biogenesis,+function+and+decay.">The widespread regulation of microRNA biogenesis, function and decay.</a> Nat Rev Genet. 11 (9), 597-610 (2010).</li><li>Beermann, J., Piccoli, M. T., Viereck, J., Thum, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Non-coding+RNAs+in+Development+and+Disease:+Background,+Mechanisms,+and+Therapeutic+Approaches.">Non-coding RNAs in Development and Disease: Background, Mechanisms, and Therapeutic Approaches.</a> Physiol Rev. 96 (4), 1297-1325 (2016).</li><li>Saikumar, J., Ramachandran, K., Vaidya, V. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Noninvasive+micromarkers.">Noninvasive micromarkers.</a> Clin Chem. 60 (9), 1158-1173 (2014).</li><li>Yang, G., Yang, L., Wang, W., Wang, J., Xu, Z. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Discovery+and+validation+of+extracellular/circulating+microRNAs+during+idiopathic+pulmonary+fibrosis+disease+progression.">Discovery and validation of extracellular/circulating microRNAs during idiopathic pulmonary fibrosis disease progression.</a> Gene. 562 (1), 138-144 (2015).</li><li>Zhang, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Circulating+miR-126+is+a+potential+biomarker+to+predict+the+onset+of+type+2+diabetes+mellitus+in+susceptible+individuals.">Circulating miR-126 is a potential biomarker to predict the onset of type 2 diabetes mellitus in susceptible individuals.</a> Biochem Biophys Res Commun. , (2015).</li><li>Zhong, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=miR-21+is+a+key+therapeutic+target+for+renal+injury+in+a+mouse+model+of+type+2+diabetes.">miR-21 is a key therapeutic target for renal injury in a mouse model of type 2 diabetes.</a> Diabetologia. 56 (3), 663-674 (2013).</li><li>Wang, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Downregulation+of+urinary+cell-free+microRNA-214+as+a+diagnostic+and+prognostic+biomarker+in+bladder+cancer.">Downregulation of urinary cell-free microRNA-214 as a diagnostic and prognostic biomarker in bladder cancer.</a> J Surg Oncol. , (2015).</li><li>Morishita, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=MicroRNA+expression+profiling+in+peritoneal+fibrosis.">MicroRNA expression profiling in peritoneal fibrosis.</a> Transl Res. 169, 47-66 (2016).</li><li>Minami, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=miRNA+expression+atlas+in+male+rat.">miRNA expression atlas in male rat.</a> Sci Data. 1, 140005 (2014).</li><li>Morse, S. M., Shaw, G., Larner, S. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Concurrent+mRNA+and+protein+extraction+from+the+same+experimental+sample+using+a+commercially+available+column-based+RNA+preparation+kit.">Concurrent mRNA and protein extraction from the same experimental sample using a commercially available column-based RNA preparation kit.</a> Biotechniques. 40 (1), 54-58 (2006).</li><li>Mestdagh, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Evaluation+of+quantitative+miRNA+expression+platforms+in+the+microRNA+quality+control+(miRQC)+study.">Evaluation of quantitative miRNA expression platforms in the microRNA quality control (miRQC) study.</a> Nat Methods. 11 (8), 809-815 (2014).</li><li>Bustin, S. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+MIQE+guidelines:+minimum+information+for+publication+of+quantitative+real-time+PCR+experiments.">The MIQE guidelines: minimum information for publication of quantitative real-time PCR experiments.</a> Clin Chem. 55 (4), 611-622 (2009).</li><li>Schmittgen, T. D., Livak, K. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Analyzing+real-time+PCR+data+by+the+comparative+C(T)+method.">Analyzing real-time PCR data by the comparative C(T) method.</a> Nat Protoc. 3 (6), 1101-1108 (2008).</li><li>Krediet, R. T., Lindholm, B., Rippe, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pathophysiology+of+peritoneal+membrane+failure.">Pathophysiology of peritoneal membrane failure.</a> Perit Dial Int. 20, S22-S42 (2000).</li><li>Devuyst, O., Margetts, P. J., Topley, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+pathophysiology+of+the+peritoneal+membrane.">The pathophysiology of the peritoneal membrane.</a> J Am Soc Nephrol. 21 (7), 1077-1085 (2010).</li><li>Hirahara, I., Ishibashi, Y., Kaname, S., Kusano, E., Fujita, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Methylglyoxal+induces+peritoneal+thickening+by+mesenchymal-like+mesothelial+cells+in+rats.">Methylglyoxal induces peritoneal thickening by mesenchymal-like mesothelial cells in rats.</a> Nephrol Dial Transplant. 24 (2), 437-447 (2009).</li><li>Dallas, P. B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Gene+expression+levels+assessed+by+oligonucleotide+microarray+analysis+and+quantitative+real-time+RT-PCR+--+how+well+do+they+correlate?.">Gene expression levels assessed by oligonucleotide microarray analysis and quantitative real-time RT-PCR -- how well do they correlate?.</a> BMC Genomics. 6, 59 (2005).</li><li>Rockett, J. C., Hellmann, G. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Confirming+microarray+data--is+it+really+necessary?.">Confirming microarray data--is it really necessary?.</a> Genomics. 83 (4), 541-549 (2004).</li></ol>

Используя протокол, представленный в этой рукописи, miRNAs в крысиной перитонеальной мембране были успешно очищены и обнаружены с использованием qRT-PCR. Надежность анализа данных qRT-PCR зависит от качества очищенных miRNA. Поэтому чистоту miRNAs можно проверить до qRT-PCR соотношением поглощения при...

МикроРНК (miRNAs) представляют собой короткие, некодирующие РНК, которые посттранскрипционно регулируют экспрессию РНК (мРНК) мессенджера 1 . Изменения экспрессии miRNAs регулируют экспрессию многих мРНК, которые играют ключевую роль в различных патологических состояниях, включая рак, воспаление, нарушения обмена веществ и фиброз 2 , 3 , 4 , 5 , 6 , 7 , 8 . Таким образом, miRNAs обладают потенциалом в качестве новых биомаркеров и терапевтических мишеней 2 , 3 , 4 , 5 , 6 , 7 , 8 . Профиль экспрессии miRNA был определен у разных крысОрганов и тканей, включая печень, сердце, легкие и почки 9 . Однако стандартные методы очистки и обнаружения miRNAs в перитонеальной мембране крысы не были установлены. Общая цель этого протокола заключается в успешной очистке и обнаружении miRNAs в перитонеальной мембране крысы. Во-первых, образец перитонеальной мембраны гомогенизировали с использованием стеклянного гомогенизатора с последующим воздействием системы измельчения биополимера в колонку 10 микроцентрифужного спирта. Затем общую РНК, включая miRNA, очищали из образца перитонеальной мембраны с использованием спиновой колонки 10 на основе диоксида кремния. Затем кДНК синтезировали из очищенной полной РНК с использованием обратной транскриптазы, поли (А) полимеразы и олиго-dT-праймера 11 . Наконец, экспрессию miRNA определяли с помощью qRT-PCR с использованием интеркалирующего красителя 11 . Обоснованием этого протокола является bСогласно предыдущим исследованиям, которые показали значительную очистку и обнаружение miRNA в тканях простым процессом 8 , 10 , 11 . Сообщается, что использование системы измельчения биополимера в спин-колонке с микроцентрифугой и спиновой колонке на основе диоксида кремния может очищать высококачественную общую РНК из тканей 10 . Сообщалось, что способ синтеза кДНК из очищенной полной РНК с использованием обратной транскриптазы, поли (А)-полимеразы и олиго-dT-праймера и способ детектирования экспрессии miRNA с помощью qRT-PCR с использованием интеркалирующего красителя в этом протоколе показывают высокую точность и Чувствительность 11 . Кроме того, это простой процесс, который экономит время и предотвращает техническую ошибку. Поэтому этот протокол полезен в исследованиях, которые требуют высокоточного и чувствительного обнаружения miRNA в перитонеальной мембране крысы в ​​широком диапазоне патологических состояний,

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>QIA shredder</td>
			<td>Qiagen</td>
			<td>79654</td>
			<td>biopolymer-shredding system in a micro centrifuge spin-column</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>miRNeasy Mini kit</td>
			<td>Qiagen</td>
			<td>217004</td>
			<td>silica-membrane based spin column</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>QIAzol Lysis Reagent</td>
			<td>Qiagen</td>
			<td>79306</td>
			<td>phenol/guanidine-based lysis reagent</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Buffer RLT</td>
			<td>Qiagen</td>
			<td>79216</td>
			<td>wash buffer 1</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Buffer RWT</td>
			<td>Qiagen</td>
			<td>1067933</td>
			<td>wash buffer 2</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>miScript II RT kit&#160;</td>
			<td>Qiagen</td>
			<td>218161</td>
			<td>includes 10&#215; Nucleics Mix containing deoxynucleotides, ribonucleotide triphosphates, and oligo-dT primers; miScript Reverse Transcriptase Mix containing poly(A) polymerase and reverse transcriptase and; miScript HiSpec buffer</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>miScript SYBR Green PCR kit</td>
			<td>Qiagen</td>
			<td>218073</td>
			<td>includes QuantiTect SYBR Green PCR Master Mix and miScript Universal Primer</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>RNU6-2 primer&#160;&#160;</td>
			<td>Qiagen</td>
			<td>MS00033740</td>
			<td>not disclosed</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>miRNA-142-3p primer</td>
			<td>Qiagen</td>
			<td>MS00031451</td>
			<td>5&#39;-UGUAGUGUUUCC 
			UACUUUAUGGA-3&#39;&#160;&#160;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>miRNA-21-5p primer</td>
			<td>Qiagen</td>
			<td>MS00009079</td>
			<td>5&#39;-UAGCUUAUCAG 
			ACUGAUGUUGA-3&#39;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>miRNA-221-3p primer</td>
			<td>Qiagen</td>
			<td>MS00003857</td>
			<td>5&#39;-AGCUACAUUGU 
			CUGCUGGGUUUC-3&#39;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>miRNA-223-3p primer</td>
			<td>Qiagen</td>
			<td>MS00033320</td>
			<td>5&#39;-UGUCAGUUUG 
			UCAAAUACCCC-3&#39;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>miRNA-34a-5p primer</td>
			<td>Qiagen</td>
			<td>MS00003318</td>
			<td>5&#39;-UGGCAGUGUCU 
			UAGCUGGUUGU-3&#39;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>miRNA-327 primer</td>
			<td>Qiagen</td>
			<td>MS00000805</td>
			<td>5&#39;-CCUUGAGGGG 
			CAUGAGGGU-3&#39;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MicroAmp Optical 96 well reaction plate for qRT-PCR</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>4316813</td>
			<td>96-well reaction plate</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MicroAmp Optical Adhesive Film&#160;</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>4311971</td>
			<td>adhesive film for 96-well reaction plate</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>QuantStudio 12K Flex Flex Real-Time PCR system</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>4472380</td>
			<td>real-time PCR instrument</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>QuantStudio 12K Flex Software version 1.2.1.</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>4472380</td>
			<td>real-time PCR instrument software</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>methylglyoxal</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>M0252</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Midperic</td>
			<td>Terumo</td>
			<td>not assign&#160;</td>
			<td>peritoneal dialysis fluid</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sprague&#8211;Dawley rats</td>
			<td>SLC</td>
			<td>not assign&#160;</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

detection of microrna expression in peritoneal membrane of rats using quantitative real-time pcr

МикроРНК (miRNAs) представляют собой небольшие некодирующие РНК, которые регулируют экспрессию РНК-посланников после транскрипции. Профиль экспрессии miRNA был исследован в различных органах и тканях крысы. Однако стандартные методы очистки miRNAs и обнаружения их экспрессии в крысиной перитонеальной мембране не были установлены. Мы разработали эффективный и надежный метод очистки и количественной оценки miRNAs с использованием количественной реакции обратной транскрипционной полимеразной цепной реакции в реальном времени (qRT-PCR) в перитонеальной мембране крысы. Этот протокол состоит из четырех этапов: 1) очистка образца перитонеальной мембраны; 2) очистка полной РНК, включая miRNA от образца брюшной мембраны; 3) обратная транскрипция miRNA для получения кДНК; И 4) qRT-PCR для определения экспрессии miRNA. Используя этот протокол, мы успешно определили, что экспрессия шести miRNAs (miRNA-142-3p, miRNA-21-5p, miRNA-221-3p, miRNA-223-3p, miRNA-327 и miRNA-34a-5p) увеличиласьЗначительно в перитонеальной мембране модели крысиного перитонеального фиброза по сравнению с таковой в контрольных группах. Этот протокол можно использовать для изучения профиля экспрессии miRNA в перитонеальной мембране крыс во многих патологических состояниях.

Представленные здесь результаты основаны на нашем ранее опубликованном исследовании 8 . Мы исследовали профиль экспрессии miRNA при перитонеальном фиброзе. Перитонеальный фиброз является основным осложнением при перитонеальном диализе. Он характеризует?...

Watch this Scientific Journal Video about Detection of microRNA Expression in Peritoneal Membrane of Rats Using Quantitative Real-time PCR at JoVE.com

Detection of microRNA Expression in Peritoneal Membrane of Rats Using Quantitative Real-time PCR

Здесь мы представляем протокол для обнаружения экспрессии микроРНК в перитонеальной мембране крысы с использованием количественной цепной реакции обратной транскрипции в реальном времени. Этот метод подходит для изучения профиля экспрессии микроРНК в перитонеальной мембране крысы в ​​нескольких патологических состояниях.

Обнаружение экспрессии микроРНК в перитонеальной мембране крыс с использованием количественной ПЦР в реальном времени

MicroRNAs (miRNAs) are small noncoding RNAs that regulate messenger RNA expression post-transcriptionally. The miRNA expression profile has been ...

The overall goal of this procedure is to successfully purify and detect miRNAs in the rat peritoneal membrane. To begin this procedure, after inhalational anesthesia with 4%isoflurane. Spray the abdominal skin of the rat with 70%ethanol and mount it on the cork sheet, on its'back.Next make a longitudinal incision in the animal's abdominal skin, muscle, and peritoneal membrane using scissors and forceps. Pick up the peritoneal membrane using the forceps and make horizontal incisions on its'upper portion along the lowest rib bone under the diaphragm. And on its'lower side on the lateral region using the surgical scissors.Next, make lateral longitudinal incisions to remove the peritoneal membrane from the body, using the surgical scissors. Then wash it with PPS in a petri dish. Cut out and trim 20 milligrams of peritoneal membrane sample.In this procedure, place a 20 milligram peritoneal membrane sample into a glass homogenizer. And add 700 microliters phenol guanidine based lysis reagent. After that, homogenize the peritoneal membrane sample on ice, by slowing pressing a pestle onto the sample with twisting.Repeat this process several dozen times, until the peritoneal membrane sample has completely dissolved into the phenol guanidine based lysis reagent. for further homogenization, transfer the homogenized lysate to a bio-polymer shredding system in the micro centrifuge spin column in a two milliliter collection tube. Then centrifuge it at 14, 000 times G for three minutes at four degrees Celsius.Next, transfer the homogenized lysate to a new micro centrifuge tube. Add 140 microliters of chloroform to the homogenized lysate and cap the tube securely. Subsequently, mix the tube by inversion for 15 seconds.Afterward, incubate the sample for two to three minutes at room temperature. Following that, centrifuge it at 12, 000 times G for 15 minutes at four degrees Celsius. Transfer 300 microliters of the supernatant to a new micro centrifuge tube, without disturbing the precipitant.And add 450 micro liters of 100%ethanol. Then mix the sample by vortexing for five seconds. Next pipette up to 700 micro liters of the sample into a silicone membrane based spin column, placed in a two milliliter collection tube, and close the cap.Then centrifuge it at 15, 000 times G for 15 seconds. After centrifugation, discard the flow through in the collection tube. Then add 700 microliters of wash buffer 1, to the silicon membrane based spin column to stringently wash the sample and close the cap.Centrifuge it at 15, 000 times G for 15 seconds. After centrifugation, discard the flow through in the collection tube. Add 500 microliters of wash buffer 2, to the silica membrane based spin column, to remove any trace of salt, and close the cap.Then centrifuge it at 15, 000 times G for 15 seconds. After centrifugation, discard the flow through and the collection tube and repeat this procedure again. Next, centrifuge the silica membrane based spin column again at 15, 000 times G for one minute.After centrifugation, discard the collection tube and any flow through. Place the silica membrane based spin column in a new, one point five milliliter collection tube. Then transfer 25 microliters of RNase free water onto the column and close the cap.Leave the sample at room temperature for five minutes. Centrifuge it at 15, 000 times G for one minute. Following that, transfer the 25 microliter alouette containing the total RNA to a new micro centrifuge tube and store it at minus 80 degrees Celsius before use.In this procedure, prepare a master mix solution that contains two microliters of 10x nucleic acid mix, two microliters of reverse transcriptase mix, and four microliters of 5x Hispec buffer, for a total of 8 microliters per tube. Then dispense 8 microliters of the master mix solution into each tube. Measure the quantity of the total RNAs using a Spectrophotometer.Afterward, add one microgram of the isolated total RNAs, purified from the peritoneal membrane sample, to each tube. Following that, add RNase free water to each tube to bring it to a total of 20 microliters. Then mix it thoroughly by pipetting and centrifuge it for 15 seconds.Following that, incubate the sample for 60 minutes at 37 degrees Celsius. Then incubate it for five minutes at 95 degrees Celsius. Transfer the newly generated cDNA to a new micro centrifuge tube and dilute it 10 times with RNase free water.In this procedure, prepare a master mix containing 12 point five microliters of 2x PCR master mix, two point five microliters of five micromolar of each miRNA primer dissolved in nuclease free water, and one point two five microliters of 10x universal primer, for each well. Dispense 22 point five microliters of this master mix into each well of a 96 well plate. Then add two point five microliters of template cDNA to each well.Seal the 96 well reaction plate with a piece of film. Then centrifuge it at 1, 000 times G for 30 seconds. To run the PCR cycling program, set the plate in the real time PCR instrument.In the real time PCR software, define the experimental properties. Next, assign names to the samples and target miRNAs in each well. Then in the real time PCR software input a reaction volume of 20 micro liters and the following PCR cycling conditions in accordance with the instructions.Pre incubation at 95 degrees Celsius for 15 minutes. And then 40 cycles of denaturation at 94 degrees Celsius for 15 seconds, and kneeling at 55 degrees Celsius for 30 seconds, And extension at 70 degrees Celsius for 30 seconds. Based on miRNA, micro array screening, the levels of six miRNAs have been found to be significantly increased in the peritoneal membrane of peritoneal fibrosis rats, compared with those in mock rats and control rats, using QRTCPR, following the protocol presented in this manuscript.

Research

JoVE Journal

Genetics

Merging Absolute and Relative Quantitative PCR Data to Quantify STAT3 Splice Variant Transcripts

Слияние абсолютной и относительной количественной ПЦР данных для количественного определения Stat3 сплайсированный вариант Transcripts

Human signal transducer and activator of transcription 3 (STAT3) is one of many genes containing a tandem splicing site. Alternative donor splice sites 3 ...

Detection of Copy Number Alterations Using Single Cell Sequencing

Обнаружение Copy Number Изменений Использование Single Cell Секвенирование

Detection of genomic changes at single cell resolution is important for characterizing genetic heterogeneity and evolution in normal tissues, cancers, and ...

Systemic Delivery of MicroRNA Using Recombinant Adeno-associated Virus Serotype 9 to Treat Neuromuscular Diseases in Rodents

Системные поставки микроРНК с использованием рекомбинантного аденоассоциированный вирус серотипа 9 для лечения нервно-мышечных заболеваний у грызунов

RNA interference via the endogenous miRNA pathway regulates gene expression by controlling protein synthesis through post-transcriptional gene silencing. ...

Bidirectional Retroviral Integration Site PCR Methodology and Quantitative Data Analysis Workflow

Двунаправленная ретровирусная интеграция сайта Методология ПЦР и количественный анализ данных

Integration Site (IS) assays are a critical component of the study of retroviral integration sites and their biological significance. In recent retroviral ...

Real-time Analysis of Transcription Factor Binding, Transcription, Translation, and Turnover to Display Global Events During Cellular Activation

Анализ в реальном времени транскрипционного фактора привязки, транскрипция, перевод и оборот для отображения глобальных событий в процессе активации клеточного

Upon activation, cells rapidly change their functional programs and, thereby, their gene expression profile. Massive changes in gene expression occur, for ...

Semi-quantitative Detection of RNA-dependent RNA Polymerase Activity of Human Telomerase Reverse Transcriptase Protein

Полуколичественного обнаружение РНК зависимой РНК-полимеразы активности человека теломеразы транскриптазы белка

Human telomerase reverse transcriptase (TERT) is the catalytic subunit of telomerase, and it elongates telomere through RNA-dependent DNA polymerase ...

CRISPR-Mediated Reorganization of Chromatin Loop Structure

ТРИФОСФАТЫ опосредованной реорганизация структуры хроматина цикла

Recent studies have clearly shown that long-range, three-dimensional chromatin looping interactions play a significant role in the regulation of gene ...

Tissue-specific miRNA Expression Profiling in Mouse Heart Sections Using In Situ Hybridization

Tissue-specific miRNA Expression Profiling in Mouse Heart Sections Using In Situ Hybridization

Ткани конкретных Мирна выражение профилирования в мыши сердца с помощью секции гибридизации In Situ

micro-RNAs (miRNAs) are single-stranded RNA transcripts that bind to messenger RNAs (mRNAs) and inhibit their translation or promote their degradation. To ...

Detection of Human Immunodeficiency Virus Type 1 (HIV-1) Antisense Protein (ASP) RNA Transcripts in Patients by Strand-Specific RT-PCR

Detection of Human Immunodeficiency Virus Type 1 HIV-1 Antisense Protein ASP RNA Transcripts in Patients by Strand-Specific RT-PCR

Обнаружение вируса иммунодефицита человека типа 1 (ВИЧ-1) Антисмысление белка (ASP) РНК Стенограммы у пациентов Strand-специфический RT-PCR

In retroviruses, antisense transcription has been described in both human immunodeficiency virus type 1 (HIV-1) and human T-lymphotropic virus 1 (HTLV-1). ...

High-Throughput Quantitative RT-PCR in Single and Bulk C. elegans Samples Using Nanofluidic Technology

High-Throughput Quantitative RT-PCR in Single and Bulk C. elegans Samples Using Nanofluidic Technology

Высокая пропускная способность Количественный RT-PCR в одиночных и массовых C. elegans образцы с использованием нанофлюидных технологий

This paper presents a high-throughput reverse transcription quantitative PCR (RT-qPCR) assay for Caenorhabditis elegans that is fast, robust, and highly ...