Name: fat body organ culture system in aedes aegypti, a vector of zika virus
Uploaded: 2017-08-19T13:00:00
Duration: 6 min 18 s
Description: Watch this Scientific Journal Video about Fat Body Organ Culture System in Aedes Aegypti, a Vector of Zika Virus at JoVE.com

وأيد هذا البحث المعاهد الوطنية للصحة منحة #SC1AI109055، منح NMSU HHMI #52008103 2014، وجبهة الخلاص الوطني مكتب المدعي العام الاتحادي منح #1238731. ونحن نشكر المشاركين في فئة NMSU ربيع عام 2015 BIOL302 الأساليب الجزيئية ولافيش باتيا على دعمها التقني مع تجارب الثقافة الجسم الدهون.

1-إعداد الحلول والمواد الكاشفة <ol><li>حل الأسهم من الأحماض الأمينية <ol><li>تحضير 4 X الأحماض الأمينية حل الأسهم 23 ، 24 بوزنها و إضافة الأحماض الأمينية مختلفة 20 قارورة Erlenmeyer وفقا للتركيزات الواردة في الجدول 1- 
		ملاحظة: في بعض الحالات، amino acid(s) يمكن استبعادها من الحل والاستعاضة عنها بكميات متساوية المولى من المانيتول الاحتفاظ بتركيز متساو من أوسموليتيس-</li>
		<li>إضافة مبلغ ddH 2 س لإنتاج وحدة التخزين المطلوبة للحل المناسب-</li>
		<li>لضمان أن يكون تماما حل الأحماض الأمينية، الحرارة بلطف مع التحريك باستمرار حتى السائل واضح تماما؛ وسوف يستغرق على لوناً أصفر طفيف. 
		ملاحظة: قد تكون ضرورية لخفض درجة الحموضة إلى 6 بإضافة HCl للسماح لبعض من الأحماض الأمينية مسعور أكثر بحل.</li>
		<li>قاسمة الحل والعقيمة عامل تصفية باستخدام عامل تصفية المحاقن مع 0.2-ميكرومتر المسامية الحجم.</li>
		<li>تخزين في حاوية محكمة الإغلاق في-20 درجة مئوية لمدة تصل إلى 6 أشهر.</li>
	</ol></li> <li>وكالة الأنباء الجزائرية ملاحظة: انظر 25.
	<ol><li>ل 20 X الملح حل الأسهم، والجمع بين الأملاح المدرجة في الجدول 2 في 50 مل الماء. يقلب حتى يذوب تماما. 
		ملاحظة: قد يكون من الضروري على الحرارة قليلاً الحل لإذابة الأملاح تماما.</li>
		<li>ستيريلي-تصفية باستخدام عامل تصفية المحاقن مع 0.2-ميكرومتر المسامية الحجم وتخزين الحل في أنبوب 50 مل في-20 درجة مئوية.</li>
	</ol></li> <li>الكالسيوم المخزون الحل <ol><li>50 س الحل مخزون الكالسيوم، أضف ز 0.90 من كلوريد الكالسيوم إلى 100 مل الماء (الجدول 3)؛ ويحرك حتى يذوب تماما.</li>
		<li>ستيريل-تصفية باستخدام المحاقن تصفية مع حجم مسام 0.2 ميكرومتر، الكوة الحل في أنابيب 50 مل، وتخزينها في-20 درجة مئوية.</li>
	</ol></li> <li>تريس المخزن المؤقت (درجة الحموضة 7.4) <ol><li>تريس المخزن المؤقت، والجمع بين الملح والحلول المدرجة في الجدول 4 وإضافة ddH 2 س يصل إلى 100 مل.</li>
		<li>ستيريل-تصفية باستخدام المحاقن تصفية مع حجم المسام 0.2 ميكرون وقاسمه الحل في أنابيب 50 مل؛ وتخزين في درجة حرارة الغرفة-</li>
	</ol></li> <li>الجسم الدهون الثقافة المتوسطة <ol><li>بإعداد متوسطة الثقافة الجسم الدهون، إعداد جميع الحلول المذكورة أعلاه-</li>
		<li>الجمع بينهما وفقا لوحدات التخزين في الجدول 5 جعل 200 مل من الجسم الدهون الثقافة المتوسطة.</li>
		<li>ضبط درجة الحموضة إلى 7.2 باستخدام هيدروكسيد الصوديوم أو HCl.</li>
		<li>ستيريل-تصفية الحل باستخدام عامل تصفية المحاقن مع حجم مسام 0.2 ميكرون.</li>
		<li>تقسيم الحل إلى مختبرين 15 مل وتخزينها في-20 درجة مئوية لمدة تصل إلى 6 أشهر.</li>
	</ol></li></ol> 2. إعداد لتشريح <ol><li>إعداد ستيريوميكروسكوبي (10-20 x التكبير) مع الإضاءة ووضع ملاقط فائقة غرامة اثنين ومقص التشريح الصغير-</li>
	<li>إعداد كافة الحلول اللازمة للتجربة. ذوبان الجليد المتوسط الثقافة الدهون في الجسم إلى درجة حرارة الغرفة. 
	ملاحظة: يمكن حل بريسيبيتانتس بلطف تدفئة حل لا تزيد عن 30 درجة مئوية.</li>
	<li>مع المضخة، جمع البعوض الإناث البالغات (3-7 أيام بعد ظهور) وتخدير لهم باستخدام ثاني أكسيد الكربون أو مدت 
	ملاحظة: مرة تخديره، البعوض ينبغي أن يظل قيد CO 2 لأقصر وقت ممكن، لا تتجاوز 20 دقيقة بدلاً من ذلك، يمكن تخديره على الجليد البعوض والاحتفاظ بها لما يقرب من 30 دقيقة</li>
	<li>إعداد لوحة 6-جيدا مع 3 مل من وكالة الأنباء الجزائرية في بئر-</li>
</ol> 3. تشريح جثة الدهون <ol><li>التركيز ستيريوميكروسكوبي تشريح وضبط الرئاسة إلى ارتفاع مريحة.</li>
	<li>وضع شريحة مجهر مقعر على سطح مجهر وإضافة نقطتين من وكالة الأنباء الجزائرية إلى المركز-</li>
	<li>التقاط البعوض بساق باستخدام ملقط وأنه نقل إلى السطح الجزائرية على الشريحة المجهر.</li>
	<li>بعناية قبضة البعوض بالصدر، مع الملقط في اليد اليسرى، وتدوير البعوض حيث يكون الجانب البطني صعودا.</li>
	<li>بينما يمسك الجسم ثابت بالصدر، فهم أجزاء البطن الأخيرين، مع الملقط في اليد اليمنى، واجذب. 
	ملاحظة: فصل آخر جزئين البطن من البطن والمبايض المرفقة، Malpighian الأنابيب، والمعي الخلفي والامامي؛ في بعض الأحيان سوف الشريحة المحصول من البطن. إذا كانوا قد لا أزيلت، إدراج نصائح مغلقة الملقط في حفرة صغيرة تم إنشاؤها وإزالة الأنسجة المتبقية.</li>
	<li>جانبا الملقط حق وتلتقط المقص الربيع. شريحة شفرة واحد في الحفرة في البطن حتى الجزء أسفل الصدر. بلطف وسرعة قطع البطن طوليا. 
	ملاحظة: بمجرد القص، البطن ينبغي البدء في التوسع إلى الخارج، على الرغم من أن هذا قد لا يحدث فورا.</li>
	<li>المضي قدما لجعل خفض الثاني، الذي سوف يكون قطع أفقي أسفل الصدر، وأقل قليلاً من حيث انتهى أول خطوة من نوعها- 
	ملاحظة: البطن ينبغي ثم فتح وتنأى عن الصدر، مع بشرة أعلى والهيئات الدهون الجانب مغمورة داخل وكالة الأنباء الجزائرية. هذا الجدار الجسم البطن وهو إعداد الجسم الدهون للثقافة في المختبر.</li>
	<li>رفع الجثث الدهون من وكالة الأنباء الجزائرية الحل باستخدام التلميح لزوج من الملقط ونقلها من الحل إلى لوحة 6-كذلك يتضمن وكالة الأنباء الجزائرية في درجة حرارة الغرفة. تسمح الأنسجة إلى الراحة لحوالي 0.5 ح قبل الانتقال إلى ثقافة الجسم الدهون.</li>
</ol> 4. ثقافة الجسم الدهون <ol><li>احتضان الهيئات الدهون في وكالة الأنباء الجزائرية في درجة حرارة الغرفة لمالا يقل عن 0.5 ح حجته لهم.</li>
	<li>نقل الهيئات الدهون باستخدام تلميح الملقط وانتشالهم بلطف الحل وكالة الأنباء الجزائرية. أدنى التلميح إلى المتوسطة ثقافة الجسم الدهون. 
	ملاحظة: يجب فتح على سطح المتوسط الجسم الدهون والتعويم الحر. ثقافة الجسم الدهون تتم عادة في لوحات 96-جيدا، مع 150-200 ميليلتر من المتوسط في كل بئر. أحد جيدا يمكن أن يصلح يصل إلى ثلاث هيئات الدهون الفردية، وأنها قابلة للتطبيق لأكثر من 12 ح (نتائج شخصية غير منشورة).</li>
	<li>بعد فترة الحضانة، نقل جثث الدهون من المتوسط إلى أنابيب الطرد المركزي 1.5 مل يحتوي على الكواشف الملائمة للتجهيز النهائي. 
	ملاحظة: تشمل تحليلات نموذجية قبكر 16 ، 17 ، ، من 18 19، الغربية النشاف 18 ، 20 ترانسكريبتوميكس 26، البروتيوميات 21 أو 22 من جميع.</li>
</ol>

<ol>
	<li>Benelli, G., Mehlhorn, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Declining+malaria,+rising+of+dengue+and+Zika+virus:+insights+for+mosquito+vector+control.">Declining malaria, rising of dengue and Zika virus: insights for mosquito vector control.</a> Parasitol Res. 115 (5), 1747-1754 (2016).</li><li>Newby, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+path+to+eradication:+a+progress+report+on+the+malaria-eliminating+countries.">The path to eradication: a progress report on the malaria-eliminating countries.</a> Lancet. 387 (10029), 1775-1784 (2016).</li><li>Clements, A. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> The Biology of Mosquitoes. 2, (1992).</li><li>Long, C. A., Zavala, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Malaria+vaccines+and+human+immune+responses.">Malaria vaccines and human immune responses.</a> Curr Opin Microbiol. 32, 96-102 (2016).</li><li>Mendis, K. N., David, P. H., Carter, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Human+immune+responses+against+sexual+stages+of+malaria+parasites:+considerations+for+malaria+vaccines.">Human immune responses against sexual stages of malaria parasites: considerations for malaria vaccines.</a> Int J Parasitol. 20 (4), 497-502 (1990).</li><li>Frings, S., Lindemann, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Odorant+response+of+isolated+olfactory+receptor+cells+is+blocked+by+amiloride.">Odorant response of isolated olfactory receptor cells is blocked by amiloride.</a> J Membr Biol. 105 (3), 233-243 (1988).</li><li>Froese, A., Szyszka, P., Menzel, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effect+of+GABAergic+inhibition+on+odorant+concentration+coding+in+mushroom+body+intrinsic+neurons+of+the+honeybee.">Effect of GABAergic inhibition on odorant concentration coding in mushroom body intrinsic neurons of the honeybee.</a> J Comp Physiol A Neuroethol Sens Neural Behav Physiol. 200 (3), 183-195 (2014).</li><li>Yewhalaw, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Multiple+insecticide+resistance:+an+impediment+to+insecticide-based+malaria+vector+control+program.">Multiple insecticide resistance: an impediment to insecticide-based malaria vector control program.</a> PLoS One. 6 (1), e16066 (2011).</li><li>Arrese, E. L., Soulages, J. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Insect+fat+body:+energy,+metabolism,+and+regulation.">Insect fat body: energy, metabolism, and regulation.</a> Annu Rev Entomol. 55, 207-225 (2010).</li><li>Raikhel, A. S., Deitsch, K. W., Sappington, T. W., Crampton, J. M., Beard, C. B., Louis, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> The Molecular Biology of Insect Disease Vectors: A Methods Manual. , 507-522 (1997).</li><li>Price, D. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+fat+body+transcriptomes+of+the+yellow+fever+mosquito+Aedes+aegypti,+pre-+and+post-+blood+meal.">The fat body transcriptomes of the yellow fever mosquito Aedes aegypti, pre- and post- blood meal.</a> PLoS One. 6 (7), e22573 (2011).</li><li>Hansen, I. A., Attardo, G. M., Rodriguez, S. D., Drake, L. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Four-way+regulation+of+mosquito+yolk+protein+precursor+genes+by+juvenile+hormone-,+ecdysone-,+nutrient-,+and+insulin-like+peptide+signaling+pathways.">Four-way regulation of mosquito yolk protein precursor genes by juvenile hormone-, ecdysone-, nutrient-, and insulin-like peptide signaling pathways.</a> Front Physiol. 5, 103 (2014).</li><li>Raikhel, A. S., Dhadialla, T. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Accumulation+of+yolk+proteins+in+insect+oocytes.">Accumulation of yolk proteins in insect oocytes.</a> Annu Rev Entomol. 37, 217-251 (1992).</li><li>Raikhel, A. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Molecular+biology+of+mosquito+vitellogenesis:+from+basic+studies+to+genetic+engineering+of+antipathogen+immunity.">Molecular biology of mosquito vitellogenesis: from basic studies to genetic engineering of antipathogen immunity.</a> Insect Biochem Mol Biol. 32 (10), 1275-1286 (2002).</li><li>Hansen, I. A., Attardo, G. M., Chandrasekar, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ch.+6.">Ch. 6.</a> Short Views on Insect Molecular Biology. , (2009).</li><li>Hansen, I. A., Attardo, G. M., Park, J. H., Peng, Q., Raikhel, A. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Target+of+rapamycin-mediated+amino+acid+signaling+in+mosquito+anautogeny.">Target of rapamycin-mediated amino acid signaling in mosquito anautogeny.</a> Proc Natl Acad Sci USA. 101 (29), 10626-10631 (2004).</li><li>Hansen, I. A., Attardo, G. M., Roy, S. G., Raikhel, A. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Target+of+rapamycin-dependent+activation+of+S6+kinase+is+a+central+step+in+the+transduction+of+nutritional+signals+during+egg+development+in+a+mosquito.">Target of rapamycin-dependent activation of S6 kinase is a central step in the transduction of nutritional signals during egg development in a mosquito.</a> J Biol Chem. 280 (21), 20565-20572 (2005).</li><li>Attardo, G. M., Hansen, I. A., Shiao, S. H., Raikhel, A. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Identification+of+two+cationic+amino+acid+transporters+required+for+nutritional+signaling+during+mosquito+reproduction.">Identification of two cationic amino acid transporters required for nutritional signaling during mosquito reproduction.</a> J Exp Biol. 209 (Pt 16), 3071-3078 (2006).</li><li>Carpenter, V. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=SLC7+amino+acid+transporters+of+the+yellow+fever+mosquito+Aedes+aegypti+and+their+role+in+fat+body+TOR+signaling+and+reproduction.">SLC7 amino acid transporters of the yellow fever mosquito Aedes aegypti and their role in fat body TOR signaling and reproduction.</a> J Insect Physiol. 58 (4), 513-522 (2012).</li><li>Attardo, G. M., Higgs, S., Klingler, K. A., Vanlandingham, D. L., Raikhel, A. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=RNA+interference-mediated+knockdown+of+a+GATA+factor+reveals+a+link+to+anautogeny+in+the+mosquito+Aedes+aegypti.">RNA interference-mediated knockdown of a GATA factor reveals a link to anautogeny in the mosquito Aedes aegypti.</a> Proc Natl Acad Sci USA. 100 (23), 13374-13379 (2003).</li><li>Hugo, L. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Proteomic+biomarkers+for+ageing+the+mosquito+Aedes+aegypti+to+determine+risk+of+pathogen+transmission.">Proteomic biomarkers for ageing the mosquito Aedes aegypti to determine risk of pathogen transmission.</a> PLoS One. 8 (3), e58656 (2013).</li><li>Price, D. P., Schilkey, F. D., Ulanov, A., Hansen, I. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Small+mosquitoes,+large+implications:+crowding+and+starvation+affects+gene+expression+and+nutrient+accumulation+in+Aedes+aegypti.">Small mosquitoes, large implications: crowding and starvation affects gene expression and nutrient accumulation in Aedes aegypti.</a> Parasit Vectors. 8, 252 (2015).</li><li>Uchida, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Induction+of+oogenesis+in+mosquitoes+(Diptera:+Culicidae)+by+infusion+of+the+hemocoel+with+amino+acids.">Induction of oogenesis in mosquitoes (Diptera: Culicidae) by infusion of the hemocoel with amino acids.</a> J Med Entomol. 38 (4), 572-575 (2001).</li><li>Uchida, K., Ohmori, D., Yamakura, F., Suzuki, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Changes+in+free+amino+acid+concentration+in+the+hemolymph+of+the+female+Culex+pipiens+pallens+(Diptera:+Culicidae),+after+a+blood+meal.">Changes in free amino acid concentration in the hemolymph of the female Culex pipiens pallens (Diptera: Culicidae), after a blood meal.</a> J Med Entomol. 27 (3), 302-308 (1990).</li><li>Hayes, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Determination+of+a+physiological+saline+solution+for+Aedes+aegypti+.(L).">Determination of a physiological saline solution for Aedes aegypti .(L).</a> J Econ Entomol. 46 (4), 624-627 (1953).</li><li>Price, D. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+Fat+Body+Transcriptomes+of+the+Yellow+Fever+Mosquito+Aedes+aegypti,+Pre-+and+Post+Blood+Meal.">The Fat Body Transcriptomes of the Yellow Fever Mosquito Aedes aegypti, Pre- and Post Blood Meal.</a> Plos One. 6 (7), e22573 (2011).</li><li>Chomczynski, P., Mackey, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Short+technical+reports.+Modification+of+the+TRI+reagent+procedure+for+isolation+of+RNA+from+polysaccharide-and+proteoglycan-rich+sources.">Short technical reports. Modification of the TRI reagent procedure for isolation of RNA from polysaccharide-and proteoglycan-rich sources.</a> Biotechniques. 19 (6), 942-945 (1995).</li><li>Fujiwara, T., Kazawa, T., Haupt, S. S., Kanzaki, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Postsynaptic+odorant+concentration+dependent+inhibition+controls+temporal+properties+of+spike+responses+of+projection+neurons+in+the+moth+antennal+lobe.">Postsynaptic odorant concentration dependent inhibition controls temporal properties of spike responses of projection neurons in the moth antennal lobe.</a> PLoS One. 9 (2), e89132 (2014).</li><li>Larsen, W. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Growth+in+an+insect+organ+culture.">Growth in an insect organ culture.</a> J Insect Physiol. 13 (4), 613-619 (1967).</li><li>Judy, K. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Isolation,+Structure,+and+Absolute+Configuration+of+a+New+Natural+Insect+Juvenile+Hormone+from+Manduca+sexta.">Isolation, Structure, and Absolute Configuration of a New Natural Insect Juvenile Hormone from Manduca sexta.</a> Proc Natl Acad Sci USA. 70 (5), 1509-1513 (1973).</li><li>Marks, E. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+action+of+hormones+in+insect+cell+and+organ+cultures.">The action of hormones in insect cell and organ cultures.</a> Gen Comp Endocrinol. 15 (2), 289-302 (1970).</li><li>Hughes, G. L., Pike, A. D., Xue, P., Rasgon, J. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Invasion+of+Wolbachia+into+Anopheles+and+Other+Insect+Germlines+in+an+Ex+vivo+Organ+Culture+System.">Invasion of Wolbachia into Anopheles and Other Insect Germlines in an Ex vivo Organ Culture System.</a> PLoS One. 7 (4), e36277 (2012).</li><li>Postlethwait, J. H., Handler, A. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Roles+of+Juvenile-Hormone+and+20-Hydroxy-Ecdysone+during+Vitellogenesis+in+Isolated+Abdomens+of+Drosophila+melanogaster.">Roles of Juvenile-Hormone and 20-Hydroxy-Ecdysone during Vitellogenesis in Isolated Abdomens of Drosophila melanogaster.</a> J Insect Physiol. 25 (5), 455-460 (1979).</li><li>Spielman, A., Gwadz, R. W., Anderson, W. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ecdysone-initiated+ovarian+development+in+mosquitoes.">Ecdysone-initiated ovarian development in mosquitoes.</a> J Insect Physiol. 17 (10), 1807-1814 (1971).</li><li>Boudko, D. Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Substrate+specificity+and+transport+mechanism+of+amino-acid+transceptor+Slimfast+from+Aedes+aegypti.">Substrate specificity and transport mechanism of amino-acid transceptor Slimfast from Aedes aegypti.</a> Nat Commun. 6, 8546 (2015).</li><li>Fleischer, J., Bumbalo, R., Bautze, V., Strotmann, J., Breer, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Expression+of+odorant+receptor+Olfr78+in+enteroendocrine+cells+of+the+colon.">Expression of odorant receptor Olfr78 in enteroendocrine cells of the colon.</a> Cell Tissue Res. 361 (3), 697-710 (2015).</li><li>Jones, K. H., Senft, J. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+improved+method+to+determine+cell+viability+by+simultaneous+staining+with+fluorescein+diacetate-propidium+iodide.">An improved method to determine cell viability by simultaneous staining with fluorescein diacetate-propidium iodide.</a> J Histochem Cytochem. 33 (1), 77-79 (1985).</li><li>Strober, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Trypan+blue+exclusion+test+of+cell+viability.">Trypan blue exclusion test of cell viability.</a> Curr Protoc Immunol. A3B, (2001).</li></ol>

ليس لدينا شيء الكشف عنها.

الثقافة الحشرات الجهاز كان يستخدم على نطاق واسع دراسة الحشرات علم الغدد الصماء، والتنمية، والايض، فضلا عن التحقيق في التفاعل بين أجهزة محددة والبكتيرية سيمبيونتس29،،من3031، 32،،من3334. واستخدمت في المختبر الجسم الدهون جهاز الثقافة تحديداً لدراسة النقل من الأحماض الأمينية وتنظيم إنتاج البروتين صفار في البعوض وغيرها17،16، ديبتيرا35 , 36-أثناء عملية فيتيلوجينيسيس، يستخدم الجسم الدهون البعوض صفيف الناقلين الأحماض الأمينية خصوصية عالية لاستيراد الأحماض الأمينية المستمدة من وجبة الدم من هيموليمف لتجميع كميات كبيرة من بروتينات صفار12 ،19،،من3536. ثقافة الجسم الدهون كانت مفيدة لتحديد المتطلبات الغذائية الجسم الدهون في هذا السياق18.
نوعية المواد البداية، أنثى البعوض، أمر حاسم لنجاح هذه التجارب. يرقات البعوض التي أثيرت في ظروف مزدحمة تحت وتتغذى على الوجبات الغذائية العالية في المغذيات وعادة ما ينتج أفضل النتائج. وهناك بعض المتغيرات الهامة في الاعتبار عند وضع شروط ثقافة الجسم الدهون البعوض في المختبر من حيث التصميم التجريبي. أظهرنا في دراسات سابقة أن التعبير الجيني الجسم الدهون تتفاوت تفاوتاً كبيرا تبعاً لتاريخ حياة الفرد والحالة التغذوية ل البعوض11،22. يجب أن تكون شروط الثقافة البعوض موحدة للحد من التفاوت في الحجم والاحتياطيات الغذائية للبعوض التجريبية. وبالإضافة إلى ذلك، ينبغي تدريب الموظفين يؤدون تشريح لضمان تشريح سريعة ودقيقة مع نتائج متسقة. يمكن التحقق من صلاحية خلية في هيئات الدهون منعزلة باستخدام مختلف الأساليب المصبوغة37،38.
تصميم تجريبي لتجربة ثقافة الجسم الدهون ينبغي أن تأخذ في الاعتبار عدد تشريح ممكن في فترة زمنية معينة. عندما يتطلب الأمر كميات كبيرة من الدهون في الهيئات، دورات تشريح متعددة أو dissectors متعددة قد يكون ضروريا. وهناك طائفة واسعة من التطبيقات المستقبلية للثقافة في المختبر الجسم الدهون في البعوض وغيرها من الحشرات. أنه سوف يكون مفيداً بشكل خاص لاختبار المرشحين المحتملين من المخدرات لمكافحة الحشرات. استخدام التقنيات المعدلة وراثيا في الحشرات للتعبير عن البروتينات مراسل محددة في الجسم الدهون تروفوسيتيس سوف تفتح طرق جديدة لتطوير المقايسة قوية لدراسة فسيولوجيا الجسم الدهون.

البعوض ناقلات الأمراض البشرية المدمرة، بما في ذلك الملاريا وحمى الضنك وداء شيكونغونيا و Zika1،،من23. وعلى الرغم من الجهود الدولية المكثفة للحد من هذه الأمراض ومراقبة السكان البعوض يحيل بها المرض، انتشار الأوبئة للأمراض التي ينقلها البعوض لا تزال شائعة، لا سيما في البلدان النامية. لقاحات فعالة ضد العديد من هذه الأمراض أما غير متوفرة أو لفعالية محدودة4،5. الطريقة الأكثر فعالية للحيلولة دون تفشي السيطرة على البعوض السكان، أساسا من خلال استخدام المبيدات الحشرية العلاجات. ومع ذلك، وضعت في العديد من البعوض السكان مقاومة المبيدات الحشرية وأصبحت مشكلة شائعة في جميع أنحاء العالم6،،من78. دراسة علم وظائف الأعضاء البعوض أمر ضروري لتطوير أدوات جديدة واستراتيجيات السيطرة على المرض.
الجسم الدهون البعوض يلعب دوراً مركزياً في تخزين المواد الغذائية والتوازن الأيضي، والاستنساخ، وتقويض إكسينوبيوتيك9،10،،من1112. هو جهاز التخزين الرئيسي للشحوم، والجليكوجين، والأحماض الأمينية في شكل بروتينات التخزين. وهو يعمل أيضا كموقع التوليف لمعظم البروتينات hemolymph ونواتج الأيض. في البعوض، والجسد الدهون هو المصدر الوحيد لإنتاج البروتين الصفار الذي يحدث في الإناث بعد أن تأخذ وجبة الدم13،14.
نوع الخلايا الرئيسية للجسم الدهون هو تروفوسيتي كبير، الكروموزومية أو adipocyte3،9،،من1012. ينقسم إلى الفصوص أو مانعات أنسجة الجسم الدهون ويمكن العثور عليها في جميع أجزاء الجسم من البعوض، مع الجزء الأكبر يقع في البطن، حيث يتم إرفاق الفصوص كبيرة من الدهون في الجسم على هيئة جدار البطن.
النظام ثقافة الجسم الدهون البعوض المعروضة هنا وضعت في السبعينات وما زالت أداة قوية لدراسة الجسم الدهون علم وظائف الأعضاء10، لا سيما في تركيبة مع تحليل التكنولوجيات الحالية. ويستند أساسا لهذا الأسلوب عزل جدران الجسم البطن والأنسجة المرتبطة بها الدهون في الجسم. طبيعة بشرة البطن مسعور يتسبب في أن تطفو على سطح متوسط الثقافة، مع الفصوص المرفقة من البطن الدهون الجسم مغمورة. يتم الحفاظ على سبيراكليس وهيكل تراتشيولار، تأمين الأوكسجين للأنسجة المستزرعة. من الآن فصاعدا، سوف نشير إلى هذه الأعمال التحضيرية باعتبارها "هيئات الدهون." الهيئات الدهون منعزلة البقاء لأكثر من 12 ح عند المحتضنة في الوسيلة المناسبة (نتائج غير منشورة). الثقافة الدهون في الجسم هو أداة قيمة وقد تناول مجموعة متنوعة من الأسئلة المتعلقة بالدهون الجسم الغدد الصماء وعلم وظائف الأعضاء9،10،،من1215،16، 17.
مثقف الدهون الهيئات يمكن أن تخضع لمختلف التجارب والتحكم في العلاجات، توقيت التي يمكن أن يقررها المحقق. في نهاية فترة الحضانة، يمكن جمع الهيئات الدهون ومعالجته لتحليلات المتلقين للمعلومات، بما في ذلك قبكر16،17،،من1819، الغربية النشاف18 ،20، البروتيوميات21أو22من جميع. يمكن إجراء تجارب على نطاقات مختلفة، من الهيئات الدهون الفردية لمجموعات من مئات التي يمكن أن تكون مثقف معا.
نتائج تمثيلية شملت هنا مستمدة من الدهون الهيئات مثقف حضور الأحماض الأمينية و ecdysone 20-هيدروكسي هرمون الستيرويد لمحاكاة التنشيط وجبة الدم من، فيتيلوجينيسيس،من1617 ،من 2324. يمكننا تحليل ومقارنة التعبير الجيني التفاضلي لعدم تنشيط مقابل تنشيط الهيئات الدهون عن طريق تحليل تسلسل الجيل القادم.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" width="508">
	<tbody>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:64px;">Scissors&#160;</td>
			<td style="width:192px;">Fiskars</td>
			<td style="width:143px;">83872</td>
			<td style="width:111px;"></td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:64px;">Fly pad</td>
			<td style="width:192px;">Genesee Scientific</td>
			<td style="width:143px;">789060</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="127">
			<td height="127" style="height:127px;width:64px;">Battery-powered aspirator w/ collection vial</td>
			<td style="width:192px;">Hausherrs Machine Works, Inc.</td>
			<td style="width:143px;">3740-01-210-2368</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="43">
			<td height="43" style="height:43px;width:64px;">Fine tip forceps</td>
			<td style="width:192px;">World Precision Instruments, Inc.&#160;</td>
			<td style="width:143px;">500085</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="64">
			<td height="64" style="height:64px;width:64px;">Light microscope&#160;</td>
			<td style="width:192px;">Leica Microsystems</td>
			<td style="width:143px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="43">
			<td height="43" style="height:43px;width:64px;">96 well plate&#160;</td>
			<td style="width:192px;">Sigma</td>
			<td style="width:143px;">CL S3383</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:64px;">Sucrose</td>
			<td style="width:192px;">Sigma</td>
			<td style="width:143px;">S9378</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;">Alanine</td>
			<td style="width:192px;">Sigma</td>
			<td>A7627</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;">Arginine</td>
			<td style="width:192px;">Sigma</td>
			<td>A5006</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;">Asparagine</td>
			<td style="width:192px;">Sigma</td>
			<td>A0884</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;">Aspartic Acid</td>
			<td style="width:192px;">Sigma</td>
			<td>A9256</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;">Cysteine</td>
			<td style="width:192px;">Sigma</td>
			<td>W326305</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;">Glutamic Acid</td>
			<td style="width:192px;">Sigma</td>
			<td>G1251</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;">Glutamine</td>
			<td style="width:192px;">Sigma</td>
			<td>G3126</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;">Glycine</td>
			<td style="width:192px;">Sigma</td>
			<td>G2879</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;">Histidine</td>
			<td style="width:192px;">Sigma</td>
			<td>H6034</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;">Isoleucine</td>
			<td style="width:192px;">Sigma</td>
			<td>I2752</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;">Lysine</td>
			<td style="width:192px;">Sigma</td>
			<td>L5501</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;">Leucine</td>
			<td style="width:192px;">Sigma</td>
			<td>L8000</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;">Phenylalanine</td>
			<td style="width:192px;">Sigma</td>
			<td>P2126</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;">Proline</td>
			<td style="width:192px;">Sigma</td>
			<td>P0380</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;">Serine</td>
			<td style="width:192px;">Sigma</td>
			<td>S4500</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;">Threonine</td>
			<td style="width:192px;">Sigma</td>
			<td>T8625</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;">Tryptophan</td>
			<td style="width:192px;">Sigma</td>
			<td>T0254</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;">Tyrosine</td>
			<td style="width:192px;">Sigma</td>
			<td>T3754</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;">Valine</td>
			<td style="width:192px;">Sigma</td>
			<td>V0500</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;">Methionine</td>
			<td style="width:192px;">Sigma</td>
			<td>M9625</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:64px;">NaCl</td>
			<td style="width:192px;">Sigma</td>
			<td>S7653</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:64px;">KCl</td>
			<td style="width:192px;">Sigma</td>
			<td>P9333</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="45">
			<td height="45" style="height:45px;width:64px;">MgCl2-6H2O</td>
			<td style="width:192px;">Sigma</td>
			<td>M2670</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="23">
			<td height="23" style="height:23px;width:64px;">NaHCO3</td>
			<td style="width:192px;">Sigma</td>
			<td>S5761</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="45">
			<td height="45" style="height:45px;width:64px;">CaCl2-2H2O</td>
			<td style="width:192px;">Sigma</td>
			<td>C8106</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="41">
			<td height="41" style="height:41px;width:64px;">Tris pH8.0&#160;</td>
			<td style="width:192px;">Sigma</td>
			<td>T1503</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:64px;">EDTA</td>
			<td style="width:192px;">Sigma</td>
			<td>E6758</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="23">
			<td height="23" style="height:23px;width:64px;">ddH2O</td>
			<td style="width:192px;">Sigma</td>
			<td>W4502</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

fat body organ culture system in aedes aegypti, a vector of zika virus

الجسم الدهون الحشرات يلعب دوراً مركزياً في الأيض الحشرات وتخزين المواد الغذائية، النسخ المتطابق لوظائف الكبد والأنسجة الدهنية في الفقاريات. عادة ما يتم توزيع أنسجة الجسم الدهون الحشرات في جميع أنحاء الجسم الحشرات. ومع ذلك، غالباً ما تتركز في البطن وتعلق على هيئة جدار البطن.
الجسم الدهون البعوض هو المصدر الوحيد لصفار البيض والبروتينات، والتي تعتبر حاسمة بالنسبة لإنتاج البيض. ولذلك، يمثل ثقافة أنسجة الجسم الدهون البعوض في المختبر نظاما هاما لدراسة فسيولوجيا البعوض، التمثيل الغذائي، وفي نهاية المطاف، إنتاج البيض. وتبدأ عملية الثقافة الدهون الجسم بإعداد الحلول والمواد الكاشفة، بما في ذلك حلول الأسهم من الأحماض الأمينية و بعوض المحلول الملحي الفسيولوجي الملح حل الأسهم (الجزائرية) وحل مخزون الكالسيوم والجسم الدهون الثقافة المتوسطة. ما زالت العملية مع تشريح الجسم الدهون، متبوعاً علاج تجريبي. وبعد العلاج، ويمكن أن يؤديها مجموعة متنوعة من تحليلات مختلفة، بما في ذلك الحمض النووي الريبي التسلسل (الحمض النووي الريبي-Seq)، قبكر والبقع الغربية، البروتيوميات وجميع.
في تجربتنا مثال، نبدي البروتوكول عن طريق الختان والثقافة الهيئات الدهون من البعوض الحمى الصفراء، بعوض الزاعجة المصرية، ناقل الرئيسي من سيتناقش بما في ذلك حمى الضنك وداء شيكونغونيا وزكى. الجيش الملكي النيبالي من الهيئات الدهون مثقف تحت شرط فسيولوجية المعروفة لبروتينات صفار upregulate مقابل السيطرة تخضع لتحليل الحمض النووي الريبي Seq لإثبات الفائدة المحتملة لهذا الإجراء لإجراء تحقيقات تعبير الجيني.

على سبيل مثال، إجراء تجربة ثقافة جسم الدهون وتحفيز الهيئات الدهون منعزلة من حضانة لهم في محلول يحتوي على مزيج متوازن من جميع الأحماض الأمينية العشرين التي تحدث بشكل طبيعي وهرمون الستيرويد الحشرات 20-هيدروكسي اكديسوني (10 ميكرون) ح 6 . كعنصر تحكم، كانت الهيئات الدهون المحتضنة في وكالة الأنباء الجزائرية لمبلغ مساو من الوقت.
بعد الحضانة، كان مجموع الجيش الملكي النيبالي المعزولة باستخدام كاشف ثلاثي27 اتباع إرشادات الشركة المصنعة. تم تقييم نوعية وكمية من عينات الحمض النووي الريبي المستخرج باستخدام جهاز المطياف الضوئي، كوانتيتيشن فلوروميتريك، والتفريد [اغروس] هلام. مكتبات تسلسل الحمض النووي الريبي تم إنشاؤها باستخدام 4 ميكروغرام من مجموع الجيش الملكي النيبالي، وتم تحديده كمياً باستخدام تقنيات مختلفة اثنين. في وقت لاحق، أرسلت المكتبات إلى موفر خدمة تجارية للتسلسل نهاية الاقتران.
وترد نتائج هذه التجربة في الجدول 6. وكانت الجينات تظهر الاستجابة النسخي أقوى من الأحماض الأمينية و 20-هيدروكسيكديسوني أساسا صفار البروتين الجينات، وما يتفق مع النتائج السابقة11.
ويبين الشكل 1 حرارة خريطة تبين مستويات التعبير الجيني 1,256 خلطات أعرب الجينات من مثقف الدهون الهيئات بعد اثنين من العلاجات المختلفة.
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/55508/55508fig1.jpg"> 
الشكل 1 . الحرارة خريطة الجينات التي أعرب عنها في ثقافة الجسم الدهون. وكان حساب الحرارة خريطة استناداً إلى عدد النصوص المحددة لكل الجينات في مكتبات مختلفة باستخدام حزمة heatmap28 الذي يعد جزءا من بيئة البرامج R. يمثل أغمق التعبير الجيني أعلى. جينات 1,256 مع اختلاف يعتد به إحصائيا في التعبير (قيم س-&#60; 0.05) وترد. يتم ترتيب الجينات وفقا لمستويات التعبير المتوسط، أشارت إلى جانب ديندروجرام على اليسار (لا وفقا لعلاقاتهم النشوء والتطور). لاحظ العدد الكبير من الجينات مع التعبير أعلى أو أسفل ينظم بعد التحفيز بالأحماض الأمينية (أإ) و 20-هيدروكسيكديسوني (20E). وكالة الأنباء الجزائرية = المحلول الملحي الفسيولوجي بعوض . انظر تكميلية الملف 1 للحصول على قائمة من الجينات، ومستويات التعبير النسبي. <a href="//ecsource.jove.com/files/ftp_upload/55508/55508fig1large.jpg" target="_blank">الرجاء انقر هنا لمشاهدة نسخة أكبر من هذا الرقم-</a>
<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>حمض أميني</td>
			<td>الوزن الجزيئي غ/مول</td>
			<td>مم تركيز</td>
			<td>ملغم للتر الواحد</td>
			<td>مغ لحجم 300 مل</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>ألانين</td>
			<td>89.1</td>
			<td>26.68</td>
			<td>2377.19</td>
			<td>713.16</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>ارجينين</td>
			<td>174.2</td>
			<td>26.68</td>
			<td>4647.66</td>
			<td>1394.3</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>أسباراجين</td>
			<td>150.1</td>
			<td>26.68</td>
			<td>4004.67</td>
			<td>1201.4</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>حمض الأسبارتيك</td>
			<td>133</td>
			<td>26.68</td>
			<td>3548.44</td>
			<td>1064.53</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>سيستين</td>
			<td>121.16</td>
			<td>10.68</td>
			<td>1293.99</td>
			<td>388.2</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>حمض الغلوتاميك</td>
			<td>147.1</td>
			<td>26.68</td>
			<td>3924.63</td>
			<td>1177.39</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>الجلوتامين</td>
			<td>146</td>
			<td>26.68</td>
			<td>3895.28</td>
			<td>1168.58</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>جليكاين</td>
			<td>75</td>
			<td>53.32</td>
			<td>3999</td>
			<td>1199.7</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>الحامض الأميني</td>
			<td>155.16</td>
			<td>80</td>
			<td>12412.8</td>
			<td>3723.84</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>آيسولوسين</td>
			<td>131</td>
			<td>10.68</td>
			<td>1399.08</td>
			<td>419.72</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>ليسين</td>
			<td>183</td>
			<td>26.68</td>
			<td>4882.44</td>
			<td>1464.73</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>ليوسيني</td>
			<td>131</td>
			<td>26.68</td>
			<td>3495.08</td>
			<td>1048.52</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>فينيلألانين</td>
			<td>165</td>
			<td>10.68</td>
			<td>1762.2</td>
			<td>528.66</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>برولين</td>
			<td>115</td>
			<td>26.68</td>
			<td>3068.2</td>
			<td>920.46</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>سيرين</td>
			<td>105</td>
			<td>53.32</td>
			<td>5598.6</td>
			<td>1679.58</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>ثريونين</td>
			<td>119</td>
			<td>10.68</td>
			<td>1270.92</td>
			<td>381.28</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>التربتوفان</td>
			<td>204</td>
			<td>10.68</td>
			<td>2178.72</td>
			<td>653.62</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>تيروزين</td>
			<td>181</td>
			<td>5.32</td>
			<td>962.92</td>
			<td>288.88</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>فالين</td>
			<td>117</td>
			<td>10.68</td>
			<td>1249.56</td>
			<td>374.87</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>الميثيونين</td>
			<td>149</td>
			<td>10.68</td>
			<td>1591.32</td>
			<td>477.4</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>
الجدول 1. 4 X حل الأسهم من الأحماض الأمينية.
<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>المكون</td>
			<td>الوزن بالجرام إضافة إلى 50 مل ddH2س</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>كلوريد الصوديوم</td>
			<td>ز 8.0</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>بوكل</td>
			<td>ز 0.074</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>مجكل2-6 ح2س</td>
			<td>ز 0.120</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>ناكو3</td>
			<td>ز 0.0250</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>
الجدول 2- 20 X الملح حل الأسهم.
<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>المكون</td>
			<td>الوزن بالجرام إضافة إلى 100 مل ddH2O</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>كاكل2-2 ح2س</td>
			<td>ز 0.90</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>
<stron></stron>ز > الجدول 3. 50 س الحل مخزون الكالسيوم.
<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>المكون</td>
			<td>تركيز حل الأسهم</td>
			<td>تقييم حجم المخزن المؤقت 100 مل</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>تريس pH8.0</td>
			<td>م 1</td>
			<td>5 مل</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>يدتا</td>
			<td>0.25 M</td>
			<td>2 مل</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>كلوريد الصوديوم</td>
			<td>نا</td>
			<td>ز 0.3</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>ddH2س</td>
			<td>نا</td>
			<td>إلى 100 مل (~ 93 مل)</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>
الجدول 4- العازلة تريس.
<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>المكون</td>
			<td>تقييم حجم 200 مل</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>حل الأسهم من الأحماض الأمينية</td>
			<td>150 مل</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>حل الأسهم الملح</td>
			<td>10 مل</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>حل مخزون الكالسيوم</td>
			<td>4 مل</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>المخزن المؤقت لقسم التدريب والامتحانات</td>
			<td>10 مل</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>ddH2O</td>
			<td>مل 26</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>
الجدول 5- هيئة الدهون الثقافة المتوسطة.
<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>تعليق توضيحي</td>
			<td>وصف الجينات</td>
			<td>أمثال التغيير</td>
			<td>قيمة P</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>AAEL006138</td>
			<td>ب-تغيرات</td>
			<td>3443</td>
			<td>2.52E--112</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>AAEL006126</td>
			<td>ج-تغيرات</td>
			<td>2795</td>
			<td>8.64E-91</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>AAEL006563</td>
			<td>كاربوكسيبيبتيداسي فيتيلوجينيك</td>
			<td>1002</td>
			<td>2.17E--119</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>AAEL010434</td>
			<td>تغيرات-أ</td>
			<td>220</td>
			<td>1.14E-27</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>AAEL006542</td>
			<td>كاربوكسيبيبتيداسي فيتيلوجينيك</td>
			<td>185</td>
			<td>2.14E--65</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>AAEL012678</td>
			<td>AAEL003006-السلطة الفلسطينية [بعوضة aegypti](65%)</td>
			<td>96</td>
			<td>4.00E-70</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>AAEL000080</td>
			<td>البروتين افتراضية</td>
			<td>82</td>
			<td>6.69E-188</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>AAEL015312</td>
			<td>كاثيبسين فيتيلوجينيك ب</td>
			<td>77</td>
			<td>1.27E-15</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>AAEL009588</td>
			<td>مستقبلات النووية 3</td>
			<td>75</td>
			<td>4.58E--56</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>AAEL010529</td>
			<td>البروتين افتراضية</td>
			<td>66</td>
			<td>1.32E--29</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>
الجدول 6- النتائج التجريبية.
الملف الإضافي 1- <a href="//ecsource.jove.com/files/ftp_upload/55508/Table_of_genes_for_figure_1.xlsx" target="_blank">اضغط هنا لتحميل هذا الملف.</a>

Watch this Scientific Journal Video about Fat Body Organ Culture System in Aedes Aegypti, a Vector of Zika Virus at JoVE.com

Fat Body Organ Culture System in Aedes Aegypti, a Vector of Zika Virus

الجسم الدهون هو الجهاز المركزي الأيضي في الحشرات. نقدم نظام جهاز يعيش ثقافة التي تمكن المستخدم من دراسة ردود أنسجة الجسم الدهون منعزلة للمنبهات المختلفة.

الجسم الدهون نظام الثقافة الجهاز في بعوض الزاعجة المصرية، ناقل للفيروس Zika

The insect fat body plays a central role in insect metabolism and nutrient storage, mirroring functions of the liver and fat tissue in vertebrates. Insect ...

Research

JoVE Journal

Biology

Fat Body Organ Culture System in Aedes Aegypti, a Vector of Zika Virus

Injection of dsRNA into Female A. aegypti Mosquitos

حقن الرنا المزدوج الجديلة الى انثى البعوض بعوض A.

Reverse genetic approaches have proven extremely useful for determining  which genes underly resistance to vector pathogens in mosquitoes.  This video ...

Microinjection of A. aegypti Embryos to Obtain Transgenic Mosquitoes

Microinjection الجنين بعوض ألف الحصول على البعوض المعدلة وراثيا

In this video, Nijole Jasinskiene demonstrates the methodology employed to generate transgenic Aedes aegypti mosquitoes, which are vectors for dengue ...

Primary Culture and Plasmid Electroporation of the Murine Organ of Corti. 

الابتدائية الثقافة وElectroporation البلازميد الجهاز الفئران كورتي.

In all mammals, the sensory epithelium for audition is located along the spiraling organ of Corti that resides within the conch shaped cochlea of the ...

RNAi-mediated Gene Knockdown and In Vivo Diuresis Assay in Adult Female Aedes aegypti Mosquitoes

RNAi-mediated Gene Knockdown and In Vivo Diuresis Assay in Adult Female Aedes aegypti Mosquitoes

رني ضربة قاضية بوساطة الجينات و<em&gt; في الجسم الحي</em&gt; فحص إدرار البول في الإناث البالغات<em&gt; الزاعجة المصرية</em&gt; البعوض

This video protocol demonstrates an effective technique to knockdown a particular gene in an insect and conduct a novel bioassay to measure excretion ...

Mouse Embryonic Development in a Serum-free Whole Embryo Culture System

الفأر الجنينية التنمية في الجامعة نظام الثقافة الأجنة الخالية من المصل

Mid-gestation stage mouse embryos were cultured utilizing a serum-free culture medium prepared from commercially available stem cell media supplements in ...

Physiological Recordings and RNA Sequencing of the Gustatory Appendages of the Yellow-fever Mosquito Aedes aegypti

Physiological Recordings and RNA Sequencing of the Gustatory Appendages of the Yellow-fever Mosquito Aedes aegypti

الفسيولوجية تسجيلات وRNA تسلسل الزوائد ذوقي من البعوض الحمى الصفراء<em&gt; الزاعجة المصرية</em

Electrophysiological recording of action potentials from sensory neurons of mosquitoes provides investigators a glimpse into the chemical perception of ...

Maintaining Aedes aegypti Mosquitoes Infected with Wolbachia

Maintaining Aedes aegypti Mosquitoes Infected with Wolbachia

الحفاظ على بعوض الزاعجة المصرية "البعوض مصابة" ولبخيه

Aedes aegypti mosquitoes experimentally infected with Wolbachia are being utilized in programs to control the spread of arboviruses such as dengue, ...

Improved Fecundity and Fertility Assay for Aedes aegypti using 24 Well Tissue Culture Plates (EAgaL Plates)

Improved Fecundity and Fertility Assay for Aedes aegypti using 24 Well Tissue Culture Plates EAgaL Plates

تحسين Fecundity والخصوبة المقايسة لAedes aegypti باستخدام 24 لوحات زراعة أنسجة البئر (لوحات EAgaL)

Mosquitoes represent a significant public health problem as vectors of various pathogens. For those studies that require an assessment of mosquito fitness ...

Preparing Irradiated and Marked Male Aedes aegypti Mosquitoes for Release in an Operational Sterile Insect Technique Program

Preparing Irradiated and Marked Male Aedes aegypti Mosquitoes for Release in an Operational Sterile Insect Technique Program

تحضير ذكور بعوضة الزاعجة المصرية المشععة والموسومة للإفراج عنها في برنامج تقنية الحشرة العقيمة التشغيلية

The control of such human diseases as dengue, Zika, and chikungunya relies on the control of their vector, the Aedes aegypti mosquito, because there is no ...

Using the Fluorescent Dye, Rhodamine B, to Study Mating Competitiveness in Male Aedes aegypti Mosquitoes

Using the Fluorescent Dye, Rhodamine B, to Study Mating Competitiveness in Male Aedes aegypti Mosquitoes

باستخدام صبغة الفلورسنت، رودامين B، لدراسة القدرة التنافسية التزاوج في الذكور Aedes aegypti البعوض

The success of sterile or incompatible insect technique-based population suppression programs depends on the ability of released males to compete for ...