Name: fat body organ culture system in aedes aegypti, a vector of zika virus
Uploaded: 2017-08-19T13:00:00
Duration: 6 min 18 s
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Cette recherche a été financée par grant NIH #SC1AI109055, la subvention NMSU HHMI #52008103 2014 et NSF PGR accordent #1238731. Nous remercions les participants de la classe NMSU Spring 2015 BIOL302 moléculaire méthodes Lavesh Bhatia, pour leur soutien technique avec les expériences de culture de tissu adipeux.

1. préparation des Solutions et réactifs <ol><li>solution mère de l’acide aminé <ol><li>Prepare a 4 X acide aminé solution mère 23 , 24 par pesage et Ajouter les 20 acides aminés différents dans un erlenmeyer selon les concentrations indiquées au tableau 1. 
		Remarque : Dans certains cas, acides aminés peuvent être exclus de la solution et remplacé par molaires égales de mannitol à maintenir une concentration égale d’osmolytes.</li>
		<li>Ajouter la quantité appropriée de ddH 2 O pour produire le volume souhaité de solution.</li>
		<li>Pour s’assurer que les acides aminés ont complètement dissoutes, chauffer doucement en remuant continuellement jusqu'à ce que le liquide soit tout à fait clair, il faudra une légère teinte jaune. 
		Remarque : Il peut être nécessaire pour ramener le pH à 6 en ajoutant HCl pour permettre à certains des acides aminés hydrophobes plus de dissoudre.</li>
		<li>Partie aliquote de la solution et stérile-filtre à l’aide d’un filtre de seringue avec un 0,2 µm taille de pore.</li>
		<li>Magasin dans un récipient étanche à-20 ° C jusqu'à 6 mois.</li>
	</ol></li> <li>APS Remarque : voir 25.
	<ol><li>Pour le 20 X sel solution mère, combiner les sels figurant au tableau 2 dans 50 mL d’eau. Remuer jusqu'à dissolution complète. 
		Remarque : Il peut être nécessaire de chauffer légèrement la solution pour dissoudre complètement les sels.</li>
		<li>Filtre stérile à l’aide d’un filtre de seringue avec un 0,2 µm taille de pore et conserver la solution dans un tube de 50 mL à -20 ° C.</li>
	</ol></li> <li>Solution stock de calcium <ol><li>pour les 50 X solution stock de calcium, d’ajouter 0,90 g de chlorure de calcium pour 100 mL d’eau (tableau 3) : remuer jusqu'à dissolution complète.</li>
		<li>à l’aide d’une seringue stérile filtre filtrer avec une taille de pores de 0,2 µm, aliquote de la solution dans les tubes de 50 mL et conserver à -20 ° C.</li>
	</ol></li> <li>Tampon Tris (pH 7,4) <ol><li>pour les Tris de la mémoire tampon, mélanger le sel et les solutions énumérées dans le tableau 4 et ajouter ddH 2 O à 100 mL.</li>
		<li>à l’aide d’une seringue stérile filtre filtrer avec une taille de pores de 0,2 µm et une aliquote de la solution dans les tubes de 50 mL ; conserver à température ambiante.</li>
	</ol></li> <li>Milieu de culture de tissu adipeux <ol><li>pour préparer le milieu de culture de tissu adipeux, préparer toutes les solutions énumérées ci-dessus.</li>
		<li>Les combiner selon les volumes dans le tableau 5 de faire 200 mL de milieu de culture de tissu adipeux.</li>
		<li>Ajuster le pH à 7,2 avec NaOH ou HCl.</li>
		<li>Stérile-filtrer la solution à l’aide d’un filtre de seringue avec une taille de pores de 0,2 µm.</li>
		<li>Diviser la solution en aliquotes de 15 mL et conserver à-20 ° C jusqu'à 6 mois.</li>
	</ol></li></ol> 2. Préparation pour la Dissection <ol><li>préparer un stéréomicroscope (grossissement de x 10-20) avec éclairage et étalez deux pincettes ultra-fin et une paire de ciseaux de dissection micro.</li>
	<li>Préparer toutes les solutions nécessaires pour l’expérience. Décongeler le milieu de culture de corps gras à température ambiante. 
	NOTE : Précipitants peuvent être dissous en chauffant doucement la solution ne dépassant pas 30 ° C.</li>
	<li>Avec un aspirateur, recueillir les moustiques femelles adultes (3-7 jours après la levée) et anesthésier les à l’aide de dioxyde de carbone ou Ice. 
	Remarque : Une fois anesthésié, les moustiques doivent rester sous CO 2 le moins longtemps possibles, ne dépassant ne pas 20 min. par ailleurs, les moustiques peuvent être anesthésiés sur glace et conservées pendant environ 30 min.</li>
	<li>Préparer un plateau de 6 puits avec 3 mL de APS / puits.</li>
</ol> 3. La Dissection de corps gras <ol><li>concentrer le stéréomicroscope dissection et ajuster la présidence à une hauteur confortable.</li>
	<li>Placer une lame de microscope concaves sur la surface de microscope et ajouter deux gouttes de APS au centre.</li>
	<li>Ramasser un moustique par une jambe à l’aide d’une pince et les transfère à la surface de l’APS sur la lame de microscope.</li>
	<li>Soigneusement attraper le moustique par le thorax, avec la pince dans la main gauche et tournez le moustique de sorte que la face ventrale est à la hausse.</li>
	<li>Tout en tenant le corps soutenue par le thorax, saisir les deux derniers segments abdominaux, avec la pince dans la main droite et tirez doucement. 
	Remarque : Les deux derniers segments abdominaux seront séparera de l’abdomen et les ovaires ci-joint Malpighi tubules, intestin et strié ; parfois, la récolte se glisser hors de l’abdomen. Si elles n’ont pas été supprimées, insérez l’extrémité fermée de la pince dans le petit trou créé et supprimer les autres tissus.</li>
	<li>Annulée la pince droite et ramasser les ciseaux de printemps. Glisser une lame dans le trou dans l’abdomen jusqu'à le segment inférieur du thorax. Doucement et rapidement coupé l’abdomen sur la longueur. 
	Remarque : Une fois que la coupe a été faite, l’abdomen devrait commencer à étendre vers l’extérieur, bien que cela ne peut pas se produire immédiatement.</li>
	<li>Procéder à la deuxième coupe, qui sera une coupe latérale du thorax et légèrement sous où s’est terminée la première coupe. 
	Remarque : L’abdomen devrait ensuite ouvrir et se dissocier de la cage thoracique, avec la cuticule vers le haut et les corps gras côté immergés au sein de l’APS. Cette paroi abdominale du corps est la préparation des corps gras pour in vitro culture.</li>
	<li>Soulever les corps gras de la solution APS avec la pointe d’une paire de pinces et de la solution de les transférer sur la plaque de 6 puits contenant APS à température ambiante. Permettre le tissu se reposer pendant environ 0,5 h avant de passer à la culture de tissu adipeux.</li>
</ol> 4. Culture de tissu adipeux <ol><li>Incuber les corps gras sur l’APS à température ambiante pendant au moins 0,5 h s’équilibrer les.</li>
	<li>Transférer les corps gras à l’aide de la pointe de la pince et faire doucement sortir la solution APS. Abaissez l’extrémité dans le milieu de culture de tissu adipeux. 
	Remarque : Le tissu adipeux doit ouvrir sur la surface du milieu et flotter librement. La culture de tissu adipeux est généralement effectuée dans des plaques de 96 puits, avec 150-200 µL de milieu dans chaque puits. On peut bien s’intégrer jusqu'à trois corps individuels de gras, et ils sont viables pendant plus de 12 heures (résultats personnels non publiés).</li>
	<li>Après la période d’incubation, transférer les corps gras du milieu dans les tubes à centrifuger de 1,5 mL contenant les réactifs appropriés pour le traitement en aval. 
	Remarque : Les analyses typiques incluent qPCR 16 , 17 , 18 , 19, Western blotting 18 , 20, 26 de la transcriptomique, protéomique 21 ou métabolomique 22.</li>
</ol>

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	<li>Benelli, G., Mehlhorn, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Declining+malaria,+rising+of+dengue+and+Zika+virus:+insights+for+mosquito+vector+control.">Declining malaria, rising of dengue and Zika virus: insights for mosquito vector control.</a> Parasitol Res. 115 (5), 1747-1754 (2016).</li><li>Newby, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+path+to+eradication:+a+progress+report+on+the+malaria-eliminating+countries.">The path to eradication: a progress report on the malaria-eliminating countries.</a> Lancet. 387 (10029), 1775-1784 (2016).</li><li>Clements, A. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> The Biology of Mosquitoes. 2, (1992).</li><li>Long, C. A., Zavala, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Malaria+vaccines+and+human+immune+responses.">Malaria vaccines and human immune responses.</a> Curr Opin Microbiol. 32, 96-102 (2016).</li><li>Mendis, K. N., David, P. H., Carter, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Human+immune+responses+against+sexual+stages+of+malaria+parasites:+considerations+for+malaria+vaccines.">Human immune responses against sexual stages of malaria parasites: considerations for malaria vaccines.</a> Int J Parasitol. 20 (4), 497-502 (1990).</li><li>Frings, S., Lindemann, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Odorant+response+of+isolated+olfactory+receptor+cells+is+blocked+by+amiloride.">Odorant response of isolated olfactory receptor cells is blocked by amiloride.</a> J Membr Biol. 105 (3), 233-243 (1988).</li><li>Froese, A., Szyszka, P., Menzel, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effect+of+GABAergic+inhibition+on+odorant+concentration+coding+in+mushroom+body+intrinsic+neurons+of+the+honeybee.">Effect of GABAergic inhibition on odorant concentration coding in mushroom body intrinsic neurons of the honeybee.</a> J Comp Physiol A Neuroethol Sens Neural Behav Physiol. 200 (3), 183-195 (2014).</li><li>Yewhalaw, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Multiple+insecticide+resistance:+an+impediment+to+insecticide-based+malaria+vector+control+program.">Multiple insecticide resistance: an impediment to insecticide-based malaria vector control program.</a> PLoS One. 6 (1), e16066 (2011).</li><li>Arrese, E. L., Soulages, J. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Insect+fat+body:+energy,+metabolism,+and+regulation.">Insect fat body: energy, metabolism, and regulation.</a> Annu Rev Entomol. 55, 207-225 (2010).</li><li>Raikhel, A. S., Deitsch, K. W., Sappington, T. W., Crampton, J. M., Beard, C. B., Louis, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> The Molecular Biology of Insect Disease Vectors: A Methods Manual. , 507-522 (1997).</li><li>Price, D. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+fat+body+transcriptomes+of+the+yellow+fever+mosquito+Aedes+aegypti,+pre-+and+post-+blood+meal.">The fat body transcriptomes of the yellow fever mosquito Aedes aegypti, pre- and post- blood meal.</a> PLoS One. 6 (7), e22573 (2011).</li><li>Hansen, I. A., Attardo, G. M., Rodriguez, S. D., Drake, L. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Four-way+regulation+of+mosquito+yolk+protein+precursor+genes+by+juvenile+hormone-,+ecdysone-,+nutrient-,+and+insulin-like+peptide+signaling+pathways.">Four-way regulation of mosquito yolk protein precursor genes by juvenile hormone-, ecdysone-, nutrient-, and insulin-like peptide signaling pathways.</a> Front Physiol. 5, 103 (2014).</li><li>Raikhel, A. S., Dhadialla, T. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Accumulation+of+yolk+proteins+in+insect+oocytes.">Accumulation of yolk proteins in insect oocytes.</a> Annu Rev Entomol. 37, 217-251 (1992).</li><li>Raikhel, A. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Molecular+biology+of+mosquito+vitellogenesis:+from+basic+studies+to+genetic+engineering+of+antipathogen+immunity.">Molecular biology of mosquito vitellogenesis: from basic studies to genetic engineering of antipathogen immunity.</a> Insect Biochem Mol Biol. 32 (10), 1275-1286 (2002).</li><li>Hansen, I. A., Attardo, G. M., Chandrasekar, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ch.+6.">Ch. 6.</a> Short Views on Insect Molecular Biology. , (2009).</li><li>Hansen, I. A., Attardo, G. M., Park, J. H., Peng, Q., Raikhel, A. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Target+of+rapamycin-mediated+amino+acid+signaling+in+mosquito+anautogeny.">Target of rapamycin-mediated amino acid signaling in mosquito anautogeny.</a> Proc Natl Acad Sci USA. 101 (29), 10626-10631 (2004).</li><li>Hansen, I. A., Attardo, G. M., Roy, S. G., Raikhel, A. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Target+of+rapamycin-dependent+activation+of+S6+kinase+is+a+central+step+in+the+transduction+of+nutritional+signals+during+egg+development+in+a+mosquito.">Target of rapamycin-dependent activation of S6 kinase is a central step in the transduction of nutritional signals during egg development in a mosquito.</a> J Biol Chem. 280 (21), 20565-20572 (2005).</li><li>Attardo, G. M., Hansen, I. A., Shiao, S. H., Raikhel, A. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Identification+of+two+cationic+amino+acid+transporters+required+for+nutritional+signaling+during+mosquito+reproduction.">Identification of two cationic amino acid transporters required for nutritional signaling during mosquito reproduction.</a> J Exp Biol. 209 (Pt 16), 3071-3078 (2006).</li><li>Carpenter, V. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=SLC7+amino+acid+transporters+of+the+yellow+fever+mosquito+Aedes+aegypti+and+their+role+in+fat+body+TOR+signaling+and+reproduction.">SLC7 amino acid transporters of the yellow fever mosquito Aedes aegypti and their role in fat body TOR signaling and reproduction.</a> J Insect Physiol. 58 (4), 513-522 (2012).</li><li>Attardo, G. M., Higgs, S., Klingler, K. A., Vanlandingham, D. L., Raikhel, A. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=RNA+interference-mediated+knockdown+of+a+GATA+factor+reveals+a+link+to+anautogeny+in+the+mosquito+Aedes+aegypti.">RNA interference-mediated knockdown of a GATA factor reveals a link to anautogeny in the mosquito Aedes aegypti.</a> Proc Natl Acad Sci USA. 100 (23), 13374-13379 (2003).</li><li>Hugo, L. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Proteomic+biomarkers+for+ageing+the+mosquito+Aedes+aegypti+to+determine+risk+of+pathogen+transmission.">Proteomic biomarkers for ageing the mosquito Aedes aegypti to determine risk of pathogen transmission.</a> PLoS One. 8 (3), e58656 (2013).</li><li>Price, D. P., Schilkey, F. D., Ulanov, A., Hansen, I. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Small+mosquitoes,+large+implications:+crowding+and+starvation+affects+gene+expression+and+nutrient+accumulation+in+Aedes+aegypti.">Small mosquitoes, large implications: crowding and starvation affects gene expression and nutrient accumulation in Aedes aegypti.</a> Parasit Vectors. 8, 252 (2015).</li><li>Uchida, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Induction+of+oogenesis+in+mosquitoes+(Diptera:+Culicidae)+by+infusion+of+the+hemocoel+with+amino+acids.">Induction of oogenesis in mosquitoes (Diptera: Culicidae) by infusion of the hemocoel with amino acids.</a> J Med Entomol. 38 (4), 572-575 (2001).</li><li>Uchida, K., Ohmori, D., Yamakura, F., Suzuki, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Changes+in+free+amino+acid+concentration+in+the+hemolymph+of+the+female+Culex+pipiens+pallens+(Diptera:+Culicidae),+after+a+blood+meal.">Changes in free amino acid concentration in the hemolymph of the female Culex pipiens pallens (Diptera: Culicidae), after a blood meal.</a> J Med Entomol. 27 (3), 302-308 (1990).</li><li>Hayes, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Determination+of+a+physiological+saline+solution+for+Aedes+aegypti+.(L).">Determination of a physiological saline solution for Aedes aegypti .(L).</a> J Econ Entomol. 46 (4), 624-627 (1953).</li><li>Price, D. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+Fat+Body+Transcriptomes+of+the+Yellow+Fever+Mosquito+Aedes+aegypti,+Pre-+and+Post+Blood+Meal.">The Fat Body Transcriptomes of the Yellow Fever Mosquito Aedes aegypti, Pre- and Post Blood Meal.</a> Plos One. 6 (7), e22573 (2011).</li><li>Chomczynski, P., Mackey, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Short+technical+reports.+Modification+of+the+TRI+reagent+procedure+for+isolation+of+RNA+from+polysaccharide-and+proteoglycan-rich+sources.">Short technical reports. Modification of the TRI reagent procedure for isolation of RNA from polysaccharide-and proteoglycan-rich sources.</a> Biotechniques. 19 (6), 942-945 (1995).</li><li>Fujiwara, T., Kazawa, T., Haupt, S. S., Kanzaki, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Postsynaptic+odorant+concentration+dependent+inhibition+controls+temporal+properties+of+spike+responses+of+projection+neurons+in+the+moth+antennal+lobe.">Postsynaptic odorant concentration dependent inhibition controls temporal properties of spike responses of projection neurons in the moth antennal lobe.</a> PLoS One. 9 (2), e89132 (2014).</li><li>Larsen, W. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Growth+in+an+insect+organ+culture.">Growth in an insect organ culture.</a> J Insect Physiol. 13 (4), 613-619 (1967).</li><li>Judy, K. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Isolation,+Structure,+and+Absolute+Configuration+of+a+New+Natural+Insect+Juvenile+Hormone+from+Manduca+sexta.">Isolation, Structure, and Absolute Configuration of a New Natural Insect Juvenile Hormone from Manduca sexta.</a> Proc Natl Acad Sci USA. 70 (5), 1509-1513 (1973).</li><li>Marks, E. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+action+of+hormones+in+insect+cell+and+organ+cultures.">The action of hormones in insect cell and organ cultures.</a> Gen Comp Endocrinol. 15 (2), 289-302 (1970).</li><li>Hughes, G. L., Pike, A. D., Xue, P., Rasgon, J. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Invasion+of+Wolbachia+into+Anopheles+and+Other+Insect+Germlines+in+an+Ex+vivo+Organ+Culture+System.">Invasion of Wolbachia into Anopheles and Other Insect Germlines in an Ex vivo Organ Culture System.</a> PLoS One. 7 (4), e36277 (2012).</li><li>Postlethwait, J. H., Handler, A. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Roles+of+Juvenile-Hormone+and+20-Hydroxy-Ecdysone+during+Vitellogenesis+in+Isolated+Abdomens+of+Drosophila+melanogaster.">Roles of Juvenile-Hormone and 20-Hydroxy-Ecdysone during Vitellogenesis in Isolated Abdomens of Drosophila melanogaster.</a> J Insect Physiol. 25 (5), 455-460 (1979).</li><li>Spielman, A., Gwadz, R. W., Anderson, W. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ecdysone-initiated+ovarian+development+in+mosquitoes.">Ecdysone-initiated ovarian development in mosquitoes.</a> J Insect Physiol. 17 (10), 1807-1814 (1971).</li><li>Boudko, D. Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Substrate+specificity+and+transport+mechanism+of+amino-acid+transceptor+Slimfast+from+Aedes+aegypti.">Substrate specificity and transport mechanism of amino-acid transceptor Slimfast from Aedes aegypti.</a> Nat Commun. 6, 8546 (2015).</li><li>Fleischer, J., Bumbalo, R., Bautze, V., Strotmann, J., Breer, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Expression+of+odorant+receptor+Olfr78+in+enteroendocrine+cells+of+the+colon.">Expression of odorant receptor Olfr78 in enteroendocrine cells of the colon.</a> Cell Tissue Res. 361 (3), 697-710 (2015).</li><li>Jones, K. H., Senft, J. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+improved+method+to+determine+cell+viability+by+simultaneous+staining+with+fluorescein+diacetate-propidium+iodide.">An improved method to determine cell viability by simultaneous staining with fluorescein diacetate-propidium iodide.</a> J Histochem Cytochem. 33 (1), 77-79 (1985).</li><li>Strober, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Trypan+blue+exclusion+test+of+cell+viability.">Trypan blue exclusion test of cell viability.</a> Curr Protoc Immunol. A3B, (2001).</li></ol>

Nous n’avons rien à divulguer.

Culture d’organes insectes a été largement utilisée pour étudier les insecte endocrinologie, le développement et le métabolisme, ainsi qu’étudier l’interaction entre les organes spécifiques et symbiotes bactériens29,30,31, 32,33,,34. In vitro culture organotypique de corps gras a été utilisée spécifiquement pour étudier le transport des acides aminés et la régulation de la production de protéines du jaune d’oeuf dans les moustiques et autres diptères16,17,35 , 36. au cours du processus de la vitellogenèse, le corps adipeux de moustique utilise un tableau d’acides aminés de haute spécificité transporteurs d’importer des farines de sang provenant des acides aminés de l’hémolymphe de synthétiser de grandes quantités de protéines de jaune d’oeuf12 ,19,35,,36. La culture de tissu adipeux a été déterminant pour délimiter les besoins nutritionnels de corps gras dans ce contexte18.
La qualité des matières premières, les moustiques femelles, est essentielle pour le succès de ces expériences. Les larves de moustiques levées dans des conditions sous surpeuplées et régimes alimentaires riches en nutriments se nourrissent généralement produisent les meilleurs résultats. Il y a certaines variables importantes à considérer lors de l’établissement des conditions de culture de tissu adipeux de moustique en laboratoire sur le plan expérimental. Nous avons montré dans des études précédentes que l’expression des gènes corps gras varie considérablement selon l’histoire de la vie individuelle et l’état nutritionnel des moustiques11,22. Les conditions de culture de moustiques doivent être uniformes pour réduire la variabilité de la taille et des réserves nutritionnelles des moustiques expérimentales. En outre, le personnel effectuant des dissections devrait être formé pour assurer les dissections rapides et précises pour des résultats constants. La viabilité des cellules dans des corps gras isolés peut être vérifiée à l’aide de différentes coloration méthodes37,38.
Le protocole expérimental d’une expérience de culture de tissu adipeux devrait prendre en considération le nombre de dissections possible dans un laps de temps donné. Lorsque de grandes quantités de corps gras sont nécessaires, plusieurs séances de dissection ou dissecteurs multiples peuvent être nécessaires. Il y a un large éventail d’applications futures pour in vitro culture de tissu adipeux dans les moustiques et autres insectes. Il sera particulièrement utile pour tester les candidats potentiels de drogue pour le contrôle des insectes. L’utilisation des techniques transgéniques chez les insectes pour exprimer les protéines spécifiques de journaliste dans le tissu adipeux trophocytes ouvrira de nouvelles méthodes pour développer les bioessais puissants pour l’étude de la physiologie du tissu adipeux.

Les moustiques sont vecteurs de maladies dévastatrices, y compris le paludisme, dengue, chikungunya et Zika1,2,3. Malgré d’intenses efforts internationaux pour lutter contre ces maladies et de contrôler les populations de moustiques transmettant la maladie, les épidémies de maladies transmises par les moustiques restent les mêmes, en particulier dans les pays en développement. Des vaccins efficaces contre bon nombre de ces maladies sont soit indisponibles, soit d’efficacité limitée4,5. Le moyen le plus efficace pour prévenir les poussées est de contrôler les populations de moustiques, principalement grâce à l’utilisation des traitements insecticides. Cependant, résistance aux insecticides a développé de nombreuses populations de moustiques et deviennent un problème commun autour du monde6,7,8. L’étude de la physiologie de moustique est essentiel au développement de nouveaux outils et stratégies pour contrôler la maladie.
Le tissu adipeux moustique joue un rôle central dans l’entreposage d’éléments nutritifs, l’homéostasie métabolique, la reproduction et catabolisme des xénobiotiques9,10,11,12. C’est l’organe de stockage principal pour les triglycérides, de glycogène et les acides aminés sous forme de protéines de réserve. Il fonctionne également comme le lieu de synthèse pour la plupart des protéines de l’hémolymphe et des métabolites. Chez les moustiques, le tissu adipeux est la seule source de production de protéines d’oeuf qui se produit chez les femelles après qu’ils prennent un repas de sang13,14.
Le type de cellules principales du tissu adipeux est le grand, polyploïde trophocyte ou adipocytes3,9,10,12. Le tissu adipeux est organisé en lobes ou gaines et peut être trouvé dans toutes les parties du corps du moustique, avec la plus grande partie située dans l’abdomen, où les grands lobes de corps gras sont attachés à la paroi abdominale du corps.
Le système de culture de tissu adipeux moustique présenté ici a été développé dans les années 70 et reste un outil puissant pour l’étude de la physiologie corps gras10, surtout en combinaison avec les technologies actuelles d’analyse. La Fondation de cette technique repose sur l’isolation des murs organe abdominales et le tissu adipeux associé. La nature hydrophobe de la cuticule abdominale provoque de flotter à la surface du milieu de culture, avec les lobes ci-jointe du tissu adipeux abdominal immergé. Les stigmates et la structure tracheolar sont maintenues, assurant l’oxygénation des tissus cultivés. Désormais, nous allons nous référer à ces préparations comme « corps gras ». Isolées des corps gras restent viables pendant plus de 12 h incubés dans le milieu approprié (résultats non publiés). La culture de tissu adipeux est un outil précieux qui a abordé diverses questions au sujet de corps gras endocrinologie et physiologie9,10,12,15,16, 17.
Les corps gras peut être soumises à divers expérimental et traitements, le calendrier qui peut être décidé par l’enquêteur. À la fin de la période d’incubation, les corps gras peuvent être collectées et traitées pour les analyses en aval, y compris qPCR16,17,18,19, Western blotting18 ,20, protéomique21ou22de la métabolomique. Des expériences peuvent être effectuées à différentes échelles, de différents corps gras à des groupes de centaines qui peuvent être cultivées ensemble.
Les résultats représentatifs inclus ici proviennent de corps gras mis en culture en présence d’acides aminés et l’ecdysone 20-hydroxy-hormone stéroïde pour simuler l’activation de la farine de sang de la vitellogenèse16,17, 23,24. Nous avons analysé et comparé l’expression différentielle des gènes de non-activé par rapport à des corps gras activés via l’analyse de la séquence de génération.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" width="508">
	<tbody>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:64px;">Scissors&#160;</td>
			<td style="width:192px;">Fiskars</td>
			<td style="width:143px;">83872</td>
			<td style="width:111px;"></td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:64px;">Fly pad</td>
			<td style="width:192px;">Genesee Scientific</td>
			<td style="width:143px;">789060</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="127">
			<td height="127" style="height:127px;width:64px;">Battery-powered aspirator w/ collection vial</td>
			<td style="width:192px;">Hausherrs Machine Works, Inc.</td>
			<td style="width:143px;">3740-01-210-2368</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="43">
			<td height="43" style="height:43px;width:64px;">Fine tip forceps</td>
			<td style="width:192px;">World Precision Instruments, Inc.&#160;</td>
			<td style="width:143px;">500085</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="64">
			<td height="64" style="height:64px;width:64px;">Light microscope&#160;</td>
			<td style="width:192px;">Leica Microsystems</td>
			<td style="width:143px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="43">
			<td height="43" style="height:43px;width:64px;">96 well plate&#160;</td>
			<td style="width:192px;">Sigma</td>
			<td style="width:143px;">CL S3383</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:64px;">Sucrose</td>
			<td style="width:192px;">Sigma</td>
			<td style="width:143px;">S9378</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;">Alanine</td>
			<td style="width:192px;">Sigma</td>
			<td>A7627</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;">Arginine</td>
			<td style="width:192px;">Sigma</td>
			<td>A5006</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;">Asparagine</td>
			<td style="width:192px;">Sigma</td>
			<td>A0884</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;">Aspartic Acid</td>
			<td style="width:192px;">Sigma</td>
			<td>A9256</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;">Cysteine</td>
			<td style="width:192px;">Sigma</td>
			<td>W326305</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;">Glutamic Acid</td>
			<td style="width:192px;">Sigma</td>
			<td>G1251</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;">Glutamine</td>
			<td style="width:192px;">Sigma</td>
			<td>G3126</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;">Glycine</td>
			<td style="width:192px;">Sigma</td>
			<td>G2879</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;">Histidine</td>
			<td style="width:192px;">Sigma</td>
			<td>H6034</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;">Isoleucine</td>
			<td style="width:192px;">Sigma</td>
			<td>I2752</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;">Lysine</td>
			<td style="width:192px;">Sigma</td>
			<td>L5501</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;">Leucine</td>
			<td style="width:192px;">Sigma</td>
			<td>L8000</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;">Phenylalanine</td>
			<td style="width:192px;">Sigma</td>
			<td>P2126</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;">Proline</td>
			<td style="width:192px;">Sigma</td>
			<td>P0380</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;">Serine</td>
			<td style="width:192px;">Sigma</td>
			<td>S4500</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;">Threonine</td>
			<td style="width:192px;">Sigma</td>
			<td>T8625</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;">Tryptophan</td>
			<td style="width:192px;">Sigma</td>
			<td>T0254</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;">Tyrosine</td>
			<td style="width:192px;">Sigma</td>
			<td>T3754</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;">Valine</td>
			<td style="width:192px;">Sigma</td>
			<td>V0500</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;">Methionine</td>
			<td style="width:192px;">Sigma</td>
			<td>M9625</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:64px;">NaCl</td>
			<td style="width:192px;">Sigma</td>
			<td>S7653</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:64px;">KCl</td>
			<td style="width:192px;">Sigma</td>
			<td>P9333</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="45">
			<td height="45" style="height:45px;width:64px;">MgCl2-6H2O</td>
			<td style="width:192px;">Sigma</td>
			<td>M2670</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="23">
			<td height="23" style="height:23px;width:64px;">NaHCO3</td>
			<td style="width:192px;">Sigma</td>
			<td>S5761</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="45">
			<td height="45" style="height:45px;width:64px;">CaCl2-2H2O</td>
			<td style="width:192px;">Sigma</td>
			<td>C8106</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="41">
			<td height="41" style="height:41px;width:64px;">Tris pH8.0&#160;</td>
			<td style="width:192px;">Sigma</td>
			<td>T1503</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:64px;">EDTA</td>
			<td style="width:192px;">Sigma</td>
			<td>E6758</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="23">
			<td height="23" style="height:23px;width:64px;">ddH2O</td>
			<td style="width:192px;">Sigma</td>
			<td>W4502</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

fat body organ culture system in aedes aegypti, a vector of zika virus

Le tissu adipeux insecte joue un rôle central dans le métabolisme des insecte et d’entreposage d’éléments nutritifs, reflétant les fonctions du foie et des tissus adipeux chez les vertébrés. Le tissu adipeux insectes est généralement réparti dans tout le corps de l’insecte. Toutefois, il est souvent concentrée dans l’abdomen et attaché à la paroi abdominale du corps.
Le corps adipeux de moustique est la seule source de protéines de jaune d’oeuf, lesquelles sont essentielles pour la production de œufs. Par conséquent, la culture in vitro de tissus adipeux moustique représente un système important pour l’étude de la physiologie de moustique, métabolisme et, finalement, la production de œufs. Le processus de culture de tissu adipeux commence par la préparation de solutions et réactifs, y compris les acides aminés des solutions mères, Aedes sel solution stock de sérum physiologique (APS), solution stock de calcium et milieu de culture de tissu adipeux. Le processus se poursuit avec la dissection des corps gras, suivie d’un traitement expérimental. Après le traitement, une variété de différentes analyses peut être effectuée, y compris les ARN (RNA-Seq) le séquençage, qPCR, Western blots, protéomique et métabolomique.
Dans notre expérience de l’exemple, nous montrons le protocole par le biais de l’excision et de la culture du corps gras de la fièvre jaune du moustique, Aedes aegypti, principal vecteur d’arbovirus dont la dengue, chikungunya et Zika. L’ARN des corps gras, cultivées dans des conditions physiologiques connues pour réguler positivement les protéines jaune contre le contrôle ont fait l’objet de RNA-Seq analyse pour démontrer l’utilité potentielle de cette procédure pour les enquêtes de l’expression génique.

À titre d’exemple, nous avons effectué une expérience de culture de tissu adipeux et stimulé isolées des corps gras en incubant eux sur une solution contenant un mélange équilibré de tous les vingt acides aminés naturels et l’ecdysone la 20-hydroxy-hormones stéroïdes d’insectes (10 µM) pendant 6 h . Comme contrôle, corps gras ont été incubées sur APS pour un montant égal de temps.
Après incubation, l’ARN total a été isolé à l’aide d’un tri-réactif27 suivant les instructions du fabricant. La qualité et la quantité des échantillons d’ARN extraits ont été évalués à l’aide d’un spectrophotomètre, dosage fluorimétrique et électrophorèse sur gel d’agarose. Les bibliothèques de séquençage de RNA ont été générés à l’aide de 4 µg d’ARN total et ont été quantifiés à l’aide de deux techniques différentes. Par la suite, les bibliothèques ont été envoyés à un fournisseur commercial de bout-à-pas apparié.
Les résultats de cette expérience sont indiqués au tableau 6. Les gènes montrant la plus forte réponse transcriptionnelle d’acides aminés et la 20-hydroxyecdysone étaient principalement jaunes gènes des protéines, qui est en accord avec les précédents résultats11.
La figure 1 montre une carte thermique indiquant les niveaux d’expression de gène de 1 256 différentiellement exprimés gènes provenant des corps gras après deux traitements différents.
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/55508/55508fig1.jpg"> 
Figure 1 . Carte de chaleur des gènes exprimés dans la culture de tissu adipeux. La carte thermique a été calculée sur le nombre de relevés de notes spécifiques pour chaque gène dans les différentes bibliothèques utilisant le heatmap paquet28 qui fait partie de l’environnement du logiciel R. La nuance plus foncée représente l’expression génétique plus élevée. 1 256 gènes avec une variation statistiquement significative dans l’expression (Q-valeurs &#60; 0,05) sont indiquées. Les gènes sont classés en fonction de leurs niveaux d’expression moyenne, indiquée par le dendrogramme sur la gauche (pas selon leurs relations phylogénétiques). Remarque le nombre élevé de gènes à expression vers le haut ou vers le bas-réglé après stimulation par les acides aminés (AA) et de la 20-hydroxyecdysone (20E). APS = Aedes physiologique. Voir 1 de fichier supplémentaire pour obtenir une liste des gènes et leurs niveaux d’expression relative. <a href="//ecsource.jove.com/files/ftp_upload/55508/55508fig1large.jpg" target="_blank">S’il vous plaît cliquez ici pour visionner une version agrandie de cette figure.</a>
<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>Acide aminé</td>
			<td>Poids moléculaire g/mol</td>
			<td>mM Concentration</td>
			<td>mg par litre</td>
			<td>mg pour volume 300 mL</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Alanine</td>
			<td>89,1</td>
			<td>26.68</td>
			<td>2377.19</td>
			<td>713.16</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Arginine</td>
			<td>174,2</td>
			<td>26.68</td>
			<td>4647.66</td>
			<td>1394.3</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Asparagine</td>
			<td>150,1</td>
			<td>26.68</td>
			<td>4004.67</td>
			<td>1201.4</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Acide aspartique</td>
			<td>133</td>
			<td>26.68</td>
			<td>3548.44</td>
			<td>1064.53</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cystéine</td>
			<td>121.16</td>
			<td>10.68</td>
			<td>1293.99</td>
			<td>388,2</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Acide glutamique</td>
			<td>147,1</td>
			<td>26.68</td>
			<td>3924.63</td>
			<td>1177.39</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Glutamine</td>
			<td>146</td>
			<td>26.68</td>
			<td>3895.28</td>
			<td>1168.58</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Glycine</td>
			<td>75</td>
			<td>53.32</td>
			<td>3999</td>
			<td>1199.7</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Histidine</td>
			<td>155,16</td>
			<td>80</td>
			<td>12412.8</td>
			<td>3723.84</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Isoleucine</td>
			<td>131</td>
			<td>10.68</td>
			<td>1399.08</td>
			<td>419.72</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Lycine</td>
			<td>183</td>
			<td>26.68</td>
			<td>4882.44</td>
			<td>1464.73</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Leucine</td>
			<td>131</td>
			<td>26.68</td>
			<td>3495.08</td>
			<td>1048.52</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Phénylalanine</td>
			<td>165</td>
			<td>10.68</td>
			<td>1762.2</td>
			<td>528.66</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Proline</td>
			<td>115</td>
			<td>26.68</td>
			<td>3068.2</td>
			<td>920.46</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sérine</td>
			<td>105</td>
			<td>53.32</td>
			<td>5598.6</td>
			<td>1679.58</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Thréonine</td>
			<td>119</td>
			<td>10.68</td>
			<td>1270.92</td>
			<td>381.28</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tryptophane</td>
			<td>204</td>
			<td>10.68</td>
			<td>2178.72</td>
			<td>653.62</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tyrosine</td>
			<td>181</td>
			<td>5.32</td>
			<td>962.92</td>
			<td>288,88</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Valine</td>
			<td>117</td>
			<td>10.68</td>
			<td>1249.56</td>
			<td>374.87</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Méthionine</td>
			<td>149</td>
			<td>10.68</td>
			<td>1591.32</td>
			<td>477,4</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>
Le tableau 1. 4 x solution mère de l’acide aminé.
<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>Composant</td>
			<td>Poids en grammes, on ajoutés 50 ml FD2O</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>NaCl</td>
			<td>8,0 g</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>KCl</td>
			<td>0,074 g</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MgCl2-6 H2O</td>
			<td>0,120 g</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>NaHCO3</td>
			<td>0,0250 g</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>
Le tableau 2. 20 X sel solution mère.
<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>Composant</td>
			<td>Poids en grammes, on ajoutés 100 ml ddH2O</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CaCl2-2 H2O</td>
			<td>0,90 g</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>
<stron></stron>g &gt; tableau 3. 50 x solution stock de calcium.
<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>Composant</td>
			<td>Concentration de la solution mère</td>
			<td>Stock de volume pour 100 ml de tampon</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tris pH8.0</td>
			<td>1 M</td>
			<td>5 mL</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>EDTA</td>
			<td>0,25 M</td>
			<td>2 mL</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>NaCl</td>
			<td>NA</td>
			<td>0,3 g</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>ddH2O</td>
			<td>NA</td>
			<td>100 ml (~ 93 mL)</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>
Tableau 4. Tampon Tris.
<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>Composant</td>
			<td>Stock de volume de 200 ml</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Solution mère de l’acide aminé</td>
			<td>150 mL</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Solution de sel de Stock</td>
			<td>10 mL</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Solution Stock de calcium</td>
			<td>4 mL</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tampon TES</td>
			<td>10 mL</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>ddH2O</td>
			<td>26 mL</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>
Tableau 5. Milieu de culture de tissu adipeux.
<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>Annotation</td>
			<td>Description de gène</td>
			<td>Changement de pli</td>
			<td>P-valeur</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>AAEL006138</td>
			<td>La vitellogénine-B</td>
			<td>3443</td>
			<td>2.52E-112</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>AAEL006126</td>
			<td>La vitellogénine-C</td>
			<td>2795</td>
			<td>8.64E-91</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>AAEL006563</td>
			<td>carboxypeptidase vitellogène</td>
			<td>1002</td>
			<td>2.17E-119</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>AAEL010434</td>
			<td>La vitellogénine-A</td>
			<td>220</td>
			<td>1.14E-27</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>AAEL006542</td>
			<td>carboxypeptidase vitellogène</td>
			<td>185</td>
			<td>2.14E-65</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>AAEL012678</td>
			<td>AAEL003006-PA [Aedes aegypti](65%)</td>
			<td>96</td>
			<td>4.00E-70</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>AAEL000080</td>
			<td>protéine hypothétique</td>
			<td>82</td>
			<td>6.69E-188</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>AAEL015312</td>
			<td>Vitellogène cathepsine B</td>
			<td>77</td>
			<td>1.27E-15</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>AAEL009588</td>
			<td>récepteur nucléaire 3</td>
			<td>75</td>
			<td>4.58E-56</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>AAEL010529</td>
			<td>protéine hypothétique</td>
			<td>66</td>
			<td>1.32E-29</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>
Tableau 6. Des résultats expérimentaux.
Fichier supplémentaires 1. <a href="//ecsource.jove.com/files/ftp_upload/55508/Table_of_genes_for_figure_1.xlsx" target="_blank">S’il vous plaît cliquez ici pour télécharger ce fichier.</a>

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Fat Body Organ Culture System in Aedes Aegypti, a Vector of Zika Virus

Le corps gras est l’organe central métabolique chez les insectes. Nous présentons un système de culture d’organes vivants qui permet à l’utilisateur afin d’étudier les réactions du tissu adipeux isolées à divers stimuli.

Système de Culture ou organe de corps gras chez Aedes Aegypti, vecteur de Virus Zika

The insect fat body plays a central role in insect metabolism and nutrient storage, mirroring functions of the liver and fat tissue in vertebrates. Insect ...

Research

JoVE Journal

Biology

Fat Body Organ Culture System in Aedes Aegypti, a Vector of Zika Virus

Injection of dsRNA into Female A. aegypti Mosquitos

L&#39;injection d&#39;ARNdb dans Femme Mosquitos aegypti A.

Reverse genetic approaches have proven extremely useful for determining  which genes underly resistance to vector pathogens in mosquitoes.  This video ...

Recherche

Biologie

Microinjection of A. aegypti Embryos to Obtain Transgenic Mosquitoes

Microinjection d&#39;embryons aegypti a. Pour obtenir les moustiques transgéniques

In this video, Nijole Jasinskiene demonstrates the methodology employed to generate transgenic Aedes aegypti mosquitoes, which are vectors for dengue ...

Primary Culture and Plasmid Electroporation of the Murine Organ of Corti. 

Culture primaire et l&#39;électroporation plasmidique de l&#39;Organe de Corti murin.

In all mammals, the sensory epithelium for audition is located along the spiraling organ of Corti that resides within the conch shaped cochlea of the ...

RNAi-mediated Gene Knockdown and In Vivo Diuresis Assay in Adult Female Aedes aegypti Mosquitoes

RNAi-mediated Gene Knockdown and In Vivo Diuresis Assay in Adult Female Aedes aegypti Mosquitoes

Inactivation génique médiée par ARNi et<em&gt; In Vivo</emEssai diurèse&gt; Femmes adultes<em&gt; Aedes aegypti</em&gt; Les moustiques

This video protocol demonstrates an effective technique to knockdown a particular gene in an insect and conduct a novel bioassay to measure excretion ...

Mouse Embryonic Development in a Serum-free Whole Embryo Culture System

Souris développement embryonnaire dans tout un système de culture d&#39;embryons sans sérum

Mid-gestation stage mouse embryos were cultured utilizing a serum-free culture medium prepared from commercially available stem cell media supplements in ...

Physiological Recordings and RNA Sequencing of the Gustatory Appendages of the Yellow-fever Mosquito Aedes aegypti

Physiological Recordings and RNA Sequencing of the Gustatory Appendages of the Yellow-fever Mosquito Aedes aegypti

Physiologiques Recordings et ARN séquençage des annexes gustatives du Mosquito fièvre jaune<em&gt; Aedes aegypti</em

Electrophysiological recording of action potentials from sensory neurons of mosquitoes provides investigators a glimpse into the chemical perception of ...

Maintaining Aedes aegypti Mosquitoes Infected with Wolbachia

Maintaining Aedes aegypti Mosquitoes Infected with Wolbachia

Maintenir les moustiques Aedes aegypti infectés par Wolbachia

Aedes aegypti mosquitoes experimentally infected with Wolbachia are being utilized in programs to control the spread of arboviruses such as dengue, ...

Improved Fecundity and Fertility Assay for Aedes aegypti using 24 Well Tissue Culture Plates (EAgaL Plates)

Improved Fecundity and Fertility Assay for Aedes aegypti using 24 Well Tissue Culture Plates EAgaL Plates

Amélioration de la fécondité et de la fertilité pour Aedes aegypti à l’aide de 24 plaques de culture tissulaire de puits (plaques EAgaL)

Mosquitoes represent a significant public health problem as vectors of various pathogens. For those studies that require an assessment of mosquito fitness ...

Preparing Irradiated and Marked Male Aedes aegypti Mosquitoes for Release in an Operational Sterile Insect Technique Program

Preparing Irradiated and Marked Male Aedes aegypti Mosquitoes for Release in an Operational Sterile Insect Technique Program

Préparation de moustiques mâles Aedes aegypti irradiés et marqués en vue de leur libération dans le cadre d’un programme opérationnel de techniques d’insectes stériles

The control of such human diseases as dengue, Zika, and chikungunya relies on the control of their vector, the Aedes aegypti mosquito, because there is no ...

Using the Fluorescent Dye, Rhodamine B, to Study Mating Competitiveness in Male Aedes aegypti Mosquitoes

Using the Fluorescent Dye, Rhodamine B, to Study Mating Competitiveness in Male Aedes aegypti Mosquitoes

Utilisation du colorant fluorescent, Rhodamine B, pour étudier la compétitivité de l’accouplement chez les moustiques mâles Aedes aegypti

The success of sterile or incompatible insect technique-based population suppression programs depends on the ability of released males to compete for ...