Name: fat body organ culture system in aedes aegypti, a vector of zika virus
Uploaded: 2017-08-19T13:00:00
Duration: 6 min 18 s
Description: Watch this Scientific Journal Video about Fat Body Organ Culture System in Aedes Aegypti, a Vector of Zika Virus at JoVE.com

Denne forskningen ble støttet av NIH grant #SC1AI109055, i 2014 NMSU HHMI grant #52008103 og NSF PGR gi #1238731. Vi takker deltakerne på NMSU våren 2015 BIOL302 molekylær metoder klassen og Lavesh Bhatia for deres teknisk støtte med fett kroppen cellekulturer eksperimenter.

1. forberede løsninger og reagenser <ol><li>aminosyre lagerløsning <ol><li>forberede en 4 X aminosyre lagerløsning 23 , 24 ved veiing og legge til 20 ulike aminosyrer i en Erlenmeyer kolbe ifølge konsentrasjonen i tabell 1. 
		Merk: I noen tilfeller amino acid(s) kan utelukkes løsningen og erstattet av lik molar mengder mannitol å opprettholde en lik konsentrasjonen av osmolytes.</li>
		<li>Legge til riktig mengde ddH 2 O å produsere det ønskede volumet løsning.</li>
		<li>å sikre at aminosyrer har fullstendig oppløst, varm forsiktig mens kontinuerlig under omrøring til væsken er helt klart, det vil ta på en liten gul fargetone. 
		Merk: Det kan være nødvendig å redusere pH 6 ved å legge HCl å tillate noen av de mer hydrofobe aminosyrene å oppløse.</li>
		<li>Aliquot løsningen og sterile-filter med en sprøyte-filter med en 0,2-µm pore størrelse.</li>
		<li>Lagres i lukket beholder på 20 ° C i opptil 6 måneder.</li>
	</ol></li> <li>APS Merk: se 25.
	<ol><li>For 20 X salt lagerløsning, kombinere salter oppført i tabell 2 i 50 mL vann. Rør til fullstendig oppløst. 
		Merk: Det kan være nødvendig å litt varme løsningen for å løse salter.</li>
		<li>Sterile-filter med en sprøyte-filter med en 0,2-µm pore størrelse og lagre løsningen i en 50-mL tube på -20 ° C.</li>
	</ol></li> <li>Kalsium lagerløsning <ol><li>For 50 X kalsium lagerløsning, legge 0,90 g veisalt til 100 mL vann (tabell 3), rør til fullstendig oppløst.</li>
		<li>Sterile-filteret bruker en sprøyte filtrere 0,2-µm pore størrelse, aliquot løsningen i 50-mL rør, og lagre på -20 ° C.</li>
	</ol></li> <li>Tris buffer (pH 7.4) <ol><li>For Tris buffer, kombinere salt og løsningene som er oppført i Tabell 4 og legge til ddH 2 O opptil 100 mL.</li>
		<li>Sterile-filteret bruker en sprøyte filtrere med 0,2-µm porestørrelse og aliquot løsningen i 50-mL rør, lagre ved romtemperatur.</li>
	</ol></li> <li>Fett kroppen kultur medium <ol><li>for å forberede fett kroppen kultur medium, forberede alle løsningene ovenfor.</li>
		<li>Kombinere dem som volumene i tabell 5 å 200 mL fett kroppen kultur medium.</li>
		<li>Justerer pH verdien til 7.2 NaOH eller HCl.</li>
		<li>Sterile-filter løsningen filtere sprøyte med en 0,2-µm porestørrelse.</li>
		<li>Del løsningen i 15-mL dele og lagre på 20 ° C for inntil 6 måneder.</li>
	</ol></li></ol> 2. Forbereder disseksjon <ol><li>forberede en stereomicroscope (10-20 x forstørrelse) med belysning og legge ut to ultra-fin pinsett og et par mikro disseksjon saks.</li>
	<li>Forbereder alle løsninger nødvendig for eksperimentet. Tine fett kroppen kultur medium til romtemperatur. 
	Merk: Precipitants kan løses ved å forsiktig varme løsningen ikke høyere enn 30 ° C.</li>
	<li>Med en aspirator, samle voksne kvinnelige mygg (3-7 dager etter fremveksten) og bedøve dem med karbondioksid eller ice. 
	Merk: Når anesthetized, myggen bør holdes under CO 2 for kortest tid mulig, ikke overstiger 20 min. Alternativt, myggen kan være anesthetized på is og holdt for ca 30 min.</li>
	<li>Forberede en 6-vel plate med 3 mL APS per brønn.</li>
</ol> 3. Fett kroppen disseksjon <ol><li>fokus på dissecting stereomicroscope og Juster stolen til en behagelig høyde.</li>
	<li>Plassere en konkav microscope skyve på mikroskopet og legge to dråper APS Center.</li>
	<li>Plukke opp en mygg av et Ben med en pinsett og overføre den til APS overflaten på mikroskopet lysbildet.</li>
	<li>Nøye grep mosquito av thorax, med tang i venstre hånd, og rotere mosquito slik at siden ventrale er oppadgående.</li>
	<li>Hold kroppen jevn av thorax og forstå de to siste abdominal segmentene, med tang i høyre hånd, og trekk forsiktig. 
	Merk: De to siste abdominal segmentene vil skille fra magen og tilknyttede eggstokkene, Malpighian tubuli, baktarm og midttarmen; noen ganger ville avling skyve ute av magen. Hvis de ikke er fjernet, lukket tips av Tang inn i det lille hullet opprettet og fjerne gjenværende vev.</li>
	<li>Satt rett tang og plukke opp våren saksen. Skyv ett blad inn i hullet i magen til segmentet under thorax. Forsiktig og raskt kutte magen lengderetningen. 
	Merk: Når kuttet er gjort, magen bør begynne å utvide utover, men dette ikke kan skje umiddelbart.</li>
	<li>Fortsetter å gjøre andre kutt, som vil være en lateral kutt under thorax og under der det første kuttet endte. 
	Merk: Buk skal deretter åpne opp og dissociate fra thorax, med cuticle opp og fett organer side-omgitt APS. Denne bukveggen i kroppen er fett kroppen forberedelse for kultur i vitro.</li>
	<li>Løft fett organer fra APS løsningen med spissen av et par pinsett og overføre dem fra løsningen til 6-vel plate som inneholder APS ved romtemperatur. Tillate vevet til å hvile i ca 0,5 timer før fremme til fett kroppen kulturen.</li>
</ol> 4. Fett kroppen kultur <ol><li>ruge fett organer på APS ved romtemperatur for minst 0,5 h å equilibrate dem.</li>
	<li>Overføre fett organer med spissen av tang og løft dem ut av APS løsningen. Senk spissen til fett kroppen kultur medium. 
	Merk: Fett kroppen bør åpne på overflaten av mediet og flyter fritt. Fett kroppen kulturen utføres vanligvis i 96-brønnen plater, med 150-200 µL av medium i hver brønn. En godt kan passe opptil tre individuelle fett organer, og de er levedyktig på mer enn 12 h (upubliserte personlige resultater).</li>
	<li>Etter inkubasjonstiden, overføre fett organer fra mediet til 1.5-mL sentrifuge rør som inneholder riktige reagensene nedstrøms behandling. 
	Merk: Typisk analyser inkluderer qPCR 16 , 17 , 18 , 19, Western blotting 18 , 20, transcriptomics 26, Proteomikk 21 eller metabolomics 22.</li>
</ol>

<ol>
	<li>Benelli, G., Mehlhorn, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Declining+malaria,+rising+of+dengue+and+Zika+virus:+insights+for+mosquito+vector+control.">Declining malaria, rising of dengue and Zika virus: insights for mosquito vector control.</a> Parasitol Res. 115 (5), 1747-1754 (2016).</li><li>Newby, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+path+to+eradication:+a+progress+report+on+the+malaria-eliminating+countries.">The path to eradication: a progress report on the malaria-eliminating countries.</a> Lancet. 387 (10029), 1775-1784 (2016).</li><li>Clements, A. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> The Biology of Mosquitoes. 2, (1992).</li><li>Long, C. A., Zavala, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Malaria+vaccines+and+human+immune+responses.">Malaria vaccines and human immune responses.</a> Curr Opin Microbiol. 32, 96-102 (2016).</li><li>Mendis, K. N., David, P. H., Carter, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Human+immune+responses+against+sexual+stages+of+malaria+parasites:+considerations+for+malaria+vaccines.">Human immune responses against sexual stages of malaria parasites: considerations for malaria vaccines.</a> Int J Parasitol. 20 (4), 497-502 (1990).</li><li>Frings, S., Lindemann, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Odorant+response+of+isolated+olfactory+receptor+cells+is+blocked+by+amiloride.">Odorant response of isolated olfactory receptor cells is blocked by amiloride.</a> J Membr Biol. 105 (3), 233-243 (1988).</li><li>Froese, A., Szyszka, P., Menzel, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effect+of+GABAergic+inhibition+on+odorant+concentration+coding+in+mushroom+body+intrinsic+neurons+of+the+honeybee.">Effect of GABAergic inhibition on odorant concentration coding in mushroom body intrinsic neurons of the honeybee.</a> J Comp Physiol A Neuroethol Sens Neural Behav Physiol. 200 (3), 183-195 (2014).</li><li>Yewhalaw, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Multiple+insecticide+resistance:+an+impediment+to+insecticide-based+malaria+vector+control+program.">Multiple insecticide resistance: an impediment to insecticide-based malaria vector control program.</a> PLoS One. 6 (1), e16066 (2011).</li><li>Arrese, E. L., Soulages, J. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Insect+fat+body:+energy,+metabolism,+and+regulation.">Insect fat body: energy, metabolism, and regulation.</a> Annu Rev Entomol. 55, 207-225 (2010).</li><li>Raikhel, A. S., Deitsch, K. W., Sappington, T. W., Crampton, J. M., Beard, C. B., Louis, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> The Molecular Biology of Insect Disease Vectors: A Methods Manual. , 507-522 (1997).</li><li>Price, D. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+fat+body+transcriptomes+of+the+yellow+fever+mosquito+Aedes+aegypti,+pre-+and+post-+blood+meal.">The fat body transcriptomes of the yellow fever mosquito Aedes aegypti, pre- and post- blood meal.</a> PLoS One. 6 (7), e22573 (2011).</li><li>Hansen, I. A., Attardo, G. M., Rodriguez, S. D., Drake, L. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Four-way+regulation+of+mosquito+yolk+protein+precursor+genes+by+juvenile+hormone-,+ecdysone-,+nutrient-,+and+insulin-like+peptide+signaling+pathways.">Four-way regulation of mosquito yolk protein precursor genes by juvenile hormone-, ecdysone-, nutrient-, and insulin-like peptide signaling pathways.</a> Front Physiol. 5, 103 (2014).</li><li>Raikhel, A. S., Dhadialla, T. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Accumulation+of+yolk+proteins+in+insect+oocytes.">Accumulation of yolk proteins in insect oocytes.</a> Annu Rev Entomol. 37, 217-251 (1992).</li><li>Raikhel, A. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Molecular+biology+of+mosquito+vitellogenesis:+from+basic+studies+to+genetic+engineering+of+antipathogen+immunity.">Molecular biology of mosquito vitellogenesis: from basic studies to genetic engineering of antipathogen immunity.</a> Insect Biochem Mol Biol. 32 (10), 1275-1286 (2002).</li><li>Hansen, I. A., Attardo, G. M., Chandrasekar, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ch.+6.">Ch. 6.</a> Short Views on Insect Molecular Biology. , (2009).</li><li>Hansen, I. A., Attardo, G. M., Park, J. H., Peng, Q., Raikhel, A. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Target+of+rapamycin-mediated+amino+acid+signaling+in+mosquito+anautogeny.">Target of rapamycin-mediated amino acid signaling in mosquito anautogeny.</a> Proc Natl Acad Sci USA. 101 (29), 10626-10631 (2004).</li><li>Hansen, I. A., Attardo, G. M., Roy, S. G., Raikhel, A. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Target+of+rapamycin-dependent+activation+of+S6+kinase+is+a+central+step+in+the+transduction+of+nutritional+signals+during+egg+development+in+a+mosquito.">Target of rapamycin-dependent activation of S6 kinase is a central step in the transduction of nutritional signals during egg development in a mosquito.</a> J Biol Chem. 280 (21), 20565-20572 (2005).</li><li>Attardo, G. M., Hansen, I. A., Shiao, S. H., Raikhel, A. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Identification+of+two+cationic+amino+acid+transporters+required+for+nutritional+signaling+during+mosquito+reproduction.">Identification of two cationic amino acid transporters required for nutritional signaling during mosquito reproduction.</a> J Exp Biol. 209 (Pt 16), 3071-3078 (2006).</li><li>Carpenter, V. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=SLC7+amino+acid+transporters+of+the+yellow+fever+mosquito+Aedes+aegypti+and+their+role+in+fat+body+TOR+signaling+and+reproduction.">SLC7 amino acid transporters of the yellow fever mosquito Aedes aegypti and their role in fat body TOR signaling and reproduction.</a> J Insect Physiol. 58 (4), 513-522 (2012).</li><li>Attardo, G. M., Higgs, S., Klingler, K. A., Vanlandingham, D. L., Raikhel, A. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=RNA+interference-mediated+knockdown+of+a+GATA+factor+reveals+a+link+to+anautogeny+in+the+mosquito+Aedes+aegypti.">RNA interference-mediated knockdown of a GATA factor reveals a link to anautogeny in the mosquito Aedes aegypti.</a> Proc Natl Acad Sci USA. 100 (23), 13374-13379 (2003).</li><li>Hugo, L. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Proteomic+biomarkers+for+ageing+the+mosquito+Aedes+aegypti+to+determine+risk+of+pathogen+transmission.">Proteomic biomarkers for ageing the mosquito Aedes aegypti to determine risk of pathogen transmission.</a> PLoS One. 8 (3), e58656 (2013).</li><li>Price, D. P., Schilkey, F. D., Ulanov, A., Hansen, I. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Small+mosquitoes,+large+implications:+crowding+and+starvation+affects+gene+expression+and+nutrient+accumulation+in+Aedes+aegypti.">Small mosquitoes, large implications: crowding and starvation affects gene expression and nutrient accumulation in Aedes aegypti.</a> Parasit Vectors. 8, 252 (2015).</li><li>Uchida, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Induction+of+oogenesis+in+mosquitoes+(Diptera:+Culicidae)+by+infusion+of+the+hemocoel+with+amino+acids.">Induction of oogenesis in mosquitoes (Diptera: Culicidae) by infusion of the hemocoel with amino acids.</a> J Med Entomol. 38 (4), 572-575 (2001).</li><li>Uchida, K., Ohmori, D., Yamakura, F., Suzuki, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Changes+in+free+amino+acid+concentration+in+the+hemolymph+of+the+female+Culex+pipiens+pallens+(Diptera:+Culicidae),+after+a+blood+meal.">Changes in free amino acid concentration in the hemolymph of the female Culex pipiens pallens (Diptera: Culicidae), after a blood meal.</a> J Med Entomol. 27 (3), 302-308 (1990).</li><li>Hayes, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Determination+of+a+physiological+saline+solution+for+Aedes+aegypti+.(L).">Determination of a physiological saline solution for Aedes aegypti .(L).</a> J Econ Entomol. 46 (4), 624-627 (1953).</li><li>Price, D. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+Fat+Body+Transcriptomes+of+the+Yellow+Fever+Mosquito+Aedes+aegypti,+Pre-+and+Post+Blood+Meal.">The Fat Body Transcriptomes of the Yellow Fever Mosquito Aedes aegypti, Pre- and Post Blood Meal.</a> Plos One. 6 (7), e22573 (2011).</li><li>Chomczynski, P., Mackey, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Short+technical+reports.+Modification+of+the+TRI+reagent+procedure+for+isolation+of+RNA+from+polysaccharide-and+proteoglycan-rich+sources.">Short technical reports. Modification of the TRI reagent procedure for isolation of RNA from polysaccharide-and proteoglycan-rich sources.</a> Biotechniques. 19 (6), 942-945 (1995).</li><li>Fujiwara, T., Kazawa, T., Haupt, S. S., Kanzaki, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Postsynaptic+odorant+concentration+dependent+inhibition+controls+temporal+properties+of+spike+responses+of+projection+neurons+in+the+moth+antennal+lobe.">Postsynaptic odorant concentration dependent inhibition controls temporal properties of spike responses of projection neurons in the moth antennal lobe.</a> PLoS One. 9 (2), e89132 (2014).</li><li>Larsen, W. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Growth+in+an+insect+organ+culture.">Growth in an insect organ culture.</a> J Insect Physiol. 13 (4), 613-619 (1967).</li><li>Judy, K. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Isolation,+Structure,+and+Absolute+Configuration+of+a+New+Natural+Insect+Juvenile+Hormone+from+Manduca+sexta.">Isolation, Structure, and Absolute Configuration of a New Natural Insect Juvenile Hormone from Manduca sexta.</a> Proc Natl Acad Sci USA. 70 (5), 1509-1513 (1973).</li><li>Marks, E. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+action+of+hormones+in+insect+cell+and+organ+cultures.">The action of hormones in insect cell and organ cultures.</a> Gen Comp Endocrinol. 15 (2), 289-302 (1970).</li><li>Hughes, G. L., Pike, A. D., Xue, P., Rasgon, J. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Invasion+of+Wolbachia+into+Anopheles+and+Other+Insect+Germlines+in+an+Ex+vivo+Organ+Culture+System.">Invasion of Wolbachia into Anopheles and Other Insect Germlines in an Ex vivo Organ Culture System.</a> PLoS One. 7 (4), e36277 (2012).</li><li>Postlethwait, J. H., Handler, A. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Roles+of+Juvenile-Hormone+and+20-Hydroxy-Ecdysone+during+Vitellogenesis+in+Isolated+Abdomens+of+Drosophila+melanogaster.">Roles of Juvenile-Hormone and 20-Hydroxy-Ecdysone during Vitellogenesis in Isolated Abdomens of Drosophila melanogaster.</a> J Insect Physiol. 25 (5), 455-460 (1979).</li><li>Spielman, A., Gwadz, R. W., Anderson, W. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ecdysone-initiated+ovarian+development+in+mosquitoes.">Ecdysone-initiated ovarian development in mosquitoes.</a> J Insect Physiol. 17 (10), 1807-1814 (1971).</li><li>Boudko, D. Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Substrate+specificity+and+transport+mechanism+of+amino-acid+transceptor+Slimfast+from+Aedes+aegypti.">Substrate specificity and transport mechanism of amino-acid transceptor Slimfast from Aedes aegypti.</a> Nat Commun. 6, 8546 (2015).</li><li>Fleischer, J., Bumbalo, R., Bautze, V., Strotmann, J., Breer, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Expression+of+odorant+receptor+Olfr78+in+enteroendocrine+cells+of+the+colon.">Expression of odorant receptor Olfr78 in enteroendocrine cells of the colon.</a> Cell Tissue Res. 361 (3), 697-710 (2015).</li><li>Jones, K. H., Senft, J. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+improved+method+to+determine+cell+viability+by+simultaneous+staining+with+fluorescein+diacetate-propidium+iodide.">An improved method to determine cell viability by simultaneous staining with fluorescein diacetate-propidium iodide.</a> J Histochem Cytochem. 33 (1), 77-79 (1985).</li><li>Strober, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Trypan+blue+exclusion+test+of+cell+viability.">Trypan blue exclusion test of cell viability.</a> Curr Protoc Immunol. A3B, (2001).</li></ol>

Vi har ingenting å avsløre.

Insekt orgel kultur ble brukt mye å studere insekt endokrinologi, utvikling og metabolisme, så vel som å undersøke samhandlingen mellom bestemte organer og bakteriell symbionter29,30,31, 32,33,34. In vitro fett kroppen orgel kultur ble brukt spesielt til å studere aminosyre transport og regulering av eggeplomme protein produksjon i mygg og andre insekter16,17,35 , 36. under av vitellogenesis, mygg fett kroppen bruker en rekke høy spesifisitet aminosyre transportører importere blod måltid-avledet aminosyrer fra hemolymph å syntetisere store mengder eggeplomme proteiner12 ,19,35,36. Fett kroppen kultur var medvirkende til avgrensning av fett kroppen ernæringsmessige kravene i denne sammenheng18.
Kvaliteten på utgangsmaterialet, kvinnelige mygg, er avgjørende for suksessen til disse eksperimentene. Larvene oppvokst i under overfylt forhold og matet på høy-næringsstoffer dietter vanligvis gi de beste resultatene. Det er noen viktige variabler å vurdere når etablere mygg fett kroppen kultur forhold i laboratoriet i eksperimentell design. Vi viste tidligere studier som fett kroppen genuttrykk varierer betydelig avhengig av personlige livshistorie og ernæringsmessig status mygg11,22. Mygg kultur betingelsene skal uniform å redusere variasjon i størrelsen og ernæringsmessige reserver av eksperimentelle myggen. I tillegg bør skal utføre disseksjoner trenes å sikre rask og nøyaktig disseksjoner med konsistente resultater. Cellen levedyktighet i isolerte fett kroppen kan kontrolleres ved hjelp av ulike flekker metoder37,38.
Eksperimentell design av et fat kroppen kultur eksperiment bør ta i betraktning antall dissections i en gitt tidsperiode. Når store mengder fett organer, kan disseksjon økter eller flere dissectors være nødvendig. Det er et bredt spekter av framtidige applikasjoner for i vitro fett kroppen kultur i mygg og andre insekter. Det vil være spesielt nyttig for testing av potensielle narkotika kandidater for insekt kontroll. Bruk av transgene teknikker i insekter å uttrykke spesifikke reporter proteiner i fett kroppen trophocytes vil åpne opp nye metoder å utvikle kraftige bioassay for å studere fett kroppen fysiologi.

Myggen er vektorer av ødeleggende menneskelige sykdommer, inkludert malaria, denguefeber, chikungunya og Zika1,2,3. Til tross for intens internasjonal innsats til å dempe disse sykdommene og styre sykdom-overføre mygg befolkninger, er epidemic utbrudd av mygg-sykdommer fortsatt vanlig, særlig i utviklingsland. Effektive vaksiner mot mange av disse sykdommene er utilgjengelig eller begrenset effekt4,5. Den mest effektive måten å hindre utbrudd er å kontrollere mygg befolkninger, hovedsakelig gjennom bruk av insektmiddel behandlinger. Insektmiddel motstand har imidlertid utviklet mange mygg bestander og bli et vanlig problem rundt i verden6,7,8. Studiet av mygg fysiologi er avgjørende for utviklingen av romanen verktøy og strategier for å kontrollere sykdommen.
Mygg fett kroppen spiller en sentral rolle i næringsstoffer lagring, metabolske homeostase, reproduksjon og xenobiotic oval katabolisme9,10,11,12. Det er det hovedlageret orgelet for triglyserider, glykogen og aminosyrer i form av lagring proteiner. Det fungerer også som plassering for syntese for de fleste hemolymph proteiner og metabolitter. I mygg er kroppen fett den eneste kilden til eggeplomme protein produksjon som oppstår i kvinner når de tar en blod måltid13,14.
Den viktigste celle typen fett kroppen er store, polyploid trophocyte eller adipocyte3,9,10,12. Fett kroppens vev er organisert i fliker eller hylser og kan finnes i alle kroppsdeler av mosquito, med den største delen ligger i magen, hvor store lobes av fett kroppen er festet til kroppen bukveggen.
Presenteres her mygg fett kroppen kultur-systemet ble utviklet i ' 70s og er et kraftig verktøy for å studere fett kroppen fysiologi10, spesielt i kombinasjon med gjeldende analyseteknologier. Grunnlaget for denne teknikken er basert på isolasjon av abdominal kroppen veggene og tilknyttede fett kroppsvev. Abdominal cuticle hydrofobe natur gjør at den flyter på overflaten av den kultur mediet, med tilknyttede lobes av abdominal fett kroppen nedsenket. Den voksne og tracheolar struktur er vedlikeholdt, sikre oksygenering av kultivert vev. Heretter, vil vi referere til disse forberedelsene som "fett organer." Isolert fett kroppen være levedyktig på mer enn 12 h når ruges i passende medium (upubliserte resultater). Fett kroppen kultur er et verdifullt verktøy som har tatt en rekke spørsmål om fett kroppen endokrinologi og fysiologi9,10,12,15,16, 17.
Kulturperler fett organer kan utsettes for ulike eksperimentelle og kontroll behandlinger, tidspunktet som kan være avgjøres av utprøver. På slutten av inkubasjonstiden, kan fett organer være samlet inn og behandlet for nedstrøms analyser, blant annet qPCR16,17,18,19, Western blotting18 ,20, Proteomikk21eller metabolomics22. Eksperimenter kan utføres på forskjellige skalaer, fra personlige fett kroppene til grupper av hundrevis som kan kultivert sammen.
Representant resultatene med her var avledet fra fett organer kultivert i nærvær av aminosyrer og steroid hormon 20-hydroxy isoinokosterone simulere blod måltid aktivering av vitellogenesis16,17, 23,24. Vi analysert og forhold til differensial genuttrykk av ikke-aktivert versus aktivert fett kroppen via neste generasjons sekvensering analyse.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" width="508">
	<tbody>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:64px;">Scissors&#160;</td>
			<td style="width:192px;">Fiskars</td>
			<td style="width:143px;">83872</td>
			<td style="width:111px;"></td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:64px;">Fly pad</td>
			<td style="width:192px;">Genesee Scientific</td>
			<td style="width:143px;">789060</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="127">
			<td height="127" style="height:127px;width:64px;">Battery-powered aspirator w/ collection vial</td>
			<td style="width:192px;">Hausherrs Machine Works, Inc.</td>
			<td style="width:143px;">3740-01-210-2368</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="43">
			<td height="43" style="height:43px;width:64px;">Fine tip forceps</td>
			<td style="width:192px;">World Precision Instruments, Inc.&#160;</td>
			<td style="width:143px;">500085</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="64">
			<td height="64" style="height:64px;width:64px;">Light microscope&#160;</td>
			<td style="width:192px;">Leica Microsystems</td>
			<td style="width:143px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="43">
			<td height="43" style="height:43px;width:64px;">96 well plate&#160;</td>
			<td style="width:192px;">Sigma</td>
			<td style="width:143px;">CL S3383</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:64px;">Sucrose</td>
			<td style="width:192px;">Sigma</td>
			<td style="width:143px;">S9378</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;">Alanine</td>
			<td style="width:192px;">Sigma</td>
			<td>A7627</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;">Arginine</td>
			<td style="width:192px;">Sigma</td>
			<td>A5006</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;">Asparagine</td>
			<td style="width:192px;">Sigma</td>
			<td>A0884</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;">Aspartic Acid</td>
			<td style="width:192px;">Sigma</td>
			<td>A9256</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;">Cysteine</td>
			<td style="width:192px;">Sigma</td>
			<td>W326305</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;">Glutamic Acid</td>
			<td style="width:192px;">Sigma</td>
			<td>G1251</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;">Glutamine</td>
			<td style="width:192px;">Sigma</td>
			<td>G3126</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;">Glycine</td>
			<td style="width:192px;">Sigma</td>
			<td>G2879</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;">Histidine</td>
			<td style="width:192px;">Sigma</td>
			<td>H6034</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;">Isoleucine</td>
			<td style="width:192px;">Sigma</td>
			<td>I2752</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;">Lysine</td>
			<td style="width:192px;">Sigma</td>
			<td>L5501</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;">Leucine</td>
			<td style="width:192px;">Sigma</td>
			<td>L8000</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;">Phenylalanine</td>
			<td style="width:192px;">Sigma</td>
			<td>P2126</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;">Proline</td>
			<td style="width:192px;">Sigma</td>
			<td>P0380</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;">Serine</td>
			<td style="width:192px;">Sigma</td>
			<td>S4500</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;">Threonine</td>
			<td style="width:192px;">Sigma</td>
			<td>T8625</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;">Tryptophan</td>
			<td style="width:192px;">Sigma</td>
			<td>T0254</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;">Tyrosine</td>
			<td style="width:192px;">Sigma</td>
			<td>T3754</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;">Valine</td>
			<td style="width:192px;">Sigma</td>
			<td>V0500</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;">Methionine</td>
			<td style="width:192px;">Sigma</td>
			<td>M9625</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:64px;">NaCl</td>
			<td style="width:192px;">Sigma</td>
			<td>S7653</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:64px;">KCl</td>
			<td style="width:192px;">Sigma</td>
			<td>P9333</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="45">
			<td height="45" style="height:45px;width:64px;">MgCl2-6H2O</td>
			<td style="width:192px;">Sigma</td>
			<td>M2670</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="23">
			<td height="23" style="height:23px;width:64px;">NaHCO3</td>
			<td style="width:192px;">Sigma</td>
			<td>S5761</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="45">
			<td height="45" style="height:45px;width:64px;">CaCl2-2H2O</td>
			<td style="width:192px;">Sigma</td>
			<td>C8106</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="41">
			<td height="41" style="height:41px;width:64px;">Tris pH8.0&#160;</td>
			<td style="width:192px;">Sigma</td>
			<td>T1503</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:64px;">EDTA</td>
			<td style="width:192px;">Sigma</td>
			<td>E6758</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="23">
			<td height="23" style="height:23px;width:64px;">ddH2O</td>
			<td style="width:192px;">Sigma</td>
			<td>W4502</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

fat body organ culture system in aedes aegypti, a vector of zika virus

Insekt fett kroppen spiller en sentral rolle i insekt metabolisme og næringsstoffer lagring, speiling funksjonene i lever og fettvev i virveldyr. Insekt fett kroppens vev er vanligvis distribuert gjennom insekt kroppen. Men er det ofte konsentrert i magen og festet til kroppen bukveggen.
Mygg fett kroppen er den eneste kilden til eggeplomme proteiner, som er kritiske for eggproduksjon. Derfor kultur i vitro mygg fett kroppsvev representerer en betydelig system for studier av mygg fysiologi, metabolisme, og til slutt, eggproduksjon. Fett kroppen kultur prosessen begynner med utarbeidelse av løsninger og reagenser, inkludert aminosyre lager løsninger, Aedes fysiologisk salt lager saltløsning (APS), kalsium lagerløsning og fett kroppen kultur medium. Prosessen fortsetter med fett kroppen disseksjon, etterfulgt av en eksperimentell behandling. Etter behandling, kan en rekke ulike analyser utføres, og inkludert RNA sekvensering (RNA-Seq), qPCR, Western blots, Proteomikk og metabolomics.
I vårt eksempel eksperiment viser vi protokollen gjennom excision og kultur av fett organer fra gulfeber mosquito, Aedes aegypti, en rektor vektor av arboviruses inkludert dengue, chikungunya og Zika. RNA fra fett kroppen kultivert under en fysiologisk tilstand som kalles upregulate eggeplomme proteiner versus kontrollen ble gjenstand RNA-Seq analyse å demonstrere den potensielle nytten av denne prosedyren for undersøkelser av genuttrykk.

Som et eksempel, vi utført et fett kroppen kultur eksperiment og stimulert isolert fett organer av rugende dem på en løsning som inneholder en balansert blanding av alle tjue naturlig forekommende aminosyrer og insekt steroid hormon 20-hydroxy isoinokosterone (10 µM) 6 h . Som en kontroll, ble fett organer inkubert på APS for en lik mengde tid.
Etter inkubasjon ble den totale RNA isolert med en tri-reagens27 følge instruksjonene fra produsenten. Kvaliteten og kvantiteten av utdraget RNA prøver ble vurdert med et spektrofotometer, fluorometric kvantifisering og agarose gel geleelektroforese. RNA sekvensering biblioteker ble generert ved hjelp av 4 µg av totalt og kvantifisert bruker to ulike teknikker. Deretter ble bibliotekene sendt til en kommersiell leverandør for sammenkoblede slutten-sekvensering.
Resultatet av dette eksperimentet er vist i tabell 6. Gener viser sterkeste transcriptional svaret aminosyre og 20-hydroxyecdysone var hovedsakelig eggeplomme protein gener, som er i samsvar med tidligere resultater11.
Figur 1 viser en varmekart som angir gene expression nivåene av 1,256 ulikt uttrykt gener fra kulturperler fett kroppen etter to ulike behandlinger.
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/55508/55508fig1.jpg"> 
Figur 1 . Varmekartet av gener som er uttrykt i fett kroppen kultur. Varmekartet ble beregnet basert på antall bestemte transkripsjoner for hver genet i ulike bibliotekene bruker heatmap pakken28 som en del av R programvaremiljø. Mørkere skygge representerer høyere genuttrykk. 1,256 gener med statistisk signifikant variasjon i uttrykket (Q-verdiene &#60; 0,05) vises. Gener er sortert i henhold til tilgangsnivåene gjennomsnitt uttrykk, angitt av dendrogram til venstre (ikke i deres phylogenetic relasjoner). Merk det høye antallet gener med opp - eller ned-regulert uttrykk etter stimulering med aminosyrer (AA) og 20-hydroxyecdysone (20E). APS = Aedes fysiologiske saline. Se ekstra fil 1 en liste av gener og deres relative uttrykk. <a href="//ecsource.jove.com/files/ftp_upload/55508/55508fig1large.jpg" target="_blank">Klikk her for å se en større versjon av dette tallet.</a>
<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>Aminosyre</td>
			<td>Molekylvekt g/mol</td>
			<td>mM konsentrasjon</td>
			<td>mg per Liter</td>
			<td>mg for 300 mL volum</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Alanin</td>
			<td>89.1</td>
			<td>26.68</td>
			<td>2377.19</td>
			<td>713.16</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Arginin</td>
			<td>174.2</td>
			<td>26.68</td>
			<td>4647.66</td>
			<td>1394.3</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Asparagine</td>
			<td>150.1</td>
			<td>26.68</td>
			<td>4004.67</td>
			<td>1201.4</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Aspartic syre</td>
			<td>133</td>
			<td>26.68</td>
			<td>3548.44</td>
			<td>1064.53</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cystein</td>
			<td>121.16</td>
			<td>10.68</td>
			<td>1293.99</td>
			<td>388.2</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Glutaminsyre</td>
			<td>147.1</td>
			<td>26.68</td>
			<td>3924.63</td>
			<td>1177.39</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Glutamin</td>
			<td>146</td>
			<td>26.68</td>
			<td>3895.28</td>
			<td>1168.58</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Glysin</td>
			<td>75</td>
			<td>53.32</td>
			<td>3999</td>
			<td>1199.7</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Histidin</td>
			<td>155.16</td>
			<td>80</td>
			<td>12412.8</td>
			<td>3723.84</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Isoleucin</td>
			<td>131</td>
			<td>10.68</td>
			<td>1399.08</td>
			<td>419.72</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Lycine</td>
			<td>183</td>
			<td>26.68</td>
			<td>4882.44</td>
			<td>1464.73</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Leucine</td>
			<td>131</td>
			<td>26.68</td>
			<td>3495.08</td>
			<td>1048.52</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fenylalanin</td>
			<td>165</td>
			<td>10.68</td>
			<td>1762.2</td>
			<td>528.66</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>ProLine</td>
			<td>115</td>
			<td>26.68</td>
			<td>3068.2</td>
			<td>920.46</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Serine</td>
			<td>105</td>
			<td>53.32</td>
			<td>5598.6</td>
			<td>1679.58</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Threonin</td>
			<td>119</td>
			<td>10.68</td>
			<td>1270.92</td>
			<td>381.28</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tryptofan</td>
			<td>204</td>
			<td>10.68</td>
			<td>2178.72</td>
			<td>653.62</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tyrosin</td>
			<td>181</td>
			<td>5,32</td>
			<td>962.92</td>
			<td>288.88</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Valin</td>
			<td>117</td>
			<td>10.68</td>
			<td>1249.56</td>
			<td>374.87</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Metionin</td>
			<td>149</td>
			<td>10.68</td>
			<td>1591.32</td>
			<td>477.4</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>
Tabell 1. 4 x aminosyre lagerløsning.
<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>Komponent</td>
			<td>Vekt i gram lagt til 50 ml ddH2O</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>NaCl</td>
			<td>8.0 g</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>KCl</td>
			<td>0.074 g</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MgCl2-6 H2O</td>
			<td>0.120 g</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>NaHCO3</td>
			<td>0.0250 g</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>
Tabell 2. 20 X salt lagerløsning.
<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>Komponent</td>
			<td>Vekt i gram lagt til 100 ml ddH2O</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CaCl2-2 H2O</td>
			<td>0,90 g</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>
<stron></stron>g > tabell 3. 50 x kalsium lagerløsning.
<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>Komponent</td>
			<td>Konsentrasjonen av lagerløsning</td>
			<td>Volum lager 100 ml bufferen</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tris pH8.0</td>
			<td>1 M</td>
			<td>5 mL</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>EDTA</td>
			<td>0,25 M</td>
			<td>2 mL</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>NaCl</td>
			<td>NA</td>
			<td>0,3 g</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>ddH2O</td>
			<td>NA</td>
			<td>til 100 mL (~ 93 mL)</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>
Tabell 4. Tris buffer.
<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>Komponent</td>
			<td>Volum lager for 200 ml</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Aminosyren lagerløsning</td>
			<td>150 mL</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Salt lager løsning</td>
			<td>10 mL</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Kalsium lagerløsning</td>
			<td>4 mL</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>TES Buffer</td>
			<td>10 mL</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>ddH2O</td>
			<td>26 mL</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>
Tabell 5. Fett kroppen kultur medium.
<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>Merknad</td>
			<td>Gene beskrivelse</td>
			<td>Kaste endring</td>
			<td>P-verdien</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>AAEL006138</td>
			<td>Vitellogenin-B</td>
			<td>3443</td>
			<td>2.52E-112</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>AAEL006126</td>
			<td>Vitellogenin-C</td>
			<td>2795</td>
			<td>8.64E-91</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>AAEL006563</td>
			<td>vitellogenic karboksypeptidase</td>
			<td>1002</td>
			<td>2.17E-119</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>AAEL010434</td>
			<td>Vitellogenin-A</td>
			<td>220</td>
			<td>1.14E-27</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>AAEL006542</td>
			<td>vitellogenic karboksypeptidase</td>
			<td>185</td>
			<td>2.14E-65</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>AAEL012678</td>
			<td>AAEL003006-PA [Aedes aegypti](65%)</td>
			<td>96</td>
			<td>4.00E-70</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>AAEL000080</td>
			<td>hypotetisk protein</td>
			<td>82</td>
			<td>6.69E-188</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>AAEL015312</td>
			<td>Vitellogenic katepsin B</td>
			<td>77</td>
			<td>1.27E-15</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>AAEL009588</td>
			<td>kjernefysisk reseptor 3</td>
			<td>75</td>
			<td>4.58E-56</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>AAEL010529</td>
			<td>hypotetisk protein</td>
			<td>66</td>
			<td>1.32E-29</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>
Tabell 6. Eksperimentelle resultater.
Ekstra fil 1. <a href="//ecsource.jove.com/files/ftp_upload/55508/Table_of_genes_for_figure_1.xlsx" target="_blank">Klikk her for å laste ned denne filen.</a>

Watch this Scientific Journal Video about Fat Body Organ Culture System in Aedes Aegypti, a Vector of Zika Virus at JoVE.com

Fat Body Organ Culture System in Aedes Aegypti, a Vector of Zika Virus

Kroppen fett er det sentrale metabolsk orgelet i insekter. Vi presenterer et levende orgel kultur system som gjør det mulig å studere reaksjoner av isolerte fett kroppsvev på ulike stimuli.

Fett kroppen Organ kultur-systemet i Aedes Aegypti, en vektor av Zika Virus

The insect fat body plays a central role in insect metabolism and nutrient storage, mirroring functions of the liver and fat tissue in vertebrates. Insect ...

Research

JoVE Journal

Biology

Fat Body Organ Culture System in Aedes Aegypti, a Vector of Zika Virus

Injection of dsRNA into Female A. aegypti Mosquitos

Reverse genetic approaches have proven extremely useful for determining  which genes underly resistance to vector pathogens in mosquitoes.  This video ...

Microinjection of A. aegypti Embryos to Obtain Transgenic Mosquitoes

In this video, Nijole Jasinskiene demonstrates the methodology employed to generate transgenic Aedes aegypti mosquitoes, which are vectors for dengue ...

Primary Culture and Plasmid Electroporation of the Murine Organ of Corti. 

In all mammals, the sensory epithelium for audition is located along the spiraling organ of Corti that resides within the conch shaped cochlea of the ...

RNAi-mediated Gene Knockdown and In Vivo Diuresis Assay in Adult Female Aedes aegypti Mosquitoes

RNAi-mediated Gene Knockdown and In Vivo Diuresis Assay in Adult Female Aedes aegypti Mosquitoes

RNAi-mediert Gene knockdown og<em&gt; In Vivo</em&gt; Diurese Assay i voksen hunn<em&gt; Aedes aegypti</em&gt; Mygg

This video protocol demonstrates an effective technique to knockdown a particular gene in an insect and conduct a novel bioassay to measure excretion ...

Mouse Embryonic Development in a Serum-free Whole Embryo Culture System

Mus embryoutvikling i en Serum-fri Whole Embryo Kultur System

Mid-gestation stage mouse embryos were cultured utilizing a serum-free culture medium prepared from commercially available stem cell media supplements in ...

Physiological Recordings and RNA Sequencing of the Gustatory Appendages of the Yellow-fever Mosquito Aedes aegypti

Physiological Recordings and RNA Sequencing of the Gustatory Appendages of the Yellow-fever Mosquito Aedes aegypti

Fysiologiske Recordings og RNA sekvensering av Gustatory vedheng av Yellow-feber Mosquito<em&gt; Aedes aegypti</em

Electrophysiological recording of action potentials from sensory neurons of mosquitoes provides investigators a glimpse into the chemical perception of ...

Maintaining Aedes aegypti Mosquitoes Infected with Wolbachia

Maintaining Aedes aegypti Mosquitoes Infected with Wolbachia

Opprettholde Aedes aegypti mygg infisert med Wolbachia

Aedes aegypti mosquitoes experimentally infected with Wolbachia are being utilized in programs to control the spread of arboviruses such as dengue, ...

Improved Fecundity and Fertility Assay for Aedes aegypti using 24 Well Tissue Culture Plates (EAgaL Plates)

Improved Fecundity and Fertility Assay for Aedes aegypti using 24 Well Tissue Culture Plates EAgaL Plates

Forbedret fecundity og ufrivillig analyse for Aedes aegypti ved hjelp av 24 Brønn vev kulturplater (EAgaL plater)

Mosquitoes represent a significant public health problem as vectors of various pathogens. For those studies that require an assessment of mosquito fitness ...

Preparing Irradiated and Marked Male Aedes aegypti Mosquitoes for Release in an Operational Sterile Insect Technique Program

Preparing Irradiated and Marked Male Aedes aegypti Mosquitoes for Release in an Operational Sterile Insect Technique Program

Forbereder bestrålte og merkede mannlige Aedes aegypti mygg for utgivelse i et operativt sterilt insektteknikkprogram

The control of such human diseases as dengue, Zika, and chikungunya relies on the control of their vector, the Aedes aegypti mosquito, because there is no ...

Using the Fluorescent Dye, Rhodamine B, to Study Mating Competitiveness in Male Aedes aegypti Mosquitoes

Using the Fluorescent Dye, Rhodamine B, to Study Mating Competitiveness in Male Aedes aegypti Mosquitoes

Bruke fluorescerende fargestoff, Rhodamine B, for å studere parring konkurranseevne i mannlige Aedes aegypti mygg

The success of sterile or incompatible insect technique-based population suppression programs depends on the ability of released males to compete for ...