Name: fat body organ culture system in aedes aegypti, a vector of zika virus
Uploaded: 2017-08-19T13:00:00
Duration: 6 min 18 s
Description: Watch this Scientific Journal Video about Fat Body Organ Culture System in Aedes Aegypti, a Vector of Zika Virus at JoVE.com

Denna forskning stöds av NIH grant #SC1AI109055, de 2014 NMSU HHMI grant #52008103 och NSF PGR bevilja #1238731. Vi tackar deltagarna för NMSU våren 2015 BIOL302 molekylära metoder klassen och Lavesh Bhatia för deras tekniska support med fett kroppen kultur experimenten.

1. förbereda lösningar och reagenser <ol><li>aminosyra stamlösning <ol><li>Förbered a 4 X aminosyra stamlösning 23 , 24 genom vägning och att lägga till 20 olika aminosyror i en Erlenmeyerkolv enligt de koncentrationer som anges i tabell 1. 
		Obs: I vissa fall amino acid(s) kan uteslutas från lösningen och ersättas med lika molar mängder mannitol att upprätthålla en lika koncentration av osmolytes.</li>
		<li>Lägg till lämplig mängd ddH 2 O att producera önskad volym lösning.</li>
		<li>Att säkerställa att aminosyrorna har helt upplöst, värm försiktigt under omrörning kontinuerligt tills vätskan är helt klar, det tar på en gul färgton. 
		Obs: Det kan vara nödvändigt att minska pH till 6 genom att lägga till HCl för att tillåta att vissa av de mer hydrofoba aminosyrorna att upplösa.</li>
		<li>Alikvot lösningen och sterila-filter med en spruta filter med ett 0,2 µm porstorlek.</li>
		<li>Förvaras i slutna behållare vid-20 ° C i upp till 6 månader.</li>
	</ol></li> <li>APS Obs: se 25.
	<ol><li>För 20 X salt stamlösning, kombinera salter som anges i tabell 2 i 50 mL vatten. Rör om tills helt upplöst. 
		Obs: Det kan vara nödvändigt att något värma lösningen för att fullständigt lösa salterna.</li>
		<li>Steril-filter med en spruta filter med ett 0,2 µm porstorlek och förvara lösningen i en 50 mL tub på -20 ° C.</li>
	</ol></li> <li>Kalcium stamlösning <ol><li>för 50 X kalcium stamlösning, lägga till 0,90 g kalciumklorid i 100 mL vatten (tabell 3), rör om tills helt upplöst.</li>
		<li>Steril-filter med hjälp av en spruta med porstorlek 0,2 µm, alikvotens filtrera lösningen till 50 mL rör och förvaras vid -20 ° C.</li>
	</ol></li> <li>Tris buffert (pH 7,4) <ol><li>för Tris buffert, kombinera salt och lösningar som anges i tabell 4 och Lägg till ddH 2 O upp till 100 mL.</li>
		<li>Steril-filter med hjälp av en spruta filtrera med 0,2 µm porstorlek och alikvot lösningen till 50 mL tuber, förvara i rumstemperatur.</li>
	</ol></li> <li>Fett kroppen odlingsmedium <ol><li>för att förbereda fett kroppen odlingsmediet, förbereda alla lösningar ovan.</li>
		<li>Kombinera dem enligt volymerna i tabell 5 att göra 200 mL fett kroppen odlingsmedium.</li>
		<li>Justera pH-värdet till 7,2 med NaOH eller HCl.</li>
		<li>Steril-filter om lösningen med en spruta filter med porstorlek 0,2 µm.</li>
		<li>Dela upp lösningen i 15 mL alikvoter och förvaras vid-20 ° C i upp till 6 månader.</li>
	</ol></li></ol> 2. Förbereda för dissektion <ol><li>förbereda ett stereomikroskop (10-20 x förstoring) med belysning och lägga ut två ultrafina pincett och en mikro dissektion sax.</li>
	<li>Förbereda alla lösningar nödvändiga för experimentet. Tina upp fett kroppen odlingssubstratet rumstemperatur. 
	Obs: Precipitants kan upplösas genom att försiktigt värma lösningen på högst 30 ° C.</li>
	<li>Med en insugningsventil, samla vuxna kvinnliga myggor (3-7 dagar efter uppkomst) och söva dem med koldioxid eller ice. 
	Obs: En gång sövda, myggor bör hållas under CO 2 kortast tid möjligt, inte överstiger 20 min. Alternativt, myggor kan vara sövda på is och hållas för cirka 30 min.</li>
	<li>Förbereda en 6-well platta med 3 mL APS per brunn.</li>
</ol> 3. Fett kroppen dissektion <ol><li>fokusera dissekera stereomikroskopet och justera stolen till en bekväm höjd.</li>
	<li>Placera en konkav objektglas på Mikroskop yta och tillsätt två droppar APS till stadens.</li>
	<li>Plocka upp en mygga av ett ben med hjälp av en pincett och överföra det till APS ytan på objektglas.</li>
	<li>Försiktigt grepp mygga av bröstkorgen, med tången i vänster hand och rotera Myggan så att den ventrala sidan är uppåt.</li>
	<li>Medan du håller kroppen stadig av bröstkorgen, förstå de två sista buk segment, med hjälp av tången i höger hand och dra försiktigt. 
	Obs: De två sista buk segment kommer att separera från buken och den bifogade äggstockarna, Malpighian tubuli, hindgut och midgut; grödan kommer ibland glida ut ur buken. Om de inte har avlägsnats, infoga stängda tips på tången i det lilla hålet som skapade och ta bort återstående vävnader.</li>
	<li>Upphäva rätt tången och plocka upp våren saxen. Skjut ett blad i hålet i buken upp till segmentet nedanför bröstkorgen. Snabbt och försiktigt skär buken på längden. 
	Obs: När snittet gjorts, buken bör börja expandera utåt, om detta inte kan inträffa omedelbart.</li>
	<li>Fortsätt att göra andra snittet, som kommer att vara ett laterala snitt nedanför bröstkorgen och något nedanför där det första snittet slutade. 
	Obs: Buken bör sedan öppna upp och ta avstånd från bröstkorgen, med nagelbanden upp och fett organ sida-inbäddat i APS. Denna kropp bukväggen är fett kroppen förberedelserna för in vitro- kultur.</li>
	<li>Lyft de fet organ från APS lösningen med spetsen av ett par pincett och överföra dem från lösningen till 6-väl plattan som innehåller APS i rumstemperatur. Tillåta vävnad vila i cirka 0,5 h innan den fett kroppen kultur.</li>
</ol> 4. Fett kroppen kultur <ol><li>Inkubera fett organ på APS i rumstemperatur i minst 0,5 h temperera dem.</li>
	<li>Överför de fet organ använda spetsen på tången och lyfta försiktigt dem ur APS lösningen. Lägre spetsen i fett kroppen odlingsmediet. 
	Obs: Fett kroppen bör öppna på ytan av mediet och flyta fritt. Den fet kroppen kulturen utförs vanligtvis i 96 brunnar-plattor, med 150-200 µL av medium i varje brunn. En väl ryms upp till tre enskilda fett organ, och de är lönsamt för mer än 12 h (opublicerade personliga resultat).</li>
	<li>Efter inkubationstiden överföra de fet organ från mediet i 1,5 mL centrifugrör som innehåller lämpliga reagenser för nedströms behandling. 
	Observera: Typiska analyser ingår qPCR 16 , 17 , 18 , 19, Western blotting 18 , 20, transkriptomik 26, proteomik 21 eller metabolomik 22.</li>
</ol>

<ol>
	<li>Benelli, G., Mehlhorn, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Declining+malaria,+rising+of+dengue+and+Zika+virus:+insights+for+mosquito+vector+control.">Declining malaria, rising of dengue and Zika virus: insights for mosquito vector control.</a> Parasitol Res. 115 (5), 1747-1754 (2016).</li><li>Newby, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+path+to+eradication:+a+progress+report+on+the+malaria-eliminating+countries.">The path to eradication: a progress report on the malaria-eliminating countries.</a> Lancet. 387 (10029), 1775-1784 (2016).</li><li>Clements, A. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> The Biology of Mosquitoes. 2, (1992).</li><li>Long, C. A., Zavala, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Malaria+vaccines+and+human+immune+responses.">Malaria vaccines and human immune responses.</a> Curr Opin Microbiol. 32, 96-102 (2016).</li><li>Mendis, K. N., David, P. H., Carter, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Human+immune+responses+against+sexual+stages+of+malaria+parasites:+considerations+for+malaria+vaccines.">Human immune responses against sexual stages of malaria parasites: considerations for malaria vaccines.</a> Int J Parasitol. 20 (4), 497-502 (1990).</li><li>Frings, S., Lindemann, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Odorant+response+of+isolated+olfactory+receptor+cells+is+blocked+by+amiloride.">Odorant response of isolated olfactory receptor cells is blocked by amiloride.</a> J Membr Biol. 105 (3), 233-243 (1988).</li><li>Froese, A., Szyszka, P., Menzel, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effect+of+GABAergic+inhibition+on+odorant+concentration+coding+in+mushroom+body+intrinsic+neurons+of+the+honeybee.">Effect of GABAergic inhibition on odorant concentration coding in mushroom body intrinsic neurons of the honeybee.</a> J Comp Physiol A Neuroethol Sens Neural Behav Physiol. 200 (3), 183-195 (2014).</li><li>Yewhalaw, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Multiple+insecticide+resistance:+an+impediment+to+insecticide-based+malaria+vector+control+program.">Multiple insecticide resistance: an impediment to insecticide-based malaria vector control program.</a> PLoS One. 6 (1), e16066 (2011).</li><li>Arrese, E. L., Soulages, J. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Insect+fat+body:+energy,+metabolism,+and+regulation.">Insect fat body: energy, metabolism, and regulation.</a> Annu Rev Entomol. 55, 207-225 (2010).</li><li>Raikhel, A. S., Deitsch, K. W., Sappington, T. W., Crampton, J. M., Beard, C. B., Louis, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> The Molecular Biology of Insect Disease Vectors: A Methods Manual. , 507-522 (1997).</li><li>Price, D. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+fat+body+transcriptomes+of+the+yellow+fever+mosquito+Aedes+aegypti,+pre-+and+post-+blood+meal.">The fat body transcriptomes of the yellow fever mosquito Aedes aegypti, pre- and post- blood meal.</a> PLoS One. 6 (7), e22573 (2011).</li><li>Hansen, I. A., Attardo, G. M., Rodriguez, S. D., Drake, L. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Four-way+regulation+of+mosquito+yolk+protein+precursor+genes+by+juvenile+hormone-,+ecdysone-,+nutrient-,+and+insulin-like+peptide+signaling+pathways.">Four-way regulation of mosquito yolk protein precursor genes by juvenile hormone-, ecdysone-, nutrient-, and insulin-like peptide signaling pathways.</a> Front Physiol. 5, 103 (2014).</li><li>Raikhel, A. S., Dhadialla, T. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Accumulation+of+yolk+proteins+in+insect+oocytes.">Accumulation of yolk proteins in insect oocytes.</a> Annu Rev Entomol. 37, 217-251 (1992).</li><li>Raikhel, A. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Molecular+biology+of+mosquito+vitellogenesis:+from+basic+studies+to+genetic+engineering+of+antipathogen+immunity.">Molecular biology of mosquito vitellogenesis: from basic studies to genetic engineering of antipathogen immunity.</a> Insect Biochem Mol Biol. 32 (10), 1275-1286 (2002).</li><li>Hansen, I. A., Attardo, G. M., Chandrasekar, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ch.+6.">Ch. 6.</a> Short Views on Insect Molecular Biology. , (2009).</li><li>Hansen, I. A., Attardo, G. M., Park, J. H., Peng, Q., Raikhel, A. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Target+of+rapamycin-mediated+amino+acid+signaling+in+mosquito+anautogeny.">Target of rapamycin-mediated amino acid signaling in mosquito anautogeny.</a> Proc Natl Acad Sci USA. 101 (29), 10626-10631 (2004).</li><li>Hansen, I. A., Attardo, G. M., Roy, S. G., Raikhel, A. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Target+of+rapamycin-dependent+activation+of+S6+kinase+is+a+central+step+in+the+transduction+of+nutritional+signals+during+egg+development+in+a+mosquito.">Target of rapamycin-dependent activation of S6 kinase is a central step in the transduction of nutritional signals during egg development in a mosquito.</a> J Biol Chem. 280 (21), 20565-20572 (2005).</li><li>Attardo, G. M., Hansen, I. A., Shiao, S. H., Raikhel, A. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Identification+of+two+cationic+amino+acid+transporters+required+for+nutritional+signaling+during+mosquito+reproduction.">Identification of two cationic amino acid transporters required for nutritional signaling during mosquito reproduction.</a> J Exp Biol. 209 (Pt 16), 3071-3078 (2006).</li><li>Carpenter, V. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=SLC7+amino+acid+transporters+of+the+yellow+fever+mosquito+Aedes+aegypti+and+their+role+in+fat+body+TOR+signaling+and+reproduction.">SLC7 amino acid transporters of the yellow fever mosquito Aedes aegypti and their role in fat body TOR signaling and reproduction.</a> J Insect Physiol. 58 (4), 513-522 (2012).</li><li>Attardo, G. M., Higgs, S., Klingler, K. A., Vanlandingham, D. L., Raikhel, A. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=RNA+interference-mediated+knockdown+of+a+GATA+factor+reveals+a+link+to+anautogeny+in+the+mosquito+Aedes+aegypti.">RNA interference-mediated knockdown of a GATA factor reveals a link to anautogeny in the mosquito Aedes aegypti.</a> Proc Natl Acad Sci USA. 100 (23), 13374-13379 (2003).</li><li>Hugo, L. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Proteomic+biomarkers+for+ageing+the+mosquito+Aedes+aegypti+to+determine+risk+of+pathogen+transmission.">Proteomic biomarkers for ageing the mosquito Aedes aegypti to determine risk of pathogen transmission.</a> PLoS One. 8 (3), e58656 (2013).</li><li>Price, D. P., Schilkey, F. D., Ulanov, A., Hansen, I. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Small+mosquitoes,+large+implications:+crowding+and+starvation+affects+gene+expression+and+nutrient+accumulation+in+Aedes+aegypti.">Small mosquitoes, large implications: crowding and starvation affects gene expression and nutrient accumulation in Aedes aegypti.</a> Parasit Vectors. 8, 252 (2015).</li><li>Uchida, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Induction+of+oogenesis+in+mosquitoes+(Diptera:+Culicidae)+by+infusion+of+the+hemocoel+with+amino+acids.">Induction of oogenesis in mosquitoes (Diptera: Culicidae) by infusion of the hemocoel with amino acids.</a> J Med Entomol. 38 (4), 572-575 (2001).</li><li>Uchida, K., Ohmori, D., Yamakura, F., Suzuki, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Changes+in+free+amino+acid+concentration+in+the+hemolymph+of+the+female+Culex+pipiens+pallens+(Diptera:+Culicidae),+after+a+blood+meal.">Changes in free amino acid concentration in the hemolymph of the female Culex pipiens pallens (Diptera: Culicidae), after a blood meal.</a> J Med Entomol. 27 (3), 302-308 (1990).</li><li>Hayes, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Determination+of+a+physiological+saline+solution+for+Aedes+aegypti+.(L).">Determination of a physiological saline solution for Aedes aegypti .(L).</a> J Econ Entomol. 46 (4), 624-627 (1953).</li><li>Price, D. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+Fat+Body+Transcriptomes+of+the+Yellow+Fever+Mosquito+Aedes+aegypti,+Pre-+and+Post+Blood+Meal.">The Fat Body Transcriptomes of the Yellow Fever Mosquito Aedes aegypti, Pre- and Post Blood Meal.</a> Plos One. 6 (7), e22573 (2011).</li><li>Chomczynski, P., Mackey, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Short+technical+reports.+Modification+of+the+TRI+reagent+procedure+for+isolation+of+RNA+from+polysaccharide-and+proteoglycan-rich+sources.">Short technical reports. Modification of the TRI reagent procedure for isolation of RNA from polysaccharide-and proteoglycan-rich sources.</a> Biotechniques. 19 (6), 942-945 (1995).</li><li>Fujiwara, T., Kazawa, T., Haupt, S. S., Kanzaki, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Postsynaptic+odorant+concentration+dependent+inhibition+controls+temporal+properties+of+spike+responses+of+projection+neurons+in+the+moth+antennal+lobe.">Postsynaptic odorant concentration dependent inhibition controls temporal properties of spike responses of projection neurons in the moth antennal lobe.</a> PLoS One. 9 (2), e89132 (2014).</li><li>Larsen, W. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Growth+in+an+insect+organ+culture.">Growth in an insect organ culture.</a> J Insect Physiol. 13 (4), 613-619 (1967).</li><li>Judy, K. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Isolation,+Structure,+and+Absolute+Configuration+of+a+New+Natural+Insect+Juvenile+Hormone+from+Manduca+sexta.">Isolation, Structure, and Absolute Configuration of a New Natural Insect Juvenile Hormone from Manduca sexta.</a> Proc Natl Acad Sci USA. 70 (5), 1509-1513 (1973).</li><li>Marks, E. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+action+of+hormones+in+insect+cell+and+organ+cultures.">The action of hormones in insect cell and organ cultures.</a> Gen Comp Endocrinol. 15 (2), 289-302 (1970).</li><li>Hughes, G. L., Pike, A. D., Xue, P., Rasgon, J. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Invasion+of+Wolbachia+into+Anopheles+and+Other+Insect+Germlines+in+an+Ex+vivo+Organ+Culture+System.">Invasion of Wolbachia into Anopheles and Other Insect Germlines in an Ex vivo Organ Culture System.</a> PLoS One. 7 (4), e36277 (2012).</li><li>Postlethwait, J. H., Handler, A. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Roles+of+Juvenile-Hormone+and+20-Hydroxy-Ecdysone+during+Vitellogenesis+in+Isolated+Abdomens+of+Drosophila+melanogaster.">Roles of Juvenile-Hormone and 20-Hydroxy-Ecdysone during Vitellogenesis in Isolated Abdomens of Drosophila melanogaster.</a> J Insect Physiol. 25 (5), 455-460 (1979).</li><li>Spielman, A., Gwadz, R. W., Anderson, W. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ecdysone-initiated+ovarian+development+in+mosquitoes.">Ecdysone-initiated ovarian development in mosquitoes.</a> J Insect Physiol. 17 (10), 1807-1814 (1971).</li><li>Boudko, D. Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Substrate+specificity+and+transport+mechanism+of+amino-acid+transceptor+Slimfast+from+Aedes+aegypti.">Substrate specificity and transport mechanism of amino-acid transceptor Slimfast from Aedes aegypti.</a> Nat Commun. 6, 8546 (2015).</li><li>Fleischer, J., Bumbalo, R., Bautze, V., Strotmann, J., Breer, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Expression+of+odorant+receptor+Olfr78+in+enteroendocrine+cells+of+the+colon.">Expression of odorant receptor Olfr78 in enteroendocrine cells of the colon.</a> Cell Tissue Res. 361 (3), 697-710 (2015).</li><li>Jones, K. H., Senft, J. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+improved+method+to+determine+cell+viability+by+simultaneous+staining+with+fluorescein+diacetate-propidium+iodide.">An improved method to determine cell viability by simultaneous staining with fluorescein diacetate-propidium iodide.</a> J Histochem Cytochem. 33 (1), 77-79 (1985).</li><li>Strober, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Trypan+blue+exclusion+test+of+cell+viability.">Trypan blue exclusion test of cell viability.</a> Curr Protoc Immunol. A3B, (2001).</li></ol>

Vi har inget att redovisa.

Insekt orgelkultur användes flitigt studera insekt endokrinologi, utveckling och ämnesomsättningen, samt för att undersöka samspelet mellan specifika organ och bakteriell symbionter29,30,31, 32,33,34. In vitro fett kroppen orgelkultur användes specifikt för att studera aminosyra transport och reglering av äggula proteinproduktionen i myggor och andra Diptera16,17,35 , 36. under processen för vitellogenesis, mygga fett kroppen använder en matris av hög-specificitet aminosyra transportörer för att importera blodmjöl framställda aminosyror från hemolymph att syntetisera stora mängder äggula proteiner12 ,19,35,36. Fett kroppen kulturen var avgörande för avgränsningen av fett kroppen näringsbehov i detta sammanhang18.
Kvaliteten på utgångsmaterialet, kvinnliga myggor, är avgörande för framgången för dessa experiment. Mygglarver upp i under-trångt villkor och utfodras på hög näringsämnen Dieter vanligtvis ger bästa resultat. Det finns några viktiga variabler att överväga vid fastställandet av mygga fett kroppen odlingsbetingelser i laboratoriet experimental designmässigt. Vi visade i tidigare studier som fett kroppen genuttrycket varierar betydligt beroende på individuell livshistoria och näringsstatus av mygga11,22. Mygga kultur villkoren bör vara enhetliga för att minska variationen i storlek och näringsmässiga reserver av experimentella myggor. Dessutom bör personal som utför dissektionerna utbildas för att säkerställa snabb och noggrann dissektioner med konsekventa resultat. Cellernas viabilitet i isolerade fett organ kan kontrolleras med hjälp av olika färgning metoder37,38.
Experimentell design av ett fett kroppen kultur experiment bör beakta antalet dissektioner möjligt under en viss tidsperiod. När stora mängder fett organ krävs behövas flera dissektion sessioner eller flera analysera. Det finns ett brett utbud av framtida ansökningar om in vitro- fett kroppen kultur i myggor och andra insekter. Det kommer att vara särskilt användbart för att testa potentiella läkemedelskandidater för insektskontroll. Användningen av transgena tekniker i insekter att uttrycka särskilda reporter proteiner i fett kroppen trophocytes kommer att öppna upp nya metoder för att utveckla kraftfulla bioassays för studien av fett kroppen fysiologi.

Myggor är vektorer av förödande mänskliga sjukdomar, inklusive malaria, denguefeber, chikungunya och Zika1,2,3. Trots intensiva internationella ansträngningar att stävja dessa sjukdomar och att kontrollera sjukdom-sändning mygga populationer, är epidemiska utbrott moskitburen sjukdomar fortfarande vanligt, särskilt i utvecklingsländerna. Effektiva vacciner mot många av dessa sjukdomar är antingen inte tillgänglig eller begränsad effekt4,5. Det mest effektiva sättet att förhindra utbrott är att styra mygga populationer, främst genom användning av insektsmedel behandlingar. Insektsmedel motstånd har dock utvecklats i många mygga populationer och blivit ett vanligt problem runt den värld6,7,8. Studien av mygga fysiologi är avgörande för utvecklingen av nya verktyg och strategier för att bekämpa sjukdomar.
Mygga fett kroppen spelar en central roll i näringsämnen lagring, metabolisk homeostas, reproduktion och xenobiotiska katabolism9,10,11,12. Det är den huvudsaklig lagring orgeln för triglycerider, glykogen och aminosyror i form av lagring proteiner. Det fungerar också som plats för syntes för de flesta hemolymph proteiner och metaboliter. I myggor är fett kroppen den enda källan till äggula proteinproduktion som förekommer hos kvinnor efter de ta en blodmjöl13,14.
Den huvudsakliga celltypen av fett kroppen är stor, polyploida trophocyte eller fettceller3,9,10,12. Fett vävnad är uppdelad i loberna eller slidor och kan hittas i alla delar av kroppen av mygga, med den största delen ligger i buken, där stora loberna i fett kroppen bifogas kroppen bukväggen.
Mygga fett kroppen kultur systemet presenteras här utvecklades i ' 70-talet och är fortfarande ett kraftfullt verktyg för att studera fett kroppen fysiologi10, särskilt i kombination med nuvarande teknik för analys. Grunden för denna teknik är baserad på isoleringen av buken kropp väggarna och den associerade fett vävnaden. Den hydrofoba karaktären av buken nagelband orsakar det att flyta på ytan av odlingssubstratet, med bifogade loberna av buk fett kroppen nedsänkt. De externa och tracheolar struktur upprätthålls, att säkerställa syresättning av odlade vävnad. Hädanefter hänvisar vi till dessa preparat som ”fett organ”. Isolerade fett organ förblir lönsamt för mer än 12 h när inkuberas i lämpligt medium (opublicerade resultat). Fett kroppen kultur är ett värdefullt verktyg som har tagit upp en mängd frågor om fett kroppen endokrinologi och fysiologi9,10,12,15,16, 17.
Odlade fett organ kan utsättas för olika experimentella och styra behandlingar, tidpunkten för som kan beslutas av prövaren. I slutet av inkubationstiden, kan fett organ samlas in och bearbetas för nedströms analyser, inklusive qPCR16,17,18,19, Western blotting18 ,20, proteomik21eller metabolomik22. Experiment kan utföras på olika skalor, från enskilda fat organ till grupper av hundratals som kan vara odlade tillsammans.
De representativa resultat ingår här härleddes från fett organ odlade i närvaro av aminosyror och den steroid hormon 20-hydroxy ecdysone att simulera blodmjöl aktiveringen vitellogenesis16,17, 23,24. Vi analyserade och jämförde differentiell genuttrycket av inte-aktiverat kontra aktiverade fett organ via nästa generations sekvensering analys.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" width="508">
	<tbody>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:64px;">Scissors&#160;</td>
			<td style="width:192px;">Fiskars</td>
			<td style="width:143px;">83872</td>
			<td style="width:111px;"></td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:64px;">Fly pad</td>
			<td style="width:192px;">Genesee Scientific</td>
			<td style="width:143px;">789060</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="127">
			<td height="127" style="height:127px;width:64px;">Battery-powered aspirator w/ collection vial</td>
			<td style="width:192px;">Hausherrs Machine Works, Inc.</td>
			<td style="width:143px;">3740-01-210-2368</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="43">
			<td height="43" style="height:43px;width:64px;">Fine tip forceps</td>
			<td style="width:192px;">World Precision Instruments, Inc.&#160;</td>
			<td style="width:143px;">500085</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="64">
			<td height="64" style="height:64px;width:64px;">Light microscope&#160;</td>
			<td style="width:192px;">Leica Microsystems</td>
			<td style="width:143px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="43">
			<td height="43" style="height:43px;width:64px;">96 well plate&#160;</td>
			<td style="width:192px;">Sigma</td>
			<td style="width:143px;">CL S3383</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:64px;">Sucrose</td>
			<td style="width:192px;">Sigma</td>
			<td style="width:143px;">S9378</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;">Alanine</td>
			<td style="width:192px;">Sigma</td>
			<td>A7627</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;">Arginine</td>
			<td style="width:192px;">Sigma</td>
			<td>A5006</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;">Asparagine</td>
			<td style="width:192px;">Sigma</td>
			<td>A0884</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;">Aspartic Acid</td>
			<td style="width:192px;">Sigma</td>
			<td>A9256</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;">Cysteine</td>
			<td style="width:192px;">Sigma</td>
			<td>W326305</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;">Glutamic Acid</td>
			<td style="width:192px;">Sigma</td>
			<td>G1251</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;">Glutamine</td>
			<td style="width:192px;">Sigma</td>
			<td>G3126</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;">Glycine</td>
			<td style="width:192px;">Sigma</td>
			<td>G2879</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;">Histidine</td>
			<td style="width:192px;">Sigma</td>
			<td>H6034</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;">Isoleucine</td>
			<td style="width:192px;">Sigma</td>
			<td>I2752</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;">Lysine</td>
			<td style="width:192px;">Sigma</td>
			<td>L5501</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;">Leucine</td>
			<td style="width:192px;">Sigma</td>
			<td>L8000</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;">Phenylalanine</td>
			<td style="width:192px;">Sigma</td>
			<td>P2126</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;">Proline</td>
			<td style="width:192px;">Sigma</td>
			<td>P0380</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;">Serine</td>
			<td style="width:192px;">Sigma</td>
			<td>S4500</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;">Threonine</td>
			<td style="width:192px;">Sigma</td>
			<td>T8625</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;">Tryptophan</td>
			<td style="width:192px;">Sigma</td>
			<td>T0254</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;">Tyrosine</td>
			<td style="width:192px;">Sigma</td>
			<td>T3754</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;">Valine</td>
			<td style="width:192px;">Sigma</td>
			<td>V0500</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;">Methionine</td>
			<td style="width:192px;">Sigma</td>
			<td>M9625</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:64px;">NaCl</td>
			<td style="width:192px;">Sigma</td>
			<td>S7653</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:64px;">KCl</td>
			<td style="width:192px;">Sigma</td>
			<td>P9333</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="45">
			<td height="45" style="height:45px;width:64px;">MgCl2-6H2O</td>
			<td style="width:192px;">Sigma</td>
			<td>M2670</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="23">
			<td height="23" style="height:23px;width:64px;">NaHCO3</td>
			<td style="width:192px;">Sigma</td>
			<td>S5761</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="45">
			<td height="45" style="height:45px;width:64px;">CaCl2-2H2O</td>
			<td style="width:192px;">Sigma</td>
			<td>C8106</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="41">
			<td height="41" style="height:41px;width:64px;">Tris pH8.0&#160;</td>
			<td style="width:192px;">Sigma</td>
			<td>T1503</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:64px;">EDTA</td>
			<td style="width:192px;">Sigma</td>
			<td>E6758</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="23">
			<td height="23" style="height:23px;width:64px;">ddH2O</td>
			<td style="width:192px;">Sigma</td>
			<td>W4502</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

fat body organ culture system in aedes aegypti, a vector of zika virus

Insekt fett kroppen spelar en central roll i insekt metabolism och näringsämnen lagring, spegling funktioner i lever och fettvävnad hos ryggradsdjur. Insekt fett vävnad är vanligtvis fördelade i insekt kroppen. Det är dock ofta koncentrerade i buken och bifogas kroppen bukväggen.
Mygga fett kroppen är den enda källan till äggula proteiner, som är kritiska för äggproduktion. Därför i vitro kultur mygga fett kroppsvävnader representerar en viktig system för studier av mygga fysiologi, metabolism, och slutligen, äggproduktion. Fett kroppen kultur processen börjar med beredning av lösningar och reagenser, inklusive aminosyra stamlösningar, Aedes fysiologisk koksaltlösning salt stamlösning (APS), kalcium stamlösning och fett kroppen odlingsmedium. Processen fortsätter med fett kroppen dissektion, följt av en experimentell behandling. Efter behandling, kan en mängd olika analyser utföras, inklusive RNA sekvensering (RNA-Seq), qPCR, Western blotting, proteomik och metabolomik.
I vårt exempel experiment visar vi protokollet genom excision och kultur av fett organ från den gula feber Myggan, Aedes aegypti, en rektor vektor av arboviruses bland annat denguefeber och chikungunya Zika. RNA från fett organ odlade under ett fysiologiskt tillstånd känt att upregulate äggula proteiner kontra kontroll var föremål för RNA-Seq analys att demonstrera den potentiella nyttan av detta förfarande för utredningar av genuttryck.

Som ett exempel, vi utförde ett fett kroppen kultur experiment och stimuleras isolerade fett organ av inkubering på en lösning som innehåller en balanserad blandning av alla tjugo naturligt förekommande aminosyror och den insekt steroid hormon 20-hydroxy ecdysone (10 µM) för 6 h . Som en kontroll inkuberades fett organ på APS för en lika stor mängd tid.
Efter inkubation isolerades de total-RNA med en tri-reagens27 följa tillverkarens instruktioner. Kvalitet och kvantitet av extraherade RNA-prover bedömdes med hjälp av en spektrofotometer och fluorometric kvantitering agaros gelelektrofores. RNA-sekvensering bibliotek genererades med hjälp av 4 µg totalt RNA och kvantifierades använder två olika tekniker. Därefter skickades biblioteken till en kommersiell leverantör för Parade slutet-sekvensering.
Resultatet av detta experiment visas i tabell 6. Gener som visar den starkaste transkriptionell Svaren aminosyra och 20-hydroxyecdysone var primärt äggula protein gener, som är överens med tidigare resultat11.
Figur 1 visar en intensitetskarta visar gen uttrycksnivåerna av 1 256 differentially uttryckt gener från odlade fett kroppar efter två olika behandlingar.
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/55508/55508fig1.jpg"> 
Figur 1 . Stresskartan gener uttrycks i fett kroppen kultur. Stresskartan beräknades på grundval av antalet särskilda avskrifter för varje gen i olika bibliotek använder heatmap paketet28 som ingår i R programvarumiljö. Den mörka nyansen representerar högre genuttryck. 1.256 gener med statistiskt signifikant variation i uttryck (Q-värden &#60; 0,05) visas. Generna är ordnade enligt deras genomsnitt uttryck nivåer, indikeras av dendrogram till vänster (inte enligt deras släktskapsförhållanden). Observera antalet gener med upp - eller ner-reglerade uttryck efter stimulering med aminosyror (AA) och 20-hydroxyecdysone (20E). APS = Aedes fysiologisk koksaltlösning. Se kompletterande fil 1 för en lista av gener och deras relativa nivåer. <a href="//ecsource.jove.com/files/ftp_upload/55508/55508fig1large.jpg" target="_blank">Klicka här för att se en större version av denna siffra.</a>
<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>Aminosyra</td>
			<td>Molekylär vikt g/mol</td>
			<td>mM koncentration</td>
			<td>mg per Liter</td>
			<td>mg för 300 mL volym</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Alanin</td>
			<td>89,1</td>
			<td>26.68</td>
			<td>2377.19</td>
			<td>713.16</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Arginin</td>
			<td>174,2</td>
			<td>26.68</td>
			<td>4647.66</td>
			<td>1394.3</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Asparagin</td>
			<td>150.1</td>
			<td>26.68</td>
			<td>4004.67</td>
			<td>1201.4</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Asparaginsyra</td>
			<td>133</td>
			<td>26.68</td>
			<td>3548.44</td>
			<td>1064.53</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cystein</td>
			<td>121.16</td>
			<td>10,68</td>
			<td>1293.99</td>
			<td>388.2</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Glutaminsyra</td>
			<td>147,1</td>
			<td>26.68</td>
			<td>3924.63</td>
			<td>1177.39</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Glutamin</td>
			<td>146</td>
			<td>26.68</td>
			<td>3895.28</td>
			<td>1168.58</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Glycin</td>
			<td>75</td>
			<td>53.32</td>
			<td>3999</td>
			<td>1199.7</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Histidin</td>
			<td>155.16</td>
			<td>80</td>
			<td>12412.8</td>
			<td>3723.84</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Isoleucin</td>
			<td>131</td>
			<td>10,68</td>
			<td>1399.08</td>
			<td>419.72</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Lycine</td>
			<td>183</td>
			<td>26.68</td>
			<td>4882.44</td>
			<td>1464.73</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Leucin</td>
			<td>131</td>
			<td>26.68</td>
			<td>3495.08</td>
			<td>1048.52</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fenylalanin</td>
			<td>165</td>
			<td>10,68</td>
			<td>1762.2</td>
			<td>528.66</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Proline</td>
			<td>115</td>
			<td>26.68</td>
			<td>3068.2</td>
			<td>920.46</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Serin</td>
			<td>105</td>
			<td>53.32</td>
			<td>5598.6</td>
			<td>1679.58</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Treonin</td>
			<td>119</td>
			<td>10,68</td>
			<td>1270.92</td>
			<td>381,28</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tryptofan</td>
			<td>204</td>
			<td>10,68</td>
			<td>2178.72</td>
			<td>653.62</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tyrosin</td>
			<td>181</td>
			<td>5,32</td>
			<td>962.92</td>
			<td>288.88</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Valin</td>
			<td>117</td>
			<td>10,68</td>
			<td>1249.56</td>
			<td>374.87</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Metionin</td>
			<td>149</td>
			<td>10,68</td>
			<td>1591.32</td>
			<td>477,4</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>
Tabell 1. 4 x aminosyra stamlösning.
<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>Komponent</td>
			<td>Vikt i gram tillsätts 50 ml ddH2O</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>NaCl</td>
			<td>8,0 g</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>KCl</td>
			<td>0,074 g</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MgCl2-6 H2O</td>
			<td>0,120 g</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>NaHCO3</td>
			<td>0.0250 g</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>
Tabell 2. 20 X salt stamlösning.
<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>Komponent</td>
			<td>Vikt i gram tillsätts 100 ml ddH2O</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CaCl2-2 H2O</td>
			<td>0,90 g</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>
<stron></stron>g > tabell 3. 50 x kalcium stamlösning.
<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>Komponent</td>
			<td>Koncentration av stamlösning</td>
			<td>Volym lager för 100 ml buffert</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tris pH8.0</td>
			<td>1 M</td>
			<td>5 mL</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>EDTA</td>
			<td>0,25 M</td>
			<td>2 mL</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>NaCl</td>
			<td>NA</td>
			<td>0,3 g</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>ddH2O</td>
			<td>NA</td>
			<td>till 100 mL (~ 93 mL)</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>
Tabell 4. Tris buffert.
<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>Komponent</td>
			<td>Volym lager för 200 ml</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Aminosyra stamlösning</td>
			<td>150 mL</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Salt stamlösning</td>
			<td>10 mL</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Kalcium stamlösning</td>
			<td>4 mL</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>TES buffert</td>
			<td>10 mL</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>ddH2O</td>
			<td>26 mL</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>
Tabell 5. Fett kroppen odlingsmedium.
<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>Anteckning</td>
			<td>Gen Beskrivning</td>
			<td>-Faldig förändring</td>
			<td>P-värde</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>AAEL006138</td>
			<td>Vitellogenin-B</td>
			<td>3443</td>
			<td>2.52E-112</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>AAEL006126</td>
			<td>Vitellogenin-C</td>
			<td>2795</td>
			<td>8.64E-91</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>AAEL006563</td>
			<td>vitellogenic karboxypeptidas</td>
			<td>1002</td>
			<td>2.17E-119</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>AAEL010434</td>
			<td>Vitellogenin-A</td>
			<td>220</td>
			<td>1.14E-27</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>AAEL006542</td>
			<td>vitellogenic karboxypeptidas</td>
			<td>185</td>
			<td>2.14E-65</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>AAEL012678</td>
			<td>AAEL003006-PA [Aedes aegypti](65%)</td>
			<td>96</td>
			<td>4.00E-70</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>AAEL000080</td>
			<td>hypotetiska protein</td>
			<td>82</td>
			<td>6.69E-188</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>AAEL015312</td>
			<td>Vitellogenic cathepsin B</td>
			<td>77</td>
			<td>1.27E-15</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>AAEL009588</td>
			<td>nukleär receptor 3</td>
			<td>75</td>
			<td>4.58E-56</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>AAEL010529</td>
			<td>hypotetiska protein</td>
			<td>66</td>
			<td>1.32E-29</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>
Tabell 6. Experimentella resultat.
Kompletterande fil 1. <a href="//ecsource.jove.com/files/ftp_upload/55508/Table_of_genes_for_figure_1.xlsx" target="_blank">Vänligen klicka här för att hämta den här filen.</a>

Watch this Scientific Journal Video about Fat Body Organ Culture System in Aedes Aegypti, a Vector of Zika Virus at JoVE.com

Fat Body Organ Culture System in Aedes Aegypti, a Vector of Zika Virus

Fett kroppen är centrala metaboliska organ i insekter. Vi presenterar en levande kultur organsystem som ger användaren möjlighet att studera Svaren isolerade fett vävnad på olika stimuli.

Fett kroppen kultur organsystem i Aedes Aegypti, en vektor av zikaviruset

The insect fat body plays a central role in insect metabolism and nutrient storage, mirroring functions of the liver and fat tissue in vertebrates. Insect ...

Research

JoVE Journal

Biology

Fat Body Organ Culture System in Aedes Aegypti, a Vector of Zika Virus

Injection of dsRNA into Female A. aegypti Mosquitos

Injektion av dsRNA till Kvinna A. aegypti Mosquitos

Reverse genetic approaches have proven extremely useful for determining  which genes underly resistance to vector pathogens in mosquitoes.  This video ...

Microinjection of A. aegypti Embryos to Obtain Transgenic Mosquitoes

Mikroinjektion av A. aegypti Embryon Skaffa Transgena myggor

In this video, Nijole Jasinskiene demonstrates the methodology employed to generate transgenic Aedes aegypti mosquitoes, which are vectors for dengue ...

Primary Culture and Plasmid Electroporation of the Murine Organ of Corti. 

Primär Kultur och Plasmid elektroporation av Murine organ Corti.

In all mammals, the sensory epithelium for audition is located along the spiraling organ of Corti that resides within the conch shaped cochlea of the ...

RNAi-mediated Gene Knockdown and In Vivo Diuresis Assay in Adult Female Aedes aegypti Mosquitoes

RNAi-mediated Gene Knockdown and In Vivo Diuresis Assay in Adult Female Aedes aegypti Mosquitoes

RNAi-mediated gene Knockdown och<em&gt; In Vivo</em&gt; Diures Analys hos vuxna kvinnliga<em&gt; Aedes aegypti</em&gt; Myggor

This video protocol demonstrates an effective technique to knockdown a particular gene in an insect and conduct a novel bioassay to measure excretion ...

Mouse Embryonic Development in a Serum-free Whole Embryo Culture System

Mouse embryonala utveckling i ett serumfritt Hela Embryo Culture System

Mid-gestation stage mouse embryos were cultured utilizing a serum-free culture medium prepared from commercially available stem cell media supplements in ...

Physiological Recordings and RNA Sequencing of the Gustatory Appendages of the Yellow-fever Mosquito Aedes aegypti

Physiological Recordings and RNA Sequencing of the Gustatory Appendages of the Yellow-fever Mosquito Aedes aegypti

Fysiologiska Inspelningar och RNA sekvensering av de smak bihang till Gula-febern Mosquito<em&gt; Aedes aegypti</em

Electrophysiological recording of action potentials from sensory neurons of mosquitoes provides investigators a glimpse into the chemical perception of ...

Maintaining Aedes aegypti Mosquitoes Infected with Wolbachia

Maintaining Aedes aegypti Mosquitoes Infected with Wolbachia

Att upprätthålla Aedes aegypti myggor infekterade med Wolbachia

Aedes aegypti mosquitoes experimentally infected with Wolbachia are being utilized in programs to control the spread of arboviruses such as dengue, ...

Improved Fecundity and Fertility Assay for Aedes aegypti using 24 Well Tissue Culture Plates (EAgaL Plates)

Improved Fecundity and Fertility Assay for Aedes aegypti using 24 Well Tissue Culture Plates EAgaL Plates

Förbättrad fecundity och fertilitetsanalys för Aedes aegypti med hjälp av 24 Well Tissue Culture Plates (EAgaL Plates)

Mosquitoes represent a significant public health problem as vectors of various pathogens. For those studies that require an assessment of mosquito fitness ...

Preparing Irradiated and Marked Male Aedes aegypti Mosquitoes for Release in an Operational Sterile Insect Technique Program

Preparing Irradiated and Marked Male Aedes aegypti Mosquitoes for Release in an Operational Sterile Insect Technique Program

Förbereda bestrålade och märkta manliga Aedes aegypti-myggor för frisättning i ett operativt sterilt insektsteknikprogram

The control of such human diseases as dengue, Zika, and chikungunya relies on the control of their vector, the Aedes aegypti mosquito, because there is no ...

Using the Fluorescent Dye, Rhodamine B, to Study Mating Competitiveness in Male Aedes aegypti Mosquitoes

Using the Fluorescent Dye, Rhodamine B, to Study Mating Competitiveness in Male Aedes aegypti Mosquitoes

Använda fluorescerande färgämne, Rhodamin B, för att studera parning konkurrenskraft i manliga Aedes aegypti myggor

The success of sterile or incompatible insect technique-based population suppression programs depends on the ability of released males to compete for ...