Name: novel assay for cold nociception in drosophila larvae
Uploaded: 2017-04-03T15:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Novel Assay for Cold Nociception in Drosophila Larvae at JoVE.com

Biz eleştirel el yazması okumak için soğuk prob deneyine, sinek hisse senetleri için Bloomington Drosophila Stok Merkezi ve Galko laboratuar üyelerinin erken aşamasını geliştirmek için Sarah Wu ve Camille Graham teşekkür ederiz. Bu çalışma NIH NRSA HNT için (NIH F31NS083306) tarafından ve NIH R01NS069828, R21NS087360 ve MJG Temel Araştırma Texas MD Anderson Clark Fellowship bir üniversite tarafından desteklenmiştir.

Larva 1. Hazırlık <ol><li> 25 ° C kuluçka makinesi içinde stokları ya da genetik haç kaldırın. <ol><li> ortasını kültür durumunda, 20-25 bakire dişi ve düzenli mısır unu uçucu ortamı ihtiva eden şişe başına 15-20 erkek kullanın. dişiler yiyecek yeni şişeye transfer etmeden önce yaklaşık 48 saat yumurtalarını bırakmak için izin verin. </li></ol></li><li> 4-5 gün yumurta yumurtlama sonra yavaşça aşırı duygusal yiyecek ve larvaları içine su akışı püskürtme istenen genotip 3....

<ol>
	<li>Grueber, W. B., Jan, L. Y., Jan, Y. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tiling+of+the+Drosophila+epidermis+by+multidendritic+sensory+neurons.">Tiling of the Drosophila epidermis by multidendritic sensory neurons.</a> Development. 129 (12), 2867-2878 (2002).</li><li>Gao, F. B., Brenman, J. E., Jan, L. Y., Jan, Y. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Genes+regulating+dendritic+outgrowth,+branching,+and+routing+in+Drosophila.">Genes regulating dendritic outgrowth, branching, and routing in Drosophila.</a> Genes Dev. 13 (19), 2549-2561 (1999).</li><li>Sweeney, S. T., Broadie, K., Keane, J., Niemann, H., O'Kane, C. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Targeted+expression+of+tetanus+toxin+light+chain+in+Drosophila+specifically+eliminates+synaptic+transmission+and+causes+behavioral+defects.">Targeted expression of tetanus toxin light chain in Drosophila specifically eliminates synaptic transmission and causes behavioral defects.</a> Neuron. 14 (2), 341-351 (1995).</li><li>Hwang, R. Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Nociceptive+neurons+protect+Drosophila+larvae+from+parasitoid+wasps.">Nociceptive neurons protect Drosophila larvae from parasitoid wasps.</a> Curr Biol. 17 (24), 2105-2116 (2007).</li><li>Im, S. H., Galko, M. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pokes,+sunburn,+and+hot+sauce:+Drosophila+as+an+emerging+model+for+the+biology+of+nociception.">Pokes, sunburn, and hot sauce: Drosophila as an emerging model for the biology of nociception.</a> Dev Dyn. 241 (1), 16-26 (2012).</li><li>Milinkeviciute, G., Gentile, C., Neely, G. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Drosophila+as+a+tool+for+studying+the+conserved+genetics+of+pain.">Drosophila as a tool for studying the conserved genetics of pain.</a> Clin Genet. 82 (4), 359-366 (2012).</li><li>Turner, H. N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+TRP+Channels+Pkd2,+NompC,+and+Trpm+Act+in+Cold-Sensing+Neurons+to+Mediate+Unique+Aversive+Behaviors+to+Noxious+Cold+in+Drosophila.">The TRP Channels Pkd2, NompC, and Trpm Act in Cold-Sensing Neurons to Mediate Unique Aversive Behaviors to Noxious Cold in Drosophila.</a> Curr Biol. , (2016).</li><li>Kernan, M., Cowan, D., Zuker, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Genetic+dissection+of+mechanosensory+transduction:+mechanoreception-defective+mutations+of+Drosophila.">Genetic dissection of mechanosensory transduction: mechanoreception-defective mutations of Drosophila.</a> Neuron. 12 (6), 1195-1206 (1994).</li><li>Tsubouchi, A., Caldwell, J. C., Tracey, W. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dendritic+filopodia,+Ripped+Pocket,+NOMPC,+and+NMDARs+contribute+to+the+sense+of+touch+in+Drosophila+larvae.">Dendritic filopodia, Ripped Pocket, NOMPC, and NMDARs contribute to the sense of touch in Drosophila larvae.</a> Curr Biol. 22 (22), 2124-2134 (2012).</li><li>Yan, Z., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Drosophila+NOMPC+is+a+mechanotransduction+channel+subunit+for+gentle-touch+sensation.">Drosophila NOMPC is a mechanotransduction channel subunit for gentle-touch sensation.</a> Nature. 493 (7431), 221-225 (2013).</li><li>Tracey, W. D., Wilson, R. I., Laurent, G., Benzer, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=painless,+a+Drosophila+gene+essential+for+nociception.">painless, a Drosophila gene essential for nociception.</a> Cell. 113 (2), 261-273 (2003).</li><li>Babcock, D. T., Landry, C., Galko, M. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cytokine+signaling+mediates+UV-induced+nociceptive+sensitization+in+Drosophila+larvae.">Cytokine signaling mediates UV-induced nociceptive sensitization in Drosophila larvae.</a> Curr Biol. 19 (10), 799-806 (2009).</li><li>Chattopadhyay, A., Gilstrap, A. V., Galko, M. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Local+and+global+methods+of+assessing+thermal+nociception+in+Drosophila+larvae.">Local and global methods of assessing thermal nociception in Drosophila larvae.</a> J Vis Exp. (63), e3837 (2012).</li><li>Grueber, W. B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Projections+of+Drosophila+multidendritic+neurons+in+the+central+nervous+system:+links+with+peripheral+dendrite+morphology.">Projections of Drosophila multidendritic neurons in the central nervous system: links with peripheral dendrite morphology.</a> Development. 134 (1), 55-64 (2007).</li><li>Hughes, C. L., Thomas, J. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+sensory+feedback+circuit+coordinates+muscle+activity+in+Drosophila.">A sensory feedback circuit coordinates muscle activity in Drosophila.</a> Mol Cell Neurosci. 35 (2), 383-396 (2007).</li><li>Zhong, L., Hwang, R. Y., Tracey, W. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pickpocket+is+a+DEG/ENaC+protein+required+for+mechanical+nociception+in+Drosophila+larvae.">Pickpocket is a DEG/ENaC protein required for mechanical nociception in Drosophila larvae.</a> Curr Biol. 20 (5), 429-434 (2010).</li><li>Xiang, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Light-avoidance-mediating+photoreceptors+tile+the+Drosophila+larval+body+wall.">Light-avoidance-mediating photoreceptors tile the Drosophila larval body wall.</a> Nature. 468 (7326), 921-926 (2010).</li><li>Neely, G. G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=TrpA1+regulates+thermal+nociception+in+Drosophila.">TrpA1 regulates thermal nociception in Drosophila.</a> PLoS One. 6 (8), e24343 (2011).</li><li>Zhou, Y., Cameron, S., Chang, W. T., Rao, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Control+of+directional+change+after+mechanical+stimulation+in+Drosophila.">Control of directional change after mechanical stimulation in Drosophila.</a> Mol Brain. 5, 39 (2012).</li><li>Im, S. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tachykinin+acts+upstream+of+autocrine+Hedgehog+signaling+during+nociceptive+sensitization+in+Drosophila.">Tachykinin acts upstream of autocrine Hedgehog signaling during nociceptive sensitization in Drosophila.</a> Elife. 4, e10735 (2015).</li><li>Babcock, D. T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hedgehog+signaling+regulates+nociceptive+sensitization.">Hedgehog signaling regulates nociceptive sensitization.</a> Curr Biol. 21 (18), 1525-1533 (2011).</li><li>Berrigan, D., Pepin, D. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=How+Maggots+Move+-+Allometry+and+Kinematics+of+Crawling+in+Larval+Diptera.">How Maggots Move - Allometry and Kinematics of Crawling in Larval Diptera.</a> J. Insect Physiol. 41 (4), 329-337 (1995).</li><li>Galko, M. J., Krasnow, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cellular+and+genetic+analysis+of+wound+healing+in+Drosophila+larvae.">Cellular and genetic analysis of wound healing in Drosophila larvae.</a> PLoS Biol. 2 (8), E239 (2004).</li><li>Burra, S., Wang, Y., Brock, A. R., Galko, M. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Using+Drosophila+larvae+to+study+epidermal+wound+closure+and+inflammation.">Using Drosophila larvae to study epidermal wound closure and inflammation.</a> Methods Mol Biol. 1037, 449-461 (2013).</li><li>Dar, A. C., Das, T. K., Shokat, K. M., Cagan, R. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Chemical+genetic+discovery+of+targets+and+anti-targets+for+cancer+polypharmacology.">Chemical genetic discovery of targets and anti-targets for cancer polypharmacology.</a> Nature. 486 (7401), 80-84 (2012).</li><li>Pandey, U. B., Nichols, C. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Human+disease+models+in+Drosophila+melanogaster+and+the+role+of+the+fly+in+therapeutic+drug+discovery.">Human disease models in Drosophila melanogaster and the role of the fly in therapeutic drug discovery.</a> Pharmacol Rev. 63 (2), 411-436 (2011).</li><li>Gill, R. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Multistate+life-tables+and+regression+models.">Multistate life-tables and regression models.</a> Math Popul Stud. 3 (4), 259-276 (1992).</li><li>Mantel, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ranking+procedures+for+arbitrarily+restricted+observation.">Ranking procedures for arbitrarily restricted observation.</a> Biometrics. 23 (1), 65-78 (1967).</li><li>Breslow, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+generalized+Kruskal-Wallis+test+for+comparing+K+samples+subject+to+unequal+patterns+of+censorship.">A generalized Kruskal-Wallis test for comparing K samples subject to unequal patterns of censorship.</a> Biometrika. 57 (3), 579-594 (1970).</li><li>Gehan, E. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+generalized+wilcoxon+test+for+comparing+arbitrarily+singly-censored+samples.">A generalized wilcoxon test for comparing arbitrarily singly-censored samples.</a> Biometrika. 52, 203-223 (1965).</li></ol>

Burada tarif edilen deney, nitel ve nicel olarak, çeşitli genetik geçmişlerde, çevresel etkiler, ve / veya hasar kaynaklı durumların larvaları nosisepsiyon veya nosiseptif hassasiyete değerlendirmek için de kullanılabilir. Bu deney, bu araç ile soğuk bir uyarıcı odak uygulama için izin verdiği bir özellikle düşük ısılara yanıt, periferal sensor nöronların bir alt fonksiyonunu değerlendirmek. İlginç bir şekilde, bu soğuk uyarılmış davranışlar ısı 7,...

Drosophila yeni korunmuş genler ve karmaşık davranışlar temelinde yatan nöronal devrelerin tanımlanması için yüksek ölçüde yararlı olduğu kanıtlanmıştır. Sinekler gelişmiş bir genetik araç ve nosisepsiyon 5, 6, 7 hücresel ve moleküler bazları incelemek için genetik ve nöronal manipülasyon, 1, 2, 3, 4 izin basitleştirilmiş sinir sistemi sağlar. Larvalar, yumuşak bir dokunuş 8, 9, 10, zararlı ısı 11, 12, 13 ve zararlı uyarıcıya 4 mekanik hissi için davranışsal deneyleri göz önüne alındığında, bu analizler için özellikle yararlıdır </sup&gt; 11 zaten kurulmuş ve şeffaf larva kütikül epidermis ve altta yatan duyusal nöronların canlı veya sabit görüntüleme için izin verir edilmiştir. Son zamanlarda, zararlı soğuk için bir tahlil de burada daha detaylı olarak tarif 7, geliştirilmiştir. Ince, konik uçlu soğuk probu kullanarak, göstermektedir, ya da sert bir mekanik ya da yüksek sıcaklık uyaranlara 7, 8 sonra, 11 Drosophila larvaları sergilerler yumuşak bir dokunuş sonrasında normal hareket sırasında gözlenen davranışlar farklıdır soğuk spesifik reaktif davranışlar, bir dizi olduğu . Soğuk özgü davranış sağlam bir tam vücut kasılması (BT), bir U-şekli (ABD) içine arka segment (PR) ve ön eş zamanlı bir zam ve posterior segment 45-90º zam bulunmaktadır. Bu davranışların sıklığı düşen sıcaklıklar ama s, her tepe ile artarHafif farklı soğuk sıcaklıklarda. Son çalışmalar, BT tepkileri zararlı ısı veya sert mekanik uyarıcılara 7 cevap verdiği, bu daha farklı, periferal sensor nöronların aracılık olduğunu göstermektedir. Çok omurgalı nosiseptörlerin gibi, Drosophila birden fazla dendritik (md), periferal duyu nöronları epidermis üzerinde 1 arborize kompleks dentritik yapılara sahiptir. MD nöronlar ventral sinir kablosu 14 aksonları çıkıntı, her larva gövde bölümünün içinde mevcut bulunmaktadır. MD duyu nöronları dendritik morfolojiye göre dört farklı sınıflarına (I-IV) ayrılır ve duyusal fonksiyonları 4, 9, 10, 15, 16, 17 değişken adres. sınıf IV nöronlar larva lateral vücut rulo tepkileri için gerekli ikenyüksek sıcaklıklarda veya sert mekanik uyarıcılara 4, sınıf III nöronlar yumuşak bir dokunuş yanıtları 9, 10 için gereklidir ve sadece soğuk ile aktif hale getirilmediği, fakat aynı zamanda soğuk uyarılmış davranışsal tepkileri 7 için gereklidir. Her iki sınıf III ve sınıf IV nöronlar uyaranlara 9, 10, 17, 19 7, 11, 18, zararlı ve zararlı olmayan davranışsal tepkileri kolaylaştırmak ayrı geçici reseptör potansiyel (TRP) kanal kullanmaktadır. Bundan başka, larva nosisepsiyon 20, hücresel ve davranış seviyelerinde 12, 21, aşağıdaki yaralanması hassaslaştırılır. Burada tarif edilen deney, quantificatio sağlarNormal ya da potansiyel iki n ortam sıcaklıklarında (18-22 ° C) için, zararlı soğuktan (10 ° C &#39;≤) kadar düşük sıcaklıklarda, zararsız serin (11-17 ° C) için davranışsal tepkileri değiştirmiştir. Bu tahlilde kullanılan soğuk sıcaklıklarda, doğrudan, sınıf III duyu nöronlarını aktive edici nitelik olabilir ve niceliksel olarak 7 analiz edilebilir sağlam ve tekrarlanabilir kalsiyum artar ve soğuk uyarılmış davranışsal tepkileri ortaya çıkarma yeteneğine sahiptir. Bu deney, soğuk nosisepsiyon, nosiseptif duyarlılığın veya nosiseptif plastisite etki, genetik ve çevresel faktörlerin belirlenmesi çeşitli çevre koşullarına maruz larvası (değiştirilmiş beslenme, yaralanma, farmakolojik maddelere) yanı sıra hemen hemen herhangi bir genotip larvalarına uygulanabilir. thermosensation çok canlı üzerindeki her yerde olduğu göz önüne alındığında, bu deney, nosisepsiyon çalışma için değerli bir araç sağlar ve yeni gen hedefleri veya artıracak nöronal etkileşimleri ortaya çıkarabiliromurgalı nosisepsiyon anlayışımız. Özel oluşturulmuş soğuk prob (soğuk prob, Malzemelerin Tablo) termal iletim yoluyla alüminyum şaft ve konik ucunu soğutur, Peltier cihazı, kontrol edilen bir kapalı döngü sıcaklığı kullanmaktadır. Termistör alüminyum konik ucu içine gömülü olduğu kontrol birimi gerçek zamanlı sıcaklığını gösterir. Bir soğutucu ve fan (Termal Kontrol Ünitesi, Malzemelerin Tablo) elde edilebilir Peltier tesir ısı yükü (Qc) böylece (22-0 ° C) istenen sıcaklık aralığı ayarlamak için termoelektrik modül eklenir. Soğuk prob ucunun zararlı soğuk uyaran, ön ve arka uçlarından eşit uzaklıktaki segmenti (lar), sırt orta çizgisi için elle uygulanır larva (kabaca kademeli A4, Şekil 1A bakınız). Soğuk uyaranlara yanıt olarak, larva genellikle 10 s kesim içinde üç soğuk hatırlattığı hareketler birini üretmek: tam gövdekasılması (BT), bir U-şekli (ABD) ya da (Sonuçlar tarif edilmiştir) arka segment (PR) bir zam içine anterior ve posterior segment bir 45-90º kaldırmak. Bu davranışların hiçbiri, normal peristaltik hareketin veya yem arama davranışı sırasında gerçekleştirilir. Bu davranışlar da yumuşak bir dokunuş tepkiler ve yüksek sıcaklık veya zararlı mekanik uyarıcılara verdikleri caydırıcı haddeleme yanıt farklıdır.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" width="573">
	<tbody>
		<tr height="63">
			<td height="63" style="height:63px;width:216px;">Cold Probe</td>
			<td style="width:71px;">Pro-Dev Engineering</td>
			<td style="width:119px;">Custom-built on demand</td>
			<td style="width:167px;">Part numbers and construction details can be provided on request</td>
		</tr>
		<tr height="63">
			<td height="63" style="height:63px;width:216px;">Thermal Control Unit</td>
			<td style="width:71px;">TE Technology</td>
			<td style="width:119px;">Custom Built enclosure</td>
			<td style="width:167px;">Part numbers and construction details can be provided on request</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Zeiss Stemi 2000 microscope</td>
			<td style="width:71px;">Zeiss</td>
			<td style="width:119px;">NT55-605</td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="84">
			<td height="84" style="height:84px;width:216px;">Fiber-Lite MI-150 High Intensity Illuminator</td>
			<td style="width:71px;">Dolan-Jenner Industries.</td>
			<td style="width:119px;">A20500</td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="84">
			<td height="84" style="height:84px;width:216px;">Schott Dual Gooseneck 23 inch Fiber Optic Light Guide</td>
			<td style="width:71px;">Schott North America, Inc.</td>
			<td style="width:119px;">Schott A08575</td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="147">
			<td height="147" style="height:147px;width:216px;">Forceps</td>
			<td style="width:71px;">FST</td>
			<td style="width:119px;">FS-1670</td>
			<td style="width:167px;">Used to sort and handle larvae. Be sure to smooth and blunt forceps tips slightly to lower the risk of accidently puncturing or injuring the larvae</td>
		</tr>
		<tr height="84">
			<td height="84" style="height:84px;width:216px;">Paintbrush</td>
			<td style="width:71px;">Dick Blick Art Materials</td>
			<td style="width:119px;">06762-1002</td>
			<td style="width:167px;">Used to sort and handle larvae. It is helpful if the paintbrush is damp during use.</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="40" style="height:40px;width:216px;">35 X 10 mm Polystyrene Petri Dish</td>
			<td rowspan="2" style="width:71px;">Falcon</td>
			<td rowspan="2" style="width:119px;">351008</td>
			<td rowspan="2" style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="40" style="height:40px;width:216px;">60 X 10 mm Polystyrene Petri Dish</td>
			<td rowspan="2" style="width:71px;">Falcon</td>
			<td rowspan="2" style="width:119px;">351007</td>
			<td rowspan="2" style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="63">
			<td height="63" style="height:63px;width:216px;">Piece of black vinyl (at least 2 x 2 inches)</td>
			<td style="width:71px;"></td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td style="width:167px;">Used to provide contrast and orient larvae to the cold probe</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">Fisherbrand Scoopula Spatula</td>
			<td style="width:71px;">Fisher Scientific</td>
			<td style="width:119px;">14-357Q</td>
			<td style="width:167px;">Used to move food</td>
		</tr>
		<tr height="63">
			<td height="63" style="height:63px;width:216px;">Kimtech Science Kimwipes</td>
			<td style="width:71px;">Fisher Scientific</td>
			<td style="width:119px;">06-666A</td>
			<td style="width:167px;">Used to dry the larvae and cold probe if there is excess moisture</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

novel assay for cold nociception in drosophila larvae

Nasıl organizmalar algılayıp hala tam olarak anlaşılamamıştır zararlı sıcaklıklara yanıt verirler. Bundan başka, örneğin periferik nöropati veya hasar kaynaklı hassasiyete geçiren hastalarda duyu makine hassasiyete, altında yatan mekanizmalar iyi karakterize değildir. Genetik olarak uysal Drosophila modeli, zararlı ısı tespiti için gerekli hücreleri ve genlerin çalışma için kullanılmıştır hangi ilgi birden fazla korunmuş genleri vermiştir. Küçük hücreler ve zararlı soğuk algılama için önemli reseptörler hakkında ancak bilinmektedir. Drosophila soğuk sıcaklıklarda (≤10 ºC) uzun süre maruz hayatta etmez ve zararlı soğuk uyarıcıları onlar anlamda nasıl davranış tercihi deneylerde, daha sıcak sıcaklıklar tercih serin önlemek ve muhtemelen önleyecektir rağmen ancak son zamanlarda incelendi. Burada tarif ve ilk zararlı soğuk (≤10 ºC) davranışsal tahlil karakterizeDrosophila. Bu aracı ve analizi kullanarak, kalitatif ve kantitatif olarak soğuk nosiseptif davranışlar değerlendirmek için nasıl bir müfettiş göstermektedir. Bu hastalık, yaralanma ya da duyarlılık bağlamında muhtemelen normal / sağlıklı kültür koşulları altında yapılabilir ya da edilebilir. Bundan başka, bu deney thermosensation, ağrı veya nosiseptif duyarlılığın etkileyebilir istenen genotipler, seçilen larvalarına uygulanabilir. ağrı ayrıca muhtemelen omurgalılar dahil diğer türlere, ağrı süreçlerinin önemli bir anlayış toplamaktadır olacak ısı nosisepsiyon incelemek için bu tahlil kullanılarak, yüksek düzeyde korunmuş bir süreç olduğu göz önüne alındığında.

Ara sıra duraklamaları, baş döner, ve yön 22&#39;de değişiklikleri içeren bir peristaltik hareketi ile Drosophila larvaları hareket. fokal ancak zararlı soğuk uyarıcının uygulanması, larva sergi zararlı ısı ve mekanik uyarıcılara karşı caydırıcı yatay rulo farklı kendine has davranışlar, bir dizi yanıt olarak. Bu davranışlar yumuşak bir dokunuş 8, 9, <su...

Watch this Scientific Journal Video about Novel Assay for Cold Nociception in Drosophila Larvae at JoVE.com

Novel Assay for Cold Nociception in Drosophila Larvae

Burada Drosophila larvalarının soğuk nosisepsiyon incelemek için yeni bir test göstermektedir. Bu deney, bir fokal zararlı soğuk uyan uygulamak edebilen özel bir dahili Peltier prob kullanır ve ölçülebilir soğuk belirli bir davranış ile sonuçlanır. Bu teknik, soğuk nosisepsiyon başka hücresel ve moleküler diseksiyon sağlayacaktır.

Soğuk nosisepsiyon için Roman Tahlili<em&gt; Drosophila</em&gt; Larva

How organisms sense and respond to noxious temperatures is still poorly understood. Further, the mechanisms underlying sensitization of the sensory ...

The overall goal of this noxious cold assay is to be able to quantitate and assess changes in innocuous to noxious cold detection. This method can help answer key questions in the nociception field, including facilitating identification of novel, conserved, cold nociception genes and modulators of pain responses in disease and or injury. The main advantage of this technique is it allows for precise manipulation of the noxious cold stimulus and quantification of cold evoked responses over a variety of environmental and genetics contexts.Generally individuals new to this method will need to practice consistent application of the probe before beginning an experiment. We first had the idea for this method when we found the that drosophila larvae respond to noxious heat and we became curious about whether they do the same to noxious cold. Raise stocks or genetic crosses of drosophila in a 25 degrees Celsius incubator.Note, if culturing a cross, use 20 to 25 virgin females and 15 to 20 males per vial containing regular corn meal fly media and culture for approximately 48 hours before transferring flies to a new vial of food. Five days after the culture is started, collected third instar larvae of the desired genotype by gently squirting a stream of water into the mushy food and larvae. Then pour out the contents into a medium sized clean Petri Dish.Next, gently sort larvae by size, using forceps to preclude larger, wandering third instar, or small, sickly larvae from being tested. Discard larvae containing any undesired genetic markers or balancers. Have another lab member label containers where sorted larvae will be placed to keep the experimenter blind to the experimental condition or genotype of the larvae.Use a scoopula to transfer a small amount of fresh food into a clean labeled Petri Dish filled halfway with room temperature water. Finally, use forceps to gently move the sorted larvae onto the food to prevent starvation or dessication, if testing is anticipated to take more than 20 minutes. Begin by turning on the cold probe unit and allow it a few minutes to cool to the desired temperature.Wipe away any excess moisture on the probe with a laboratory wipe. When not in immediate use, place an insulating cap on the probe to both insulate and keep the tip clean and prevent damage. Next, place a middle third instar larva onto a thin piece of dark movable vinyl to help with contrast visualization and alignment of the probe.Then, place this piece of vinyl with the larva under a bright field microscope. Adjust the microscope and light unit to medium brightness to provide contrast and prevent the larva from drying out too quickly. Using a damp paintbrush, ensure that the larva is moist from the Petri Dish water so that it will not stick to the vinyl and remove any excess water surrounding it using a KimWipe.Advanced the probe by hand towards the larva at a 90 degree angle to the anteroposterior body axis, using the vinyl to move the larva into correct position. The orient the tip of the probe to gently lay across the mid-dorsal surface of the larva with the probe at approximately a 45 degree angle to the microscope stage. Upon probe contact, start a timer.Apply enough downward pressure to slightly indent the surface of the larval cuticle, while still allowing forward or backward movement. Next, hold the probe in place for up to 10 seconds or until a cold evoked behavioral response is observed, whichever occurs first. Then, remove the probe.Record the observed behavioral response and latency of the response. Take note of any non-responders or larvae that do not respond within 10 seconds. Finally, discard the larva and prepare the next.Repeat the procedure until the desired number of test larvae is reached. After contact with the cold probe, results from this experiment indicate that the larvae respond with the following cold-evoked behaviors, crunching their anterior and posterior segments towards the center of their body in a contraction, CT, raising of their anterior and posterior segments into the air to make a U-Shape, US, raising only the posterior segments into the air, PR.Furthermore, different behaviors peak over varying cold ranges such that PR and US peak at three to eight degrees Celsius, while CT peaks around nine to 14 degrees Celsius. Lastly, when comparing latencies of the different cold behaviors, these data show that CT responses were significantly different from PR and US at three degrees Celsius and 10 degrees Celsius and from US at 20 degrees Celsius.Once mastered, this technique can be completed in approximately 30 to 40 minutes for one set of 30 larvae. While attempting this procedure, it's important to be aware of abnormal locomotion, the moisture level of the larva, and the pressure and placement of the cold probe onto the larva. Visual demonstration of this method is critical as improper application of the cold probe could result in different dose response curves or a lack of the cold response behavior.Following this procedure, other methods can be used, such as fluorescent light imaging, gene expression analysis and behavioral assays. All will determine how cold exposure effects cellular activity, morphology, gene expression, or other behaviors. This technique paves the way for researchers in the field of cold nociception to study the genetic, environmental, and disease effects in drosophila.After watching this video, you should have a good understanding of how to use the cold probe tool and assay to analyze cold-evoked responses and understand the cellular and genetic mechanisms of cold nociception.

Research

JoVE Journal

Neuroscience

Novel Assay for Cold Nociception in Drosophila Larvae

Local and Global Methods of Assessing Thermal Nociception in Drosophila Larvae

Local and Global Methods of Assessing Thermal Nociception in Drosophila Larvae

Termal nosisepsiyon değerlendirilmesi Yerel ve Küresel Yöntemleri<em&gt; Drosophila</em&gt; Larva

In this article, we demonstrate assays to study thermal nociception in Drosophila larvae. One assay involves spatially-restricted (local) stimulation of ...

Nörobilim

Visualization of Proprioceptors in Drosophila Larvae and Pupae

Visualization of Proprioceptors in Drosophila Larvae and Pupae

Içinde proprioseptörlere Görselleştirmesi<em&gt; Drosophila</em&gt; Larva ve Pupa

Proprioception is the ability to sense the motion, or position, of body parts by responding to stimuli arising within the body. In fruitflies and other ...

Appetitive Associative Olfactory Learning in Drosophila Larvae

Appetitive Associative Olfactory Learning in Drosophila Larvae

In iştahlı İlişkilendirilebilir Olfaktör Öğrenme<em&gt; Drosophila</em&gt; Larva

In the following we describe the methodological  details of appetitive associative olfactory learning in Drosophila larvae. The setup, in combination with ...

Light Preference Assay to Study Innate and Circadian Regulated Photobehavior in Drosophila Larvae

Light Preference Assay to Study Innate and Circadian Regulated Photobehavior in Drosophila Larvae

Içinde Doğuştan gelen ve sirkadiyen Ayarlı Photobehavior Eğitim ışık tercih Testi<em&gt; Drosophila</em&gt; Larva

Light acts as environmental signal to control animal behavior at various levels. The Drosophila larval nervous system is used as a unique model to answer ...

Optogenetic Perturbation of Neural Activity with Laser Illumination in Semi-intact Drosophila Larvae in Motion

Optogenetic Perturbation of Neural Activity with Laser Illumination in Semi-intact Drosophila Larvae in Motion

Yarı sağlam Lazer Aydınlatma ile Sinir Faaliyet optogenetic Pertürbasyon<em&gt; Drosophila</emMotion&gt; Larva

Drosophila larval locomotion is a splendid model system in developmental and physiological neuroscience, by virtue of the genetic accessibility of the ...

A Single-fly Assay for Foraging Behavior in Drosophila

A Single-fly Assay for Foraging Behavior in Drosophila

Toplayıcılık Davranış için Tek-sinek Deneyi<em&gt; Drosophila</em

For many animals, hunger promotes changes in the olfactory system in a manner that facilitates the search for appropriate food sources. In this video ...

Straightforward Assay for Quantification of Social Avoidance in Drosophila melanogaster

Straightforward Assay for Quantification of Social Avoidance in Drosophila melanogaster

Sosyal Kaçınma Niceleme için Basit Testi<em&gt; Drosophila melanogaster</em

Drosophila melanogaster is an emerging model to study different aspects of social interactions. For example, flies avoid areas previously occupied by ...

A Simple and Inexpensive Method for Determining Cold Sensitivity and Adaptation in Mice

Fareler Soğuk Hassasiyeti ve Uyum belirlenmesi için Basit ve ucuz Yöntem

Cold hypersensitivity is a serious clinical problem, affecting a broad subset of patients and causing significant decreases in quality of life.  The cold ...

Foraging Path-length Protocol for Drosophila melanogaster Larvae

Foraging Path-length Protocol for Drosophila melanogaster Larvae

için yiyecek arama yolu uzunluğu Protokolü<em&gt; Drosophila melanogaster</em&gt; Larva

The Drosophila melanogaster larval path-length phenotype is an established measure used to study the genetic and environmental contributions to behavioral ...

Taste Preference Assay for Adult Drosophila

Taste Preference Assay for Adult Drosophila

Yetişkin için tat Tercihi Testi<em&gt; Drosophila</em

Olfactory and gustatory perception of the environment is vital for animal survival.  The most obvious application of these chemosenses is to be able to ...