Name: a method for production of recombinant mcd1d protein in insect cells.
Uploaded: 2007-12-10T22:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about A Method For Production of Recombinant mCD1d Protein in Insect Cells. at JoVE.com

<p class="jove_step" style=";text-align:right;direction:rtl"> I. ההפשרה תאים </p><p class="jove_content" style=";text-align:right;direction:rtl"> קח את הבקבוקון קפוא של TN5 תאים, להפשיר אותה אמבטיה במים 37 מעלות צלזיוס. הוסף 5 מ&quot;ל של מדיום אקספרס חרקים (Invitrogen, קטלוג מספר 10486) בבקבוק <sup>2</sup> 25cm TC. שים לב אקספרס five מגיע ללא גלוטמין, צריך להוסיף 10 מ&quot;ל של סטרפטוקוקוס עט...

<ol>
	<li>Benlagha, K., Weiss, A., Beavis, A., Teyton, L., Bendelac, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+vivo+identification+of+glycolipipd+antigen-specific+T+cells+using+fluorecent+CD1d+tetramers.">In vivo identification of glycolipipd antigen-specific T cells using fluorecent CD1d tetramers.</a> <em style='font-style: italic'>J. Exp. Med</em>. <b>191</b>, 1895-1903 (2000).</li><li>Kinjo, Y., Wu, D., Kim, G., Xing, G. W., Poles, M. A., Ho, D. D., Tsuji, M., Kawahara, K., Wong, C. H., Kronenberg, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Recognition+of+bacterial+glycosphingolipids+by+natural+killer+T+cells.">Recognition of bacterial glycosphingolipids by natural killer T cells.</a> <em style='font-style: italic'>Nature</em>. <b>434</b>, 520-525 (2005).</li><li>Naidenko, O. V., Maher, J. K., Ernst, W. A., Sakai, T., Modlin, R. L., Kronenberg, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Binding+and+antigen+presentation+of+ceramide-containing+glycolipids+by+soluble+mouse+and+human+CD1d+molecules.">Binding and antigen presentation of ceramide-containing glycolipids by soluble mouse and human CD1d molecules.</a> <em style='font-style: italic'>J. Exp. Med</em>. <b>190</b>, 1069-1080 (1999).</li><li>Porcelli, S. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+CD1+family:+A+third+lineage+of+antigen-+presenting+molecules.">The CD1 family: A third lineage of antigen- presenting molecules.</a> <em style='font-style: italic'>Adv. Immunol</em>. <b>59</b>, 1-98 (1995).</li><li>Sidobre, S., Kronemberg, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=CD1+tetramers:+A+powerful+tool+for+the+analysis+of+glycolipid-reactive+T+cells.">CD1 tetramers: A powerful tool for the analysis of glycolipid-reactive T cells.</a> <em style='font-style: italic'>J. Immunol</em>. <b>169</b>, 1340-1348 (2002).</li></ol>

<p style=";text-align:right;direction:rtl"> בהליך זה, הוא הראה כיצד ליזום, לגדול, להדביק תאים חרקים וכיצד titer baculovirus באמצעות תאים אלה. ההיבטים החשובים ביותר של הליך זה הם אחזקה של תאים לדעת את titer המדויק של baculovirus. ברגע שיש לך שנוצר CD1 tetramers, הם יכולים לשמש כלי רב עוצמה לניתוח glycolipid בתאי T תגובתי. מערכות Baculovirus משמשים גם נרחב כדי ...

<!DOCTYPE html PUBLIC "-//W3C//DTD XHTML 1.0 Transitional//EN" "http://www.w3.org/TR/xhtml1/DTD/xhtml1-transitional.dtd">
<html xmlns="http://www.w3.org/1999/xhtml" xml:lang="en" lang="en">	
		
		<div>
		<table border="1">
		<thead>
		<tr>
		<th>Material Name</th>
		<th>Type</th>
		<th>Company</th>
		<th>Catalogue Number</th>
		<th>Comment</th>
		</tr>
		</thead>
		<tbody>
		
<tr>
<td>Express Five SFM</td>
<td> Serum Free Medium</td>
<td>Invitrogen</td>
<td>10486025</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>High Five TM</td>
<td> Insect Cells</td>
<td>Invitrogen</td>
<td>B855-02</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Glutamine Pen strep</td>
<td>Antibiotics</td>
<td>Invitrogen</td>
<td>10378-016</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>25cm2 TC Flask</td>
<td> Plastic</td>
<td>Fisher</td>
<td>10-126-28</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>175 cm2 TC Flask</td>
<td> Plug seal flask</td>
<td>Fisher</td>
<td>10-126-8</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Erlenmeyer Flask</td>
<td>   Cell Culture Flask</td>
<td>Fisher</td>
<td>07 200 672</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>YM 30 Concenterator</td>
<td>30,000 MWCO</td>
<td>Millipore</td>
<td>UFC 903096</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>FPLC equipment</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>GE Healthcare</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>BrA Enzyme and Buffer</td>
<td> Biotinylation Kit</td>
<td>Avidity</td>
<td>BIRA500</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Ni-NTA Agarose Column</td>
<td>His Tag Protein Purification Column</td>
<td>GE Healthcare</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Desalting column</td>
<td> To get Rod of Salt from Protein</td>
<td>GE Healthcare</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>MonoQ  Column</td>
<td>Anion Exchange Chromatgraphy</td>
<td>GE Healthcare</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>S200 Column</td>
<td> Size Exclusion Chromatography</td>
<td>GE Healthcare</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>alpha-Galcer</td>
<td> Glycolipid</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>PE- Streptavidin</td>
<td>  For conjugating Protein</td>
<td>Molecular Probe</td>
<td> S-866</td>
<td>&nbsp;</td>		</tbody>
		</table>
		</div>
	

a method for production of recombinant mcd1d protein in insect cells.

<p style=";text-align:right;direction:rtl"> CD1 חלבונים מהווים המחזור השלישי של אנטיגן הצגת מולקולות. הם פני התא גליקופרוטאינים, כפי שבאה לידי ביטוי שרשראות כבדות כ 50-kDa glycosylated המשויכים noncovalently עם microglobulin-Beta2. הם נקשרים שומנים ולא פפטידים. למרות המבנה שלהם מאשר את הדמיון של CD1 חלבונים MHC אני בכיתה ו הכיתה מולקולות II הצגת אנטיגן, mCD1d חריץ צר יחסית, עמוק, הידרופובי מאוד ויש לו שני כיסים מחייב במקום הכיסים רדוד מספר תיאר הקלאסית MHC- מקודד אנטיגן הצגת מולקולות. בהתבסס על רצפי אמינו חומצה שלהם, כגון חריץ hydrobphobic מספקת סביבה אידיאלית עבור הכריכה של אנטיגנים השומנים. </p><p style=";text-align:right;direction:rtl"> הרוצח טבעי T (NKT) תאים להשתמש TCR שלהם להכיר glycolipids חייב או שהציג CD1d. בתאי T תגובתי שומנים שהציג CD1 היו מעורבים הגנה נגד מחלות אוטואימוניות זיהומיות בבית דחייה הגידול. לפיכך, היכולת לזהות, לטהר, ולעקוב אחר תגובת התא NKT CD1-reactive היא בעלת חשיבות רבה. הדור של tetramers של אלפא Galactosyl ceramide (א-Galcer) עם CD1d יש תובנה משמעותית לתוך הביולוגיה של תאים NKT. Tetramers בנויים CD1 מולקולות אחרות יש גם שנוצר אלה ריאגנטים חדשים הרחיבו מאוד את הידע של הפונקציות של שומנים בדם תגובתי בתאי T, עם שימוש פוטנציאלי ניטור התגובה השומנים מבוסס חיסונים באבחון של מחלות אוטואימוניות אחרות טיפולים. </p>

Watch this Scientific Journal Video about A Method For Production of Recombinant mCD1d Protein in Insect Cells. at JoVE.com

A Method For Production of Recombinant mCD1d Protein in Insect Cells.

<p class="jove_content">שיטה להכנת תאים חרקים להדביק אותם עם baculovirus לצורך הייצור של proteinand רקומביננטי mCD1d יצירת tetramers mCD1d.</p>

שיטה לייצור של חלבון רקומביננטי mCD1d בתוך תאים חרקים.

CD1 proteins constitute a third class of antigen-presenting molecules. They are cell surface glycoproteins, expressed as approximately 50-kDa glycosylated ...

Research

JoVE Journal

Biology

Pyrosequencing: A Simple Method for Accurate Genotyping

Pyrosequencing: שיטה פשוטה genotyping מדויק

Pharmacogenetic research benefits first-hand from the abundance of information provided by the completion of the Human Genome Project. With such a ...

A Protocol for Phage Display and Affinity Selection Using Recombinant Protein Baits

פרוטוקול לתצוגת הפאג וזיקה בחירה באמצעות פיתיונות חלבון רקומביננטי

Using  recombinant phage as a scaffold to present various protein portions encoded by  a directionally cloned cDNA library to immobilized bait molecules ...

Optimization and Utilization of <em>Agrobacterium</em>-mediated Transient Protein Production in <em>Nicotiana</em>

Optimization and Utilization of Agrobacterium-mediated Transient Protein Production in Nicotiana

אופטימיזציה וניצול<em&gt; Agrobacterium</emייצור חלבון חלוף&gt; בתיווך ב<em&gt; Nicotiana</em

Agrobacterium-mediated transient protein production in plants is a promising approach to produce vaccine antigens and therapeutic proteins within a short ...

Efficient Production and Purification of Recombinant Murine Kindlin-3 from Insect Cells for Biophysical Studies

הפקה וטיהור יעילה של רקומביננטי Murine Kindlin-3 מתאי חרקים לBiophysical לימודים

Kindlins are essential coactivators, with talin, of the cell surface receptors&#160;integrins and also participate in integrin outside-in signalling, and ...

Investigating Protein-protein Interactions in Live Cells Using Bioluminescence Resonance Energy Transfer

חוקר חלבונים אינטראקציות בתאים חיים באמצעות העברת פליטת אור התהודה אנרגיה

Assays based on Bioluminescence Resonance Energy Transfer (BRET) provide a sensitive and reliable means to monitor protein-protein interactions in live ...

Recombinant Protein Expression for Structural Biology in HEK 293F Suspension Cells: A Novel and Accessible Approach

ביטוי חלבון רקומביננטי לביולוגיה מבנית בתאי ההשעיה HEK 293F: רומן וגישה נגישה

The expression and purification of large amounts of recombinant protein complexes is an essential requirement for structural biology studies. For over two ...

Green Fluorescent Protein-based Expression Screening of Membrane Proteins in <em>Escherichia coli</em>

Green Fluorescent Protein-based Expression Screening of Membrane Proteins in Escherichia coli

הקרנה ירוקה פלורסנט מבוסס חלבון ביטוי של החלבונים ממברנה ב<em&gt; Coli Escherichia</em

The production of recombinant membrane proteins for structural and functional studies remains technically challenging due to low levels of expression and ...

A Comparative Analysis of Recombinant Protein Expression in Different Biofactories: Bacteria, Insect Cells and Plant Systems

ניתוח השוואתי של ביטוי חלבון רקומביננטי בBiofactories שונה: חיידקים, תאי חרקים וצמחי מערכות

Plant-based systems are considered a valuable platform for the production of recombinant proteins as a result of their well-documented potential for the ...

Nephrotoxin Microinjection in Zebrafish to Model Acute Kidney Injury

Nephrotoxin Microinjection דג הזברה למודל אי-ספיקת כליות חריפה

The kidneys are susceptible to harm from exposure to chemicals they filter from the bloodstream. This can lead to organ injury associated with a rapid ...

A Graphical User Interface for Software-assisted Tracking of Protein Concentration in Dynamic Cellular Protrusions

ממשק משתמש גרפי למעקב בסיוע תוכנה של ריכוז חלבון בהפרעות ניידות דינמיות

Filopodia are dynamic, finger-like cellular protrusions associated with migration and cell-cell communication. In order to better understand the complex ...