Name: a method for production of recombinant mcd1d protein in insect cells.
Uploaded: 2007-12-10T22:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about A Method For Production of Recombinant mCD1d Protein in Insect Cells. at JoVE.com

<p class="jove_step"> मैं कक्ष पहले गला लें </p><p class="jove_content"> TN5 कोशिकाओं के जमे हुए शीशी ले लो, और यह एक 37 डिग्री सेल्सियस पानी के स्नान में गल. कीट एक्सप्रेस माध्यम से 5ml (Invitrogen, सूची संख्या - 10,486) 25cm <sup>2</sup> टीसी फ्लास्क में जोड़ें. ध्यान दें क?...

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	<li>Benlagha, K., Weiss, A., Beavis, A., Teyton, L., Bendelac, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+vivo+identification+of+glycolipipd+antigen-specific+T+cells+using+fluorecent+CD1d+tetramers.">In vivo identification of glycolipipd antigen-specific T cells using fluorecent CD1d tetramers.</a> <em style='font-style: italic'>J. Exp. Med</em>. <b>191</b>, 1895-1903 (2000).</li><li>Kinjo, Y., Wu, D., Kim, G., Xing, G. W., Poles, M. A., Ho, D. D., Tsuji, M., Kawahara, K., Wong, C. H., Kronenberg, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Recognition+of+bacterial+glycosphingolipids+by+natural+killer+T+cells.">Recognition of bacterial glycosphingolipids by natural killer T cells.</a> <em style='font-style: italic'>Nature</em>. <b>434</b>, 520-525 (2005).</li><li>Naidenko, O. V., Maher, J. K., Ernst, W. A., Sakai, T., Modlin, R. L., Kronenberg, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Binding+and+antigen+presentation+of+ceramide-containing+glycolipids+by+soluble+mouse+and+human+CD1d+molecules.">Binding and antigen presentation of ceramide-containing glycolipids by soluble mouse and human CD1d molecules.</a> <em style='font-style: italic'>J. Exp. Med</em>. <b>190</b>, 1069-1080 (1999).</li><li>Porcelli, S. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+CD1+family:+A+third+lineage+of+antigen-+presenting+molecules.">The CD1 family: A third lineage of antigen- presenting molecules.</a> <em style='font-style: italic'>Adv. Immunol</em>. <b>59</b>, 1-98 (1995).</li><li>Sidobre, S., Kronemberg, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=CD1+tetramers:+A+powerful+tool+for+the+analysis+of+glycolipid-reactive+T+cells.">CD1 tetramers: A powerful tool for the analysis of glycolipid-reactive T cells.</a> <em style='font-style: italic'>J. Immunol</em>. <b>169</b>, 1340-1348 (2002).</li></ol>

<p> इस प्रक्रिया में, यह दिखाया गया है कैसे आरंभ करने के लिए बढ़ती है, कीट कोशिकाओं को संक्रमित और कैसे इन कोशिकाओं का उपयोग baculovirus टिटर. इस प्रक्रिया का सबसे महत्वपूर्ण पहलुओं में कोशिकाओं के रखरखाव कर रहे हैं और baculovir...

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		<div>
		<table border="1">
		<thead>
		<tr>
		<th>Material Name</th>
		<th>Type</th>
		<th>Company</th>
		<th>Catalogue Number</th>
		<th>Comment</th>
		</tr>
		</thead>
		<tbody>
		
<tr>
<td>Express Five SFM</td>
<td> Serum Free Medium</td>
<td>Invitrogen</td>
<td>10486025</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>High Five TM</td>
<td> Insect Cells</td>
<td>Invitrogen</td>
<td>B855-02</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Glutamine Pen strep</td>
<td>Antibiotics</td>
<td>Invitrogen</td>
<td>10378-016</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>25cm2 TC Flask</td>
<td> Plastic</td>
<td>Fisher</td>
<td>10-126-28</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>175 cm2 TC Flask</td>
<td> Plug seal flask</td>
<td>Fisher</td>
<td>10-126-8</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Erlenmeyer Flask</td>
<td>   Cell Culture Flask</td>
<td>Fisher</td>
<td>07 200 672</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>YM 30 Concenterator</td>
<td>30,000 MWCO</td>
<td>Millipore</td>
<td>UFC 903096</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>FPLC equipment</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>GE Healthcare</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>BrA Enzyme and Buffer</td>
<td> Biotinylation Kit</td>
<td>Avidity</td>
<td>BIRA500</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Ni-NTA Agarose Column</td>
<td>His Tag Protein Purification Column</td>
<td>GE Healthcare</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Desalting column</td>
<td> To get Rod of Salt from Protein</td>
<td>GE Healthcare</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>MonoQ  Column</td>
<td>Anion Exchange Chromatgraphy</td>
<td>GE Healthcare</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>S200 Column</td>
<td> Size Exclusion Chromatography</td>
<td>GE Healthcare</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>alpha-Galcer</td>
<td> Glycolipid</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>PE- Streptavidin</td>
<td>  For conjugating Protein</td>
<td>Molecular Probe</td>
<td> S-866</td>
<td>&nbsp;</td>		</tbody>
		</table>
		</div>
	

a method for production of recombinant mcd1d protein in insect cells.

<p class="jove_content"> CD1 प्रोटीन प्रतिजन पेश अणुओं की एक तिहाई वर्ग का गठन. वे कोशिका की सतह glycoproteins, लगभग 50 केडीए ग्लाइकोसिलेटेड भारी जंजीरों कि noncovalently beta2-microglobulin के साथ जुड़े रहे हैं के रूप में व्यक्त कर रहे हैं. वे बजाय लिपिड पेप्टाइड्स बाँध. हालांकि उनकी संरचना MHC वर्ग मैं और वर्ग द्वितीय प्रतिजन अणुओं पेश CD1 प्रोटीन की समानता की पुष्टि, mCD1d नाली अपेक्षाकृत संकीर्ण, गहरी, और अत्यधिक hydrophobic है और यह दो बाध्यकारी जेब कई शास्त्रीय लिए वर्णित उथले जेब के बजाय MHC प्रतिजन - पेश अणुओं इनकोडिंग. उनके एमिनो एसिड दृश्यों के आधार पर, ऐसी hydrobphobic नाली लिपिड प्रतिजनों के बंधन के लिए एक आदर्श वातावरण प्रदान करता है. </p><p class="jove_content"> प्राकृतिक हत्यारा टी कोशिकाओं (NKT) उनके TCR उपयोग करने के लिए बाध्य glycolipids या CD1d द्वारा प्रस्तुत की पहचान कर सकते हैं. टी कोशिकाओं लिपिड CD1 द्वारा प्रस्तुत प्रतिक्रियाशील autoimmune और संक्रामक रोगों के खिलाफ संरक्षण में और ट्यूमर अस्वीकृति में शामिल किया गया है. इस प्रकार, की पहचान करने के लिए, शुद्ध और CD1 प्रतिक्रियाशील NKT सेल की प्रतिक्रिया को ट्रैक करने की क्षमता काफी महत्व की है. CD1d साथ अल्फा Galactosyl ceramide (एक Galcer) के tetramers पीढ़ी NKT कोशिकाओं के जीव विज्ञान में महत्वपूर्ण अंतर्दृष्टि है. अन्य CD1 अणुओं से निर्माण tetramers भी उत्पन्न किया गया है और इन नए अभिकर्मकों लिपिड प्रतिक्रियाशील टी कोशिकाओं के कार्यों का बहुत ज्ञान का विस्तार किया है लिपिड आधारित टीकों के जवाब की निगरानी में क्षमता का उपयोग के साथ और autoimmune रोगों और अन्य के निदान में, उपचार. </p>

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A Method For Production of Recombinant mCD1d Protein in Insect Cells.

<p class="jove_content">एक विधि के लिए कीट कोशिकाओं को तैयार करने और उन्हें पुनः संयोजक mCD1d mCD1d tetramers पैदा proteinand के उत्पादन के उद्देश्य के लिए baculovirus साथ संक्रमित.</p>

कीट कक्ष में पुनः संयोजक mCD1d प्रोटीन के उत्पादन के लिए एक विधि.

CD1 proteins constitute a third class of antigen-presenting molecules. They are cell surface glycoproteins, expressed as approximately 50-kDa glycosylated ...

Research

JoVE Journal

Biology

Pyrosequencing: A Simple Method for Accurate Genotyping

Pyrosequencing: सटीक जीनोटाइपिंग के लिए एक सरल तरीका

Pharmacogenetic research benefits first-hand from the abundance of information provided by the completion of the Human Genome Project. With such a ...

A Protocol for Phage Display and Affinity Selection Using Recombinant Protein Baits

पुनः संयोजक प्रोटीन फँसाना चाहे का उपयोग फेज प्रदर्शन और आत्मीयता चयन के लिए एक प्रोटोकॉल

Using  recombinant phage as a scaffold to present various protein portions encoded by  a directionally cloned cDNA library to immobilized bait molecules ...

Optimization and Utilization of <em>Agrobacterium</em>-mediated Transient Protein Production in <em>Nicotiana</em>

Optimization and Utilization of Agrobacterium-mediated Transient Protein Production in Nicotiana

अनुकूलन और की उपयोगिता<em&gt; Agrobacterium</emमें&gt; मध्यस्थता क्षणिक प्रोटीन उत्पादन<em&gt; निकोटियाना</em

Agrobacterium-mediated transient protein production in plants is a promising approach to produce vaccine antigens and therapeutic proteins within a short ...

Efficient Production and Purification of Recombinant Murine Kindlin-3 from Insect Cells for Biophysical Studies

के कुशल उत्पादन और शोधन संयोजक Murine Kindlin -3 की biophysical अध्ययन के लिए कीट कोशिकाओं से

Kindlins are essential coactivators, with talin, of the cell surface receptors&#160;integrins and also participate in integrin outside-in signalling, and ...

Investigating Protein-protein Interactions in Live Cells Using Bioluminescence Resonance Energy Transfer

Bioluminescence प्रतिध्वनि ऊर्जा हस्तांतरण का प्रयोग जीवित कोशिकाओं में प्रोटीन, प्रोटीन बातचीत की जांच कर

Assays based on Bioluminescence Resonance Energy Transfer (BRET) provide a sensitive and reliable means to monitor protein-protein interactions in live ...

Recombinant Protein Expression for Structural Biology in HEK 293F Suspension Cells: A Novel and Accessible Approach

एक उपन्यास और सुलभ दृष्टिकोण: स्ट्रक्चरल HEK 293F निलंबन कोशिकाओं में जीवविज्ञान के लिए पुनः संयोजक प्रोटीन अभिव्यक्ति

The expression and purification of large amounts of recombinant protein complexes is an essential requirement for structural biology studies. For over two ...

Green Fluorescent Protein-based Expression Screening of Membrane Proteins in <em>Escherichia coli</em>

Green Fluorescent Protein-based Expression Screening of Membrane Proteins in Escherichia coli

झिल्ली प्रोटीन की हरी फ्लोरोसेंट प्रोटीन आधारित अभिव्यक्ति स्क्रीनिंग में<em&gt; Escherichia कोलाई</em

The production of recombinant membrane proteins for structural and functional studies remains technically challenging due to low levels of expression and ...

A Comparative Analysis of Recombinant Protein Expression in Different Biofactories: Bacteria, Insect Cells and Plant Systems

बैक्टीरिया, कीट कोशिकाओं और संयंत्र सिस्टम: पुनः संयोजक प्रोटीन विभिन्न Biofactories में अभिव्यक्ति का एक तुलनात्मक विश्लेषण

Plant-based systems are considered a valuable platform for the production of recombinant proteins as a result of their well-documented potential for the ...

Nephrotoxin Microinjection in Zebrafish to Model Acute Kidney Injury

Zebrafish में Nephrotoxin Microinjection गुर्दे की गंभीर चोट मॉडल के लिए

The kidneys are susceptible to harm from exposure to chemicals they filter from the bloodstream. This can lead to organ injury associated with a rapid ...

A Graphical User Interface for Software-assisted Tracking of Protein Concentration in Dynamic Cellular Protrusions

डायनामिक सेलुलर प्रोट्र्रेशन में प्रोटीन एकाग्रता के सॉफ़्टवेयर-सहायता प्राप्त ट्रैकिंग के लिए एक ग्राफ़िकल यूजर इंटरफेस

Filopodia are dynamic, finger-like cellular protrusions associated with migration and cell-cell communication. In order to better understand the complex ...