Name: a method for production of recombinant mcd1d protein in insect cells.
Uploaded: 2007-12-10T22:00:00
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<p class="jove_step"> I.は、セルを融解</p><p class="jove_content"> TN5細胞の凍結バイアルを取る、そして37℃の水浴中で解凍します。 25センチメートル<sup>2</sup> TCフラスコ内の昆虫エクスプレス培地（Invitrogen、カタログ番号- 10486）5mlを追加します。エクスプレス5人がグルタミンなしで来ることに注意してください。100Xグルタミンペンの連鎖球菌または1 LTのメディアに単独でグルタミン10mlのを追加する必要があります。...

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	<li>Benlagha, K., Weiss, A., Beavis, A., Teyton, L., Bendelac, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+vivo+identification+of+glycolipipd+antigen-specific+T+cells+using+fluorecent+CD1d+tetramers.">In vivo identification of glycolipipd antigen-specific T cells using fluorecent CD1d tetramers.</a> <em style='font-style: italic'>J. Exp. Med</em>. <b>191</b>, 1895-1903 (2000).</li><li>Kinjo, Y., Wu, D., Kim, G., Xing, G. W., Poles, M. A., Ho, D. D., Tsuji, M., Kawahara, K., Wong, C. H., Kronenberg, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Recognition+of+bacterial+glycosphingolipids+by+natural+killer+T+cells.">Recognition of bacterial glycosphingolipids by natural killer T cells.</a> <em style='font-style: italic'>Nature</em>. <b>434</b>, 520-525 (2005).</li><li>Naidenko, O. V., Maher, J. K., Ernst, W. A., Sakai, T., Modlin, R. L., Kronenberg, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Binding+and+antigen+presentation+of+ceramide-containing+glycolipids+by+soluble+mouse+and+human+CD1d+molecules.">Binding and antigen presentation of ceramide-containing glycolipids by soluble mouse and human CD1d molecules.</a> <em style='font-style: italic'>J. Exp. Med</em>. <b>190</b>, 1069-1080 (1999).</li><li>Porcelli, S. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+CD1+family:+A+third+lineage+of+antigen-+presenting+molecules.">The CD1 family: A third lineage of antigen- presenting molecules.</a> <em style='font-style: italic'>Adv. Immunol</em>. <b>59</b>, 1-98 (1995).</li><li>Sidobre, S., Kronemberg, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=CD1+tetramers:+A+powerful+tool+for+the+analysis+of+glycolipid-reactive+T+cells.">CD1 tetramers: A powerful tool for the analysis of glycolipid-reactive T cells.</a> <em style='font-style: italic'>J. Immunol</em>. <b>169</b>, 1340-1348 (2002).</li></ol>

<p>この手順では、それは、開始の成長、昆虫細胞に感染し、これらの細胞を用いてバキュロウイルスの力価方法をする方法を示されています。この手順の最も重要な側面は、細胞の維持であり、バキュロウイルスの正確な力価を知ることができます。一度CD1四量体を生成して、それらが糖脂質反応性T細胞の解析のための強力なツールとして使用することができます。バキュロウイルスシステムは、この手順で...

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		<div>
		<table border="1">
		<thead>
		<tr>
		<th>Material Name</th>
		<th>Type</th>
		<th>Company</th>
		<th>Catalogue Number</th>
		<th>Comment</th>
		</tr>
		</thead>
		<tbody>
		
<tr>
<td>Express Five SFM</td>
<td> Serum Free Medium</td>
<td>Invitrogen</td>
<td>10486025</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>High Five TM</td>
<td> Insect Cells</td>
<td>Invitrogen</td>
<td>B855-02</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Glutamine Pen strep</td>
<td>Antibiotics</td>
<td>Invitrogen</td>
<td>10378-016</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>25cm2 TC Flask</td>
<td> Plastic</td>
<td>Fisher</td>
<td>10-126-28</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>175 cm2 TC Flask</td>
<td> Plug seal flask</td>
<td>Fisher</td>
<td>10-126-8</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Erlenmeyer Flask</td>
<td>   Cell Culture Flask</td>
<td>Fisher</td>
<td>07 200 672</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>YM 30 Concenterator</td>
<td>30,000 MWCO</td>
<td>Millipore</td>
<td>UFC 903096</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>FPLC equipment</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>GE Healthcare</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>BrA Enzyme and Buffer</td>
<td> Biotinylation Kit</td>
<td>Avidity</td>
<td>BIRA500</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Ni-NTA Agarose Column</td>
<td>His Tag Protein Purification Column</td>
<td>GE Healthcare</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Desalting column</td>
<td> To get Rod of Salt from Protein</td>
<td>GE Healthcare</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>MonoQ  Column</td>
<td>Anion Exchange Chromatgraphy</td>
<td>GE Healthcare</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>S200 Column</td>
<td> Size Exclusion Chromatography</td>
<td>GE Healthcare</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>alpha-Galcer</td>
<td> Glycolipid</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>PE- Streptavidin</td>
<td>  For conjugating Protein</td>
<td>Molecular Probe</td>
<td> S-866</td>
<td>&nbsp;</td>		</tbody>
		</table>
		</div>
	

a method for production of recombinant mcd1d protein in insect cells.

<p class="jove_content"> CD1タンパク質は、抗原提示分子の第3のクラスを構成する。彼らは、非共有結合β2-ミクログロブリンに関連付けられている約50 - kDaのグリコシル化重鎖として表現さ​​れる細胞表面の糖タンパク質です。彼らは脂質ではなく、ペプチドを結合する。それらの構造がMHCクラスIとクラスIIの抗原提示分子にCD1タンパク質の類似性を確認するものの、mCD1d溝は相対的に、狭く深く、そして非常に疎水性であり、それは古典的で説明したいくつかの浅いポケットの代わりに二つの結合ポケットを有するMHC -エンコードされた抗原提示分子。それらのアミノ酸配列に基づいて、そのようなhydrobphobic溝は脂質抗原の結合のための理想的な環境を提供します。 </p><p class="jove_content">ナチュラルキラーT（NKT）細胞は、CD1dによってバインドされるか提示糖脂質を認識するために彼らのTCRを使用してください。 CD1から提示された脂質に反応性T細胞は自己免疫と感染症予防にと腫瘍拒絶に関与してきた。したがって、識別、浄化とcd1 -反応性NKT細胞の応答を追跡する機能は非常に重要です。 CD1dによるアルファガラクトシルセラミド（α- GalCerを）の四量体の生成は、NKT細胞の生物学の重要な洞察を持っています。他のCD1分子から構成された四量体も生成されており、これらの新しい試薬を大幅に脂質反応性T細胞の機能の知識を拡大し、脂質ベースのワクチンに対する応答を監視することで、自己免疫疾患やその他の診断に利用できる可能性を治療法。 </p>

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A Method For Production of Recombinant mCD1d Protein in Insect Cells.

<p class="jove_content">昆虫細胞を調製し、mCD1d四量体を生成する組換えmCD1d proteinandの生産を目的とバキュロウイルスとそれらを感染させる方法。</p>

昆虫細胞における組換えmCD1dタンパク質の製造方法。

CD1 proteins constitute a third class of antigen-presenting molecules. They are cell surface glycoproteins, expressed as approximately 50-kDa glycosylated ...

Research

JoVE Journal

Biology

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パイロシーケンシング：正確なジェノタイピングのための簡単​​な方法

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組換えタンパク質ベイトを用いてファージディスプレイおよび親和性選択のためのプロトコル

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Optimization and Utilization of <em>Agrobacterium</em>-mediated Transient Protein Production in <em>Nicotiana</em>

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最適化と利用の<em&gt;アグロバクテリウム</em中&gt;媒介一過性タンパク質産生<em&gt;タバコ</em

Agrobacterium-mediated transient protein production in plants is a promising approach to produce vaccine antigens and therapeutic proteins within a short ...

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膜タンパク質の緑色蛍光タンパク質ベースの発現スクリーニングで<em&gt;エシェリヒア·コリ</em

The production of recombinant membrane proteins for structural and functional studies remains technically challenging due to low levels of expression and ...

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