Name: assessment of hippocampal dendritic complexity in aged mice using the golgi-cox method
Uploaded: 2017-06-22T13:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Assessment of Hippocampal Dendritic Complexity in Aged Mice Using the Golgi-Cox Method at JoVE.com

Diese Arbeit wurde von einem Pilotstipendium unter NIH P20 GM109005 (ARA) und dem Zentrum für Translational Neuroscience IDeA Programmpreis P30 GM110702 unterstützt.

Experimente wurden in Übereinstimmung mit den ethischen Standards durchgeführt, die vom Institutional Animal Care and Use Committee bei UAMS genehmigt wurden. 1. Tiere und 5-Fu Einspritzung Paradigma <ol><li> Kaufen Sie 6 Monate alte männliche C57Bl6 / J Wildtyp Mäuse und beherbergen sie unter einem konstanten 12 h Licht / Dunkel Zyklus bis sie 1 Jahr alt sind. </li><li> Verdünnen Sie die 5-Fu in 0,9% steriler Kochsalzlösung. Verwenden Sie 60 mg / kg als benötigte Dosis pro Maus. </...

<ol>
	<li>Stuart, G. J., Spruston, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dendritic+integration:+60+years+of+progress.">Dendritic integration: 60 years of progress.</a> Nat Neurosci. 18 (12), 1713-1721 (2015).</li><li>Jan, Y. N., Jan, L. Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Branching+out:+mechanisms+of+dendritic+arborization.">Branching out: mechanisms of dendritic arborization.</a> Nat Rev Neurosci. 11 (5), 316-328 (2010).</li><li>Kulkarni, V. A., Firestein, B. 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Vibroslice NVSL &amp; Vibroslice NVSLM123 Available from: <a target="_blank" href="https://www.wpiinc.com/clientuploads/pdf/NVSL_NVSLM1_IM.pdf">https://www.wpiinc.com/clientuploads/pdf/NVSL_NVSLM1_IM.pdf</a> (2000)</li><li>. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Neurolucida 11.03. , (2017).</li><li>Sholl, D. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dendritic+organization+in+the+neurons+of+the+visual+and+motor+cortices+of+the+cat.">Dendritic organization in the neurons of the visual and motor cortices of the cat.</a> J Anat. 87 (4), 387-406 (1953).</li><li>Pillai, A. G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dendritic+morphology+of+hippocampal+and+amygdalar+neurons+in+adolescent+mice+is+resilient+to+genetic+differences+in+stress+reactivity.">Dendritic morphology of hippocampal and amygdalar neurons in adolescent mice is resilient to genetic differences in stress reactivity.</a> PLoS ONE. 7 (6), (2012).</li><li>Morley, B. J., Mervis, R. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dendritic+spine+alterations+in+the+hippocampus+and+parietal+cortex+of+alpha7+nicotinic+acetylcholine+receptor+knockout+mice.">Dendritic spine alterations in the hippocampus and parietal cortex of alpha7 nicotinic acetylcholine receptor knockout mice.</a> Neuroscience. 233, 54-63 (2013).</li><li>Titus, A. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hypobaric+hypoxia-induced+dendritic+atrophy+of+hippocampal+neurons+is+associated+with+cognitive+impairment+in+adult+rats.">Hypobaric hypoxia-induced dendritic atrophy of hippocampal neurons is associated with cognitive impairment in adult rats.</a> Neuroscience. 145 (1), 265-278 (2007).</li><li>Groves, T. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=5-Fluorouracil+chemotherapy+upregulates+cytokines+and+alters+hippocampal+dendritic+complexity+in+aged+mice.">5-Fluorouracil chemotherapy upregulates cytokines and alters hippocampal dendritic complexity in aged mice.</a> Behavioral Brain Research. 316, 215-224 (2017).</li><li>Risher, W. 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L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+dendritic+tree+and+brain+disorders.">The dendritic tree and brain disorders.</a> Mol Cell Neurosci. 50 (1), 10-20 (2012).</li></ol>

Im Vergleich zu moderneren Techniken hat die Golgi-Cox-Methode mehrere Vorteile, die es zur bevorzugten Methode zur Untersuchung der Wirbelsäulenmorphologie machen: 1) Die Färbung kann für im Wesentlichen jedes Gewebe verwendet werden, 2) Ein Grundlichtmikroskop-Setup ist alles, was benötigt wird Erwerben Golgi-basierte Bilder, 3) Die Golgi-Cox-Bildgebung ist schneller als konfokale Bildgebung und 4) Golgi-gefärbte Abschnitte sind für mehrere Monate bis Jahre länger als Proben, die fluoreszenzmarkiert sind, leben...

<html> Dendriten sind der größte Teil der Neuronen, die den präsynaptischen Eingang empfangen und verarbeiten 1 . Ihre dendritischen Prozesse haben eine komplexe Geometrie, wo die proximalen Zweige einen größeren Durchmesser haben als die distalen Zweige. Da Dendriten sich entwickeln, bilden sie mehrere Verbindungen mit anderen Neuronen in einem Prozess, der als dendritische Arborisierung bezeichnet wird. Das Ausmaß und Muster dieser Verzweigung bestimmt die Menge der synaptischen Eingaben, die ein Dendrit adäquat verarbeiten kann 2 . Dendritische Arborisierung ist ein notwendiger Prozess für die aktivitätsabhängige Plastizität und die richtige Entwicklung von neuronalen Schaltungen. Extension, Retraktion, Verzweigung und Synaptogenese sind komplizierte Prozesse, die intrinsische genetische Programme und Einflüsse aus extrinsischen Faktoren beinhalten. Die morphologischen und verzweigten Variationen der neuronalen Dendriten innerhalb des Hippocampus sind in die Erkenntnis- und Gedächtnisbildung verwickeltF &quot;&gt; 3 , 4. Die Veränderungen der dendritischen Komplexität sind mit pathophysiologischen und Verhaltensänderungen verbunden 5. Anomalien beziehen sich auf mehrere Krankheitszustände, darunter zerbrechliches X-Syndrom und Down-Syndrom 6 . Dendritische Stacheln sind die spezialisierten subzellulären Kompartimente der dendritischen Dorn, die exzitatorische Eingaben im zentralen Nervensystem erhalten. Es gibt drei morphologische Klassen von dendritischen Stacheln, wobei der Name jeder Klasse auf ihrer Größe und Form basiert: 1) Pilzstacheln, die komplexe postsynaptische Dichten mit mehr Glutamatrezeptoren haben als andere Stacheln 7 ; 2) Stubby Stacheln, denen ein Stamm fehlt; Und 3) dünne Stacheln, die aus einem langwierigen, schmalen Stamm und einem Kugelkopf bestehen 8 . Das dendritische Wirbelsäulenvolumen wird teilweise verwendet, um sie zu definieren, wobei dünne Stacheln im allgemeinen kleiner sind (0,01 μm 3 </sup&gt;) Im Vergleich zu Pilzstacheln (0,8 μm 3 ) 9 , 10 . Die Stacheln stabilisieren sich mit Reifung. Zum Beispiel ziehen sich die dünnen Stacheln nach einigen Tagen zurück oder entwickeln sich zu Pilzstacheln. Alternativ sind die Pilzstacheln relativ stabil und können über einen längeren Zeitraum überleben. Die Stärke der neuronalen Verbindungen beruht auf der Anzahl der Stacheln und / oder deren Volumen 11 , 12 , 13 . Die klassische Golgi-Färbemethode und ihre moderneren Variationen sind alle für die Untersuchung der dendritischen Wirbelsäulenmorphologie und -dichte nützlich gewesen. Ein einzigartiger Aspekt der Golgi-Färbung ist, dass es zufällig etwa 5% der gesamten Neuronen, die für die Verfolgung der einzelnen Neuronen 14 , 15 erlaubt. Obwohl der genaue Mechanismus, in dem die Golgi MethOd stains einzelne Neuronen ist noch unbekannt, das Prinzip des Verfahrens basiert auf der Kristallisation von Silberchromat (Ag 2 CrO 4 ) 16 , 17 . Es gibt drei Haupttypen der Golgi-Methode: den schnellen Golgi, den Golgi-Cox und den Golgi-Kopsch 18 , 19 . Alle drei Methoden beginnen mit einer anfänglichen Inkubationsphase in Chromsalzen für mehrere Tage bis Monate, aber es gibt bestimmte wichtige Unterschiede zwischen ihnen. Der schnelle Golgi nutzt Osmiumtetroxid im ersten Schritt, während der Golgi-Kopsch Paraformaldehyd enthält. Die Färbung sowohl im Rapid-Golgi als auch im Golgi-Kopsch folgt eine Inkubation in einer 1-2% Silbernitratlösung für etwa 7 Tage. Die Golgi-Cox-Methode verwendet Quecksilberchlorid und Kaliumdichromat anstelle von Silbernitrat und hat eine Imprägnierungszeit von 2-4 Wochen. Die Gewebe werden dann geschnitten und schnell in ein verdünntes Ammoniak gegebenLösung, gefolgt von einem fotografischen Fixierer, um Salze zu entfernen. Von den drei Typen wird die Golgi-Cox-Methode als am besten angesehen, um die dendritischen Dorn ohne große Hintergrundinterferenz zu färben, zum Teil weil die Kristallartefakte nicht auf der Oberfläche des Gewebes auftreten (anders als bei der schnellen Golgi-Methode) 17 , 20 , 21 . Die vorliegende Methode ist eine leichte Variation des Protokolls, das mit einem kommerziellen Golgi-Färbe-Kit versehen ist, und wurde entworfen, um zu beurteilen, wie eine relativ niedrige Dosis des 5-Fu die dendritischen morphologischen Eigenschaften und die Wirbelsäuredichte beeinflussen würde. Alle gewonnenen Daten könnten einen weiteren Einblick geben, wie sich die chemotherapeutische Behandlung auf die neuronale Schaltung auswirkt.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" width="758">
	<colgroup>
		<col />
		<col />
		<col />
		<col />
	</colgroup>
	<tbody>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">superGolgi Kit&#160;</td>
			<td style="width:207px;">Bioenno Lifesciences</td>
			<td style="width:119px;">30100</td>
			<td style="width:216px;">&#160;Contains hazardous materials.&#160;</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">PBS 10X powder concentrate</td>
			<td style="width:207px;">Fisher&#160;</td>
			<td style="width:119px;">BP665-1</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Triton X-100</td>
			<td style="width:207px;">Sigma</td>
			<td style="width:119px;">9002-93-1</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Permount&#160;</td>
			<td style="width:207px;">Fisher&#160;</td>
			<td style="width:119px;">SP 15-100</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Slide cover&#160;</td>
			<td style="width:207px;">Fisher&#160;</td>
			<td style="width:119px;">12-546-14</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">7mL Transfer pipette&#160;</td>
			<td style="width:207px;">Globe Scientific&#160;</td>
			<td style="width:119px;">135030</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">10 mL Falcon tubes&#160;</td>
			<td style="width:207px;">BD Biosciences&#160;</td>
			<td style="width:119px;">352099</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Foil&#160;</td>
			<td style="width:207px;">Fisher&#160;</td>
			<td style="width:119px;">01-213-105</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">12-well plate&#160;</td>
			<td style="width:207px;">BD Biosciences&#160;</td>
			<td style="width:119px;">353043</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">200 proof Ethanol&#160;</td>
			<td style="width:207px;">Pharmco-AAPER</td>
			<td style="width:119px;">111000200</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Xylene&#160;</td>
			<td style="width:207px;">Acros Organics&#160;</td>
			<td style="width:119px;">1330-20-7</td>
			<td>Hazardous.&#160;</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Permabond 200</td>
			<td style="width:207px;">Permabond LLC</td>
			<td style="width:119px;">GF2492</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">25 mL serological pipette</td>
			<td style="width:207px;">Sigma</td>
			<td style="width:119px;">SIAL1489</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Parafilm</td>
			<td style="width:207px;">Midsci</td>
			<td style="width:119px;">HS234526C&#160;</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Vibratome&#160;</td>
			<td style="width:207px;">World Precision Instruments&#160;</td>
			<td style="width:119px;">NVSLM1</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">C57Bl/6 Male Mice&#160;</td>
			<td style="width:207px;">The Jackson Laboratory&#160;</td>
			<td style="width:119px;">000664</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="84">
			<td height="84" style="height:84px;width:216px;">Axio Imager 2</td>
			<td style="width:207px;">ZEISS</td>
			<td style="width:119px;">Multiple components, see website for details.&#160;</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">AxioCam MRc Camera</td>
			<td style="width:207px;">ZEISS</td>
			<td style="width:119px;">426508-9902-000</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Staining Dish , Green</td>
			<td style="width:207px;">Tissue-Tek</td>
			<td>62541-12</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Staining Dish Set&#160;</td>
			<td style="width:207px;">Electron Microscopy Sciences&#160;</td>
			<td>70312-20</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Motorized Pipet Filler&#160;</td>
			<td style="width:207px;">Fisher&#160;</td>
			<td style="width:119px;">03-692-168</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Neurolucida&#160;</td>
			<td style="width:207px;">mbf Bioscience&#160;</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Neurolucida Explorer&#160;</td>
			<td style="width:207px;">mbf Bioscience&#160;</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Prism&#160;</td>
			<td style="width:207px;">GraphPad</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

assessment of hippocampal dendritic complexity in aged mice using the golgi-cox method

Dendritische Stacheln sind die Ausstülpungen aus den neuronalen dendritischen Schächten, die exzitatorische Synapsen enthalten. Die morphologischen und verzweigten Variationen der neuronalen Dendriten innerhalb des Hippocampus sind in die Erkenntnis- und Gedächtnisbildung verwickelt. Es gibt mehrere Ansätze zur Golgi-Färbung, die alle für die Bestimmung der morphologischen Eigenschaften der dendritischen Lauben nützlich waren und einen klaren Hintergrund hervorbringen. Die vorliegende Golgi-Cox-Methode (eine leichte Variation des Protokolls, die mit einem kommerziellen Golgi-Färbe-Kit versehen ist) wurde entworfen, um zu beurteilen, wie eine relativ niedrige Dosis des chemotherapeutischen Arzneimittels 5-Flurouracil (5-Fu) die dendritische Morphologie beeinflussen würde , Die Anzahl der Stacheln und die Komplexität der Arborisierung im Hippocampus. Die 5-Fu modulierten die dendritische Komplexität signifikant und reduzierten die Wirbelsäulendichte im gesamten Hippocampus regionalspezifisch. Die dargestellten Daten zeigen, dass die Golgi-Färbemethode efDie fälligen Neuronen in der CA1, dem CA3 und dem Dentat Gyrus (DG) des Hippocampus fungiert. Dieses Protokoll berichtet die Details für jeden Schritt, so dass andere Forscher können zuverlässig Flecken Gewebe im gesamten Gehirn mit qualitativ hochwertigen Ergebnissen und minimale Fehlersuche.

Die Effekte der 5-Fu-Behandlung auf die dendritische Arborisierung und Komplexität im Hippocampus von Golgi-gefärbten Gehirnabschnitten wurden mit einer handelsüblichen Imaging-Software quantifiziert und verfolgt. Nach der Verfolgung wurden die dendritische Arborisierung, die Wirbelsäulendichte und die Wirbelsäulenmorphologie unter Verwendung der Sholl-Analyse und des dendritischen Komplexitätsindex (DCI) analysiert. Sholl-Analyse ist eine quantitative analytische Methode, die verw...

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Assessment of Hippocampal Dendritic Complexity in Aged Mice Using the Golgi-Cox Method

Hier stellen wir ein Golgi-Cox-Protokoll ausführlich vor. Diese zuverlässige Gewebe-Fleck-Methode ermöglicht eine qualitativ hochwertige Beurteilung der Cytoarchitektur im Hippocampus und im gesamten Gehirn mit minimaler Fehlersuche.

Bewertung der Hippocampalen Dendritischen Komplexität bei gealterten Mäusen unter Verwendung der Golgi-Cox-Methode

Dendritic spines are the protuberances from the neuronal dendritic shafts that contain&#160; excitatory synapses. The morphological and branching ...

The overall goal of this methodology is to properly Golgi stain brain tissue in order to examine and quantify dendritic morphology and complexity. This method can help answer key questions in neuroscience. Since Golgi staining only stains a small subset of cells, this technique could be used to trace the structure of neurons.The main advantage of this technique is that brain sections can be easily stained without risk to them drying out or falling off during any of the washing steps. Demonstrating the procedure will be Fred Kiffer, Tyler Alexander and Julie Anderson, graduate students in Dr.Allen's laboratory. Begin by immersing freshly harvested, unfixed rodent half brains in five milliliters or mercuric chloride-based solution.As mercuric chloride solution is light sensitive, cover the tube with foil. Store the samples in the dark at room temperature. The following day, slowly decant the solution into a temporary container before properly disposing of it in a biohazard waste container.Add five milliliters of fresh mercuric chloride solution and ensure that the brains are immersed. Return the samples to the dark at room temperature for 13 more days. After 14 days, prepare post-impregnation buffer by adding 30 grams of powered post-impregnation buffer to 90 milliliters of distilled or deionized water, DH2O.Fill each well of the six-well plate with 6.5 milliliters of the post-impregnation buffer, one well per brain. Then, remove the mercuric chloride solution from the brain tissue as before. Rinse the tissue with DH2O, then transfer the tissue to the six-well plates with post-impregnation buffer.Cover the plates with foil and store at room temperature in the dark. The next day, aspirate and replace the post-impregnation buffer. Re-cover the plate and store in a four degree Celsius fridge.Prepare two or three 12-well plates per brain by first labeling the plates on their lids with numbers in ascending order from left to right and up to down. Add the identification number of the brain sectioned. Pipette two milliliters of 1X PBS into each well of each plate, then set up the stage and turn on the vibratome.Then, put tape on the tissue block of the specimen holder and add a little cyanoacrylate glue on top. Remove a brain from the six-well plate and place it on a plastic or glass dish. Use a stainless steel double edged blade to cut the cerebellum caudally, making sure that the portion of the cerebellum remaining on the brain is flat.Then, place the flat surface of the remaining cerebellum on the glue. After the glue is dry, place the specimen holder with the tissue into the specimen bath. Place the specimen bath on the vibratome and cover the tissue sample in PBS.Then, attach the blade to the blade holder of the vibratome and slowly lower the blade into the specimen bath until it is fully submerged and slightly below the top of the tissue. Next, set the vibratome speed to seven, the amplitude to six and the cutting angle to 12 degrees. Start the vibration and cut 200-micron sections.Use a large paint brush to move the tissue sections from the specimen bath into each designated well of the 12-well plates. Continue to cut the tissue until the desired number of tissue sections is reached. After sectioning, use a transfer pipette to aspirate the PBS from the wells of the 12-well plate, then add two milliliters of PBS-T and wash for 30 minutes with agitation.Close to the end of the wash period, dilute three parts ammonium hydroxide solution with five parts DH2O. Then, after removing the PBS-T, add the diluted ammonium hydroxide solution. Protect from light using foil and stain the sections for 19 to 21 minutes.Then, after safely removing the ammonium hydroxide solution, add post-staining buffer. Protect with foil and stain for another 19 to 21 minutes. Finally, rinse the sections in PBS-T three times for five to 10 minutes each time.Mount the sections on 1%gelatin coated slides with the large paint brush. Allow them to dry for 20 to 30 minutes at room temperature, then place them in a Coplin Jar and leave overnight. Remove the slides from the Coplin Jar and place them in a plastic rack in the fume hood.Place in a staining dish containing 100%ethanol for five minutes. Dehydrate the sections through two further five-minute ethanol washes. Next, place the slides in a glass rack and use a metal handle to lower the rack into a glass staining dish containing 99%xylene.Wash the slides in two changes of xylene for five minutes each. After the time for the second wash has elapsed, remove the slides from the xylene one at a time and quickly cover the tissue with approximately 0.25 milliliters of mounting media. Next, take a slide cover and lay it over the media.Push any trapped air bubbles underneath the slide covers to the edge with a blunt object, such as the end of paint brush. Place the slides in an area out of direct sunlight and allow them to dry for two to three days. After drying, proceed to image acquisition using a microscope and analysis with the appropriate software.This bright field image shows a Golgi-stained neuron that meets the criteria for imaging and further analysis. All three spine types can easily be seen. Staining is consistent across the entire length of the dendrite and the dendrite is isolated from other neurons.This figure shows that Golgi stained neurons within the Dentate Gyrus showed decreased length at the fourth and sixth order following 5-fluorouracil treatment compared to the saline-treated group. Golgi staining can be used to detect significant differences in spine density. In the CA1 apical pyramidal dendrites, 5-fluorouracil administration to live mice significantly decreased spine density.In the basal dendrites, there were no significant changes in the overall density of spines. Sholl Analysis of CA1 apical pyramidal dendrites revealed that 5-fluorouracil treatment significantly decreased dendritic arborization at distances between 40 to 160 microns away from the soma. In the basal dendrites, the 5-fluorouracil treatment decreased the dendritic arborization at 30 to 110 microns away from the soma.Once mastered, this technique, accounting for both the Golgi staining process and mounting, cleaning and covering can be done in three hours per brain if performed properly. After its development, this technique paved the way for researchers in the field of neurobiology to explore neuroanatomical connections in a murine model. While attempting this procedure, it's important to remember to keep the sections in ammonium hydroxide solution for only 19 to 21 minutes as to not overstain the neurons.After watching this video, you should have a good understanding of how to properly stain, section and rinse brain tissue. Don't forget that working with the mercuric chloride-based solution, ammonium hydroxide solution and xylene can be extremely hazardous, so take precautions and wear lab gloves and work in a fume hood when performing this procedure.

Research

JoVE Journal

Neuroscience

Assessment of Motor Balance and Coordination in Mice using the Balance Beam

Beurteilung der Motor Balance und Koordination in Mäuse mit dem Schwebebalken

Brain injury, genetic manipulations, and pharmacological treatments can result in alterations of motor skills in mice.  Fine motor coordination and ...

Forschung

Neurowissenschaften

Fluorescence Recovery After Photobleaching (FRAP) of Fluorescence Tagged Proteins in Dendritic Spines of Cultured Hippocampal Neurons

Fluorescence Recovery After Photobleaching FRAP of Fluorescence Tagged Proteins in Dendritic Spines of Cultured Hippocampal Neurons

Fluorescence Recovery After Photobleaching (FRAP) der Fluoreszenz-markierten Proteine ​​in dendritischen Dornen von hippokampalen Neuronen

FRAP has been used to quantify the mobility of GFP-tagged proteins. Using a strong excitation laser, the fluorescence of a GFP-tagged protein is bleached ...

Assaying DNA Damage in Hippocampal Neurons Using the Comet Assay

Testen DNA Damage in Hippocampus-Neuronen mit dem Comet Assay

A number of drugs target the DNA repair pathways and induce cell kill by creating DNA damage. Thus, processes to directly measure DNA damage have been ...

Optogenetic Perturbation of Neural Activity with Laser Illumination in Semi-intact Drosophila Larvae in Motion

Optogenetic Perturbation of Neural Activity with Laser Illumination in Semi-intact Drosophila Larvae in Motion

Optogenetische Störung der neuronalen Aktivität mit Laser Illumination in Semi-intakt<em&gt; Drosophila</em&gt; Larven in Motion

Drosophila larval locomotion is a splendid model system in developmental and physiological neuroscience, by virtue of the genetic accessibility of the ...

Visualizing the Effects of a Positive Early Experience, Tactile Stimulation, on Dendritic Morphology and Synaptic Connectivity with Golgi-Cox Staining

Visualisierung der Auswirkungen einer Früh Positive Erfahrung, taktile Stimulation, auf dendritischen Morphologie und synaptische Verbindungen mit Golgi-Cox Färbung

To generate longer-term changes in behavior, experiences must be producing stable changes in neuronal morphology and synaptic connectivity. Tactile ...

Fast Micro-iontophoresis of Glutamate and GABA: A Useful Tool to Investigate Synaptic Integration

Schnelle Micro-Iontophorese von Glutamat und GABA: Ein nützliches Tool, um Synaptic Integration Untersuchen

One of the fundamental interests in neuroscience is to understand the integration of excitatory and inhibitory inputs along the very complex structure of ...

Imaging Dendritic Spines of Rat Primary Hippocampal Neurons using Structured Illumination Microscopy

Imaging dendritischen Dornen von Rat Primär Hippocampus Neuronen mit Structured Illumination Microscopy

Dendritic spines are protrusions emerging from the dendrite of a neuron and represent the primary postsynaptic targets of excitatory inputs in the brain. ...

Assessment of Dendritic Arborization in the Dentate Gyrus of the Hippocampal Region in Mice

Bewertung der dendritischen Verzweigung im Gyrus dentatus des Hippocampus-Region an der Maus

Dendritic arborization has been shown to be a reliable marker for examination of structural and functional integrity of neurons. Indeed, the complexity ...

A Simple and Inexpensive Method for Determining Cold Sensitivity and Adaptation in Mice

Eine einfache und kostengünstige Methode zur Bestimmung der Überempfindlichkeit auf Kälte und Anpassung an der Maus

Cold hypersensitivity is a serious clinical problem, affecting a broad subset of patients and causing significant decreases in quality of life.  The cold ...

Fluorescence and Bioluminescence Imaging of Subcellular Ca2+ in Aged Hippocampal Neurons

Fluorescence and Bioluminescence Imaging of Subcellular Ca2+ in Aged Hippocampal Neurons

Fluoreszenz- und Biolumineszenz-Bildgebung subzellulärer Ca<sup&gt; 2+</sup&gt; Im Alter von Neuronen im Hippocampus

Susceptibility to neuron cell death associated to neurodegeneration and ischemia are exceedingly increased in the aged brain but mechanisms responsible ...