Name: neonatal murine cochlear explant technique as an in vitro screening tool in hearing research
Uploaded: 2017-06-08T15:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Neonatal Murine Cochlear Explant Technique as an In Vitro Screening Tool in Hearing Research at JoVE.com

이 연구는 국립 청각 장애 및 기타 의사 소통 장애 보조원 R01DC015824 (KMS) 및 T32DC00038 (SD 지원), 국방부의 W81XWH-15-1-0472 (KMS), Bertarelli Foundation (KMS), Nancy Sayles Day Foundation (KMS), Lauer 이명 연구 센터 (KMS) 등이 있습니다. Jessica E. Sagers, 원고에 대한 통찰력있는 의견에 감사드립니다.

연구 프로토콜은 매사추세츠의 눈과 귀의 기관 동물 관리 및 사용위원회 (IACUC)의 승인을 받았습니다. 실험은 세계 의학 협회의 윤리 강령에 따라 수행되었습니다. 1. 절개 준비 <ol><li> 외과 테이블 준비하기 <ol><li> 수술 테이블을 소독하기 위해 70 % 에탄올을 사용하십시오. </li><li> 현미경 옆에 두 개의 nonsterile prep pad를 놓습니다. </li><li> 가열 살균 된 작동 가위, ...

<ol>
	<li>Geleoc, G. S., Holt, J. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Sound+strategies+for+hearing+restoration).">Sound strategies for hearing restoration).</a> Science. 344 (6184), 1241062 (2014).</li><li>Kujawa, S. G., Liberman, M. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Acceleration+of+age-related+hearing+loss+by+early+noise+exposure:+evidence+of+a+misspent+youth.">Acceleration of age-related hearing loss by early noise exposure: evidence of a misspent youth.</a> J Neurosci. 26 (7), 2115-2123 (2006).</li><li>Kujawa, S. G., Liberman, M. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Adding+insult+to+injury:+cochlear+nerve+degeneration+after+&amp;#34;temporary&amp;#34;+noise-induced+hearing+loss.">Adding insult to injury: cochlear nerve degeneration after &amp;#34;temporary&amp;#34; noise-induced hearing loss.</a> J Neurosci. 29 (45), 14077-14085 (2009).</li><li>Makary, C. A., Shin, J., Kujawa, S. G., Liberman, M. C., Merchant, S. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Age-related+primary+cochlear+neuronal+degeneration+in+human+temporal+bones.">Age-related primary cochlear neuronal degeneration in human temporal bones.</a> J Assoc Res Otolaryngol. 12 (6), 711-717 (2011).</li><li>Jensen, J. B., Lysaght, A. C., Liberman, M. C., Qvortrup, K., Stankovic, K. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Immediate+and+delayed+cochlear+neuropathy+after+noise+exposure+in+pubescent+mice.">Immediate and delayed cochlear neuropathy after noise exposure in pubescent mice.</a> PLoS One. 10 (5), (2015).</li><li>Landegger, L. D., Psaltis, D., Stankovic, K. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Human+audiometric+thresholds+do+not+predict+specific+cellular+damage+in+the+inner+ear.">Human audiometric thresholds do not predict specific cellular damage in the inner ear.</a> Hear Res. , 83-93 (2016).</li><li>Wang, H. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Spontaneous+Activity+of+Cochlear+Hair+Cells+Triggered+by+Fluid+Secretion+Mechanism+in+Adjacent+Support+Cells.">Spontaneous Activity of Cochlear Hair Cells Triggered by Fluid Secretion Mechanism in Adjacent Support Cells.</a> Cell. 163 (6), 1348-1359 (2015).</li><li>Barclay, M., Ryan, A. F., Housley, G. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Type+I+vs+type+II+spiral+ganglion+neurons+exhibit+differential+survival+and+neuritogenesis+during+cochlear+development.">Type I vs type II spiral ganglion neurons exhibit differential survival and neuritogenesis during cochlear development.</a> Neural Dev. 6, (2011).</li><li>Dinh, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Short+interfering+RNA+against+Bax+attenuates+TNFalpha-induced+ototoxicity+in+rat+organ+of+Corti+explants.">Short interfering RNA against Bax attenuates TNFalpha-induced ototoxicity in rat organ of Corti explants.</a> Otolaryngol Head Neck Surg. 148 (5), 834-840 (2013).</li><li>Mazurek, B., Yu, Y., Haupt, H., Szczepek, A. J., Olze, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Salicylate+modulates+Hsp70+expression+in+the+explanted+organ+of+Corti.">Salicylate modulates Hsp70 expression in the explanted organ of Corti.</a> Neurosci Lett. 501 (2), 67-71 (2011).</li><li>Kao, S. Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Loss+of+osteoprotegerin+expression+in+the+inner+ear+causes+degeneration+of+the+cochlear+nerve+and+sensorineural+hearing+loss.">Loss of osteoprotegerin expression in the inner ear causes degeneration of the cochlear nerve and sensorineural hearing loss.</a> Neurobiol Dis. 56, 25-33 (2013).</li><li>Jan, T. A., Chai, R., Sayyid, Z. N., Cheng, A. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Isolating+LacZ-expressing+cells+from+mouse+inner+ear+tissues+using+flow+cytometry.">Isolating LacZ-expressing cells from mouse inner ear tissues using flow cytometry.</a> J Vis Exp. (58), e3432 (2011).</li><li>Haque, K. D., Pandey, A. K., Kelley, M. W., Puligilla, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Culture+of+embryonic+mouse+cochlear+explants+and+gene+transfer+by+electroporation.">Culture of embryonic mouse cochlear explants and gene transfer by electroporation.</a> J Vis Exp. (95), e52260 (2015).</li><li>Parker, M., Brugeaud, A., Edge, A. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Primary+culture+and+plasmid+electroporation+of+the+murine+organ+of+Corti.">Primary culture and plasmid electroporation of the murine organ of Corti.</a> J Vis Exp. (36), (2010).</li><li>Mulvaney, J. F., Dabdoub, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Long-term+time+lapse+imaging+of+mouse+cochlear+explants.">Long-term time lapse imaging of mouse cochlear explants.</a> J Vis Exp. (93), e52101 (2014).</li><li>Wang, Q., Green, S. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Functional+role+of+neurotrophin-3+in+synapse+regeneration+by+spiral+ganglion+neurons+on+inner+hair+cells+after+excitotoxic+trauma+in+vitro.">Functional role of neurotrophin-3 in synapse regeneration by spiral ganglion neurons on inner hair cells after excitotoxic trauma in vitro.</a> J Neurosci. 31 (21), 7938-7949 (2011).</li><li>Landegger, L. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+synthetic+AAV+vector+enables+safe+and+efficient+gene+transfer+to+the+mammalian+inner+ear.">A synthetic AAV vector enables safe and efficient gene transfer to the mammalian inner ear.</a> Nat Biotechnol. 35 (3), 280-284 (2017).</li><li>Dilwali, S., Landegger, L. D., Soares, V. Y., Deschler, D. G., Stankovic, K. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Secreted+Factors+from+Human+Vestibular+Schwannomas+Can+Cause+Cochlear+Damage.">Secreted Factors from Human Vestibular Schwannomas Can Cause Cochlear Damage.</a> Sci Rep. 5, 18599 (2015).</li><li>Soares, V. Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Extracellular+vesicles+derived+from+human+vestibular+schwannomas+associated+with+poor+hearing+damage+cochlear+cells.">Extracellular vesicles derived from human vestibular schwannomas associated with poor hearing damage cochlear cells.</a> Neuro Oncol. , (2016).</li><li>Tong, M., Brugeaud, A., Edge, A. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Regenerated+synapses+between+postnatal+hair+cells+and+auditory+neurons.">Regenerated synapses between postnatal hair cells and auditory neurons.</a> J Assoc Res Otolaryngol. 14 (3), 321-329 (2013).</li><li>Yuan, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ouabain-induced+cochlear+nerve+degeneration:+synaptic+loss+and+plasticity+in+a+mouse+model+of+auditory+neuropathy.">Ouabain-induced cochlear nerve degeneration: synaptic loss and plasticity in a mouse model of auditory neuropathy.</a> J Assoc Res Otolaryngol. 15 (1), 31-43 (2014).</li><li>Fernandez, K. A., Jeffers, P. W., Lall, K., Liberman, M. C., Kujawa, S. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Aging+after+noise+exposure:+acceleration+of+cochlear+synaptopathy+in+&amp;#34;recovered&amp;#34;+ears.">Aging after noise exposure: acceleration of cochlear synaptopathy in &amp;#34;recovered&amp;#34; ears.</a> J Neurosci. 35 (19), 7509-7520 (2015).</li><li>Barclay, M., Constable, R., James, N. R., Thorne, P. R., Montgomery, J. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Reduced+sensory+stimulation+alters+the+molecular+make-up+of+glutamatergic+hair+cell+synapses+in+the+developing+cochlea.">Reduced sensory stimulation alters the molecular make-up of glutamatergic hair cell synapses in the developing cochlea.</a> Neuroscience. , 50-62 (2016).</li><li>Zinn, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+Silico+Reconstruction+of+the+Viral+Evolutionary+Lineage+Yields+a+Potent+Gene+Therapy+Vector.">In Silico Reconstruction of the Viral Evolutionary Lineage Yields a Potent Gene Therapy Vector.</a> Cell Rep. 12 (6), 1056-1068 (2015).</li><li>Wu, Z., Yang, H., Colosi, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effect+of+genome+size+on+AAV+vector+packaging.">Effect of genome size on AAV vector packaging.</a> Mol Ther. 18 (1), 80-86 (2010).</li><li>Shu, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Identification+of+Adeno-Associated+Viral+Vectors+That+Target+Neonatal+and+Adult+Mammalian+Inner+Ear+Cell+Subtypes.">Identification of Adeno-Associated Viral Vectors That Target Neonatal and Adult Mammalian Inner Ear Cell Subtypes.</a> Hum Gene Ther. , (2016).</li><li>Kao, S. Y., Soares, V. Y., Kristiansen, A. G., Stankovic, K. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Activation+of+TRAIL-DR5+pathway+promotes+sensorineural+degeneration+in+the+inner+ear.">Activation of TRAIL-DR5 pathway promotes sensorineural degeneration in the inner ear.</a> Aging Cell. 15 (2), 301-308 (2016).</li></ol>

연구원은 달팽이관 외식에 관련된 실험을하기 전에 해부 기술을 완벽하게해야합니다. 유모 세포는 일반적으로 학습 곡선에서 초기에 수행되는 해부 중에 손상되며, 완전 무결 한 특히 문제가되는 순간은 안정적인 손, 적절한 도구 및 경험이 필요한 tectorial membrane의 제거입니다. 시간과 자원을 절약하기 위해 해부 현미경으로 시각 제어를 수행해야하며 잠재적으로 손상된 부위를 기록해야합니다....

Sensorineural Hearing Loss (SNHL)은 내이 또는 오름차순 청각 경로의 손상을 나타냅니다. 청력 상실은 인간 1 에서 가장 흔한 감각 결손이지만 치유 요법은 아직 존재하지 않습니다 2 . 인공 와우 또는 청각의 뇌간 이식 물이 심한 SNHL 환자의 청력을 어느 정도 회복시킬 수는 있지만, 이러한 장치가 제공하는 청력은 특히 자연스러운 청력과는 매우 다르며 특히 소음의 말을 이해하거나 음악을 듣는 동안 매우 다릅니다. 유모 세포 변성은 오랫동안 외상성 청각 사건 ( 예 : 시끄러운 소음에 노출)의 주요 결과로 간주되어 왔지만, 유모 세포에서 청각 신경으로 정보를 전송하는 시냅스가 적어도 음향 외상에 취약한 증거가 증가하고 있습니다 3 , 4 , 5 </sup<html> &gt; , 6 . 청각 기능 평가를위한 현재의 금 표준 인 인간의 청력 역치는 내이의 특정 세포 손상을 예측하지 않기 때문에 가능한 한 빨리 세포 변성을 감지하고 적절한 치료를 시작하기 위해보다 정교한 도구가 필요합니다. 청력 상실에 대한 유망한 약제 처리법 은 시험 관내 에서 균질 세포 배양 물 에서 종종 시험되지만, 그러한 시스템은 달팽이 미세 환경을 정확하게 모델링하지 않습니다. Cochlear 세포는 Corti 10 , 11 또는 Spiral Ganglion Neurons (SGNs) 12 의 기관을 분리하여 또는 배양 할 때 손실되는 중요한 생체 내 과정 인 달팽이관 8,9 에서 다른 세포 유형에 영향을주는 영양 요소를 분비하는 것으로 알려져 있습니다 분자 마커를 분석그러나 &quot;정밀 의학&quot;을 추구하기 위해 생체 외 데이터를 검증하여 청력 상실에 대한 새로운 개인 맞춤 치료법을 확립하는 데 필요한 생체 내 연구는 상당한 자원과 시간을 필요로합니다. 이는 특히 고려할 때 적합합니다 청력 검사와 이어지는 인공 와우의 절개를 통해 중이 중이거나 둥근 창 막 주입을 완벽하게 수행하고 수행하는 데 얼마나 많은 노력이 필요한가 인공 와우로 알려진 체외의 체외 배양에서 유망한 화합물을 효율적으로 스크리닝하는 것은 경제적이며 신뢰할 수있는 대안을 제공합니다 14 , 15 , 16 , 17 . 이 기사에서는 치료 된 달팽이 외식편을 생성, 유지 및 평가하는 프로토콜에 대해 자세히 설명합니다. 이 모델의 특정 응용 프로그램은 심사에서의 사용을 포함하여 강조됩니다.유전자 치료를위한 바이러스 성 벡터의 비교 평가를 포함한다. ex vivo explant approach는 연구자들이 주어진 세포 치료법 이 다른 세포 집단 에 미치는 영향을 그 자리 에서 가시화 할 수있게하여 세포 유형별 메커니즘의 확인과 그 이후의 목표 화 된 치료법의 정제를 용이하게한다. 전반적으로,이 기술은 달팽이관 내 에서 공존하는 매우 다른 세포 유형 사이의 중요한 혼선을 보존하면서 생체 내 에서 달팽이관을 연구 할 수있는 모델을 제공합니다.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>Ampicillin, Sodium Salt</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>11593-027</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>anti-CtBP2 antibody, mouse(IgG1)</td>
			<td>BD Transduction Laboratories</td>
			<td>612044</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>anti-Myo7A antibody, rabbit</td>
			<td>Proteus Biosciences</td>
			<td>25-6790</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>anti-NF-H antibody, chicken</td>
			<td>EMD Millipore</td>
			<td>AB5539</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>anti-PSD95 antibody, mouse(IgG2a)</td>
			<td>Antibodies Inc.</td>
			<td>75-028</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>anti-TuJ1 antibody, mouse</td>
			<td>BioLegend</td>
			<td>801202</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cell-Tak Cell and Tissue Adhesive, 5 mg</td>
			<td>Corning</td>
			<td>354241</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CELLSTAR 15 ml Centrifuge Tubes, Conical bottom, Graduation, Sterile</td>
			<td>Greiner Bio-One</td>
			<td>188161</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CELLSTAR Cell Culture Dish, 100x20 mm</td>
			<td>Greiner Bio-One</td>
			<td>664160</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CELLSTAR Cell Culture Dish, 35x10 mm, four inner rings</td>
			<td>Greiner Bio-One</td>
			<td>627170</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CELLSTAR Cell Culture Dish, 60x15 mm</td>
			<td>Greiner Bio-One</td>
			<td>628160</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CELLSTAR 50 ml Centrifuge Tubes, Conical bottom, Graduation, Sterile</td>
			<td>Greiner Bio-One</td>
			<td>227261</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Clear Nail Polish</td>
			<td>Electron Microscopy Sciences</td>
			<td>72180</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Clear Wall Glass Bottom Dishes (Glass 40mm), PELCO&#174;, Sleeve/20, 50x7 mm</td>
			<td>Ted Pella Inc.</td>
			<td>14027-20</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Coverslips, Round, Glass, 10 mm diameter, Thickness #1, 0.13-0.16mm</td>
			<td>Ted Pella Inc.</td>
			<td>260368</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DAPI (4&#39;,6-Diamidino-2-Phenylindole, Dihydrochloride)</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>D1306</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Distilled water, 500 ml</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>15230-162&#160;</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DMEM, high glucose, pyruvate, no glutamine, 500 ml</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>10313-039</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dumont #4 Forceps</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>11241-30</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dumont #55 Forceps (Dumostar)</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>11295-51</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ethyl alcohol, Pure, 200 proof, anhydrous, &#8805;99.5%</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>459836-1L</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fetal Bovine Serum, qualified, USDA-approved regions, 500 ml</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>10437-028&#160;</td>
			<td>Aliquot in 50 ml tubes and store in -20&#176;C freezer</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Glutamate - GlutaMAX supplement, 100 ml</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>35050-061</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>goat anti-chicken-647 secondary antibody</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>A-21469</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>goat anti-mouse(IgG)-568 secondary antibody</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>A-11004</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>goat anti-mouse(IgG1)-568 secondary antibody</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>A-21124</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>goat anti-mouse(IgG2a)-488 secondary antibody</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>A-21131</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>goat anti-rabbit-488 secondary antibody</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>R37116</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>H2O, sterile, EmbryoMax Ultra Pure Water, 500ml</td>
			<td>EMD Millipore</td>
			<td>TMS-006-B</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>HBSS, calcium, magnesium, no phenol red, 500 ml</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>14025-092</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Instrument Tray with Lid Stainless Steel</td>
			<td>Mountainside Medical</td>
			<td>TechMed4255</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Micro (dissecting) knife &#8211; angled 30&#176;</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>10056-12</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microscope slides, VistaVision, color-coded, 75 x 25 mm (3 x 1&#34;), 1 mm thick, white, pack of 72</td>
			<td>VWR</td>
			<td>16004-382</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>N-2 Supplement (100X), 5 ml</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>17502-048</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>NaHCO3, Sodium Bicarbonate 7.5% solution, 100 ml</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>25080-094</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>NaOH, sodium hydroxide solution, 1 l</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>SS266-1</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Normal Horse Serum (NHS)</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>16050130</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Operating scissors</td>
			<td>Roboz Surgical Instruments Co.</td>
			<td>RS-6806</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Paraformaldehyde, Reagent Grade, Crystalline</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>P6148</td>
			<td>Prior to use: Establish Standard Operating Procedures based on protocols available online</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PBS, pH 7.4, 500 ml</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>10010-023&#160;</td>
			<td>Autoclave prior to use</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Phalloidin, Alexa Fluor 568&#160;</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>A12380</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Prep Pad, Non Sterile&#160;</td>
			<td>Medline</td>
			<td>05136CS</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Safe-Lock Microcentrifuge Tubes, Polypropylene, 0.5 ml</td>
			<td>Eppendorf</td>
			<td>022363719</td>
			<td>Autoclave prior to use</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Safe-Lock Microcentrifuge Tubes, Polypropylene, 1.5 ml</td>
			<td>Eppendorf</td>
			<td>022363204</td>
			<td>Autoclave prior to use</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Scalpel Blades - #15</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>10015-00</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Scalpel Handle - #4</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>10004-13</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Stemi 2000-C Stereo Microscope</td>
			<td>Zeiss&#160;</td>
			<td>000000-1106-133</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>TCS SP5 confocal microscope</td>
			<td>Leica</td>
			<td>N/A</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Triton-X (non-ionic surfactant)</td>
			<td>Integra</td>
			<td>T756.30.30</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>VectaShield antifade mounting medium for fluorescence</td>
			<td>Vector Laboratories, Inc.</td>
			<td>H-1000</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Zipper Bag, Reclosable, 4&#39;&#39; x 6&#39;&#39; - 2 mil. thick</td>
			<td>Zipline</td>
			<td>0609132541599</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
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neonatal murine cochlear explant technique as an in vitro screening tool in hearing research

지난 수십 년 동안 청력 연구가 눈에 띄게 발전했지만, 내이의 민감한 mechanosensory 구조를 손상 시키거나 손상시키는 감각 신경성 청력 손실 (SNHL)에 대한 치료법은 아직 없습니다. 정교한 in vitro 및 ex vivo 분석법이 최근 수년간 출현하여 SNHL 치료법 개발을위한 자원을 최소화하고 치료 노력을 가속화하면서 잠재적으로 치료 화합물의 증가를 시험 할 수있게되었습니다. 특정 세포 유형의 균질 배양이 현재의 연구에서 중요한 역할을 계속하고 있지만, 많은 과학자들은 이제 달팽이 외식 편으로 알려진보다 복잡한 기관 내 배양에 의존합니다. 내이에서 조직화 된 세포 구조를 보존하면 내외부 유모 세포, 나선형 신경절 뉴런, 신경 세포를 포함한 달팽이관 인프라의 다양한 구성 요소를 현장에서 평가할 수 있습니다.ites 및 지원 세포. 여기에서는 신생아 생쥐 달팽이 explants의 준비, 문화, 치료 및 immunostaining을 제시합니다. 이러한 explants의주의 깊은 준비는 SNHL에 기여하는 메커니즘의 식별을 용이하게하고 청각 연구 커뮤니티를위한 중요한 도구를 구성합니다.

많은 프로토콜이 Corti 체외 이식편의 기관에 초점을 맞추고 있지만이 기술은 SGNs를 포함하여 전체 달팽이관의 해부학 구조를 보존하려고 시도합니다. 이것은 연구자들에게 Corti 기관뿐만 아니라 SGNs의 신경 돌기 및 somata에 대한 주어진 치료의 효과를 분석 할 수있는 기회를 제공합니다. 여기에 설명 된 것처럼 모 틸리 움의 일부를 보존하는 절개를 수행하는 것은 Corti만의 ...

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Neonatal Murine Cochlear Explant Technique as an In Vitro Screening Tool in Hearing Research

이 프로토콜의 목표는 신생아 생쥐 달팽이 explants의 준비, 문화, 치료 및 immunostaining를 입증하는 것입니다. 이 기술은 청각 연구 에서 체외 선별 도구로 활용 될 수 있습니다.

신생아 쥐의 달팽이관 Explant 기법으로<em&gt; 체외에서</em&gt; 청력 연구의 스크리닝 도구

While there have been remarkable advances in hearing research over the past few decades, there is still no cure for Sensorineural Hearing Loss (SNHL), a ...

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Neonatal Murine Cochlear Explant Technique as an In Vitro Screening Tool in Hearing Research

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Making Sense of Listening: The IMAP Test Battery

IMAP 테스트 배터리 : 듣기의 감각을 만들기

The ability to hear is only the first step towards making sense of the range of information contained in an auditory signal. Of equal importance are the ...

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A Strategy to Identify de Novo Mutations in Common Disorders such as Autism and Schizophrenia

같은 자폐증과 정신 분열증과 같은 일반적인 장애에 드 노보 변이를 식별하는 전략

There are several lines of evidence supporting the role of de novo mutations as a mechanism for common disorders, such as autism and schizophrenia. First, ...

Excitotoxic Stimulation of Brain Microslices as an In vitro Model of Stroke

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같은 뇌 Microslices의 흥분 독성 자극<em&gt; 체외</em&gt; 스트로크의 모델

Examining molecular mechanisms involved in neuropathological conditions, such as ischemic stroke, can be difficult when using whole animal systems. As ...

Dissection and Explant Culture of Murine Allantois for the In Vitro Analysis of Allantoic Attachment

Dissection and Explant Culture of Murine Allantois for the In Vitro Analysis of Allantoic Attachment

해 부와 Allantoic 첨부 파일의 생체 외에서 분석 Murine Allantois Explant 문화

The placenta is essential for the growth and development of mammalian embryos. For this reason, numerous genetic alterations and likely also environmental ...

Vagus Nerve Stimulation As an Adjunctive Neurostimulation Tool in Treatment-resistant Depression

미주 신경 자극 치료 내성 우울증에 대체 통제 도구로

Vagus nerve stimulation (VNS) is an approved neurostimulation therapy. The purpose of the method is to treat patients with therapy-resistant depression ...

Murine Precision-Cut Liver Slices as an Ex Vivo Model of Liver Biology

뮤린 정밀 절단 간 슬라이스 간 생물학의 Ex Vivo 모델로

Understanding the mechanisms of liver injury, hepatic fibrosis, and cirrhosis that underlie chronic liver diseases (i.e., viral hepatitis, non-alcoholic ...

Measurement of Strial Blood Flow in Mouse Cochlea Utilizing an Open Vessel-Window and Intravital Fluorescence Microscopy

열린 혈관 창과 생체 내 형광 현미경을 사용한 마우스 달팽이관의 심방 혈류 측정

Transduction of sound is metabolically demanding, and the normal function of the microvasculature in the lateral wall is critical for maintaining ...

Performing Intracochlear Electrocochleography During Cochlear Implantation

인공와우 이식 중 Intracochlear Electrocochleography 수행

Electrocochleography (ECochG) measures inner ear potentials generated in response to acoustic stimulation of the ear. These potentials reflect the ...

A Neonatal BALB/c Mouse Model of Necrotizing Enterocolitis

괴사 장염의 신생아 BALB/c 마우스 모델

Necrotizing enterocolitis (NEC) is the most severe gastrointestinal (GI) disease that often occurs in premature infants, especially very low birth weight ...

Modified Technique for the Use of Neonatal Murine Hearts in the Langendorff Preparation

Langendorff 준비에서 신생아 뮤린 하트의 사용을위한 수정 된 기술

The use of the ex-vivo retrograde perfused heart has long been a cornerstone of ischemia-reperfusion investigation since its development by Oskar ...