Name: transient expression and cellular localization of recombinant proteins in cultured insect cells
Uploaded: 2017-04-20T15:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Transient Expression and Cellular Localization of Recombinant Proteins in Cultured Insect Cells at JoVE.com

نشكر لين Forlow-JECH ودانيال ليري للحصول على المساعدة الفنية. وأيد هذا العمل من خلال تمويل قاعدة CRIS إلى USDA ARS، البرنامج الوطني 304 - حماية المحاصيل والحجر [مشروع # 2020-22620-022-00D] إلى JAF وJJH ذكر الأسماء التجارية أو المنتجات التجارية في هذه المقالة هي فقط لغرض توفير معلومات محددة ولا يعني توصية أو تأييد من وزارة الزراعة الأمريكية. USDA يساوي مزود الفرصة وصاحب العمل.

1. OE-PCR لتشييد البلازميدات التعبير ملاحظة: انظر الجدول رقم 1 لجميع الاشعال المستخدمة في OE-PCR. فمن المستحسن استخدام عالية الدقة البلمرة DNA لجميع التكبير. ومع ذلك، لأن هذه الإنزيمات في كثير من الأحيان لا يترك 3 &quot;A، فمن الضروري...

<ol>
	<li>Kost, T. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Baculovirus+as+versatile+vectors+for+protein+expression+in+insect+and+mammalian+cells.">Baculovirus as versatile vectors for protein expression in insect and mammalian cells.</a> Nat. Biotechnol. 23 (5), 567-575 (2005).</li><li>van Oers, M. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Thirty+years+of+baculovirus-insect+cell+protein+expression:+from+dark+horse+to+mainstream+technology.">Thirty years of baculovirus-insect cell protein expression: from dark horse to mainstream technology.</a> J. Gen. Virol. 96 (1), 6-23 (2015).</li><li>Contreras-G&#242;mez, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Protein+production+using+the+baculovirus-insect+cell+expression+system.">Protein production using the baculovirus-insect cell expression system.</a> Biotechnol. Progr. 30 (1), 1-18 (2014).</li><li>Hunt, I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=From+gene+to+protein:+a+review+of+new+and+enabling+technologies+for+multi-parallel+protein+expression.">From gene to protein: a review of new and enabling technologies for multi-parallel protein expression.</a> Protein Expres. Purif. 40 (1), 1-22 (2005).</li><li>Kollewe, C., Vilcinskas, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Production+of+recombinant+proteins+in+insect+cells.">Production of recombinant proteins in insect cells.</a> Am. J. Biochem. Biotechnol. 9 (3), 255-271 (2013).</li><li>Altmann, F., Berger, E. G., Clausen, H., Cummings, R. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Insect+cells+as+hosts+for+the+expression+of+recombinant+glycoproteins.">Insect cells as hosts for the expression of recombinant glycoproteins.</a> Glycotechnology. , 29-43 (1999).</li><li>Shen, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+simple+plasmid-based+transient+gene+expression+method+using+High+Five+cells.">A simple plasmid-based transient gene expression method using High Five cells.</a> J. Biotechnol. 216, 67-75 (2015).</li><li>Chen, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Rapid+screening+of+membrane+protein+expression+in+transiently+transfected+insect+cells.">Rapid screening of membrane protein expression in transiently transfected insect cells.</a> Protein Expres. Purif. 88 (1), 134-142 (2013).</li><li>Shen, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Virus-free+transient+protein+production+in+Sf9+cells.">Virus-free transient protein production in Sf9 cells.</a> J. Biotechnol. 171, 61-70 (2014).</li><li>Loomis, K. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=InsectDirect+System:+rapid,+high-level+protein+expression+and+purification+from+insect+cells.">InsectDirect System: rapid, high-level protein expression and purification from insect cells.</a> J. Struct. Funct. Genomics. 6 (2), 189-194 (2005).</li><li>Wurch, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+modified+overlap+extension+PCR+method+to+create+chimeric+genes+in+the+absence+of+restriction+enzymes.">A modified overlap extension PCR method to create chimeric genes in the absence of restriction enzymes.</a> Biotechnol. Tech. 12 (9), 653-657 (1998).</li><li>Woodman, M. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Direct+PCR+of+intact+bacteria+(colony+PCR).">Direct PCR of intact bacteria (colony PCR).</a> Curr. Protoc. Microbiol. 9 (3), 1-6 (2008).</li><li>Mathew, L. G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Identification+and+characterization+of+functional+aquaporin+water+channel+protein+from+alimentary+tract+of+whitefly,+Bemisia+tabaci.">Identification and characterization of functional aquaporin water channel protein from alimentary tract of whitefly, Bemisia tabaci.</a> Insect Biochem. Mol. Biol. 41 (3), 178-190 (2011).</li><li>Van Ekert, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Molecular+and+functional+characterization+of+Bemisia+tabaci+aquaporins+reveals+the+water+channel+diversity+of+hemipteran+insects.">Molecular and functional characterization of Bemisia tabaci aquaporins reveals the water channel diversity of hemipteran insects.</a> Insect Biochem. Mol. Biol. 77, 39-51 (2016).</li><li>Hull, J. J., Brent, C. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Identification+and+characterization+of+a+sex+peptide+receptor-like+transcript+from+the+western+tarnished+plant+bug+Lygus+hesperus.">Identification and characterization of a sex peptide receptor-like transcript from the western tarnished plant bug Lygus hesperus.</a> Insect Mol. Biol. 23 (3), 301-319 (2014).</li><li>Maroniche, G. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Development+of+a+novel+set+of+Gateway-compatible+vectors+for+live+imaging+in+insect+cells.">Development of a novel set of Gateway-compatible vectors for live imaging in insect cells.</a> Insect Mol. Biol. 20 (5), 675-685 (2011).</li><li>Hull, J. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Identification+of+the+western+tarnished+plant+but+(Lygus+hesperus)+olfactory+co-receptor+ORCO:+Expression+profile+and+confirmation+of+atypical+membrane+topology.">Identification of the western tarnished plant but (Lygus hesperus) olfactory co-receptor ORCO: Expression profile and confirmation of atypical membrane topology.</a> Arch. Insect Biochem. 81 (4), 179-198 (2012).</li><li>Lee, J. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Re-evaluation+of+the+PBAN+receptor+molecule:+Characterization+of+PBANR+variants+expressed+in+the+pheromone+glands+of+moths.">Re-evaluation of the PBAN receptor molecule: Characterization of PBANR variants expressed in the pheromone glands of moths.</a> Front. Endocrinol. 3 (6), 1-12 (2012).</li><li>Fabrick, J. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Molecular+and+functional+characterization+of+multiple+aquaporin+water+channel+proteins+from+the+western+tarnished+plant+bug,+Lygus+hesperus.">Molecular and functional characterization of multiple aquaporin water channel proteins from the western tarnished plant bug, Lygus hesperus.</a> Insect Biochem. Mol. Biol. 45, 125-140 (2014).</li><li>Lu, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+baculovirus+(Bombyx+mori+nuclear+polyhedrosis+virus)+repeat+element+functions+as+a+powerful+constitutive+enhancer+in+transfected+insect+cells.">A baculovirus (Bombyx mori nuclear polyhedrosis virus) repeat element functions as a powerful constitutive enhancer in transfected insect cells.</a> J. Biol. Chem. 272, 30724-30728 (1997).</li><li>Ren, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Comparative+analysis+of+the+activity+of+two+promoters+in+insect+cells.">Comparative analysis of the activity of two promoters in insect cells.</a> African J. Biotechnol. 10, 8930-8941 (2011).</li><li>Snapp, E. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fluorescent+proteins:+a+cell+biologist's+user+guide.">Fluorescent proteins: a cell biologist's user guide.</a> Trends Cell Biol. 19, 649-655 (2009).</li><li>Kohnhorst, C. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Subcellular+functions+of+proteins+under+fluorescence+single-cell+microscopy.">Subcellular functions of proteins under fluorescence single-cell microscopy.</a> Biochim. Biophys. Acta. 1864, 77-84 (2016).</li><li>Zinchuk, V., Grossenbacher-Zinchuk, O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Recent+advances+in+quantitative+colocalization+analysis:+focus+on+neuroscience.">Recent advances in quantitative colocalization analysis: focus on neuroscience.</a> Prog. Histochem. Cytochem. 44, 125-172 (2009).</li><li>Shaner, N. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+guide+to+choosing+fluorescent+proteins.">A guide to choosing fluorescent proteins.</a> Nat. Methods. 2 (12), 905-909 (2005).</li><li>Chalfie, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Green+fluorescent+protein+as+a+marker+for+gene+expression.">Green fluorescent protein as a marker for gene expression.</a> Science. 263 (5148), 802-805 (1994).</li><li>Shaner, N. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Improved+monomeric+red,+orange+and+yellow+fluorescent+proteins+derived+from+Discosoma+sp.+red+fluorescent+protein.">Improved monomeric red, orange and yellow fluorescent proteins derived from Discosoma sp. red fluorescent protein.</a> Nat. Biotech. 22 (12), 1567-1572 (2004).</li></ol>

نظم بروتين تعبير مغاير هي أدوات هامة لإنتاج البروتينات المؤتلف استخدامها في العديد من التطبيقات المصب 4. اختيار من الأنظمة التعبير المتنوعة المتاحة يعتمد على الهدف النهائي للبروتين من الفائدة. تتوفر التي تقدم بدائل مرنة لأنظمة التعبير خلية بدائية النو?...

إنتاج البروتينات المؤتلف باستخدام نظم التعبير خلية الحشرات يقدم العديد من الفوائد لدراسة البروتينات حقيقية النواة. وهي خلايا الحشرات تمتلك تعديلات مماثلة بعد متعدية، وتجهيز، وآليات فرز مثل تلك الموجودة في خلايا الثدييات، وهو مفيد لإنتاج البروتينات مطوية بشكل صحيح 1 و 2 و 3. كما تتطلب نظم خلايا الحشرات عادة موارد أقل وأقل وقت وجهد للصيانة من خطوط الخلايا الثديية 4 و 5. نظام التعبير الفيروسة العصوية هو واحد مثل هذا النظام القائم على خلية الحشرات التي تستخدم الآن على نطاق واسع في العديد من التخصصات، بما في ذلك إنتاج البروتينات المؤتلف لتوصيف البروتين والعلاجات، وعرض مناعة من الببتيدات الخارجية والبروتينات الفيروسية لإنتاج اللقاحات، تركيب متعددة المجمعات -protein، وإنتاج البروتينات الغليكوزيلاتي، الخ. 1، 2، 4، 6. هناك، ومع ذلك، الحالات التي قد لا يكون التعبير الفيروسة العصوية ينطبق 3 و 7، واستخدام نظم التعبير الحشرات nonlytic وعابرة قد تكون أكثر ملاءمة. على وجه التحديد، عابرة التعبير خلية الحشرات توفر إمكانية لتركيب السريع للبروتين المؤتلف، ويتطلب أقل تطوير وصيانة، لا تنطوي على الفيروسية التي فرضتها تحلل الخلية، ويوفر وسيلة لدراسة أفضل الاتجار الخلوي أثناء تخليق البروتين 7، 8، 9، 10. يصف هذا البروتوكول الجيل السريع للناقلات التعبير باستخدام خطوتين تمديد تداخل PCR (OE-PCR) <suص الطبقة = &quot;XREF&quot;&gt; (11) والاستنساخ القياسية من DNA البلازميد في القولونية. يتم استخدام البلازميدات إلى المزدوج transfect خلايا الحشرات مثقف المتاحة تجاريا وتنتج البروتينات التمثيلية. يصف بروتوكول إنتاج واستخدام اثنين من البروتينات المختلفة علامة التحت خلوية fluorescently المسمى ويوضح colocalization مع اثنين من البروتينات aquaporin من الذبابة البيضاء Bemisia الحشرات. وينص البروتوكول بعد المنهجية الأساسية لOE-PCR، الحشرات صيانة الخلية وترنسفكأيشن، والفحص المجهري مضان لتوطين الخلوية من البروتينات المستهدفة.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" width="1353">
	<colgroup>
		<col />
		<col />
		<col />
		<col />
	</colgroup>
	<tbody>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:425px;">KOD DNA Polymerase</td>
			<td style="width:164px;">EMD Millipore</td>
			<td style="width:119px;">71085-3</td>
			<td style="width:645px;">High-fidelity DNA polymerase used for PCR amplification of overlap extension PCR products</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:425px;">ExTaq DNA Polymerase</td>
			<td style="width:164px;">TaKaRa-Clontech</td>
			<td style="width:119px;">RR001B</td>
			<td>DNA polymerase used for A-tailing of PCR products</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:425px;">EconoTaq PLUS GREEN 2x DNA Polymerase Master Mix</td>
			<td style="width:164px;">Lucigen</td>
			<td style="width:119px;">30033-1</td>
			<td>DNA polymerase used for bacterial colony PCR</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:425px;">Biometra TProfessional Gradient Thermocycler</td>
			<td style="width:164px;">Biometra/LABRepCo</td>
			<td style="width:119px;">070-851</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:425px;">Agarose LE</td>
			<td style="width:164px;">Benchmark Scientific</td>
			<td style="width:119px;">A1705</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:425px;">SYBR Safe DNA Gel Stain</td>
			<td>ThermoFisher</td>
			<td style="width:119px;">S33102</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:425px;">Montage DNA Gel Extraction Kit</td>
			<td style="width:164px;">EMD Millipore</td>
			<td style="width:119px;">LSKGEL050</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="63">
			<td height="63" style="height:63px;width:425px;">pIB/V5-His TOPO TA Expression Kit</td>
			<td>ThermoFisher</td>
			<td style="width:119px;">K89020</td>
			<td style="width:645px;">Contains components needed to clone overlap extension PCR products, including linearized and topoisomerase I-activated pIB/V5-His-TOPO vector, One Shot TOP10 chemically competent E. coli, and salt solution.</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:425px;">QIAprep Spin MiniPrep Kit</td>
			<td>Qiagen</td>
			<td style="width:119px;">27104</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:425px;">QIAcube Robotic Workstation</td>
			<td>Qiagen</td>
			<td style="width:119px;">9001292</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Purifier Vertical Clean Bench</td>
			<td>Labconco</td>
			<td>3970401</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Tni cultured insect cell Line</td>
			<td>Allele Biotech</td>
			<td>ABP-CEL-10005</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Sf9 cultured insect cell Line</td>
			<td>Allele Biotech</td>
			<td>ABP-CEL-10002</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Serum-Free Insect Culture Medium</td>
			<td>Allele Biotech</td>
			<td>ABP-MED-10002</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">TNM-FH Insect Culture Medium</td>
			<td>Allele Biotech</td>
			<td>ABP-MED-10001</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">IPL-41 Insect Medium</td>
			<td>ThermoFisher</td>
			<td>11405081</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Cellfectin II Transfection Reagent</td>
			<td>ThermoFisher</td>
			<td>10362100</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">16 cm Disposable Cell Scrapers</td>
			<td>Sarstedt</td>
			<td>83.1832</td>
			<td>Cell scrapers with two-position blade</td>
		</tr>
		<tr height="25">
			<td height="25" style="height:25px;">25 cm2 (T25) Tissue Culture Flasks with Vent Filter Caps</td>
			<td>Life Science Products</td>
			<td>CT-229331</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Transfer Pipets</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>1371120</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Sterile, 50 mL Bio-Reaction Tubes</td>
			<td>Life Science Products</td>
			<td>CT-229475</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">PipetteBoy</td>
			<td>VWR</td>
			<td>14222-180</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">5 mL Serological Pipettes</td>
			<td>Sarstedt</td>
			<td>86.1253.001</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">0.5 mL Flat-Cap PCR Tubes</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>14230200</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Polypropylene Biohazard Autoclave Bags</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>01828C</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">35 mm #1.5 Glass Bottom Dishes</td>
			<td>Matsunami Glass</td>
			<td>D35-14-1.5-U</td>
			<td>35 mm dish diameter, 14 mm glass diameter, 1.5 mm glass thickness, uncoated</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Incubator, Model 1510E</td>
			<td>VWR</td>
			<td>35823-961</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Countess II FL Cell Counter</td>
			<td>ThermoFisher</td>
			<td>AMQAF1000</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Countess Cell Counting Chamber Slides with 0.4% Trypan Blue Reagent</td>
			<td>ThermoFisher</td>
			<td>C10228</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Fluoview FV10i-LIV Laser Scanning Confocal Microscope</td>
			<td>Olympus</td>
			<td>FV10i-LIV</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">HsPLA2/pCS6 plasmid DNA</td>
			<td>transOMIC Technologies</td>
			<td>TCH1303</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">pmCherry Vector</td>
			<td>Clontech</td>
			<td>632522</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:425px;">NucBlue Live ReadyProbes Reagent (Hoechst 33342)</td>
			<td style="width:164px;">ThermoFisher</td>
			<td style="width:119px;">R37605</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

transient expression and cellular localization of recombinant proteins in cultured insect cells

وتستخدم أنظمة بروتين تعبير مغاير لإنتاج البروتينات المؤتلف، تفسير الخلوي الاتجار / توطين، وتحديد الوظائف الكيميائية الحيوية للبروتينات في المستوى دون العضوي. على الرغم من أن أنظمة الفيروسة العصوية التعبير وتستخدم على نحو متزايد لإنتاج البروتين في العديد من التكنولوجيا الحيوية والأدوية، والتطبيقات الصناعية، وأنظمة nonlytic التي لا تنطوي عدوى فيروسية لها فوائد واضحة ولكن غالبا ما يتم التغاضي وغير المستغلة. هنا، نحن تصف طريقة لتوليد ناقلات التعبير nonlytic وعابرة تعبير البروتين المؤتلف. يسمح هذا البروتوكول لتوطين الخلوية كفاءة من البروتينات المؤتلف، ويمكن استخدامها لتمييز بسرعة الاتجار البروتين داخل الخلية. نقدم لك مجموعة من التعبير عن أربعة بروتينات المؤتلف في خط خلية الحشرات المتاحة تجاريا، بما في ذلك اثنين من البروتينات aquaporin من الذبابة البيضاء Bemisia الحشرات، فضلاكما البروتينات علامة التحت خلوية محددة لغشاء الخلية البلازما والخلايا الجسيمات الحالة. تم إنتاج جميع البروتينات المؤتلف كما الوهم مع علامات بروتين فلوري في ترميني الكربوكسيل، والتي تسمح للكشف المباشر من البروتينات المؤتلف. ترنسفكأيشن مزدوج من الخلايا مع البلازميدات إيواء بنيات للجينات من الاهتمام وعلامة التحت خلوية تعرف يسمح لتصوير الخلايا الحية وتحسين التحقق من توطين البروتين الخلوي.

OE-PCR OE-PCR يسمح لتركيب المنتجات DNA خيالية ذلك، إدراج مرة واحدة في ناقلات التعبير، والسماح لإنتاج البروتينات خيالية المؤتلف الموافق أي الجينات اختبار المصالح والفلورسنت البروتين علامة. يمثل ا?...

Watch this Scientific Journal Video about Transient Expression and Cellular Localization of Recombinant Proteins in Cultured Insect Cells at JoVE.com

Transient Expression and Cellular Localization of Recombinant Proteins in Cultured Insect Cells

والمستغلة نظم التعبير خلية الحشرات Nonlytic لإنتاج الخلوية الاتجار / الترجمة، والتحليل الوظيفي البروتين المؤتلف. هنا، نحن تصف وسائل لتوليد ناقلات التعبير ولاحق بروتين تعبير عابر في خطوط الخلايا حرشفية الأجنحة المتاحة تجاريا. سيعرض أيضا شارك في توطين aquaporins الذبابة البيضاء Bemisia مع البروتينات علامة فلوري التحت خلوية.

التعبير عابرة والخلوية توطين البروتينات المؤتلف في الخلايا مثقف الحشرات

Heterologous protein expression systems are used for the production of recombinant proteins, the interpretation of cellular trafficking/localization, and ...

Research

JoVE Journal

Biology

A Method For Production of Recombinant mCD1d Protein in Insect Cells.

وهناك طريقة للحصول على إنتاج بروتين المؤتلف mCD1d في خلايا الحشرات.

CD1 proteins constitute a third class of antigen-presenting molecules. They are cell surface glycoproteins, expressed as approximately 50-kDa glycosylated ...

Staining of Proteins in Gels with Coomassie G-250 without Organic Solvent and Acetic Acid

تلطيخ من البروتينات في الهلام مع Coomassie G - 250 دون عضوي حمض الخليك والمذيبات

In classical protein staining protocols using Coomassie Brilliant Blue (CBB), solutions with high contents of toxic and flammable organic solvents ...

Expression of Recombinant Proteins in the Methylotrophic Yeast Pichia pastoris

Expression of Recombinant Proteins in the Methylotrophic Yeast Pichia pastoris

التعبير عن البروتينات المؤتلف في الخميرة Methylotrophic Pichia pastoris</em

Protein expression in the microbial eukaryotic host Pichia pastoris offers the possibility to generate high amounts of recombinant protein in a fast and ...

Efficient Agroinfiltration of Plants for High-level Transient Expression of Recombinant Proteins

Agroinfiltration كفاءة من النباتات للتعبير عابر الرفيع المستوى من البروتينات المؤتلف

Mammalian cell culture is the major platform for commercial production of human vaccines and therapeutic proteins. However, it cannot meet the increasing ...

Efficient Production and Purification of Recombinant Murine Kindlin-3 from Insect Cells for Biophysical Studies

كفاءة الإنتاج وتنقية المؤتلف الفئران Kindlin-3 من خلايا الحشرات للدراسات البيوفيزيائية

Kindlins are essential coactivators, with talin, of the cell surface receptors&#160;integrins and also participate in integrin outside-in signalling, and ...

High Throughput Quantitative Expression Screening and Purification Applied to Recombinant Disulfide-rich Venom Proteins Produced in E. coli

High Throughput Quantitative Expression Screening and Purification Applied to Recombinant Disulfide-rich Venom Proteins Produced in E. coli

عالية الإنتاجية التعبير الكمي فحص وتنقية تطبق على المؤتلف ثاني كبريتيد الغنية البروتينات السم المنتجة في<em&gt; E. القولونية</em

Escherichia coli (E. coli) is the most widely used expression system for the production of recombinant proteins for structural and functional studies. ...

Transient Expression of Proteins by Hydrodynamic Gene Delivery in Mice

التعبير عابرة من البروتينات عن طريق هيدرودينامي الجينات في الفئران التسليم

Efficient expression of transgenes in vivo is of critical importance in studying gene function and developing treatments for diseases. Over the past ...

siRNA Screening to Identify Ubiquitin and Ubiquitin-like System Regulators of Biological Pathways in Cultured Mammalian Cells

سيرنا فحص لتحديد اليوبيكويتين واليوبيكويتين مثل المنظمين نظام مقررات تمهيدية البيولوجية في خلايا الثدييات مثقف

Post-translational modification of proteins with ubiquitin and ubiquitin-like molecules (UBLs) is emerging as a dynamic cellular signaling network that ...

A Comparative Analysis of Recombinant Protein Expression in Different Biofactories: Bacteria, Insect Cells and Plant Systems

تحليل مقارن التعبير المؤتلف البروتين في Biofactories مختلفة: البكتيريا، خلايا الحشرات ونظم النبات

Plant-based systems are considered a valuable platform for the production of recombinant proteins as a result of their well-documented potential for the ...