Name: transient expression and cellular localization of recombinant proteins in cultured insect cells
Uploaded: 2017-04-20T15:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Transient Expression and Cellular Localization of Recombinant Proteins in Cultured Insect Cells at JoVE.com

Wir danken Lynn Forlow-Jech und Dannialle LeRoy für technische Unterstützung. Diese Arbeit wurde von Basis CRIS Finanzierung USDA ARS, Nationales Programm 304 unterstützt - Crop Protection and Quarantine [Projekt # 2020-22620-022-00D] JAF und JJH Die Erwähnung von Handelsnamen oder Handelsprodukten in diesem Artikel ausschließlich zum Zweck ist die Bereitstellung spezifische Information und stellen keine Empfehlung oder Billigung durch das US Department of Agriculture implizieren. USDA eine Politik der Chancengleichheit Anbieter und Arbeitgeber.

1. OE-PCR für die Konstruktion von Expressionsplasmiden Hinweis: Siehe Tabelle 1 für alle verwendeten Primer in OE-PCR. Die Verwendung einer High-Fidelity DNA-Polymerase wird für alle Amplifikationen empfohlen. Da jedoch diese Enzyme häufig nicht verlassen, ein 3&#39; A, ist es notwendig, eine kurze, nicht-Amplifizierung Inkubation mit einer Taq-DNA-Polymerase zu ‚A-tail‘ auszuführen, um die PCR-Produkte, bevor sie in einen TA-Insektenzellen-Expressions klonen Vektor....

<ol>
	<li>Kost, T. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Baculovirus+as+versatile+vectors+for+protein+expression+in+insect+and+mammalian+cells.">Baculovirus as versatile vectors for protein expression in insect and mammalian cells.</a> Nat. Biotechnol. 23 (5), 567-575 (2005).</li><li>van Oers, M. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Thirty+years+of+baculovirus-insect+cell+protein+expression:+from+dark+horse+to+mainstream+technology.">Thirty years of baculovirus-insect cell protein expression: from dark horse to mainstream technology.</a> J. Gen. 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Biol. 41 (3), 178-190 (2011).</li><li>Van Ekert, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Molecular+and+functional+characterization+of+Bemisia+tabaci+aquaporins+reveals+the+water+channel+diversity+of+hemipteran+insects.">Molecular and functional characterization of Bemisia tabaci aquaporins reveals the water channel diversity of hemipteran insects.</a> Insect Biochem. Mol. Biol. 77, 39-51 (2016).</li><li>Hull, J. J., Brent, C. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Identification+and+characterization+of+a+sex+peptide+receptor-like+transcript+from+the+western+tarnished+plant+bug+Lygus+hesperus.">Identification and characterization of a sex peptide receptor-like transcript from the western tarnished plant bug Lygus hesperus.</a> Insect Mol. Biol. 23 (3), 301-319 (2014).</li><li>Maroniche, G. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Development+of+a+novel+set+of+Gateway-compatible+vectors+for+live+imaging+in+insect+cells.">Development of a novel set of Gateway-compatible vectors for live imaging in insect cells.</a> Insect Mol. Biol. 20 (5), 675-685 (2011).</li><li>Hull, J. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Identification+of+the+western+tarnished+plant+but+(Lygus+hesperus)+olfactory+co-receptor+ORCO:+Expression+profile+and+confirmation+of+atypical+membrane+topology.">Identification of the western tarnished plant but (Lygus hesperus) olfactory co-receptor ORCO: Expression profile and confirmation of atypical membrane topology.</a> Arch. Insect Biochem. 81 (4), 179-198 (2012).</li><li>Lee, J. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Re-evaluation+of+the+PBAN+receptor+molecule:+Characterization+of+PBANR+variants+expressed+in+the+pheromone+glands+of+moths.">Re-evaluation of the PBAN receptor molecule: Characterization of PBANR variants expressed in the pheromone glands of moths.</a> Front. Endocrinol. 3 (6), 1-12 (2012).</li><li>Fabrick, J. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Molecular+and+functional+characterization+of+multiple+aquaporin+water+channel+proteins+from+the+western+tarnished+plant+bug,+Lygus+hesperus.">Molecular and functional characterization of multiple aquaporin water channel proteins from the western tarnished plant bug, Lygus hesperus.</a> Insect Biochem. Mol. Biol. 45, 125-140 (2014).</li><li>Lu, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+baculovirus+(Bombyx+mori+nuclear+polyhedrosis+virus)+repeat+element+functions+as+a+powerful+constitutive+enhancer+in+transfected+insect+cells.">A baculovirus (Bombyx mori nuclear polyhedrosis virus) repeat element functions as a powerful constitutive enhancer in transfected insect cells.</a> J. Biol. Chem. 272, 30724-30728 (1997).</li><li>Ren, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Comparative+analysis+of+the+activity+of+two+promoters+in+insect+cells.">Comparative analysis of the activity of two promoters in insect cells.</a> African J. Biotechnol. 10, 8930-8941 (2011).</li><li>Snapp, E. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fluorescent+proteins:+a+cell+biologist's+user+guide.">Fluorescent proteins: a cell biologist's user guide.</a> Trends Cell Biol. 19, 649-655 (2009).</li><li>Kohnhorst, C. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Subcellular+functions+of+proteins+under+fluorescence+single-cell+microscopy.">Subcellular functions of proteins under fluorescence single-cell microscopy.</a> Biochim. Biophys. Acta. 1864, 77-84 (2016).</li><li>Zinchuk, V., Grossenbacher-Zinchuk, O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Recent+advances+in+quantitative+colocalization+analysis:+focus+on+neuroscience.">Recent advances in quantitative colocalization analysis: focus on neuroscience.</a> Prog. Histochem. Cytochem. 44, 125-172 (2009).</li><li>Shaner, N. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+guide+to+choosing+fluorescent+proteins.">A guide to choosing fluorescent proteins.</a> Nat. Methods. 2 (12), 905-909 (2005).</li><li>Chalfie, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Green+fluorescent+protein+as+a+marker+for+gene+expression.">Green fluorescent protein as a marker for gene expression.</a> Science. 263 (5148), 802-805 (1994).</li><li>Shaner, N. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Improved+monomeric+red,+orange+and+yellow+fluorescent+proteins+derived+from+Discosoma+sp.+red+fluorescent+protein.">Improved monomeric red, orange and yellow fluorescent proteins derived from Discosoma sp. red fluorescent protein.</a> Nat. Biotech. 22 (12), 1567-1572 (2004).</li></ol>

Heterologe Proteinexpressionssysteme sind wichtige Werkzeuge für die Herstellung von rekombinanten Proteinen in zahlreichen Anwendungen eingesetzt Downstream 4. Die Auswahl aus den verschiedenen Expressionssystemen zur Verfügung, hängt vom Endziel für das Protein von Interesse. Mehr Insektenzellexpressionssysteme zur Verfügung , die flexible Alternativen zu pro- und eukaryotischen Zellexpressionssystemen 5, 6 bieten. Insektensysteme ...

Die Herstellung von rekombinanten Proteinen Insektenzellexpressionssysteme bietet zahlreiche Vorteile für die Untersuchung von eukaryotischen Proteinen. Und zwar besitzen Insektenzellen ähnliche post-translationale Modifikationen, die Verarbeitung und Sortiermechanismen wie jene , die in Säugetierzellen, die zur Herstellung von korrekt gefalteten Proteinen 1, 2, 3 vorteilhaft sind. Insektenzellsysteme , auch benötigen in der Regel weniger Ressourcen und weniger Zeit und Aufwand für die Wartung als Säugetier-Zelllinien 4, 5. Das Baculovirus-Expressionssystem ist ein solches Insektenzell-basiertes System, das heute weit verbreitet in vielen Disziplinen verwendet wird, einschließlich der Herstellung von rekombinanten Proteinen für die Proteincharakterisierung und Therapeutika, die immunogene Präsentation von Fremdpeptiden und virale Proteine, die für die Impfstoffherstellung, die Synthese von mehr -Protein KomplexeDie Herstellung von glycosylierten Proteinen, etc. 1, 2, 4, 6. Es gibt jedoch Situationen , in denen von Baculovirus - Expressions nicht anwendbar sein , 3, 7, und die Verwendung von nichtlysierende und transienten Insektenexpressionssystemen kann besser geeignet sein. Insbesondere transiente Insektenzellexpressions die Möglichkeit zur schnellen Synthese von rekombinantem Protein bieten, weniger Entwicklung und Wartung erfordert, nicht viralen auferlegte Zelllyse beteiligt, und stellt ein Mittel besseren zellularen Handel während Proteins zu studieren Synthese 7, 8, 9, 10. Dieses Protokoll beschreibt die schnelle Erzeugung von Expressionsvektoren unter Verwendung von Zweistufen-Überlappungsverlängerungs-PCR (OE-PCR) Escherichia coli. Plasmide sind doppelt transfizieren kommerziell erhältlichen gezüchteten Insektenzellen verwendet und repräsentative Proteine ​​zu produzieren. Das Protokoll beschreibt die Herstellung und Verwendung von zwei verschiedenen fluoreszenzmarkierten subzellulären Markerproteinen und zeigt Kolokalisation mit zwei Aquaporin - Proteinen aus dem Insekten Bemisia tabaci. Das folgende Protokoll stellt die grundlegende Methodik für OE-PCR, Insektenzell Wartung und Transfektion und Fluoreszenzmikroskopie für die zelluläre Lokalisation von Zielproteinen.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" width="1353">
	<colgroup>
		<col />
		<col />
		<col />
		<col />
	</colgroup>
	<tbody>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:425px;">KOD DNA Polymerase</td>
			<td style="width:164px;">EMD Millipore</td>
			<td style="width:119px;">71085-3</td>
			<td style="width:645px;">High-fidelity DNA polymerase used for PCR amplification of overlap extension PCR products</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:425px;">ExTaq DNA Polymerase</td>
			<td style="width:164px;">TaKaRa-Clontech</td>
			<td style="width:119px;">RR001B</td>
			<td>DNA polymerase used for A-tailing of PCR products</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:425px;">EconoTaq PLUS GREEN 2x DNA Polymerase Master Mix</td>
			<td style="width:164px;">Lucigen</td>
			<td style="width:119px;">30033-1</td>
			<td>DNA polymerase used for bacterial colony PCR</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:425px;">Biometra TProfessional Gradient Thermocycler</td>
			<td style="width:164px;">Biometra/LABRepCo</td>
			<td style="width:119px;">070-851</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:425px;">Agarose LE</td>
			<td style="width:164px;">Benchmark Scientific</td>
			<td style="width:119px;">A1705</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:425px;">SYBR Safe DNA Gel Stain</td>
			<td>ThermoFisher</td>
			<td style="width:119px;">S33102</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:425px;">Montage DNA Gel Extraction Kit</td>
			<td style="width:164px;">EMD Millipore</td>
			<td style="width:119px;">LSKGEL050</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="63">
			<td height="63" style="height:63px;width:425px;">pIB/V5-His TOPO TA Expression Kit</td>
			<td>ThermoFisher</td>
			<td style="width:119px;">K89020</td>
			<td style="width:645px;">Contains components needed to clone overlap extension PCR products, including linearized and topoisomerase I-activated pIB/V5-His-TOPO vector, One Shot TOP10 chemically competent E. coli, and salt solution.</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:425px;">QIAprep Spin MiniPrep Kit</td>
			<td>Qiagen</td>
			<td style="width:119px;">27104</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:425px;">QIAcube Robotic Workstation</td>
			<td>Qiagen</td>
			<td style="width:119px;">9001292</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Purifier Vertical Clean Bench</td>
			<td>Labconco</td>
			<td>3970401</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Tni cultured insect cell Line</td>
			<td>Allele Biotech</td>
			<td>ABP-CEL-10005</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Sf9 cultured insect cell Line</td>
			<td>Allele Biotech</td>
			<td>ABP-CEL-10002</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Serum-Free Insect Culture Medium</td>
			<td>Allele Biotech</td>
			<td>ABP-MED-10002</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">TNM-FH Insect Culture Medium</td>
			<td>Allele Biotech</td>
			<td>ABP-MED-10001</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">IPL-41 Insect Medium</td>
			<td>ThermoFisher</td>
			<td>11405081</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Cellfectin II Transfection Reagent</td>
			<td>ThermoFisher</td>
			<td>10362100</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">16 cm Disposable Cell Scrapers</td>
			<td>Sarstedt</td>
			<td>83.1832</td>
			<td>Cell scrapers with two-position blade</td>
		</tr>
		<tr height="25">
			<td height="25" style="height:25px;">25 cm2 (T25) Tissue Culture Flasks with Vent Filter Caps</td>
			<td>Life Science Products</td>
			<td>CT-229331</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Transfer Pipets</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>1371120</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Sterile, 50 mL Bio-Reaction Tubes</td>
			<td>Life Science Products</td>
			<td>CT-229475</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">PipetteBoy</td>
			<td>VWR</td>
			<td>14222-180</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">5 mL Serological Pipettes</td>
			<td>Sarstedt</td>
			<td>86.1253.001</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">0.5 mL Flat-Cap PCR Tubes</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>14230200</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Polypropylene Biohazard Autoclave Bags</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>01828C</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">35 mm #1.5 Glass Bottom Dishes</td>
			<td>Matsunami Glass</td>
			<td>D35-14-1.5-U</td>
			<td>35 mm dish diameter, 14 mm glass diameter, 1.5 mm glass thickness, uncoated</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Incubator, Model 1510E</td>
			<td>VWR</td>
			<td>35823-961</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Countess II FL Cell Counter</td>
			<td>ThermoFisher</td>
			<td>AMQAF1000</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Countess Cell Counting Chamber Slides with 0.4% Trypan Blue Reagent</td>
			<td>ThermoFisher</td>
			<td>C10228</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Fluoview FV10i-LIV Laser Scanning Confocal Microscope</td>
			<td>Olympus</td>
			<td>FV10i-LIV</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">HsPLA2/pCS6 plasmid DNA</td>
			<td>transOMIC Technologies</td>
			<td>TCH1303</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">pmCherry Vector</td>
			<td>Clontech</td>
			<td>632522</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:425px;">NucBlue Live ReadyProbes Reagent (Hoechst 33342)</td>
			<td style="width:164px;">ThermoFisher</td>
			<td style="width:119px;">R37605</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

transient expression and cellular localization of recombinant proteins in cultured insect cells

Heterologe Proteinexpressionssysteme sind für die Herstellung rekombinanter Proteine ​​verwendet werden, die Interpretation von zellulärem Handel / Lokalisierung und die Bestimmung der biochemischen Funktion von Proteinen an der Unter organismal Ebene. Obwohl Baculovirus-Expressionssysteme werden zunehmend für die Proteinproduktion in zahlreichen biotechnologischen, pharmazeutischen und industriellen Anwendungen, nichtlysierende Systemen verwendet, die nicht virale Infektion haben klare Vorteile beinhalten sie sind aber oft übersehen und nicht ausgelastet. Hier beschreiben wir ein Verfahren zum Erzeugen nichtlysierende Expressionsvektoren und transiente Expression von rekombinantem Protein. Dieses Protokoll ermöglicht die effiziente zelluläre Lokalisation von rekombinanten Proteinen und kann verwendet werden, um schnell den Proteintransport in der Zelle zu unterscheiden. Wir zeigen die Expression von vier rekombinanten Proteinen in einer handelsüblichen Insektenzelllinie, einschließlich zwei Aquaporin - Proteine aus dem Insekten Bemisia tabaci, sowieals subzellulären Markerproteine ​​spezifisch für die Zellplasmamembran und für die intrazelluläre Lysosomen. Alle rekombinanten Proteine ​​wurden als Chimären mit fluoreszierendem Protein-Marker an ihrer Carboxyltermini hergestellt, die für den direkten Nachweis der rekombinanten Proteine ​​ermöglicht. Die Doppel-Transfektion von Zellen mit Plasmiden Konstrukten für die Gene von Interesse und einem bekannten subzellulären Marker ermöglicht lebende Zellen und eine verbesserte Validierung von zellulären Proteinlokalisierung beherbergen.

OE-PCR OE-PCR ermöglicht die Synthese von chimären DNA-Produkten, die, einmal in einen Expressionsvektor eingefügt ist, ermöglichen die Herstellung von rekombinanten chimären Proteinen zu jedem Test Gen von Interesse und fluoreszierenden Markerprotein entsprechen. 1 stellt ein allgemeines Schema für die Herstellung von PIB - Expressionsvektoren , enthaltend B. tabaci Aquaporin - codierenden Sequenz...

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Transient Expression and Cellular Localization of Recombinant Proteins in Cultured Insect Cells

Nichtlysierende Insektenzellexpressionssysteme sind für die Produktion, Zellmigration / Lokalisierung und rekombinante Protein funktionelle Analyse nicht ausgelastet. Hier beschreiben wir Verfahren, Expressionsvektoren und nachfolgende transiente Proteinexpression in kommerziell erhältlichen Lepidoptera-Zelllinien zu erzeugen. Die Co-Lokalisierung von Bemisia tabaci aquaporins mit subzellulären fluoreszierenden Markerproteinen wird ebenfalls vorgestellt.

Vorübergehende Expression und zelluläre Lokalisation von rekombinanten Proteinen in gezüchteten Insektenzellen

Heterologous protein expression systems are used for the production of recombinant proteins, the interpretation of cellular trafficking/localization, and ...

Research

JoVE Journal

Biology

A Method For Production of Recombinant mCD1d Protein in Insect Cells.

Ein Verfahren zur Herstellung von rekombinantem Protein in mCD1d Insektenzellen.

CD1 proteins constitute a third class of antigen-presenting molecules. They are cell surface glycoproteins, expressed as approximately 50-kDa glycosylated ...

Forschung

Biologie

Staining of Proteins in Gels with Coomassie G-250 without Organic Solvent and Acetic Acid

Färbung von Proteinen in Gelen mit Coomassie G-250 ohne organische Lösungsmittel und Essigsäure

In classical protein staining protocols using Coomassie Brilliant Blue (CBB), solutions with high contents of toxic and flammable organic solvents ...

Expression of Recombinant Proteins in the Methylotrophic Yeast Pichia pastoris

Expression of Recombinant Proteins in the Methylotrophic Yeast Pichia pastoris

Expression von rekombinanten Proteinen in der methylotrophen Hefe Pichia pastoris</em

Protein expression in the microbial eukaryotic host Pichia pastoris offers the possibility to generate high amounts of recombinant protein in a fast and ...

Efficient Agroinfiltration of Plants for High-level Transient Expression of Recombinant Proteins

Effiziente Agroinfiltration von Pflanzen für High-Level-Transient Expression von rekombinanten Proteinen

Mammalian cell culture is the major platform for commercial production of human vaccines and therapeutic proteins. However, it cannot meet the increasing ...

Efficient Production and Purification of Recombinant Murine Kindlin-3 from Insect Cells for Biophysical Studies

Effizienten Herstellung und Reinigung von rekombinantem murinem Kindlin-3 von Insektenzellen für biophysikalische Studien

Kindlins are essential coactivators, with talin, of the cell surface receptors&#160;integrins and also participate in integrin outside-in signalling, and ...

High Throughput Quantitative Expression Screening and Purification Applied to Recombinant Disulfide-rich Venom Proteins Produced in E. coli

High Throughput Quantitative Expression Screening and Purification Applied to Recombinant Disulfide-rich Venom Proteins Produced in E. coli

Hochdurchsatz-Screening Quantitative Expression und Aufreinigung rekombinanter zu Disulfid-reichen Proteine ​​Venom Produziert in Applied<em&gt; E. coli</em

Escherichia coli (E. coli) is the most widely used expression system for the production of recombinant proteins for structural and functional studies. ...

Transient Expression of Proteins by Hydrodynamic Gene Delivery in Mice

Transiente Expression von Proteinen durch Hydrodynamische Gentransfer in Mäusen

Efficient expression of transgenes in vivo is of critical importance in studying gene function and developing treatments for diseases. Over the past ...

siRNA Screening to Identify Ubiquitin and Ubiquitin-like System Regulators of Biological Pathways in Cultured Mammalian Cells

siRNA Screening zu Ubiquitin und Ubiquitin-ähnlichen System Regler der biologischen Stoffwechselwege in kultivierten Säugerzellen identifizieren

Post-translational modification of proteins with ubiquitin and ubiquitin-like molecules (UBLs) is emerging as a dynamic cellular signaling network that ...

A Comparative Analysis of Recombinant Protein Expression in Different Biofactories: Bacteria, Insect Cells and Plant Systems

Eine vergleichende Analyse der Expression rekombinanter Proteine ​​in verschiedenen Biofabrik: Bakterien, Insektenzellen und Pflanzensysteme

Plant-based systems are considered a valuable platform for the production of recombinant proteins as a result of their well-documented potential for the ...