Name: transient expression and cellular localization of recombinant proteins in cultured insect cells
Uploaded: 2017-04-20T15:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Transient Expression and Cellular Localization of Recombinant Proteins in Cultured Insect Cells at JoVE.com

אנו מודים לין Forlow-Jech ו Dannialle לירוי לקבלת סיוע טכני. עבודה זו נתמכה על ידי מימון שקריס הבסיס USDA ARS, התכנית הלאומית 304 - להגנת הצומח ההסגר [פרויקט # 2020-22620-022-00D] להזכיר JAF ו JJH של שמות מסחריים או מוצרים מסחריים במאמר זה הוא אך ורק לשם מתן מידע ספציפי ואינו משתמע המלצה או תמיכה על ידי משרד החקלאות האמריקני. USDA היא ספקית הזדמנות שווה מעסיק.

1. OE-PCR עבור בניית פלסמידים ביטוי הערה: ראה טבלה 1 עבור כל פריימרים המשמשים OE-PCR. שימוש DNA פולימרז באיכות גבוהה מומלץ לכל הרחבות. עם זאת, בגלל אנזימים אלה לעתים קרובות לא להשאיר 3&#39; א &#39;, יש צורך לבצע דגירה קצרה, הלא הגברה עם DNA ?...

<ol>
	<li>Kost, T. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Baculovirus+as+versatile+vectors+for+protein+expression+in+insect+and+mammalian+cells.">Baculovirus as versatile vectors for protein expression in insect and mammalian cells.</a> Nat. Biotechnol. 23 (5), 567-575 (2005).</li><li>van Oers, M. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Thirty+years+of+baculovirus-insect+cell+protein+expression:+from+dark+horse+to+mainstream+technology.">Thirty years of baculovirus-insect cell protein expression: from dark horse to mainstream technology.</a> J. Gen. Virol. 96 (1), 6-23 (2015).</li><li>Contreras-G&#242;mez, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Protein+production+using+the+baculovirus-insect+cell+expression+system.">Protein production using the baculovirus-insect cell expression system.</a> Biotechnol. Progr. 30 (1), 1-18 (2014).</li><li>Hunt, I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=From+gene+to+protein:+a+review+of+new+and+enabling+technologies+for+multi-parallel+protein+expression.">From gene to protein: a review of new and enabling technologies for multi-parallel protein expression.</a> Protein Expres. Purif. 40 (1), 1-22 (2005).</li><li>Kollewe, C., Vilcinskas, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Production+of+recombinant+proteins+in+insect+cells.">Production of recombinant proteins in insect cells.</a> Am. J. Biochem. Biotechnol. 9 (3), 255-271 (2013).</li><li>Altmann, F., Berger, E. G., Clausen, H., Cummings, R. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Insect+cells+as+hosts+for+the+expression+of+recombinant+glycoproteins.">Insect cells as hosts for the expression of recombinant glycoproteins.</a> Glycotechnology. , 29-43 (1999).</li><li>Shen, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+simple+plasmid-based+transient+gene+expression+method+using+High+Five+cells.">A simple plasmid-based transient gene expression method using High Five cells.</a> J. Biotechnol. 216, 67-75 (2015).</li><li>Chen, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Rapid+screening+of+membrane+protein+expression+in+transiently+transfected+insect+cells.">Rapid screening of membrane protein expression in transiently transfected insect cells.</a> Protein Expres. Purif. 88 (1), 134-142 (2013).</li><li>Shen, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Virus-free+transient+protein+production+in+Sf9+cells.">Virus-free transient protein production in Sf9 cells.</a> J. Biotechnol. 171, 61-70 (2014).</li><li>Loomis, K. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=InsectDirect+System:+rapid,+high-level+protein+expression+and+purification+from+insect+cells.">InsectDirect System: rapid, high-level protein expression and purification from insect cells.</a> J. Struct. Funct. Genomics. 6 (2), 189-194 (2005).</li><li>Wurch, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+modified+overlap+extension+PCR+method+to+create+chimeric+genes+in+the+absence+of+restriction+enzymes.">A modified overlap extension PCR method to create chimeric genes in the absence of restriction enzymes.</a> Biotechnol. Tech. 12 (9), 653-657 (1998).</li><li>Woodman, M. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Direct+PCR+of+intact+bacteria+(colony+PCR).">Direct PCR of intact bacteria (colony PCR).</a> Curr. Protoc. Microbiol. 9 (3), 1-6 (2008).</li><li>Mathew, L. G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Identification+and+characterization+of+functional+aquaporin+water+channel+protein+from+alimentary+tract+of+whitefly,+Bemisia+tabaci.">Identification and characterization of functional aquaporin water channel protein from alimentary tract of whitefly, Bemisia tabaci.</a> Insect Biochem. Mol. Biol. 41 (3), 178-190 (2011).</li><li>Van Ekert, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Molecular+and+functional+characterization+of+Bemisia+tabaci+aquaporins+reveals+the+water+channel+diversity+of+hemipteran+insects.">Molecular and functional characterization of Bemisia tabaci aquaporins reveals the water channel diversity of hemipteran insects.</a> Insect Biochem. Mol. Biol. 77, 39-51 (2016).</li><li>Hull, J. J., Brent, C. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Identification+and+characterization+of+a+sex+peptide+receptor-like+transcript+from+the+western+tarnished+plant+bug+Lygus+hesperus.">Identification and characterization of a sex peptide receptor-like transcript from the western tarnished plant bug Lygus hesperus.</a> Insect Mol. Biol. 23 (3), 301-319 (2014).</li><li>Maroniche, G. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Development+of+a+novel+set+of+Gateway-compatible+vectors+for+live+imaging+in+insect+cells.">Development of a novel set of Gateway-compatible vectors for live imaging in insect cells.</a> Insect Mol. Biol. 20 (5), 675-685 (2011).</li><li>Hull, J. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Identification+of+the+western+tarnished+plant+but+(Lygus+hesperus)+olfactory+co-receptor+ORCO:+Expression+profile+and+confirmation+of+atypical+membrane+topology.">Identification of the western tarnished plant but (Lygus hesperus) olfactory co-receptor ORCO: Expression profile and confirmation of atypical membrane topology.</a> Arch. Insect Biochem. 81 (4), 179-198 (2012).</li><li>Lee, J. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Re-evaluation+of+the+PBAN+receptor+molecule:+Characterization+of+PBANR+variants+expressed+in+the+pheromone+glands+of+moths.">Re-evaluation of the PBAN receptor molecule: Characterization of PBANR variants expressed in the pheromone glands of moths.</a> Front. Endocrinol. 3 (6), 1-12 (2012).</li><li>Fabrick, J. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Molecular+and+functional+characterization+of+multiple+aquaporin+water+channel+proteins+from+the+western+tarnished+plant+bug,+Lygus+hesperus.">Molecular and functional characterization of multiple aquaporin water channel proteins from the western tarnished plant bug, Lygus hesperus.</a> Insect Biochem. Mol. Biol. 45, 125-140 (2014).</li><li>Lu, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+baculovirus+(Bombyx+mori+nuclear+polyhedrosis+virus)+repeat+element+functions+as+a+powerful+constitutive+enhancer+in+transfected+insect+cells.">A baculovirus (Bombyx mori nuclear polyhedrosis virus) repeat element functions as a powerful constitutive enhancer in transfected insect cells.</a> J. Biol. Chem. 272, 30724-30728 (1997).</li><li>Ren, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Comparative+analysis+of+the+activity+of+two+promoters+in+insect+cells.">Comparative analysis of the activity of two promoters in insect cells.</a> African J. Biotechnol. 10, 8930-8941 (2011).</li><li>Snapp, E. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fluorescent+proteins:+a+cell+biologist's+user+guide.">Fluorescent proteins: a cell biologist's user guide.</a> Trends Cell Biol. 19, 649-655 (2009).</li><li>Kohnhorst, C. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Subcellular+functions+of+proteins+under+fluorescence+single-cell+microscopy.">Subcellular functions of proteins under fluorescence single-cell microscopy.</a> Biochim. Biophys. Acta. 1864, 77-84 (2016).</li><li>Zinchuk, V., Grossenbacher-Zinchuk, O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Recent+advances+in+quantitative+colocalization+analysis:+focus+on+neuroscience.">Recent advances in quantitative colocalization analysis: focus on neuroscience.</a> Prog. Histochem. Cytochem. 44, 125-172 (2009).</li><li>Shaner, N. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+guide+to+choosing+fluorescent+proteins.">A guide to choosing fluorescent proteins.</a> Nat. Methods. 2 (12), 905-909 (2005).</li><li>Chalfie, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Green+fluorescent+protein+as+a+marker+for+gene+expression.">Green fluorescent protein as a marker for gene expression.</a> Science. 263 (5148), 802-805 (1994).</li><li>Shaner, N. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Improved+monomeric+red,+orange+and+yellow+fluorescent+proteins+derived+from+Discosoma+sp.+red+fluorescent+protein.">Improved monomeric red, orange and yellow fluorescent proteins derived from Discosoma sp. red fluorescent protein.</a> Nat. Biotech. 22 (12), 1567-1572 (2004).</li></ol>

מערכות ביטוי חלבון Heterologous הם כלים חשובים לייצור חלבונים רקומביננטיים בשימוש ביישומים במורד הזרם רבים 4. בחירה ממערכות ביטוי המגוונות הזמינות תלוי בסופו של דבר המטרה של החלבון של עניין. כמה מערכות תא ביטוי חרק זמינות המציעים חלופות גמישות למערכות ביטוי ?...

ייצור חלבונים רקומביננטיים באמצעות מערכות ביטוי תא חרק מציע יתרונות רבים ללימוד חלבונים איקריוטיים. כלומר, תאי חרקים בעלי שלאחר translational שינויים דומים, עיבוד, ומנגנוני מיון כמו הנוכחים בתאי יונקים, המהווה יתרון לייצור חלבוני 1 מקופל כראוי, 2, 3. גם מערכות תא חרקים בדרך כלל דורשים פחות משאבים ופחות זמן ומאמץ לצורך תחזוקה מ שורות תאים יונקים 4, 5. מערכת ביטוי baculovirus היא מערכת מבוססת תא חרק אחד כזה, כי הוא עכשיו בשימוש נרחב בתחומים רבים, כוללים הייצור של חלבונים רקומביננטיים עבור ואפיון חלבונים ותרופות, מצגת immunogenic של פפטידים זרים וחלבונים נגיפיים לייצור חיסון, הסינתזה של רב מתחמי -protein, ייצור של חלבונים glycosylated, וכו. 1, 2, 4, 6. יש, עם זאת, במצבים בהם ביטוי baculovirus לא יכול להיות ישים 3, 7, ושימוש במערכות ביטוי חרקים nonlytic וחולפת עשוי להיות מתאים יותר. באופן ספציפי, ביטוי תא חרק חולף מציע את האפשרות לסינתזה המהירה של חלבון רקומביננטי, דורש פחות פיתוח ותחזוקה, אינו כרוכות ימסו תא ויראלי שהוטל, ומספק אמצעי ללמוד סחר הסלולר טוב יותר במהלך חלבון סינתזה 7, 8, 9, 10. פרוטוקול זה מתאר את הדור המהיר של וקטורי ביטוי באמצעות הארכת חפיפת שני שלבי PCR (OE-PCR) coli Escherichia. פלסמידים משמשים-transfect הכפול זמינים מסחרי תאי חרק מתורבתים כדי לייצר חלבוני נציג. הפרוטוקול מתאר את ייצור ושימוש שני חלבונים שונים fluorescently שכותרתו התת-תאי סמן ומדגים colocalization עם שני חלבונים aquaporin מן tabaci Bemisia חרקים. הפרוטוקול הבא מספק את המתודולוגיה הבסיסית עבור OE-PCR, תחזוקת תא חרקי transfection, מיקרוסקופ פלואורסצנטי עבור הלוקליזציה של חלבוני יעד.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" width="1353">
	<colgroup>
		<col />
		<col />
		<col />
		<col />
	</colgroup>
	<tbody>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:425px;">KOD DNA Polymerase</td>
			<td style="width:164px;">EMD Millipore</td>
			<td style="width:119px;">71085-3</td>
			<td style="width:645px;">High-fidelity DNA polymerase used for PCR amplification of overlap extension PCR products</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:425px;">ExTaq DNA Polymerase</td>
			<td style="width:164px;">TaKaRa-Clontech</td>
			<td style="width:119px;">RR001B</td>
			<td>DNA polymerase used for A-tailing of PCR products</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:425px;">EconoTaq PLUS GREEN 2x DNA Polymerase Master Mix</td>
			<td style="width:164px;">Lucigen</td>
			<td style="width:119px;">30033-1</td>
			<td>DNA polymerase used for bacterial colony PCR</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:425px;">Biometra TProfessional Gradient Thermocycler</td>
			<td style="width:164px;">Biometra/LABRepCo</td>
			<td style="width:119px;">070-851</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:425px;">Agarose LE</td>
			<td style="width:164px;">Benchmark Scientific</td>
			<td style="width:119px;">A1705</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:425px;">SYBR Safe DNA Gel Stain</td>
			<td>ThermoFisher</td>
			<td style="width:119px;">S33102</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:425px;">Montage DNA Gel Extraction Kit</td>
			<td style="width:164px;">EMD Millipore</td>
			<td style="width:119px;">LSKGEL050</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="63">
			<td height="63" style="height:63px;width:425px;">pIB/V5-His TOPO TA Expression Kit</td>
			<td>ThermoFisher</td>
			<td style="width:119px;">K89020</td>
			<td style="width:645px;">Contains components needed to clone overlap extension PCR products, including linearized and topoisomerase I-activated pIB/V5-His-TOPO vector, One Shot TOP10 chemically competent E. coli, and salt solution.</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:425px;">QIAprep Spin MiniPrep Kit</td>
			<td>Qiagen</td>
			<td style="width:119px;">27104</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:425px;">QIAcube Robotic Workstation</td>
			<td>Qiagen</td>
			<td style="width:119px;">9001292</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Purifier Vertical Clean Bench</td>
			<td>Labconco</td>
			<td>3970401</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Tni cultured insect cell Line</td>
			<td>Allele Biotech</td>
			<td>ABP-CEL-10005</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Sf9 cultured insect cell Line</td>
			<td>Allele Biotech</td>
			<td>ABP-CEL-10002</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Serum-Free Insect Culture Medium</td>
			<td>Allele Biotech</td>
			<td>ABP-MED-10002</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">TNM-FH Insect Culture Medium</td>
			<td>Allele Biotech</td>
			<td>ABP-MED-10001</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">IPL-41 Insect Medium</td>
			<td>ThermoFisher</td>
			<td>11405081</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Cellfectin II Transfection Reagent</td>
			<td>ThermoFisher</td>
			<td>10362100</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">16 cm Disposable Cell Scrapers</td>
			<td>Sarstedt</td>
			<td>83.1832</td>
			<td>Cell scrapers with two-position blade</td>
		</tr>
		<tr height="25">
			<td height="25" style="height:25px;">25 cm2 (T25) Tissue Culture Flasks with Vent Filter Caps</td>
			<td>Life Science Products</td>
			<td>CT-229331</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Transfer Pipets</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>1371120</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Sterile, 50 mL Bio-Reaction Tubes</td>
			<td>Life Science Products</td>
			<td>CT-229475</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">PipetteBoy</td>
			<td>VWR</td>
			<td>14222-180</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">5 mL Serological Pipettes</td>
			<td>Sarstedt</td>
			<td>86.1253.001</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">0.5 mL Flat-Cap PCR Tubes</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>14230200</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Polypropylene Biohazard Autoclave Bags</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>01828C</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">35 mm #1.5 Glass Bottom Dishes</td>
			<td>Matsunami Glass</td>
			<td>D35-14-1.5-U</td>
			<td>35 mm dish diameter, 14 mm glass diameter, 1.5 mm glass thickness, uncoated</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Incubator, Model 1510E</td>
			<td>VWR</td>
			<td>35823-961</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Countess II FL Cell Counter</td>
			<td>ThermoFisher</td>
			<td>AMQAF1000</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Countess Cell Counting Chamber Slides with 0.4% Trypan Blue Reagent</td>
			<td>ThermoFisher</td>
			<td>C10228</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Fluoview FV10i-LIV Laser Scanning Confocal Microscope</td>
			<td>Olympus</td>
			<td>FV10i-LIV</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">HsPLA2/pCS6 plasmid DNA</td>
			<td>transOMIC Technologies</td>
			<td>TCH1303</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">pmCherry Vector</td>
			<td>Clontech</td>
			<td>632522</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:425px;">NucBlue Live ReadyProbes Reagent (Hoechst 33342)</td>
			<td style="width:164px;">ThermoFisher</td>
			<td style="width:119px;">R37605</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

transient expression and cellular localization of recombinant proteins in cultured insect cells

מערכות חלבון ביטוי Heterologous משמשות לייצור חלבונים רקומביננטיים, הפרשנות של סחר / לוקליזציה הסלולר, ואת הנחישות של הפונקציה ביוכימית של חלבונים ברמה תת-אורגניזמים. למרות שמערכות ביטוי baculovirus משמשות יותר ויותר לייצור חלבון ביוטכנולוגית רבה, תרופות, ויישומים תעשייתיים, מערכות nonlytic שאינו כרוכות זיהום ויראלי יש יתרונות ברורים, אבל הם לעתים קרובות התעלמו ו מנוצלים. כאן, אנו מתארים שיטה ליצירת וקטורי ביטוי nonlytic וביטוי חלבונים רקומביננטיים חולף. פרוטוקול זה מאפשר לוקליזציה הסלולר היעילה של חלבונים רקומביננטיים וניתן להשתמש בו כדי להבחין סחר חלבון במהירות בתוך התא. אנחנו מראים את הביטוי של ארבעה חלבונים רקומביננטיים בקו תא חרק זמין מסחרי, לרבות שני חלבוני aquaporin מן tabaci Bemisia החרקים, כמו גםכמו חלבוני סמן התת-תאי ספציפיים עבור הממברנה תא עבור lysosomes התאי. כל החלבונים רקומביננטי הופקו כמו מפלצות עם סמנים חלבון פלואורסצנטי ב Termini carboxyl שלהם, המאפשר זיהוי ישיר של חלבונים רקומביננטיים. Transfection הכפול של תאים עם פלסמידים מחסה בונים עבור הגנים של ריבית סמן התת-תאי ידוע מאפשר הדמית תא חייה ואימות משופרת של לוקליזציה חלבון הסלולר.

OE-PCR OE-PCR מאפשר לסינתזה של מוצרי ה- DNA כימרי כי, להכניס פעם לתוך וקטור ביטוי, לאפשר ייצור של חלבונים רקומביננטיים כימרי המתאים לכל גן המבחן של עניין וחלבון בסמן פלורסנטי. איור 1 מייצג תוכני?...

Watch this Scientific Journal Video about Transient Expression and Cellular Localization of Recombinant Proteins in Cultured Insect Cells at JoVE.com

Transient Expression and Cellular Localization of Recombinant Proteins in Cultured Insect Cells

מערכות Nonlytic ביטוי תא חרקים הם מנוצלים לייצור, סחר / לוקליזציה הסלולר, וניתוח פונקציונלי חלבון רקומביננטי. כאן, אנו מתארים שיטות ליצירת וקטורי ביטוי והבעת חלבון חולפת עוקבת בשורות תא פרפראים זמינות מסחרי. שיתוף הלוקליזציה של aquaporins tabaci Bemisia עם חלבונים בסמן פלורסנטי התת-תאי מוצגת גם.

ביטוי חולף ואת סלולר לוקליזציה של חלבונים רקומביננטי תאים בתרבית חרקים

Heterologous protein expression systems are used for the production of recombinant proteins, the interpretation of cellular trafficking/localization, and ...

Research

JoVE Journal

Biology

A Method For Production of Recombinant mCD1d Protein in Insect Cells.

שיטה לייצור של חלבון רקומביננטי mCD1d בתוך תאים חרקים.

CD1 proteins constitute a third class of antigen-presenting molecules. They are cell surface glycoproteins, expressed as approximately 50-kDa glycosylated ...

Staining of Proteins in Gels with Coomassie G-250 without Organic Solvent and Acetic Acid

הכתמה של חלבונים עם ג&#39;ל Coomassie G-250 ללא חומצה אצטית ממס אורגני

In classical protein staining protocols using Coomassie Brilliant Blue (CBB), solutions with high contents of toxic and flammable organic solvents ...

Expression of Recombinant Proteins in the Methylotrophic Yeast Pichia pastoris

Expression of Recombinant Proteins in the Methylotrophic Yeast Pichia pastoris

ביטוי של חלבונים רקומביננטי השמרים Methylotrophic Pichia pastoris</em

Protein expression in the microbial eukaryotic host Pichia pastoris offers the possibility to generate high amounts of recombinant protein in a fast and ...

Efficient Agroinfiltration of Plants for High-level Transient Expression of Recombinant Proteins

Agroinfiltration היעילה של צמחים לביטוי חולף ברמה גבוהה של חלבונים רקומביננטי

Mammalian cell culture is the major platform for commercial production of human vaccines and therapeutic proteins. However, it cannot meet the increasing ...

Efficient Production and Purification of Recombinant Murine Kindlin-3 from Insect Cells for Biophysical Studies

הפקה וטיהור יעילה של רקומביננטי Murine Kindlin-3 מתאי חרקים לBiophysical לימודים

Kindlins are essential coactivators, with talin, of the cell surface receptors&#160;integrins and also participate in integrin outside-in signalling, and ...

High Throughput Quantitative Expression Screening and Purification Applied to Recombinant Disulfide-rich Venom Proteins Produced in E. coli

High Throughput Quantitative Expression Screening and Purification Applied to Recombinant Disulfide-rich Venom Proteins Produced in E. coli

הקרנת תפוקה גבוהה ביטוי כמותי וטיהור יישומים לחלבוני ארס רקומביננטי דיסולפיד עשירים הופק ב<em&gt; א coli</em

Escherichia coli (E. coli) is the most widely used expression system for the production of recombinant proteins for structural and functional studies. ...

Transient Expression of Proteins by Hydrodynamic Gene Delivery in Mice

ביטוי חולף של חלבונים על ידי הידרודינמית ג&#39;ין משלוח בעכברים

Efficient expression of transgenes in vivo is of critical importance in studying gene function and developing treatments for diseases. Over the past ...

siRNA Screening to Identify Ubiquitin and Ubiquitin-like System Regulators of Biological Pathways in Cultured Mammalian Cells

הקרנת siRNA לזיהוי יוביקוויטין ורגולטורים מערכת דמויות יוביקוויטין של מסלולים ביולוגיים בתאי יונקים בתרבית

Post-translational modification of proteins with ubiquitin and ubiquitin-like molecules (UBLs) is emerging as a dynamic cellular signaling network that ...

A Comparative Analysis of Recombinant Protein Expression in Different Biofactories: Bacteria, Insect Cells and Plant Systems

ניתוח השוואתי של ביטוי חלבון רקומביננטי בBiofactories שונה: חיידקים, תאי חרקים וצמחי מערכות

Plant-based systems are considered a valuable platform for the production of recombinant proteins as a result of their well-documented potential for the ...