Name: identification and characterization of metastatic factors by gene transfer into the novel rip-tag; rip-tva murine model
Uploaded: 2017-10-16T12:30:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Identification and Characterization of Metastatic Factors by Gene Transfer into the Novel RIP-Tag; RIP-tva Murine Model at JoVE.com

Мы благодарим Гарольд Varmus, Брайан C. Льюис, Дуглас Hanahan, Дэнни Huang, Шарон Панг, Меган Вонг и Манаси м. Godbole. Y.C.N.D. поддерживается DOD Грант W81XWH-16-1-0619 и Грант 1R01CA204916 низ.

этика заявление: эксперименты на животных были проведены в соответствии с руководящими принципами и правилами, установленными Институтом животных уход и использование Комитета Weill Cornell медицины.
 1. Выбор птичьего ретровиральных векторов (на основе RCASBP A или RCANBP(A)-based) <ul ...

<ol>
	<li>Vogelstein, B., Kinzler, K. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+multistep+nature+of+cancer.">The multistep nature of cancer.</a> Trends Genet. 9 (4), 138-141 (1993).</li><li>Walrath, J. C., Hawes, J. J., Van Dyke, T., Reilly, K. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Genetically+engineered+mouse+models+in+cancer+research.">Genetically engineered mouse models in cancer research.</a> Adv Cancer Res. 106, 113-164 (2010).</li><li>Khanna, C., Hunter, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Modeling+metastasis+in+vivo.">Modeling metastasis in vivo.</a> Carcinogenesis. 26 (3), 513-523 (2005).</li><li>Du, Y. C., Lewis, B. C., Hanahan, D., Varmus, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Assessing+tumor+progression+factors+by+somatic+gene+transfer+into+a+mouse+model:+Bcl-xL+promotes+islet+tumor+cell+invasion.">Assessing tumor progression factors by somatic gene transfer into a mouse model: Bcl-xL promotes islet tumor cell invasion.</a> PLoS biology. 5 (10), e276 (2007).</li><li>Hanahan, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Heritable+formation+of+pancreatic+beta-cell+tumours+in+transgenic+mice+expressing+recombinant+insulin/simian+virus+40+oncogenes.">Heritable formation of pancreatic beta-cell tumours in transgenic mice expressing recombinant insulin/simian virus 40 oncogenes.</a> Nature. 315 (6015), 115-122 (1985).</li><li>Fisher, G. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Development+of+a+flexible+and+specific+gene+delivery+system+for+production+of+murine+tumor+models.">Development of a flexible and specific gene delivery system for production of murine tumor models.</a> Oncogene. 18 (38), 5253-5260 (1999).</li><li>Orsulic, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+RCAS-TVA-based+approach+to+designer+mouse+models.">An RCAS-TVA-based approach to designer mouse models.</a> Mamm Genome. 13 (10), 543-547 (2002).</li><li>Tuveson, D., Hanahan, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Translational+medicine:+Cancer+lessons+from+mice+to+humans.">Translational medicine: Cancer lessons from mice to humans.</a> Nature. 471 (7338), 316-317 (2011).</li><li>Choi, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Bcl-xL+promotes+metastasis+independent+of+its+anti-apoptotic+activity.">Bcl-xL promotes metastasis independent of its anti-apoptotic activity.</a> Nat Commun. 7, 10384 (2016).</li><li>Naik, P., Karrim, J., Hanahan, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+rise+and+fall+of+apoptosis+during+multistage+tumorigenesis:+down-modulation+contributes+to+tumor+progression+from+angiogenic+progenitors.">The rise and fall of apoptosis during multistage tumorigenesis: down-modulation contributes to tumor progression from angiogenic progenitors.</a> Genes Dev. 10 (17), 2105-2116 (1996).</li><li>Hughes, S. H., Greenhouse, J. J., Petropoulos, C. J., Sutrave, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Adaptor+plasmids+simplify+the+insertion+of+foreign+DNA+into+helper-independent+retroviral+vectors.">Adaptor plasmids simplify the insertion of foreign DNA into helper-independent retroviral vectors.</a> J Virol. 61 (10), 3004-3012 (1987).</li><li>Petropoulos, C. J., Payne, W., Salter, D. W., Hughes, S. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Appropriate+in+vivo+expression+of+a+muscle-specific+promoter+by+using+avian+retroviral+vectors+for+gene+transfer+[corrected].">Appropriate in vivo expression of a muscle-specific promoter by using avian retroviral vectors for gene transfer [corrected].</a> J Virol. 66 (6), 3391-3397 (1992).</li><li>Dunn, K. J., Williams, B. O., Li, Y., Pavan, W. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Neural+crest-directed+gene+transfer+demonstrates+Wnt1+role+in+melanocyte+expansion+and+differentiation+during+mouse+development.">Neural crest-directed gene transfer demonstrates Wnt1 role in melanocyte expansion and differentiation during mouse development.</a> Proc Natl Acad Sci USA. 97 (18), 10050-10055 (2000).</li><li>Loftus, S. K., Larson, D. M., Watkins-Chow, D., Church, D. M., Pavan, W. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Generation+of+RCAS+vectors+useful+for+functional+genomic+analyses.">Generation of RCAS vectors useful for functional genomic analyses.</a> DNA Res. 8 (5), 221-226 (2001).</li><li>Bromberg-White, J. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Delivery+of+short+hairpin+RNA+sequences+by+using+a+replication-competent+avian+retroviral+vector.">Delivery of short hairpin RNA sequences by using a replication-competent avian retroviral vector.</a> J Virol. 78 (9), 4914-4916 (2004).</li><li>Harpavat, S., Cepko, C. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=RCAS-RNAi:+a+loss-of-function+method+for+the+developing+chick+retina.">RCAS-RNAi: a loss-of-function method for the developing chick retina.</a> BMC Dev Biol. 6 (2), (2006).</li><li>Huse, J. T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+PTEN-regulating+microRNA+miR-26a+is+amplified+in+high-grade+glioma+and+facilitates+gliomagenesis+in+vivo.">The PTEN-regulating microRNA miR-26a is amplified in high-grade glioma and facilitates gliomagenesis in vivo.</a> Genes Dev. 23 (11), 1327-1337 (2009).</li><li>Ahronian, L. G., Lewis, B. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Generation+of+high-titer+RCAS+virus+from+DF1+chicken+fibroblasts.">Generation of high-titer RCAS virus from DF1 chicken fibroblasts.</a> Cold Spring Harb Protoc. 2014 (11), 1161-1166 (2014).</li><li>Green, M. R., Sambrook, J., Sambrook, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Molecular cloning: a laboratory manual. , (2012).</li><li>Du, Y. C., Lewis, B. C., Hanahan, D., Varmus, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Assessing+tumor+progression+factors+by+somatic+gene+transfer+into+a+mouse+model:+Bcl-xL+promotes+islet+tumor+cell+invasion.">Assessing tumor progression factors by somatic gene transfer into a mouse model: Bcl-xL promotes islet tumor cell invasion.</a> PLoS Biol. 5 (10), 2255-2269 (2007).</li><li>Du, Y. C., Chou, C. K., Klimstra, D. S., Varmus, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Receptor+for+hyaluronan-mediated+motility+isoform+B+promotes+liver+metastasis+in+a+mouse+model+of+multistep+tumorigenesis+and+a+tail+vein+assay+for+metastasis.">Receptor for hyaluronan-mediated motility isoform B promotes liver metastasis in a mouse model of multistep tumorigenesis and a tail vein assay for metastasis.</a> Proc Natl Acad Sci USA. 108 (40), 16753-16758 (2011).</li><li>Guernet, A., Grumolato, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=CRISPR/Cas9+editing+of+the+genome+for+cancer+modeling.">CRISPR/Cas9 editing of the genome for cancer modeling.</a> Methods. , (2017).</li></ol>

В этом исследовании мы описали модель мощный мыши, RIP-тегов; RIP-tva, для достижения соматическая генная доставки через птичьего ретровирусы для идентификации и определения характеристик метастатического факторов. Хотя RIP-тега; RIP-tva мышей развивать нейроэндокринных опухолях под?...

Большинство раковых заболеваний возникают от соматических перегласовок 1. Обычные генетически модифицированные мыши модели (ГЭММ) оказали значительное понимание вклада конкретных генетических изменений к tumorigenesis 2. Однако они имеют некоторые ограничения. Основным недостатком этих моделей является, что они не повторить спорадический характер образования опухоли в организме человека, в которых только некоторые клетки внутри ткани приобретают генетические изменения. Мутации в нокаут и трансгенных мышей также являются микрофлорой потенциально могут повлиять на развитие. Кроме того создание этих моделей мыши является дорогостоящим и трудоемким.
Метастазирование является важным вопросом в области рака. Моделирование метастазирование был трудным в ГЭММ. Спонтанное метастазов редок в мыши. Пенетрантностью является переменной и задержка в ГЭММ метастазированием 3. Экспериментальный метастазов модели используют прямой инъекции клеток в оборот мышей, поэтому первые шаги в метастатических Каскад удаляются.
Чтобы преодолеть некоторые из вышеуказанных ограничений в изучении метастатического факторов в модели мыши, мы разработали модель bitransgenic мыши, RIP-тегов; РИП tva4. Стратегия основана на комбинированное использование модель мыши прогрессии опухоли весьма синхронизированы, RIP-тег 5, и рецептора для подгруппы A птичьего лейкоза вирус, tva 6,7. Этот RIP-тег; RIP-tvaмодель мыши позволяет гены соматически вносимых в единый bitransgenic мыши штамм. С антигеном SV40 T, подавления опухоли подавляющие функции Rb и p53 мышей развивать нейроэндокринных опухолях поджелудочной железы в Аналогичным образом человека tumorigenesis, с этапов, включая гиперплазии, ангиогенез, аденома и инвазивной карциномы. Эта модель RIP-тег был весьма поучительна для понимания отличительными признаками рака, не ограничиваясь нейроэндокринных опухолях поджелудочной железы. Он также был использован в доклинических испытаний 8.
Мы представляем протокол для передачи соматическая генная через инъекции птичьего ретровирусы intracardiacally в RIP-тегов; RIP-tva мышей. Успешное инфекции с RCASBP-производные птичьего ретровирусы требует активно пролиферирующих клеток-мишеней. Поэтому мы выбрали RIP-тегов; RIP-tva мышей в 7 недель возраста, когда в около 50% панкреатических островков развивается гиперплазия. Для достижения эффективности 10-20% 4инфекции требуется левого желудочка внутрисердечной инъекции высокий титр вирусов. Этот способ доставки уменьшает значительное разбавление вирусных частиц в циркуляции вирусов до панкреатических островков.
Используя этот подход, мы ранее продемонстрировали, что Bcl-xL способствует метастазов рака, независимо от его анти apoptotic функция 4,9. Эта функция анти apoptotic независимые метастатическим не наблюдалось, когда Bcl-xL была выражена через трансген во всех клетках поджелудочной железы β всей онкогенной Онтогенез в RIP-тегов; RIP-Bcl-xL мыши модель 10. Таким образом наша модель мыши предлагает уникальную возможность для определения и описания функций генов когда выражена на более позднем этапе tumorigenesis. Потому что 2-4% островков развиться в опухоли в RIP-тегов; RIP-tva bitransgenic мышей без вирусной инфекции и не все предраковых поражений заражены RCASBP-производные птичьего ретровирусы, могут быть определены только те факторы, которые возлагают селективное преимущество над естественный ход развития опухолей. В частности метастатические факторов будет легче всего признана этим методом, потому что метастазы поджелудочной железы лимфатические узлы или другие органы обычно не происходит в RIP-тегов; RIP-tva мышей.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" width="747">
	<tbody>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:339px;">RCASBP-Y DV plasmid</td>
			<td style="width:123px;">Addgene</td>
			<td style="width:119px;">11478</td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">RCAS-RNAi plasmid</td>
			<td style="width:123px;">Addgene</td>
			<td style="width:119px;">15182</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">DMEM</td>
			<td style="width:123px;">Corning</td>
			<td>10-013-CV</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">fetal bovine serum</td>
			<td>Atlanta Biologicals</td>
			<td>25-005-CI</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">L-glutamine, 100x</td>
			<td style="width:123px;">Corning</td>
			<td>25-005-CI</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Penicillin-Streptomycin solution, 100x</td>
			<td style="width:123px;">Corning</td>
			<td>30-002-CI</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="24">
			<td height="24" style="height:24px;">PBS-/-, 1X</td>
			<td style="width:123px;">Corning</td>
			<td>21-040-CV</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Superfect</td>
			<td>Qiagen</td>
			<td>301305</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Polyallomer centrifuge tube</td>
			<td>Beckman Coulter</td>
			<td>326823</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:339px;">0.45 mm Nalgene 
			Syringe Filters with PES Membrane</td>
			<td style="width:123px;">Thermo Scientific</td>
			<td style="width:119px;">194-2545</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:339px;">Insulin Syringes&#160;</td>
			<td style="width:123px;">BD</td>
			<td>329461</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;">synaptophysin</td>
			<td style="width:123px;">Vector Laboratories</td>
			<td>VP-S284</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;">VECTASTAIN Elite ABC HRP Kit (Peroxidase, Rabbit IgG)&#160;</td>
			<td style="width:123px;">Vector Laboratories</td>
			<td>PK-6101</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">AmpliTaq DNA Polymerase with Buffer II</td>
			<td>Life Technologies</td>
			<td>N8080153</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">MyTaq DNA Polymerase</td>
			<td>Bioline</td>
			<td>BIO-21106</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

identification and characterization of metastatic factors by gene transfer into the novel rip-tag; rip-tva murine model

Метастатического рака составляет 90% случаев смерти среди больных с солидными опухолями. Существует настоятельная необходимость лучше понять водителей метастазов рака и для выявления роман терапевтических целей. Расследовать молекулярные события, которые управляют прогрессии от первичного рака метастазы, мы разработали модель bitransgenic мыши, RIP-тегов; РИП tva. В этой модели мыши крысы инсулина промоутер (RIP) диски выражение антигена SV40 T (тег) и рецепторов для подгруппы вирус птичьего лейкоза (НДС) в клетках поджелудочной железы β. Мышей развивать нейроэндокринных опухолях поджелудочной железы с 100% пенетрантностью через четко определенные этапы, которые похожи на человека tumorigenesis, с этапов, включая гиперплазии, ангиогенез, аденома и инвазивной карциномы. Потому что RIP-тега; RIP-tva мышей не развиваются метастатической болезни, генетические изменения, способствующие метастазы могут быть определены легко. Соматическая генная передача в tva выражая, размножающихся поджелудочной железы β предраковых поражений достигается через внутрисердечной инъекции птичьего ретровирусы, укрывательство желаемого генетические изменения. Титр &#62; 1 x 108 инфекционных единиц / мл считается подходящим для инфекции в естественных условиях . Кроме того птичьего ретровирусы могут заразить клеточных линий, полученных от опухоли в RIP-тегов; RIP-tva мышей с высокой эффективностью. Линии клетки также может использоваться для характеристики метастатического факторов. Здесь мы показано, как использовать эту модель мыши и клеточной линии для оценки функции генов кандидата в метастазов опухоли.

Уровень инфекции в vivo и in vitro RIP-тегов; RIP-tva опухолевых клеток на основе RCASBP вирусы являются соответственно ~ 20% и ~ 80% 20. В теге RIP ; RIP-tva модель мыши, примерно 4% от 400 панкреатических островков в каждой мыши естественно будет развиваться в опу?...

Watch this Scientific Journal Video about Identification and Characterization of Metastatic Factors by Gene Transfer into the Novel RIP-Tag; RIP-tva Murine Model at JoVE.com

Identification and Characterization of Metastatic Factors by Gene Transfer into the Novel RIP-Tag; RIP-tva Murine Model

Мы представляем протокол продемонстрировать Роман соматическая генная система передачи, используя RIP-тегов; RIP-tva мыши модель для изучения функции генов в метастазов. Птичий ретровирусы поставляются intracardiacally обеспечить перенос генов в предварительно злокачественных, неинвазивный поражения поджелудочной железы β-клеток у взрослых мышей.

Определение и характеристика метастатическим факторов путем переноса генов в романе RIP-тег; РИП tva мышиных модель

Metastatic cancer accounts for 90% of deaths in patients with solid tumors. There is an urgent need to better understand the drivers of cancer metastasis ...

The overall goal of this procedure is to identify and characterize metastatic factors by gene transfer into the Novel RIP-Tag;RIP-tva mouse model. This method can help answer key questions in the cancer metastasis field such as identifying the drivers and the Novel therapeutic targets. The main advantage of this mouse model of cancer is to identify metastatic factors by somatic gene transfer into pancreatic beta cell precursor legions.Begin by harvesting one 15 centimeter dish of virus producing DF1 cells per mouse to be infected. First, collect the medium from the confluent 15 centimeter dishes. Then remove cell debris by low speed centrifugation in a pre-chilled centrifuge for 10 minutes at 1650 times G and four degrees celsius.Next, transfer the viral supernatant to polyallomer ultracentrifuge tubes. Spin in an ultracentrifuge for 1.5 hours at 9540 times G and four degrees celsius. Remove as much supernatant from the ultracentrifuge tubes as possible.Then add PBS to the ultracentrifuge tube to make the final 100 microliter viral suspension per 15 centimeter dish. Cover the tubes with laboratory film and re-suspend the invisible viral pellet by vortexing for two minutes at medium speed. Then rock the ultracentrifuge tubes at four degrees celsius for one hour or overnight.After the incubation, transfer the viral suspension to a microcentrifuge tube and proceed to titer the virus. Begin the titering procedure by ensuring the DF1 cells seated into 12 well tissue culture plates have reached 30%confluency. One twelve well plate is needed for each viral titer determination.Begin a tenfold serial dilution of the viral supernatants by first mixing five microliters of viral supernatant with 495 microliters of growth medium in a microcentrifuge tube to make a ten to the second dilution. Vortex briefly for a few seconds. Then transfer 40 microliters of the ten to the second dilution to 360 microliters of growth medium in a microcentrifuge tube for the ten to the third dilution.Vortex briefly for a few seconds. Continue this process to dilute to ten to the fourth and ten to the fifth. Next aliquot 2.25 milliliters of growth medium into each of five six milliliter polystyrene tubes.And label them ten to the sixth, ten to the seventh, ten to the eighth, ten to the ninth, and ten to the tenth respectively. Mix 0.25 milliliters of the ten to the fifth dilution with 2.25 milliliters of growth medium in the six milliliter polystyrene tube for the ten to the sixth dilution. Vortex briefly for a few seconds.Repeat the procedure for ten to the seventh, ten to the eighth, ten to the ninth, and ten to the tenth dilutions. Next remove the original culture medium from the DF1 cells on the 12 well plates. And add one milliliter of diluted virus into each well in duplicate.Allow the cells to grow at 37 degrees celsius and 5 CO2 for at least seven days. Begin the infection procedure by first anesthetizing a seven week old RIP-Tag RIP-tva mouse. Apply eye lubricant to both eyes to prevent corneal drying.Shave the hair from the chest cavity of the RIP-Tag RIP-tva mouse, position the mouse on its back with the chest facing up on an absorbent lab bench paper on top of a snuggle safe warmer. Perform a toe pinch to check the animal for nonresponsiveness and to confirm full anesthesia effect. Extend the front limbs and secure them with tape.Mark the chest of the mouse for injection. Mark the location midway between the sternal notch and the top of the xiphoid process, and slightly left anatomically of the sternum. Then scrub the anterior chest wall with either a povidone iodine scrub or a chlorhexidine scrub, followed by a 70%isopropyl alcohol or a 70%ethanol soaked gauze sponge.Draw 50 microliters of air into a sterile 28.5 gauge insulin syringe to create space between the plunger and the meniscus of a 500 microliter syringe. Draw up 100 microliters of virus. The airspace without any liquid on the wall is crucial for seeing the cardiac pulse.Keep the needle upright, hold the skin of mouse taut with one hand and insert the needle into the marked location. When a bright red pulse of blood appears in the syringe, stop advancing the needle and fix the depth of the needle in the mouse with one hand. Use the other hand to carefully and slowly push the plunger to deliver the viral suspension over about a 60 second period.Deliver 10-20 microliters whenever a bright red pulse of blood appears in the syringe. The continuous entrance of red oxygenated blood into the transparent needle hub indicates the proper positioning of the needle into the left ventricle. After the last push of the plunder to deliver viral suspension and before seeing the next red pulse of blood, quickly retract the needle out of the chest cavity.Apply gentle pressure over the injection site for at least one minute to reduce the bleeding. Then carefully move the mouse onto a heating pad or under a heat lamp until it is fully conscious. RIP-Tag RIP-tva mice were infected with the indicated RCASBP-Bcl-xL retro virus at seven weeks of age and euthanized at 16 weeks of age.This photograph shows representative synaptophysin staining of metastatic pancreatic neuroendocrine tumors in pancreatic lymph nodes. Here the RIP-Tag RIP-tva mice were infected with the indicated RCASBP-RHAM B.This photograph shows the representative synaptophysin staining of metastatic pancreatic neuroendocrine tumors in pancreatic lymph nodes. Here the synaptophysin staining is seen in the liver after injection of the RCASBP-RHAMM B virus.It is important to remember the title of greater than ten to the eight infectious units per milliliter is required for in vivo infection of proliferating TVA cells in RIP-Tag RIP-tva mouse and RCASBP retro viral rector can deliver CDNA up to 2.5 kilobases. After the development of this mouse model, it paved the way to a paradigm shifting finding that BCL-xL actually promotes cancer metastasis independent of it's antiapoptotic function.

Research

JoVE Journal

Cancer Research

Identification and Characterization of Metastatic Factors by Gene Transfer into the Novel RIP-Tag; RIP-tva Murine Model

Advanced Animal Model of Colorectal Metastasis in Liver: Imaging Techniques and Properties of Metastatic Clones

Расширенный животной модели колоректального метастазами в печени: Визуализация методы и свойства метастатических клонов

Patients with a limited number of hepatic metastases and slow rates of progression can be successfully treated with local treatment approaches1,2. ...

A Syngeneic Mouse Model of Metastatic Renal Cell Carcinoma for Quantitative and Longitudinal Assessment of Preclinical Therapies

Ячейка Карцинома Сингенной Мышь Модели метастатического Почечной для количественных и Продольных оценок доклинических Терапии

Renal cell carcinoma (RCC) affects &#62; 60,000 people in the United States annually, and ~ 30% of RCC patients have multiple metastases at the time of ...

A Mouse Model of Fatigue Induced by Peripheral Irradiation

Мышь Модель усталости, индуцированный Peripheral Облучение

Cancer-related fatigue (CRF) is a distressing and costly condition that often affects patients receiving cancer treatments, including radiation therapy. ...

Virus Delivery of CRISPR Guides to the Murine Prostate for Gene Alteration

Вирус доставки ТРИФОСФАТЫ руководств для мышиных простаты для изменения гена

With an increasing incidence of prostate cancer, identification of new tumor drivers or modulators is crucial. Genetically engineered mouse models (GEMM) ...

Enrichment and Characterization of the Tumor Immune and Non-immune Microenvironments in Established Subcutaneous Murine Tumors

Обогащение и характеристика опухоли иммунной и неиммунизированных микросреды в установленных подкожной мышиных опухоли

The tumor immune microenvironment (TIME) has recently been recognized as a critical mediator of treatment response in solid tumors, especially for ...

Three-Dimensional Bone Extracellular Matrix Model for Osteosarcoma

Внеклеточная матрица модель трехмерных костей для остеосаркомы

Osteosarcoma (OS) is the most common and a highly aggressive primary bone tumor. It is characterized with anatomic and histologic variations along with ...

Murine Model of Metastatic Liver Tumors in the Setting of Ischemia Reperfusion Injury

Murine Модель метастатических опухолей печени в настройке Ишемия Реперфузия Травмы

Liver ischemia and reperfusion (I/R) injury, a common clinical challenge, remains an inevitable pathophysiological process that has been shown to induce ...

Analyzing Tumor Gene Expression Factors with the CorExplorer Web Portal

Анализ факторов экспрессии генов опухоли с веб-порталом CorExplorer

Differential gene expression analysis is an important technique for understanding disease states. The machine learning algorithm CorEx has shown utility ...

Quantifying the Brain Metastatic Tumor Micro-Environment using an Organ-On-A Chip 3D Model, Machine Learning, and Confocal Tomography

Количественная оценка микро-среды метастатической опухоли мозга с помощью 3D-модели Organ-On-A Chip, машинного обучения и конфокальцной томографии

Brain metastases are the most lethal cancer lesions; 10-30% of all cancers metastasize to the brain, with a median survival of only ~5-20 months, ...

Monitoring Breast Cancer Growth and Metastatic Colony Formation in Mice using Bioluminescence

Мониторинг роста рака молочной железы и метастатического колониеобразования у мышей с использованием биолюминесценции

Breast cancer is a frequent heterogeneous malignancy and the second leading cause of mortality in women, mainly due to distant organ metastasis. Several ...