Name: high-throughput analysis of locomotor behavior in the drosophila island assay
Uploaded: 2017-11-05T08:00:00
Duration: 10 min 30 s
Description: Watch this Scientific Journal Video about High-throughput Analysis of Locomotor Behavior in the Drosophila Island Assay at JoVE.com

אנו להכיר מרכז המשאבים דרוזופילה וינה ומרכז בלומינגטון דרוזופילה מניות (NIH P40OD018537) למתן זנים דרוזופילה . אנחנו אסירי תודה למעבדה Klämbt פיבי וזמינותו האי, מרטין Eidhof לבניית הגדרת assay האי מחקר זה היה חלק בתמיכת את E-נדיר-3 משותפת חוצה גבולות להתקשר הענק "הכנת טיפולים ataxias הקרים autosomal" הכן (בתחרות 9003037604), על ידי מענק העליון (912-12-109) מארגון הולנד על מחקר מדעי (בתחרות), ועל -ידי שתי מלגות לתואר שלישי מרכז רפואי של DCN/Radboud האוניברסיטה. התורמים שחיים היה אין תפקיד תכנון המחקר, איסוף נתונים, ניתוח, ההחלטה לפרסם או אופן ההכנה של כתב היד.

<ol>
	<li>Smeets, C. J., Verbeek, D. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cerebellar+ataxia+and+functional+genomics:+Identifying+the+routes+to+cerebellar+neurodegeneration.">Cerebellar ataxia and functional genomics: Identifying the routes to cerebellar neurodegeneration.</a> Biochim Biophys Acta. 1842, 2030-2038 (2014).</li><li>Liu, Y. T., Lee, Y. C., Soong, B. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=What+we+have+learned+from+the+next-generation+sequencing:+Contributions+to+the+genetic+diagnoses+and+understanding+of+pathomechanisms+of+neurodegenerative+diseases.">What we have learned from the next-generation sequencing: Contributions to the genetic diagnoses and understanding of pathomechanisms of neurodegenerative diseases.</a> J Neurogenet. 29, 103-112 (2015).</li><li>He, J., Mangelsdorf, M., Fan, D., Bartlett, P., Brown, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Amyotrophic+Lateral+Sclerosis+Genetic+Studies:+From+Genome-wide+Association+Mapping+to+Genome+Sequencing.">Amyotrophic Lateral Sclerosis Genetic Studies: From Genome-wide Association Mapping to Genome Sequencing.</a> Neuroscientist. 21, 599-615 (2015).</li><li>Lill, C. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Genetics+of+Parkinson's+disease.">Genetics of Parkinson's disease.</a> Mol Cell Probes. 30, 386-396 (2016).</li><li>Bjedov, I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mechanisms+of+life+span+extension+by+rapamycin+in+the+fruit+fly+Drosophila+melanogaster.">Mechanisms of life span extension by rapamycin in the fruit fly Drosophila melanogaster.</a> Cell Metab. 11, 35-46 (2010).</li><li>Hada, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=D-chiro-inositol+and+pinitol+extend+the+life+span+of+Drosophila+melanogaster.">D-chiro-inositol and pinitol extend the life span of Drosophila melanogaster.</a> J Gerontol A Biol Sci Med Sci. 68, 226-234 (2013).</li><li>Schmidt, I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Kinesin+heavy+chain+function+in+Drosophila+glial+cells+controls+neuronal+activity.">Kinesin heavy chain function in Drosophila glial cells controls neuronal activity.</a> J Neurosci. 32, 7466-7476 (2012).</li><li>Kochinke, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Systematic+Phenomics+Analysis+Deconvolutes+Genes+Mutated+in+Intellectual+Disability+into+Biologically+Coherent+Modules.">Systematic Phenomics Analysis Deconvolutes Genes Mutated in Intellectual Disability into Biologically Coherent Modules.</a> Am J Hum Genet. 98, 149-164 (2016).</li><li>Volkenhoff, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Glial+Glycolysis+Is+Essential+for+Neuronal+Survival+in+Drosophila.">Glial Glycolysis Is Essential for Neuronal Survival in Drosophila.</a> Cell Metab. 22, 437-447 (2015).</li><li>Schindelin, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fiji:+an+open-source+platform+for+biological-image+analysis.">Fiji: an open-source platform for biological-image analysis.</a> Nat Methods. 9, 676-682 (2012).</li><li>R Development Core Team. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> R: A language and environment for statistical computing. , (2008).</li><li>Greenspan, R. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Fly pushing: the theory and practice of Drosophila genetics. , (2004).</li><li>Rothblum-Oviatt, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ataxia+telangiectasia:+a+review.">Ataxia telangiectasia: a review.</a> Orphanet J Rare Dis. 11, 159 (2016).</li><li>Petersen, A. J., Rimkus, S. A., Wassarman, D. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=ATM+kinase+inhibition+in+glial+cells+activates+the+innate+immune+response+and+causes+neurodegeneration+in+Drosophila.">ATM kinase inhibition in glial cells activates the innate immune response and causes neurodegeneration in Drosophila.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 109, E656-E664 (2012).</li><li>Gargano, J. W., Martin, I., Bhandari, P., Grotewiel, M. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Rapid+iterative+negative+geotaxis+(RING):+a+new+method+for+assessing+age-related+locomotor+decline+in+Drosophila.">Rapid iterative negative geotaxis (RING): a new method for assessing age-related locomotor decline in Drosophila.</a> Exp Gerontol. 40, 386-395 (2005).</li><li>. ImageJ User Guide - IJ 1.46 Available from: <a target="_blank" href="https://imagej.nih.gov/ij/docs/guide/146-30.html">https://imagej.nih.gov/ij/docs/guide/146-30.html</a> (2012)</li></ol>

המחברים יש שאין ניגודי אינטרסים לחשוף.

פרוטוקול זה מתאר את המאקרו"דרוזופילה האי Assay" הבודק באופן כמותי התנהגות מוטורית דרוזופילה במהלך וזמינותו האי. המאקרו במדויק ספירת הזבובים על פלטפורמת לאורך זמן, ביצוע וזמינותו האי רגיש מאוד ומתאים הערכה כמותית תפוקה גבוהה של פגמים גינקולוגיות. המתודולוגיה מאפשר השוואת תנאי כלשהו, עם זבובים גדל תחת מצבים גנטיים או סביבתיים שונים, כולל חשיפה לסמים. המחוון הזה ולכן שימושי במיוחד ככלי גילוי בעת ביצוע מסכי גנטית או תרופות גדולים, כשלמדתי דרוזופילה מודלים של הפרעות תנועה, מחלות נוירולוגיות אחרות, או כאשר בדיקת גפיים או טיסה התנהגות.
פרוטוקול assay האי שהוצגו בכתב יד זה מספק יתרונות על פני שיטות קיימות/חלופית. לדוגמה, גפיים מעקב וידאו הוא ועתירת פחות מתאים לבדיקה מדגמים גדולים הרבה יותר. וזמינותו האי הוא כלי סינון תפוקה גבוהה, במובן זה, דומה לדקל ה assay מהירה geotaxis שלילי אינטראקטיבי (טבעת)16. ההבדל בין השניים הוא מבחני האי מאפשר איתור של מגוון רחב יותר של בעיות גינקולוגיות; חוסר היכולת של זבובים לעזוב את הפלטפורמה יכולה להיגרם על ידי ליקויים-טיסה, קפיצות, או הליכה להתנהגות הנגרמת על ידי אגף (שריר/עצביים) ו/או הרגל (שריר/עצביים) פגמים. מצד שני, וזמינותו טבעת מעריך פגמים בהתנהגות טיפוס/הליכה הנגרמת על ידי פגמים הרגל (שריר/עצביים). למקרה המשתמשים מעוניינות המפרט התנהגותית מרובים, ניתן לשלב וזמינותו האי בקלות גם עם מבחני אחרים, כגון הטבעת וזמינותו. בנוסף, לייזרים הדרושים עבור optogenetics יכול בקלות להיות מותקן בתיבת האי assay, הסידור הזה כל כך פשוט כי ניתן בקלות להזיז לחדר שבו לטמפרטורה ואור יכול להיות נשלט.
כדי להבטיח את ההצלחה ואת הפארמצבטית של האי וזמינותו המתוארים כאן, צריכה להיות מלווה מספר המלצות. Aliquot והעברת שבקבוקי הזבובים במבחן ניסויי לפחות יום אחד לפני הניסוי כדי למנוע את השפעת ההרדמה CO2 או קור. לא overcrowd את הבקבוקונים ניסיוני (השתמש זבובים 10-15 לכל מבחנה; מומלץ תמיד יש להציב מספר זהה של זבובים לכל מבחנה). שמור את הזבובים על מזון טרי בכל עת. אם לא מוכר כבר עם ביצוע וזמינותו, תרגול זריקת זבובים על הפלטפורמה כדי למקסם את התשואה. גם להתאמן במהירות בכדי לבטל את היד מיד לאחר מכן, כפי זה מפריע ניתוח הנתונים (ניתוח תמונות וטיסה ספירת התחלה רק לאחר היד היא מחוץ לתמונה). לשמור על התנאים הסביבתיים וניסויים זהים בניסויים צריך להשוות (למשל, פקדים נגד מוטציות או של גנוטיפ נבדק בגילאים שונים). תמיד לבצע את הניסויים באותו זמן של היום ולתחזק את הבקבוקונים תחת טמפרטורה מבוקרת, בתנאי לחות. עבור עוצמה סטטיסטית, מבחן משכפל טכנית לפחות שלושה לכל שכפול ביולוגי.
כדי להבטיח את הביצועים מוצלחת של המאקרו המתוארות כאן, מצלמת אינטרנט הגדרות התמונה שתישמר להשגת חדות מירבית: טס להופיע כאובייקטים שחור על משטח לבן. כאשר המספר של זבובים לא נספרת כראוי על-ידי המאקרו, לכוונן את הגדרות החדות, לבדוק אם רועי נבחר כראוי, להבטיח הגודל של הזבובים על הפלטפורמה מעל המינימום שצוין לטוס גודל הגדרת (ראה שלב 8.3 של פרוטוקול זה). ההגדרות רק צריכה להיות מוגדרת פעם אחת. הם חלים על כל הניסויים, כל עוד המרחק בין מצלמת האינטרנט פלטפורמת אינו משתנה. Circularity_min ואת הגדרות מקסימום להגדיר את מעגליות של החלקיקים (חלקיקים = שנספרו זבובים) זה יילקח בחשבון לניתוח (זבובים = שנספרו אובייקטים). 1 מייצג מעגל מושלם ו- 0 מייצג קו17. מאז הזבובים תמיד נוכח מידה מסוימת של מעגליות (זבוב לא יכול להופיע בתור קו ישר), הגדרת "Circularity_max" נקבע על 1, ההגדרה "Circularity_min" מוגדר ב- 0.4. לא סביר כי המשתמש צריך לכוונן הגדרות אלה.
המאקרו מדי פעם עושה טעויות הספירה כאשר זבוב ממוקם בסמוך לגבול של הפלטפורמה. הדבר יכול להתרחש אם הזבובים לא יכולים לעוף אבל הליכה בין רועי על-ידי המשתמש. ברוב המקרים, וטבלה רועי (התאמת זה ככל האפשר פלטפורמת) ניתן בקלות לפתור בעיה זו. אולם, התסריט "האי Assay ניתוח" הוא מסוגל לזהות, הנתונים הנכונים פסולים ספירות הנגרמת על ידי זבובים הליכה ויוצאים רועי בצורה טובה יחסית. למרות הרזולוציה של מצלמת האינטרנט המוצג כאן הוא גבוה מספיק כדי להפלות זבובים בסמיכות יחסית טוב, יישמנו אלגוריתמים נוספים במסגרת ההליך עיבוד התמונה המאקרו"דרוזופילה האי Assay", כגון קו פרשת המים, לשחוק את הפונקציה17. אלה מאפשרים את התיחום נאותה של הזבובים הנמצאים בסמיכות על הרציף. בנוסף, המאקרו אינו מסוגל להבחין בין זבובים קפץ מן הרציף או עף מחוץ לה. למרות זאת, הוא בדרך כלל ציין כי בריא צעיר זנים לעוף לעוף משם מיד כאשר נפל על הפלטפורמה, ואילו זבובים בוגרים וזבובים עם גירעונות גינקולוגיות להישאר זמן רב יותר על הרציף, בסופו של דבר לקפוץ או ליפול הפלטפורמה. למרות מגבלות אלו, וזמינותו של ניתוח לספק מידה מאוד מדויק של התנהגות גינקולוגיות.
כדי להבטיח את הביצועים מוצלחת של ה-script "האי Assay ניתוח", למשתמש יש לוודא כדי להזין את הנתיבים הנכון עבור קבצי קלט ופלט השורות התסריט המצוין הפרוטוקול וכדי לספק את הנתונים בתבנית של התיקיה הנכונה (כפי שמצוין איור 2). אם המשתמש ימצא את הקריטריונים המשמשים כדי לסנן נתוני הניסוי לא אמין גם מחמירים (שורה 68: הערך הראשון בעמודה "סמוך" הוא קטן או שווה ל- 5; שורה 71: הערך הראשון בעמודה "ספירה" הוא גבוה יותר מאשר המספר הכולל של זבובים הושלכו על משחקי פלטפורמה. rm +3), בטל את הגדרות סינון אלה על-ידי הוספה של # לפני הטקסט בשורות 68, 71 בקובץ ה-script "האי Assay ניתוח". במקרה זה, datasets כל ייכללו בניתוח. לחלופין, ניתן לשנות הגדרות המסנן על-ידי התאמת הערכים של שורות 68, 71 על פי צרכי המשתמש. החפצים האפשריים ב ספירת הערכים "results.txt" שנוצר על-ידי המאקרו"דרוזופילה האי Assay" ניתן גם להתאימם באופן ידני, ניתן להפעיל מחדש התסריט על נתונים מנוכי עונתיות. כאשר המשתמש מעוניין עיבוד יותר מ 10 fps, או יותר מ 10 s של נתונים, צריך מספר המסגרות שעובדו על-ידי קובץ ה-script "האי Assay ניתוח"ניתן להתאים. ניתוח סטטיסטי גם יכול להיות מוחלף על ידי חלופות המוגדרות על-ידי המשתמש.
תיקיה בשם "דוגמאות האי Assay," המכיל דוגמאות עם זמן תמונות-תוך שימוש assay את האי, הסדרה ניתן למצוא באתר הבא: https://doi.org/10.6084/m9.figshare.4309652.v1. הורד את התיקיה "דוגמאות האי Assay" ובצע את השלבים המתוארים פרוטוקול זה כדי במהירות להפוך היכרות עם המבנה של קובץ אחסון, העיבוד של התמונות עם המאקרו "assay דרוזופילה האי", "האי Assay הניתוח" . התסריט.
האי וזמינותו, בשילוב עם מאקרו מפותחת, ניתוח תסריט, ניתן להשתמש כדי להעריך ולכמת את אופן הפעולה של תנועה חריגה של מודל דרוזופילה של תסמונת אטקסיה טלנגיאקטזיה. מאז וזמינותו ניתן להחיל ביעילות על הגילאים השונים, זה גם מתאים לניתוח אופי פרוגרסיבי פוטנציאל פנוטיפים.
לסיכום, וזמינותו האי, בשילוב עם המאקרו"דרוזופילה האי Assay" התסריט "האי Assay ניתוח", הוא assay חסכוני, אמין ויעיל מאוד לנתח באופן אובייקטיבי לכמת גינקולוגיות פגמים של דרוזופילה מודלים של הפרעות תנועה באופן תפוקה גבוהה.

בשנים האחרונות, ההתקדמות בטכנולוגיות הדור הבא רצפי תרמו במידה רבה הזיהוי של גנים שבבסיס הפרעות תנועה ניווניות של המוח (למשל, אסטרוציטומה אטקסיה, פרקינסון), של העצבית ההיקפית המקור (למשל, נוירודגנרטיביות, גפיים ספסטית תורשתי), ושל שרירי המקור (למשל, שרירים דושן, ניוון חולים myotonic)1,2,3,4 . למרות זאת, מעט מאוד ידוע על המנגנונים המולקולריים העומדים בבסיס רוב ההפרעות האלה. הבנה טובה יותר של מנגנונים אלה חיוני לפיתוח טיפולים.
כמו אצל בני אדם, תנועה אורגניזמים מודל, כגון טיסה, וחיות ב דרוזופילה, נשלטת על ידי מרכזי המוח, מערכת העצבים ההיקפית, והשרירים. בנוסף, הדור מהיר והזמן גנטי בארגז הכלים של דרוזופילה להפוך את זה אורגניזם מודל מתאים במיוחד עבור ההקרנה תפוקה גבוהה של גנים המעורבים בהפרעות תנועה עבור5,6 בדיקות סמים . עקב מספר משמעותי של תנאי זה צריך להיבדק ב כגון מסכי, אמין, חסכוני, מבחני פשוטה יחסית, וכן כלים לכמת את התוצאות בצורה אוטומטית, הם רצוי מאוד.
שמידט. et al. (2012) 7 תיאר מבחן נמוכים שנקרא "וזמינותו האי" כדי להעריך את התנהגות גינקולוגיות דרוזופילה . וזמינותו האי שימש בהצלחה ב הקרנות בקנה מידה גדול לזיהוי גנים עם פונקציות ייחודיות עכשיו, דונלד7, בהערכה של דרוזופילה מודלים של מוגבלות8, וגם עבור הערכת כללי לטוס התנהגות מוטורית9. העיצוב עיקרון של וזמינותו האי מורכב פלטפורמה מוגבהת שעליו נזרקים כמה זבובים. זה גורם של התנהגות מוטורית מולדת המאפשרת זבובים בריא להימלט מן הרציף בתוך שניות. וזמינותו מודד את מספר זבובים שנותרו על הרציף נגמר הזמן7,8,9. כל התכונות הללו מציינים כי וזמינותו האי עשוי להיות כלי סינון רב עוצמה עבור גנים המעורבים בהפרעות תנועה.
כיום, ניתוח כמותי של האי מצולם assay נתונים מתבצעת באופן ידני7,8,9. כדי לשפר את היעילות של וזמינותו, פותחה שיטה בעלות נמוכה באופן אוטומטי למחצה לכמת הבריחה של זבובים מן הרציף. הגדרת משתמש פשוט מצלמת רשת מחובר למחשב נייד כדי לאסוף את הזמן התמונה סדרה של הפלטפורמה, עם מסגרות רכשה כל 0.1 מסגרות ס' מעובדים אז עם המאקרו"דרוזופילה האי Assay" מכמת את המספר של זבובים על פלטפורמת מעל הגיע הזמן. המאקרו"דרוזופילה האי Assay" מחולק שלוש פקודות מאקרו עצמאיות משנה: (I) "מחסנית צור, הקרנה," המשנה מאקרו מזהה אי אחר ניסויים המאוחסנים בתיקיות שונות ויוצר ערימה והקרנה של כל אחד סדרת זמן. (II) המאקרו המשנה "פלטפורמה להגדיר" יפתח ברציפות כל "Projection_image_name.tif" קבצים הממוקמים בתיקיות המשנה בודדים ניסיוני, ובשלב המשתמש הוא מתבקש להגדיר באופן ידני פלטפורמת האי אזור בעל עניין (ROI). (III) "ניתוח" מכמתת באופן אוטומטי את המספר של זבובים שנותרו על הבמה במהלך סדרת הזמן. ניתן להפעיל את פקודות המאקרו משנה ברציפות (בהפעלה אחת) או באופן עצמאי. עבור ניתוח נתונים סטטיסטיים, תסריט פותחה לעיבוד אוטומטי של נתונים המתקבלים, כדי להחיל מבחן סטטיסטי כדי לקבוע אם טיפולי/אחרים מתנהגים שונה באופן משמעותי מזו (איור 1). בסופו של דבר, הוכח כי תוכנית התקנה זו ניתן להשתמש כדי להעריך ולכמת את היכולת גינקולוגיות aberrant של מודל דרוזופילה תסמונת של אטקסיה טלנגיאקטזיה (ב).

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td class="xl19">25 x 95 mm Drosophila vials</td>
			<td class="xl19">Flystuff</td>
			<td class="xl20">32-116SB</td>
			<td class="xl19">-</td>
		</tr>
		<tr>
			<td class="xl21">Logitech C525 HD Webcam</td>
			<td class="xl19">Logitech</td>
			<td class="xl19">-</td>
			<td class="xl19">Any webcam with USB connection is suitable.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td class="xl19">Stand to hold webcam</td>
			<td class="xl19">-</td>
			<td class="xl19">-</td>
			<td class="xl19">-</td>
		</tr>
		<tr>
			<td class="xl19">Lamp</td>
			<td class="xl19">-</td>
			<td class="xl19">-</td>
			<td class="xl19">12 V LED lights are appropriate</td>
		</tr>
		<tr>
			<td class="xl19">Pounding pad</td>
			<td class="xl19">-</td>
			<td class="xl19">-</td>
			<td class="xl19">Any mouse pad works</td>
		</tr>
		<tr>
			<td class="xl19">Island Assay box</td>
			<td class="xl19">-</td>
			<td class="xl19">-</td>
			<td class="xl19">Dimensions 40x35x2.5 cm. Hole 20x30 cm. Transparent.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td class="xl19">Island Assay bath</td>
			<td class="xl19">-</td>
			<td class="xl19">-</td>
			<td class="xl19">Dimensions 42x38x25 cm. Non white.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td class="xl19">Island/platform</td>
			<td class="xl19">-</td>
			<td class="xl19">-</td>
			<td class="xl19">Dimensions 42x38x25 cm. Uniform white.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td class="xl19">Soap</td>
			<td class="xl19">-</td>
			<td class="xl19">-</td>
			<td class="xl19">Standard dishwashing detergent is suitable.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td class="xl19">Computer</td>
			<td class="xl19">-</td>
			<td class="xl19">-</td>
			<td class="xl19">Scripts run both on Windows and Mac</td>
		</tr>
		<tr>
			<td class="xl22">Image-recording software: HandiAvi&#174;</td>
			<td class="xl23">AZcendant&#174;</td>
			<td class="xl23">-</td>
			<td class="xl19">HandyAvi is only compatible with Windows and has been described throughout the manuscript. It can be downloaded from: http://www.azcendant.com/DownloadHandyAvi.html (version 5.0)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td class="xl22">Image-recording software: WebcamCapture</td>
			<td class="xl25">-</td>
			<td class="xl25">-</td>
			<td class="xl25">Fiji/ImageJ plugin that can be used on Mac alternative to HandyAvi for image-recordings and can be downloaded from: https://imagej.nih.gov/ij/plugins/webcam-capture/ When using this method, the user has to use the same folder setup and image-recording settings indicated in this manuscript, with the exception that for each experimental replicate, the captured image stack should be exported as Stack.tiff to the corresponding experimental replicate folder. Upon running the &#34;Drosophila Island Assay&#34; macro on this data, no text should be present in the &#34;First frame identifier&#34; setting.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td class="xl19">Fiji</td>
			<td class="xl19">-</td>
			<td class="xl19">-</td>
			<td class="xl19">Version 1.4 or higher, can be downloaded from: https://figshare.com/s/def4197ee0010b21a76f</td>
		</tr>
		<tr>
			<td class="xl19">R studio</td>
			<td class="xl19">-</td>
			<td class="xl19">-</td>
			<td class="xl24">Can be downloaded from: https://www.rstudio.com/products/rstudio/download/</td>
		</tr>
		<tr>
			<td class="xl19">R</td>
			<td class="xl19">-</td>
			<td class="xl19">-</td>
			<td class="xl24">Version 3.3.2, can be downloaded from: https://cran.rstudio.com</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

high-throughput analysis of locomotor behavior in the drosophila island assay

ההתקדמות בטכנולוגיות הדור הבא רצפי לתרום זיהוי גנים מחלה (מועמד) הפרעות תנועה, מחלות נוירולוגיות אחרות במהירות גוברת. עם זאת, מעט מאוד ידוע על המנגנונים המולקולריים העומדים בבסיס הפרעות אלה. ארגז הכלים הגנטי המולקולרי, התנהגותיות של דרוזופילה melanogaster הופך את זה אורגניזם מודל שימושי במיוחד לאפיון גנים מחלה חדשה ומנגנונים באופן תפוקה גבוהה. למרות זאת, תפוקה גבוהה מסכי לדרוש מבחני יעיל ואמין כי, באופן אידיאלי, הם חסכוניים ולא לאפשר כימות automatized של תכונות רלוונטיות להפרעות אלה. האי וזמינותו היא חסכונית בקלות הגדרת שיטה להערכת התנהגות גינקולוגיות דרוזופילה . ב הזה assay, זבובים נזרקים על גבי פלטפורמה של גובה קבוע. זה גורם תגובה מוטורית הטבועה, המאפשרת את הזבובים להימלט מן הרציף בתוך שניות. בזמן הנוכחי, כמותני של האי מצולם מבחני נעשים באופן ידני, וזו משימה מייגעת, במיוחד בעת ביצוע במסכים גדולים.
כתב יד זה מתאר את האלגוריתמים"דרוזופילה האי Assay" ו- "האי Assay ניתוח" תפוקה גבוהה, עיבוד נתונים אוטומטי של כימות של האי assay נתונים. בכיוונון, פשוט מצלמת רשת מחובר למחשב נישא אוסף סדרות תמונה של פלטפורמת בזמן ביצוע וזמינותו. האלגוריתם"דרוזופילה האי Assay" שפותחה עבור תוכנת קוד פתוח פיג'י תהליכים אלה סדרת תמונות, מכמתת, עבור כל תנאי הניסוי, המספר של זבובים על פלטפורמת לאורך זמן. התסריט של "האי Assay ניתוח", תואם את התוכנה חינם R, פותחה לעיבוד אוטומטי של נתונים המתקבלים, כדי לחשב אם טיפולי/אחרים שונים מבחינה סטטיסטית. זה מאוד משפר את היעילות של האי וזמינותו, מקל על הבדיקה עוצמה ומכניקה בסיסית והתנהגות טיסה. ניתן להחיל אותו ובכך למסכים גדולים חוקרים גינקולוגיות היכולת לעוף, דרוזופילה מודלים של הפרעות תנועה, יעילות התרופה.

ב פרוטוקול המתואר, דרוזופילה האי assay נתונים רכשה, מעובד בשלושה צעדים. ראשית, תגובת הבריחה טיסה דרוזופילה נזרק על הפלטפורמה איילנד נרשמים עם מצלמת אינטרנט ומאוחסנים כתמונות בודדות. bmp (סעיפים 1-7 לפרוטוקול). שנית, המאקרו"דרוזופילה האי Assay" (שלב 8) תהליכי המסגרות, יצירת "result" של. טקסט txt (טבלה 1), בו מסוכם מספר האובייקטים זוהה בכל מסגרת, ואוסף תמונות "Result_stack.tiff", אשר מציג האובייקטים אותר בתוך האזור של פלטפורמת בכל מסגרת. שלישית, התסריט "האי Assay ניתוח" (פרוטוקול סעיף 9) מעבד את נתוני מאקרו המאוחסן בתוך הקבצים "results.txt" של ניסויים בודדים. מספר צעדים משולבים בקובץ ה-script כדי לסנן ולשלב את הנתונים לניתוח סטטיסטי. המסגרת הראשונה שבה הזבובים נזרקים על פלטפורמת זוהה ונחשב כנקודת זמן 1. מסגרות קודמות מסולקות החל ערכת הנתונים. 100 מסגרות בעקבות הזמן נקודה 1 (המקביל 10 s) נבחרו לניתוח. ניסויים שבהם המספר הראשוני של זבובים זוהה על הרציף הוא קטן יותר 5 מושמטים אוטומטית מניתוח, ביטול לא אמין תוצאות של ניסויים חלשה. ניסויים בהם המספר הראשוני של זבובים זוהה על פלטפורמת חורגת ההגדרה "מספר זבובים לכל מבחנה" פלוס סובלנות של 3 לא יכללו גם. פעולה זו מבטלת datasets איזה רעש חלקיקים זוהו בטעות כמו זבובים. קובץ ה-script מחשב את אחוז זבובים זוהה עבור כל נקודת זמן לעומת המספר הגבוה ביותר של זבובים זוהה בסדרה. שגיאות ב- datasets הנגרמת על ידי זבובים הליכה ויוצאים רועי (מזוהה כמו ירידה ואחריו עלייה באחוזים של זבובים על פלטפורמת לאורך זמן) באופן אוטומטי מתוקנות על ידי ביחס אליהם כפי שהוא נוכח באופן עקבי על פלטפורמת בשלבים מוקדמים יותר . כל datasets שכפל עבור תנאי ניסויי ספציפי שהיו קיימים בספריה הראשית בשילוב, מיוצאים לקובץ ה-"data_all_conditions.csv". העמודות מייצגות המשתנים המתוארות בטבלה 2. קובץ ה-script ייצא גם גרף קווים עבור כל תנאי הניסוי, שמות בהתאם התיקייה המכילה את הנתונים. גרף זה מראה האחוזים של זבובים שנותרו על פלטפורמת לאורך זמן (טיסה לברוח תגובה) ניסיוני משכפל נוכח בתיקיה בהתאמה (איור 3A-B). אומרת, SD ו- SEM עבור כל תנאי הניסוי הם מחושבים ומסוכם בקובץ "סטטיסטיקה summary.csv". גרף קו הנקרא "Escape_response_all_conditions.tiff" מציגה את התגובה לברוח טיסה ממוצע עד 12 ניסיוני תנאים להציג התיקיה הראשית (איור 3C). בסופו של דבר, האזור מתחת העקומה עבור כל התנאים הניסיונית הנוכחית בתיקייה הראשית מחושב, סיכם בקובץ ה-"AUC.csv". בהתאם למספר תנאים נוכח בתיקייה הראשית, קובץ ה-script או יבצע דו-זנבית אינטראקצית ולש מבחן t של (2 התנאים) או של אנובה עם תיקון Tukey עבור מספר בדיקות (תנאי יותר מ-2) לקבוע אם ניסיוני תנאים שונים באופן משמעותי אחד מהשני. תוצאות אלה מסוכמות "Welch_t-test_results.txt" או "AUC_anova_results.txt". בעת ביצוע מקרה ANOVA, התסריט גם תייצא קובץ "AUC_anova.tiff" מציגה את ההבדל בין הממוצע חאן אל ומרווחי בטחון 95% מהמצבים ניסיוני מושווים. הערכים של אזור מוחלטת מתחת העקומה של משכפל ניסיוני עבור כל התנאים ניסיוני מוצגים כנקודות נתונים נפרדים עם medians ב "AUC.tiff" (דמות תלת-ממד).
אטקסיה Telangiectasia (AT) היא הפרעת תנועה הקרים autosomal מאופיין על ידי התפרצות מוקדמת. של אטקסיה אסטרוציטומה עקב מוטציות ב ג'ין אטקסיה Telangiectasia מוטציה (ATM)14. מוטציות של orthologue דרוזופילה של ATM, tefu, להציג פגמים ניידות ואריכות ימים15. כדי להעריך את המאקרו"דרוזופילה האי Assay", מודל דרוזופילה של AT נבדקה ב וזמינותו האי, הפלט נתוני המאקרו היה להשוותו למונים ידנית של נתונים. התוצאות מציגות את בכל מקום tefu נוקאאוט (w–; Actin-Gal4/GD11950) מקטין באופן משמעותי את היכולת של הזבובים האלה לעזוב את הפלטפורמה לעומת שולט הרקע הגנטי שלהם (w–; Actin-Gal4/+) (איור 4). לאחר 1 s, 50% של הזבובים שליטה נמלט הפלטפורמה, בניגוד ל &#60; 1% של tefu- RNAi זבובים. חשוב, נתונים שהושגו עם המאקרו בנאמנות לשכפל את הנתונים שבידי ידני סופר, המציין המאקרו הוא כלי אמין שיכול לשמש עבור כימות של האי assay נתונים והערכת ליקויי תנועה ( איור 4 A-B).
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/55892/55892fig1.jpg"> 
איור 1: תרשים זרימה חלוקה לרמות את דרישות, ניתוח ניסיוני, וניתוח וזמינותו האי. (א) האי assay ציוד. (B) הגדרת הניסוי עבור וזמינותו האי. (ג) האי וזמינותו. (ד) עיבוד של האי assay נתוני המאקרו"דרוזופילה האי Assay". המאקרו"דרוזופילה האי Assay" מורכב מאקרו המשנה 3: 1) להפוך מחסנית והקרנה, 2) מגדירים פלטפורמה, וניתוח 3). (E) עיבוד והערכה סטטיסטי של נתונים באמצעות קובץ ה-script "האי Assay ניתוח". <a href="//ecsource.jove.com/files/ftp_upload/55892/55892fig1large.jpg" target="_blank">אנא לחץ כאן כדי להציג גירסה גדולה יותר של הדמות הזאת.</a>
<img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/55892/55892fig2.jpg"> 
איור 2: דוגמאות של התאמות שונים הדרושים במהלך הפרוטוקול. מבנה הספריות (A) הדרוש באי אילו ניסויים assay מוכרחים להיות מאוחסנים עבור עיבוד נתונים וניתוח. (B) כאשר כוונון הגדרות וידאו, זבובים להופיע שחור על רקע לבן. (ג) תמונת מסגרת פלט קבציםכפי שנשמרו על ידי תוכנת צריבת התמונה המתוארת בכתב היד. חלוקה לרמות (D) הצהוב מציג את בחירת פלטפורמה. בחירת פלטפורמה מאוחסנות במנהל"רועי" מסומן בכחול. זבובים (E) מיוצגים כמו נקודות לבנות במהלך התאמת גודל מזערי לטוס הגדרת." החלון תוצאות מציג את האזור של הזבובים בפיקסלים. דוגמה (F) של מסגרת תמונה בודדת מוקלטות (בצד השמאל), את המסגרת המתאימה במחסנית התמונה המתקבלת, שהושג עם המאקרו"דרוזופילה האי Assay" (בצד ימין). <a href="//ecsource.jove.com/files/ftp_upload/55892/55892fig2large.jpg" target="_blank">אנא לחץ כאן כדי להציג גירסה גדולה יותר של הדמות הזאת.</a>
<img alt="Figure 3" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/55892/55892fig3.jpg"> 
איור 3: תמונות התוצאה מושגת לאחר עיבוד הנתונים עם script. "האי Assay ניתוח" (א) קו גרף המציג את התגובה לברוח טיסה עבור כל אחד לשלוט שכפול ניסיוני. (B) קו הגרף מציג התגובה לברוח טיסה עבור שכפול ניסיוני RNAi כל tefu. (ג) טיסה ממוצע לברוח בתגובה ל המצוין התנאים ניסיוני; קווי השגיאה מייצגים החלקות Dot ב- SEM (D) המייצג את האזור שמתחת עקומת התפלגות שליטה ומצבים מוטציה. משכפל ניסיוני עבור שני התנאים RNAi ושליטה של tefu מוצגים כנקודות נתונים נפרדים (בשחור) עם medians (הקו האדום). <a href="//ecsource.jove.com/files/ftp_upload/55892/55892fig3large.jpg" target="_blank">אנא לחץ כאן כדי להציג גירסה גדולה יותר של הדמות הזאת.</a>
<img alt="Figure 4" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/55892/55892fig4.jpg"> 
איור 4: זבובים תמונות ציפורים בכל מקום tefu להראות לך היכולת ירד משמעותית לעזוב את הרציף. הנתונים מייצגים את האחוזים של זבובים על פלטפורמת לאורך זמן (s) עבור פקד (w–; Actin-Gal4/+), tefu RNAi (w–; Actin-Gal4/GD11950) יש טיסות. (מספר משכפל = 5; קווי השגיאה מייצגים SEM). (א) נתונים גולמיים שהושג עם המאקרו"דרוזופילה האי Assay". הנקודה (B) מתווה המייצג את האזור תחת ההתפלגות עקומת עבור פקד tefu RNAi ותנאי שהושג עם המאקרו"דרוזופילה האי Assay" (ולש אינטראקצית-t-test, * * p &#60; 0.01). (ג) מתקבל על ידי ספירת המספר באופן ידני נתונים גולמיים זבובים נוכח באי לשניה. (ד) נקודה מתווה המייצג את האזור תחת עקומת התפלגות שליטה ומצבים Tefu RNAi מתקבל על ידי ספירת יד (ולש אינטראקצית-t-test, * * p &#60; 0.01). קווי השגיאה מייצגים ב- SEM <a href="//ecsource.jove.com/files/ftp_upload/55892/55892fig4large.jpg" target="_blank">אנא לחץ כאן כדי להציג גירסה גדולה יותר של הדמות הזאת.</a>
<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>שם עמודה</td>
			<td colspan="3">תיאור</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>פרוסה</td>
			<td colspan="3">שם מסגרת.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>ספירה</td>
			<td colspan="3">מספר האובייקטים שאותרו במסגרת. במסגרת הפלטפורמה (ROI).</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>השטח הכולל</td>
			<td colspan="3">השטח הכולל של האובייקטים שאותרו במסגרת. במסגרת הפלטפורמה (ROI) בפיקסלים.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>גודל ממוצע</td>
			<td colspan="3">השטח הכולל של האובייקטים שאותרו במסגרת לחלק למספר אובייקטים בתוך הגבולות של פלטפורמת (ROI).</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>% שטח</td>
			<td colspan="3">האחוז באזור שנכבשו על ידי האובייקטים ביחס מכלל השטח הרציף (ROI).</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Perim.</td>
			<td colspan="3">ההיקף הכולל של האובייקטים שאותרו במסגרת. במסגרת הפלטפורמה (ROI) בפיקסלים.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>גודל לטוס מ</td>
			<td colspan="3">המינימום לטוס הגדרת גודל המוגדר על-ידי המשתמש בממשק גרפי של המאקרו"דרוזופילה האי Assay" (בפיקסלים).</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>אזור רועי</td>
			<td colspan="3">האזור של פלטפורמת (ROI) שהוגדרו על-ידי המשתמש במהלך ההפעלה של מאקרו המשנה הגדרת פלטפורמה (בפיקסלים).</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>מספר זבובים</td>
			<td colspan="3">המספר של זבובים משמש לכל ניסוי המוגדר על-ידי המשתמש בממשק גרפי של המאקרו"דרוזופילה האי Assay".</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>
טבלה 1: פרמטרים נמדדת המאקרו"דרוזופילה האי Assay". שאר הפרמטרים המתוארים בטבלה זו יופיעו בקובץ ה-"results.txt" בעת הפעלת המאקרו"דרוזופילה האי Assay".
<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>שם עמודה</td>
			<td colspan="3">תיאור</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>פרוסה</td>
			<td colspan="3">מספר מסגרת.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>ספירה</td>
			<td colspan="3">המספר של זבובים שאותרו במסגרת. במסגרת הפלטפורמה (ROI).</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>X.Area</td>
			<td colspan="3">השטח הכולל של הזבובים שאותרו במסגרת. במסגרת הפלטפורמה (ROI) בפיקסלים.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>גודל לטוס מ</td>
			<td colspan="3">המינימום לטוס הגדרת ערך גודל המוגדר על-ידי המשתמש בממשק גרפי של המאקרו"דרוזופילה האי Assay" (בפיקסלים).</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>אזור רועי</td>
			<td colspan="3">האזור של הפלטפורמה (ROI, בפיקסלים) שהוגדרו על-ידי המשתמש בעת הפעלת המאקרו המשנה "להגדיר פלטפורמה".</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>מספר זבובים</td>
			<td colspan="3">המספר של זבובים משמש לכל ניסוי המוגדר על-ידי המשתמש בממשק גרפי של המאקרו"דרוזופילה האי Assay".</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>X.Count</td>
			<td colspan="3">% זבובים הנוכחי על פלטפורמת הפרוסה/מסגרת בהתאמה ביחס המספר הגבוה ביותר של זבובים מזוהה על הבמה במהלך הניסוי.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Timepoint</td>
			<td colspan="3">נקודת הזמן 1 מייצג המסגרת הראשונה כדי להיות מנותח, מתאים למסגרת שבה הזבובים החלו להופיע על הבמה. ישנם בסך הכל 100 מסגרות שכפול ניתח (המקביל 10 s, בעת שימוש בהגדרות המתואר.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>ניסוי</td>
			<td colspan="3">מספר משכפל לכל תנאי.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>תנאי</td>
			<td colspan="3">ציון השם של המצב ניסיוני (לפי השם על-ידי המשתמש של התיקיה המכילה את הנתונים).</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>
בטבלה 2: תיאור של המשתנים שהושג לאחר עיבוד הנתונים עם script. "האי Assay ניתוח" שאר הפרמטרים המתוארים בטבלה זו מופיעים בקובץ ה-"data_all_conditions.csv" בעת עיבוד הנתונים עם התסריט "האי Assay ניתוח".

Watch this Scientific Journal Video about High-throughput Analysis of Locomotor Behavior in the Drosophila Island Assay at JoVE.com

High-throughput Analysis of Locomotor Behavior in the Drosophila Island Assay

וזמינותו האי הוא חדש יחסית, חסכונית assay יכול לשמש כדי להעריך את התנהגות גינקולוגיות בסיסי melanogaster דרוזופילה. כתב יד זה מתאר אלגוריתמים עיבוד נתונים אוטומטי, כימות אובייקטיבי של האי assay נתונים, שהופך את assay readout רגיש, תפוקה גבוהה במסכים גדולים גנטית או תרופתי.

ניתוח תפוקה גבוהה של התנהגות גינקולוגיות וזמינותו האי דרוזופילה

Advances in next-generation sequencing technologies contribute to the identification of (candidate) disease genes for movement disorders and other ...

Research

JoVE Journal

Neuroscience

High-throughput Analysis of Locomotor Behavior in the Drosophila Island Assay

Single Sensillum Recordings in the Insects Drosophila melanogaster and Anopheles gambiae

Single Sensillum Recordings in the Insects Drosophila melanogaster and Anopheles gambiae

Sensillum הקלטות סינגל חרקים תסיסנית melanogaster ו אנופלס gambiae</em

The sense of smell is essential for insects to find foods, mates, predators, and oviposition sites3. Insect olfactory sensory neurons (OSNs) are enclosed ...

Assaying Locomotor, Learning, and Memory Deficits in Drosophila Models of Neurodegeneration

Assaying Locomotor, Learning, and Memory Deficits in Drosophila Models of Neurodegeneration

Assaying של תנועה, למידה, וזיכרון גירעונות תסיסנית מודלים של ניוון מוחיים

Advances in genetic methods have enabled the study of genes involved in human neurodegenerative diseases using Drosophila as a model system1. Most of ...

Studying the Neural Basis of Adaptive Locomotor Behavior in Insects

ללמוד את הבסיס העצבי של התנהגות מסתגלת של תנועה בתוך חרקים

Studying the neural basis of walking behavior, one often faces the problem that it is hard to separate the neuronally produced stepping output from those ...

In vivo Electroporation of Developing Mouse Retina

In vivo Electroporation of Developing Mouse Retina

ב electroporation vivo של הרשתית עכבר פיתוח

The functional characterization of genes expressed during mammalian retinal development remains a significant challenge.  Gene targeting to generate ...

Methods to Assay Drosophila Behavior

Methods to Assay Drosophila Behavior

שיטות Assay תסיסנית התנהגות

Drosophila melanogaster, the fruit fly, has been used to study molecular mechanisms of a wide range of human diseases such as cancer, cardiovascular ...

A Single-fly Assay for Foraging Behavior in Drosophila

A Single-fly Assay for Foraging Behavior in Drosophila

יחיד לטוס Assay עבור התנהגות שיחור מזון ב<em&gt; דרוזופילה</em

For many animals, hunger promotes changes in the olfactory system in a manner that facilitates the search for appropriate food sources. In this video ...

Determination of the Spontaneous Locomotor Activity in Drosophila melanogaster

Determination of the Spontaneous Locomotor Activity in Drosophila melanogaster

קביעת הפעילות של תנועה הספונטנית ב<em&gt; Melanogaster דרוזופילה</em

Drosophila melanogaster has been used as an excellent model organism to study environmental and genetic manipulations that affect behavior. One such ...

High Throughput Assay to Examine Egg-Laying Preferences of Individual Drosophila melanogaster

High Throughput Assay to Examine Egg-Laying Preferences of Individual Drosophila melanogaster

Assay תפוקה גבוהה לבחינת העדפות הטלה של פרט<em&gt; תסיסנית</em

Recently, egg-laying preference of Drosophila has emerged as a genetically tractable model to study the neural basis of simple decision-making processes. ...

A Simple Way to Measure Alterations in Reward-seeking Behavior Using Drosophila melanogaster

A Simple Way to Measure Alterations in Reward-seeking Behavior Using Drosophila melanogaster

דרך פשוטה למדוד שינויים בהתנהגות שוחרת זכה שימוש<em&gt; תסיסנית</em

We describe a protocol for measuring ethanol self-administration in fruit flies (Drosophila melanogaster) as a proxy for changes in reward states. We ...

Quantification of Drosophila Grooming Behavior

כימות של תסיסנית התנהגות Grooming

Drosophila grooming behavior is a complex multi-step locomotor program that requires coordinated movement of both forelegs and hindlegs. Here we present a ...