Name: analysis of histone antibody specificity with peptide microarrays
Uploaded: 2017-08-01T14:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Analysis of Histone Antibody Specificity with Peptide Microarrays at JoVE.com

Dette arbeidet ble delvis støttet av Van Andel Research Institute og et forskningsbidrag fra National Institutes of Health (CA181343) til SBR

1. Installere og kjøre ArrayNinja <ol><li> Last ned og installer Oracle Virtual Box fra www.virtualbox.org. </li><li> Last ned og komprimer ArrayNinja virtuell maskin (VM) fra http://research.vai.org/Tools/arrayninja. </li><li> Åpne Virtual Box og legg til ArrayNinja VM ved å klikke &#39;Maskin&#39;, &#39;Legg til&#39;, og velg arrayninja.vbox fra mappen der ArrayNinja VM ble lagret. </li><li> Start ArrayNinja ved å velge den i Virtual Box og klikk på den grønne &quot;start&quot; -pilen. </li><li> Virtual Box å...

Antistoffets pålitelighet i biomedisinske søknader er viktigst 46 , 47 . Dette gjelder spesielt i kromatinbiokjemi gitt antistoffposisjon som nøkkelverktøy for flertallet av teknikker utviklet for å karakterisere overflaten og fordelingen av histon PTM. Protokollen presenterte her detaljer en optimalisert rørledning for utforming, fabrikasjon og bruk av peptidmikroarrays for å analysere histon PTM antistoff spesifisitet. Denne rørledningen har blitt bruk...

Genomisk DNA pakkes elegant inn i eukaryotisk cellekjerne med histonproteiner for å danne kromatin. Den gjentatte underenheten av kromatin er nukleosomet, som består av 147 basepar DNA som er pakket rundt en oktamerisk kjerne av histonproteiner - H2A, H2B, H3 og H4 1 . Kromatin er bredt organisert i løst pakket eukromatin og tett pakket heterochromatin domener. Graden av kromatin-komprimering regulerer i hvilken grad proteinindustrien kan få tilgang til det underliggende DNA for å gjennomføre grunnleggende DNA-templerte prosesser som replikering, transkripsjon og reparasjon. Nøkkelregulatorer for genometilgjengelighet i forbindelse med kromatin er PTM på de ustrukturerte hale- og kjerneområdene av histonproteiner 2 , 3 . Histone PTMs fungerer direkte ved å påvirke strukturen av kromatin 4 og indirekte gjennomgåendeH rekruttering av leserproteiner og deres tilhørende makromolekylære komplekser som har kromatin remodeling, enzymatisk og stillas aktiviteter 5 . Studier av histone PTM-funksjon de siste to tiårene tyder overveldende på at disse merkene spiller nøkkelrolle i regulering av cellefell, organisasjonsutvikling og sykdomsinitiering / progresjon. Fueled av fremskritt i massespektrometribasert proteomteknologi, er det funnet mer enn 20 unike histon-PTM på mer enn 80 forskjellige histonrester 6 . Spesielt forekommer disse endringene ofte i kombinasjoner, og i samsvar med &quot;histonkoden&quot; -hypotesen, viser mange studier at leserproteiner er målrettet mot diskrete kromatinegrupper gjennom anerkjennelse av spesifikke kombinasjoner av histon PTMs 7 , 8 , 9 . En viktig utfordring fremover vil være å tilordne funksjoner til grPå grunn av listen over histon PTMer og å bestemme hvordan bestemte kombinasjoner av histon PTMer orkestrerer de dynamiske funksjonene assosiert med kromatin. Antistoffer er lynchpinreagensene for påvisning av histon PTM. Som sådan har mer enn 1000 histon-PTM-spesifikke antistoffer blitt kommersielt utviklet for bruk i kromatisk biokjemiforskning. Med den raske utviklingen av DNA-sekvenseringsteknologi med høy gjennomstrømning, brukes disse reagensene i stor grad av individuelle etterforskere og omfattende epigenomiske &quot;veikart&quot; -initiativer ( f.eks . ENCODE og BLUEPRINT) i ChIP-seq (kromatinimmunutfelling kombinert med neste generasjons sekvensering ) Rørledninger for å generere geografiske kart med høy oppløsning av histon PTM-fordelingsgenom-bred 10 , 11 . Nylige studier har imidlertid vist at spesifisiteten av histon-PTM-antistoffer kan være svært variabel og at disse reagensene viser uferdige<html> Dårlige egenskaper som ikke-mål epitopgjenkjenning, sterk positiv og negativ påvirkning av nabo-PTM, og vanskeligheter med å diskriminere modifikasjonsordren på en bestemt rest ( f.eks . Mono-, di- eller tri-metyllysin) 12 , 13 , 14 , 15 , 16 , 17 , 18 . Derfor er streng kvalitetskontroll av histon PTM-spesifikke antistoffreagenser nødvendig for å nøyaktig tolke data generert med disse verdifulle reagensene. Microarray-teknologi gjør det mulig for simultant forhør av tusenvis av makromolekylære interaksjoner i et gjennomgående, reproduserbart og miniatyrisert format. Av denne grunn har en rekke mikroarrayplattformer blitt opprettet for å analysere protein-DNA 19 ,&quot;&gt; 20, protein-protein 21 og protein-peptid-interaksjoner 22. Faktisk har histonpeptidmikroarrays oppstått som en informativ funningsplattform for kromatinbiokjemiforskning, som muliggjør høy gjennomstrømmingsprofilering av forfattere, viskelærer og lesere av histon PTM 15 , 23, 24, og også for analyse av histon-antistoffspesifisitet 17, 25. Utover deres anvendelse i kromatin og epigenetikk forskning, histon peptid-matriser har potensiell anvendelse som et diagnostisk / prognostisk test for systemisk lupus erythematosus og andre autoimmune sykdommer hvor anti- Kromatin-autoantistoffer blir dannet 26 , 27 . Her beskriver vi en integrert rørledning som vi har utviklet for å designe, fabrikere og kjøreRydder histonpeptidmikroarrays for å generere spesifisitetsprofiler for antistoffer som gjenkjenner histon og deres PTM. Rørledningen forenkles av ArrayNinja, et interaktivt program for åpen kildekode som vi nylig utviklet, som integrerer design- og analysestadene i mikroarray-eksperimenter 28 . ArrayNinja fungerer best i Google Chrome. Kort fortalt brukes en mikrokrysserskriver med robotkontakt til å deponere et bibliotek med biotinkonjugerte histonpeptider i definerte posisjoner på streptavidin-belagte glassmikroskopriller. Arrays kan da brukes i et konkurransedyktig og parallelt analyseringsformat for å forhøre antistoff-epitop-interaksjoner ( figur 1 ). Peptidbiblioteket består av hundrevis av unike syntetiske peptider som inneholder PTM (lysinacetylering, lysin / argininmetylering og serin / treoninfosforylering) alene og i relevante kombinasjoner i stor grad avledet fra proteomiske datasett. Metoder for peptidsyntese og validering<html> Er detaljert andre steder 23 . Data generert fra vår pågående histone PTM antistoff screening innsats utnytte denne array plattformen er arkivert på en offentlig web ressurs, Histone Antibody Specificity Database (www.histoneantibodies.com). Spesielt er histonpeptidmikroarrays fremstilt med variasjoner av denne protokollen blitt brukt i stor utstrekning for å karakterisere aktiviteten til histone PTM-leserdomene 8 , 29 , 30 , 31 , 32 , 33 , 34 , 35 , 36 , 37 og mer nylig for å profilere histon PTM forfatter og viskelærer 24 . /files/ftp_upload/55912/55912fig1.jpg &quot;/&gt; Figur 1: Tegneserievisning av trinnvis prosedyre for antistoff-screening på en histonpeptid-mikroarray. Biotinylerte histonpeptider som inneholder definerte posttranslasjonelle modifikasjoner (røde og blå sirkler) er medtrykt med biotin-fluorescein på streptavidinbelagt glass. Positive interaksjoner visualiseres som rød fluorescens. <a href="http://ecsource.jove.com/files/ftp_upload/55912/55912fig1large.jpg" target="_blank">Vennligst klikk her for å se en større versjon av denne figuren.</a>

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" width="746">
	<tbody>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:255px;">Printing Buffer</td>
			<td style="width:107px;">ArrayIt</td>
			<td style="width:105px;">PPB</td>
			<td style="width:281px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:255px;">BSA</td>
			<td style="width:107px;">Omnipure</td>
			<td align="right" style="width:105px;">2390</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:255px;">Streptavidin-coated glass microscope slides</td>
			<td style="width:107px;">Greiner Bio-one</td>
			<td>439003-25</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:255px;">polypropylene 384 well plate</td>
			<td style="width:107px;">Greiner Bio-one</td>
			<td align="right" style="width:105px;">784201</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:255px;">Biotin-fluorescein</td>
			<td style="width:107px;">Sigma</td>
			<td align="right" style="width:105px;">53608</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:255px;">contact microarray printer</td>
			<td style="width:107px;">Aushon</td>
			<td align="right" style="width:105px;">2470</td>
			<td style="width:281px;">Aushon 2470 Microarray Printer</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:255px;">contact microarray printer</td>
			<td style="width:107px;">Gene Machines</td>
			<td style="width:105px;">OmniGrid 100</td>
			<td style="width:281px;">OmniGrid Microarray Printer</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:255px;">PBS</td>
			<td style="width:107px;">Invitrogen</td>
			<td align="right" style="width:105px;">14190</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:255px;">Blocking Buffer</td>
			<td style="width:107px;">ArrayIt</td>
			<td style="width:105px;">SBB</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:255px;">Hydrophobic wax pen</td>
			<td style="width:107px;">Vector Labs</td>
			<td style="width:105px;">H-4000</td>
			<td>ImmEdge Hydrophobic Barrier PAP Pen</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:255px;">Silicon Gasket</td>
			<td style="width:107px;">Grace Bio-labs</td>
			<td align="right" style="width:105px;">622511</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:255px;">Hybridization Vessel</td>
			<td style="width:107px;">Thermo Scientific</td>
			<td align="right">267061</td>
			<td>or similar vessel</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:255px;">Fluorescent-dye conjugated secondary antibody</td>
			<td style="width:107px;">Life Technologies</td>
			<td>A-21244</td>
			<td style="width:281px;">Alexa Fluor 647 (anti-rabbit)</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:255px;">Fluorescent-dye conjugated secondary antibody</td>
			<td style="width:107px;">Life Technologies</td>
			<td>A-21235</td>
			<td style="width:281px;">Alexa Fluor 647 (anti-mouse)</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:255px;">Wax Imprinter</td>
			<td style="width:107px;">ArrayIt</td>
			<td>MSI48</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:255px;">Tween-20</td>
			<td style="width:107px;">Omnipure</td>
			<td align="right" style="width:105px;">9490</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:255px;">Microarray Scanner</td>
			<td style="width:107px;">Innopsys</td>
			<td style="width:105px;">InnoScan 1100AL</td>
			<td>or equivalent microarray scanner</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:255px;">EipTitan Histone Peptide Microarray</td>
			<td style="width:107px;">Epicypher</td>
			<td align="right" style="width:105px;">112001</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:255px;">AbSurance Pro Histone Peptide Microarray</td>
			<td style="width:107px;">Millipore</td>
			<td align="right" style="width:105px;">16668</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:255px;">MODified Histone Peptide Array</td>
			<td style="width:107px;">Active Motif</td>
			<td align="right" style="width:105px;">13001</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:255px;">Histone Code Peptide Microarrays</td>
			<td style="width:107px;">JPT</td>
			<td style="width:105px;">His_MA_01</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:255px;">Wax</td>
			<td style="width:107px;">Royal Oak</td>
			<td style="width:105px;">GulfWax</td>
			<td>for wax imprinter</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:255px;">Humidified Microarray Slide Hybridization Chamber</td>
			<td style="width:107px;">VWR</td>
			<td style="width:105px;">97000-284</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:255px;">High throughput microscope slide washing chamber</td>
			<td style="width:107px;">ArrayIt</td>
			<td style="width:105px;">HTW</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:255px;">Microscope slide centrifuge</td>
			<td style="width:107px;">VWR</td>
			<td>93000-204</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:255px;">Antibody 1</td>
			<td>Abcam</td>
			<td align="right" style="width:105px;">8898</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:255px;">Antibody 2</td>
			<td style="width:107px;">Millipore</td>
			<td style="width:105px;">07-473</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="64">
			<td height="64" style="height:64px;width:255px;">Biotinylated histone peptide</td>
			<td style="width:107px;">EpiCypher</td>
			<td>12-0001</td>
			<td style="width:281px;">Example peptide. Similar peptides with various modifications are available from several commercial sources.</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:255px;">ImageMagick</td>
			<td style="width:107px;"></td>
			<td style="width:105px;"></td>
			<td>https://www.imagemagick.org/script/index.php</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:255px;">ArrayNinja</td>
			<td style="width:107px;"></td>
			<td style="width:105px;"></td>
			<td>https://rothbartlab.vai.org/tools/</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

analysis of histone antibody specificity with peptide microarrays

Post-translasjonelle modifikasjoner (PTMs) på histonproteiner studeres mye for deres roller i regulering av kromatinstruktur og genuttrykk. Masseproduksjonen og fordelingen av antistoffer som er spesifikke for histon-PTM, har i stor grad tilrettelagt for forskning på disse merkene. Siden histon-PTM-antistoffer er nøkkelreagenser for mange kromatinbiokemiske applikasjoner, er streng analyse av antistoff-spesifisitet nødvendig for nøyaktig dataintolking og fortsatt fremgang i feltet. Denne protokollen beskriver en integrert rørledning for utforming, fabrikasjon og bruk av peptidmikroarrays for profiling av spesifisitet av histon-antistoffer. Design og analyse aspekter av denne prosedyren er lettet av ArrayNinja, en åpen kildekode og interaktiv programvarepakke vi nylig utviklet for å effektivisere tilpasningen av microarray utskriftsformater. Denne rørledningen har blitt brukt til å skjerme et stort antall kommersielt tilgjengelig og mye brukt histone PTM antibodiesS, og data generert fra disse forsøkene er fritt tilgjengelige gjennom en online og ekspanderende Histone Antibody Specificity Database. Utover histoner kan den generelle metode som beskrives her, anvendes bredt til analysen av PTM-spesifikke antistoffer.

Denne protokollen har blitt brukt til å designe og fremstille en peptidmikroarrayplattform for analyse av histon PTM antistoff-spesifisitet. Oppstillingen spør etter et bibliotek med mer enn 300 unike peptidfunksjoner (20 - 40 rester i lengden) som representerer mange av de kjente kombinasjonene av PTM som finnes på kjerne- og varianthistonproteiner 38 . Denne rørledningen har vært en arbeidshest for screening av mange brukte og kommersielt tilgjengelige hist...

Watch this Scientific Journal Video about Analysis of Histone Antibody Specificity with Peptide Microarrays at JoVE.com

Analysis of Histone Antibody Specificity with Peptide Microarrays

Analyse av histonantistof spesifisitet med peptidmikroarrays

Dette manuskriptet beskriver metoder for anvendelse av peptidmikroarray-teknologi til spesifisitetsprofilering av antistoffer som gjenkjenner histoner og deres posttranslasjonelle modifikasjoner.

Post-translational modifications (PTMs) on histone proteins are widely studied for their roles in regulating chromatin structure and gene expression. The ...

The goal of this video is to describe an integrated pipeline for the design fabrication and use of peptide microarrays for profiling the specificities of histone antibodies. Antibodies that recognize histones and their diverse post-translational modifications are key reagents in chromatin biochemistry research. We rely on these tools to deepen our understanding of histone modification function.Recent studies reveal inconsistencies in histone antibody behavior. As antibody choice is the most critical element in epigenetics experiments, vigorous incomprehensive quality control measures are demanded for these reagents. Here, we demonstrate an integrated pipeline we'd developed for designing, fabricating and analyzing peptide microarrays to generate specificity profiles for antibodies that recognize histones and their post-translational modifications.The pipeline is facilitated by Array Ninja, an open source interactive software application that we developed, which integrates the design and analysis stages of microarray experiments. To begin designing the array slide, under the plan a slide layout heading, select the microarray printer that will be used. Then, type, empty in the load plate field and press enter.Set the spot diameter to 275 micrometers and the spot spacing to 100 micrometers. Fill in the remaining parameters appropriately for the experiment, ensuring that the layout allows for sufficient replicates. At the resulting layout preview, mouse over each unique peptide feature on the slide and enter a feature identifier in the popup text box.Once each unique feature has been labeled, click populate. Name the slide layout, and click commit your plate to save the layout and generate a map at the physical locations of each feature in the source plates. Guided by the source plate map, load one to two microliters of each peptide feature into the designated wells of one or more 384 wells, small volume plates, dilute each feature 10 fold with 1x protein microarray printing buffer, supplemented with 1%bovine serum albumin and five micrograms per microliter fluorescin labeled biotin.Then, centrifuge the plates at 500 x G at room temperature for two minutes. Next, empty the waste container at the microarray printer. Fill the washed solution in humidifier containers with sterile distilled water.Enter the array slide parameters in the microarray printer software. Set the washing procedure to a one second wash with the single immersion, the post washed to redip the pins five times, and the humidity to 60%Then, insert encoated glass slides into the substrate platinums. Load the platinums into the platinum elevator.Insert the source plates into the plate holders and load the holders into the source plate elevator. Run the printing process, then, remove the substrate platinums from the instrument. Block the printed slides with 1x protein microarray blocking buffer for 30 minutes while shaking.Then, wash the slides in room temperature, pH 7.6 phosphate buffered saline for 10 minutes. Repeat the wash with a fresh batch of PBS. Dry the slides by centrifugation for 30 seconds at room temperature.Next, pre-heat a microarray wax imprinter at 85 degrees celsius for 30 minutes, or until the wax has melted. Then, insert a slide printed side down, into the holder and align the holder with the imprinter mold. Bring the mold into contact with the slide and hold for two seconds, then, quickly remove the slide from the holder and inspect the wax borders to verify that the arrays are properly enclosed.Store the partitioned slides at four degrees celsius, in a dry dark area. To begin the hybridization procedure, place a partitioned array slide in a plastic dish and cover the slide with hybridization buffer. Equilibrate the slide for 30 minutes at four degree celsius, while shaking at low speed.Dry the slide by spinning in a microarray slide centrifuge at room temperature. Then, add five microliters of each histone PTM antibody solution to at least two wells of the array and incubate at four degree celsius for one hour. Following incubation, remove the antibody solution and wash the array with cold PBS three times for five minutes each at four degrees celsius.Next, incubate the array in a fluorescent dye-conjugated secondary antibody solution. For 30 minutes at four degrees celsius, in the absence of light. Wash the slide three times with cold PBS as before.Dip the array in room temperature 0.1x PBS to remove excess salt and dry the slide by brief centrifugation at room temperature. Image the slide with a microarray scanner at a resolution of at least, 25 microns. To begin the analysis, use image processing software to merge the single channel files from the microarray scanner.Then, open Array Ninja and select the appropriate microarray printer under the, to quantify images header. Fill in the name of the same slide layout in the load plate dialog box, and press enter. Load the merged image file, and adjust the contrast, brightness and mid point as desired.Fill in the array scanner resolution, adjust the top and side margins to align slide layout grid with the image. To analyze a set of wells as replicates or perform other selective analysis, fill in the well coordinates in the iPin, jPin, and subA fields and press enter. Click to toggle zoom, to display a magnified image of the area under the cursor.Then, click spot seek and wait for the process to finish. Repeat the seek function as needed to center the grid circles on the array spots. Reference spots can be selected by pressing the R key and spot showing debris or widely bearing morphology can be deactivated by pressing the A key while hovering over the spot.Once the background reference spots have been selected, and spots with pore morphology or contamination have been deactivated, click populate, followed by, submit to perform the quantification. A bar graph and table will be displayed in a new page. The binding specificities of two histone PTM antibodies were evaluated using this method.A histone PTM antibody designed to target trimethylated lysine 9 on histone H3 was also found to bind to three other trimethylated lysine groups. A silylation of neighboring lysine residues was observed to positively influence targeting of lysine 9 on H3.A histone PTM antibody targeting trimethylated lysine 4 on histone H3, was found to interact with singlely methylated and dimethylated lysine 4 on H3 as well. Phosphorelation of the neighboring three anine six, was observed to negatively impact binding at lysine four in this assay.This pipeline has been used to screen many of the most widely used, commercially available histone antibodies and data generated from these experiments is freely available through the histone antibody specificity database. Variations to this pipeline have been previously described for the analysis of histone readers, writers and erasers, modifying this platform before utility beyond epigenetics research could be easily for any printable library of interest. Several histone peptide microarray platforms are available commercially for users who do not have access to the specialized equipment needed to synthesize peptides and fabricate arrays.

Research

JoVE Journal

Biochemistry

Easy Manipulation of Architectures in Protein-based Hydrogels for Cell Culture Applications

Enkel manipulering av arkitekturer i Protein-basert Hydrogels for celle kultur programmer

Hydrogels are recognized as promising materials for cell culture applications due to their ability to provide highly hydrated cell environments. The field ...

Semi-automated Biopanning of Bacterial Display Libraries for Peptide Affinity Reagent Discovery and Analysis of Resulting Isolates

Semi-automatisert Biopanning av bakteriell vise bibliotekene for peptid affinitet reagens oppdagelsen og analyse av resulterende isolerer

Biopanning bacterial display libraries is a proven technique for peptide affinity reagent discovery for recognition of both biotic and abiotic targets. ...

The Determination of Protease Specificity in Mouse Tissue Extracts by MALDI-TOF Mass Spectrometry: Manipulating PH to Cause Specificity Changes

Fastsettelse av Protease spesifisitet i musen vev ekstrakter av MALDI-TOF massespektrometri: manipulere PH å forårsake spesifisitet endringer

Proteases have several biological functions, including protein activation/inactivation and food digestion. Identifying protease specificity is important ...

Kinase Inhibitor Screening In Self-assembled Human Protein Microarrays

Kinase inhibitor screening i selv-monterte Human protein Microarrays

The screening of kinase inhibitors is crucial for better understanding properties of a drug and for the identification of potentially new targets with ...

Isolation of Histone from Sorghum Leaf Tissue for Top Down Mass Spectrometry Profiling of Potential Epigenetic Markers

Isolering av Histone fra Sorghum Leaf Tissue for Top Down Mass Spectrometry Profilering av potensielle epigenetiske markører

Histones belong to a family of highly conserved proteins in eukaryotes. They pack DNA into nucleosomes as functional units of chromatin. ...

Rapid Determination of Antibody-Antigen Affinity by Mass Photometry

Rask bestemmelse av antistoff-antigen affinitet av masse fotometri

Measurements of the specificity and affinity of antigen-antibody interactions are critically important for medical and research applications. In this ...

Cell-Free Production of Proteoliposomes for Functional Analysis and Antibody Development Targeting Membrane Proteins

Cellefri produksjon av proteoliposomer for funksjonell analyse og antistoffutvikling rettet mot membranproteiner

Membrane proteins play essential roles in a variety of cellular processes and perform vital functions. Membrane proteins are medically important in drug ...

In Vitro Characterization of Histone Chaperones using Analytical, Pull-Down and Chaperoning Assays

In Vitro Characterization of Histone Chaperones using Analytical, Pull-Down and Chaperoning Assays

In vitro Karakterisering av Histone Chaperones ved hjelp av analytiske, nedtrekkbare og chaperoning analyser

Histone proteins associate with DNA to form the eukaryotic chromatin. The basic unit of chromatin is a nucleosome, made up of a histone octamer consisting ...

Deciphering Molecular Mechanism of Histone Assembly by DNA Curtain Technique

Dekryptere molekylær mekanisme for histonmontering ved DNA-gardinteknikk

Chromatin is a higher-order structure that packages eukaryotic DNA. Chromatin undergoes dynamic alterations according to the cell cycle phase and in ...