Name: experimental models to study the neuroprotection of acidic postconditioning against cerebral ischemia
Uploaded: 2017-07-31T12:30:00
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Questo lavoro è stato finanziato dalla Fondazione Nazionale di Scienze Naturali della Cina (81573406, 81373393, 81273506, 81221003, 81473186 e 81402907), Zhejiang Provincial Science Foundation (LR15H310001) e il Programma di Zhejiang Leadership Team di S &amp; T Innovation Team (2011R50014).

Tutti gli esperimenti sono stati approvati e condotti in conformità con le linee guida etiche del comitato scientifico per la sperimentazione degli animali di Zhejiang e sono stati in piena conformità con la Guida nazionale degli istituti sanitari per la cura e l&#39;uso degli animali da laboratorio. Sono stati fatti sforzi per minimizzare qualsiasi dolore o disagio, ed è stato utilizzato il numero minimo di animali. 1. OGD di fette corticostriatali <ol><li> Preparazione della s...

<ol>
	<li>Zhao, H., Sapolsky, R. M., Steinberg, G. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Interrupting+reperfusion+as+a+stroke+therapy:+ischemic+postconditioning+reduces+infarct+size+after+focal+ischemia+in+rats.">Interrupting reperfusion as a stroke therapy: ischemic postconditioning reduces infarct size after focal ischemia in rats.</a> J Cereb Blood Flow Metab. 26 (9), 1114-1121 (2006).</li><li>Leconte, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Delayed+hypoxic+postconditioning+protects+against+cerebral+ischemia+in+the+mouse.">Delayed hypoxic postconditioning protects against cerebral ischemia in the mouse.</a> Stroke. 40 (10), 3349-3355 (2009).</li><li>Fan, Y. Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Transient+lack+of+glucose+but+not+O2+is+involved+in+ischemic+postconditioning-induced+neuroprotection.">Transient lack of glucose but not O2 is involved in ischemic postconditioning-induced neuroprotection.</a> CNS Neurosci Ther. 19 (1), 30-37 (2013).</li><li>Hess, D. C., Hoda, M. N., Bhatia, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Remote+limb+perconditioning+[corrected]+and+postconditioning:+will+it+translate+into+a+promising+treatment+for+acute+stroke.">Remote limb perconditioning [corrected] and postconditioning: will it translate into a promising treatment for acute stroke.</a> Stroke. 44 (4), 1191-1197 (2013).</li><li>Ren, C., Yan, Z., Wei, D., Gao, X., Chen, X., Zhao, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Limb+remote+ischemic+postconditioning+protects+against+focal+ischemia+in+rats.">Limb remote ischemic postconditioning protects against focal ischemia in rats.</a> Brain Res. 1288, 88-94 (2009).</li><li>Sun, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Protective+effect+of+delayed+remote+limb+ischemic+postconditioning:+role+of+mitochondrial+K(ATP)+channels+in+a+rat+model+of+focal+cerebral+ischemic+reperfusion+injury.">Protective effect of delayed remote limb ischemic postconditioning: role of mitochondrial K(ATP) channels in a rat model of focal cerebral ischemic reperfusion injury.</a> J Cereb Blood Flow Metab. 32 (5), 851-859 (2012).</li><li>Li, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Remote+limb+ischemic+postconditioning+protects+mouse+brain+against+cerebral+ischemia/reperfusion+injury+via+upregulating+expression+of+Nrf2,+HO-1+and+NQO-1+in+mice.">Remote limb ischemic postconditioning protects mouse brain against cerebral ischemia/reperfusion injury via upregulating expression of Nrf2, HO-1 and NQO-1 in mice.</a> Int J Neurosci. , 1-8 (2015).</li><li>Fan, Y. Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+novel+neuroprotective+strategy+for+ischemic+stroke:+transient+mild+acidosis+treatment+by+CO2+inhalation+at+reperfusion.">A novel neuroprotective strategy for ischemic stroke: transient mild acidosis treatment by CO2 inhalation at reperfusion.</a> J Cereb Blood Flow Metab. 34 (2), 275-283 (2014).</li><li>Shen, Z., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=PARK2-dependent+mitophagy+induced+by+acidic+postconditioning+protects+against+focal+cerebral+ischemia+and+extends+the+reperfusion+window.">PARK2-dependent mitophagy induced by acidic postconditioning protects against focal cerebral ischemia and extends the reperfusion window.</a> Autophagy. , (2017).</li><li>Skolnik, J., Takacs, L., Szende, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+vitro+oxygen+consumption+of+slices+from+kidney,+brain,+cortex+and+liver+in+hypoxia.">In vitro oxygen consumption of slices from kidney, brain, cortex and liver in hypoxia.</a> Nature. 209 (5020), 305 (1966).</li><li>Lynch, G., Schubert, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+use+of+in+vitro.+brain+slices+for+multidisciplinary+studies+of+synaptic+function.">The use of in vitro. brain slices for multidisciplinary studies of synaptic function.</a> Annu Rev Neurosci. 3, 1-22 (1980).</li><li>Zheng, S., Zuo, Z. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Isoflurane+preconditioning+reduces+purkinje+cell+death+in+an+in+vitro+model+of+rat+cerebellar+ischemia.">Isoflurane preconditioning reduces purkinje cell death in an in vitro model of rat cerebellar ischemia.</a> Neuroscience. 118 (1), 99-106 (2003).</li><li>Yin, B., Barrionuevo, G., Weber, S. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Optimized+real-time+monitoring+of+glutathione+redox+status+in+single+pyramidal+neurons+in+organotypic+hippocampal+slices+during+oxygen-glucose+deprivation+and+reperfusion.">Optimized real-time monitoring of glutathione redox status in single pyramidal neurons in organotypic hippocampal slices during oxygen-glucose deprivation and reperfusion.</a> ACS Chem Neurosci. 6 (11), 1838-1848 (2015).</li><li>Medvedeva, Y. V., Ji, S., Yin, H. Z., Weiss, J. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Differential+vulnerability+of+CA1+vs+CA3+pyramidal+neurons+after+ischemia:+possible+relationship+to+sources+of+Zn2++accumulation+and+its+entry+into+and+prolonged+effects+on+mitochondria.">Differential vulnerability of CA1 vs CA3 pyramidal neurons after ischemia: possible relationship to sources of Zn2+ accumulation and its entry into and prolonged effects on mitochondria.</a> J Neurosci. , (2016).</li><li>Pignataro, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+vivo+and+in+vitro+characterization+of+a+novel+neuroprotective+strategy+for+stroke:+ischemic+postconditioning.">In vivo and in vitro characterization of a novel neuroprotective strategy for stroke: ischemic postconditioning.</a> J Cereb Blood Flow Metab. 28 (2), 232-241 (2008).</li><li>Zhang, X., Ding, H. Z., Jiang, S., Zeng, Y. M., Tang, Q. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+in+vitro+study+of+the+neuroprotective+effect+of+propofol+on+hypoxic+hippocampal+slice.">An in vitro study of the neuroprotective effect of propofol on hypoxic hippocampal slice.</a> Brain Inj. 28 (13-14), 1758-1765 (2014).</li><li>Niu, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Chemical+profiling+with+HPLC-FTMS+of+exogenous+and+endogenous+chemicals+susceptible+to+the+administration+of+chotosan+in+an+animal+model+of+type+2+diabetes-induced+dementia.">Chemical profiling with HPLC-FTMS of exogenous and endogenous chemicals susceptible to the administration of chotosan in an animal model of type 2 diabetes-induced dementia.</a> J Pharm Biomed Anal. 104, 21-30 (2015).</li></ol>

Qui presentiamo due modelli sperimentali per studiare la neuroprotezione dell&#39;APC contro l&#39;ischemia cerebrale. Nelle fette del cervello, l&#39;APC è ottenuto incubando le fette corticostriatali dei topi in tampone acico in boom con 20% di CO 2 dopo l&#39;insorgenza di reperfusione, mentre nel modello MCAO l&#39;APC è ottenuto inalando 20% di CO 2 nei topi dopo la reperfusione. Entrambi i modelli riflettono la neuroprotezione dell&#39;APC contro l&#39;ischemia cerebrale. La protezione era ...

L&#39;ictus è una delle principali cause di mortalità e disabilità in tutto il mondo. Sono stati compiuti grandi sforzi per trovare efficaci trattamenti di ictus negli ultimi decenni, tuttavia il risultato è piuttosto insoddisfacente. Postcondizionamento è un processo manipolato da sottotossici stress dopo un episodio ischemico. Postcondizionamento, incluso ischemico, ipossico, basso glucosio e post-condizionamento ischemico a distanza, provoca meccanismi di adattamento endogeno e sono stati dimostrati promettenti terapie contro l&#39;ischemia cerebrale 1 , 2 , 3 , 4 . Tuttavia, il postcondizionamento ischemico può presentare ulteriori lesioni. Il postcondizionamento ischemico remoto a distanza richiede solitamente diversi cicli di occlusione e reperfusione da 5 a 20 minuti sugli arti posteriori ipsilaterali o bilaterali 5 , 6 , 7 . thIn realtà, queste manipolazioni post-condizionanti sono pericolose o impraticabili nella pratica clinica. Per superare questi svantaggi, abbiamo sviluppato APC come terapia per l&#39;ischemia cerebrale focale nei topi 8 . Indotta semplicemente inalando 20% di CO 2 , APC riduce in modo significativo lesioni cerebrali ischemiche in modo più fattibile e più sicuro. Recentemente abbiamo dimostrato che APC estende la finestra di reperfusione, evidenziando il significato dell&#39;APC per la terapia a colpo 9 . Qui presentiamo due modelli sperimentali per studiare la neuroprotezione dell&#39;APC contro l&#39;ischemia cerebrale. Il primo è il modello di deprivazione di ossigeno-glucosio (OGD) in fette corticostriatale di topi. La rapida preparazione e il trasferimento delle fette del cervello in un ambiente artificiale, di solito liquido cerebrospinale artificiale (ASCF), può mantenere la vitalità delle cellule e la circuiteria neuronale, che consente di studiare la funzione cerebrale in vitro 10 &lt;Sup&gt;, 11 . OGD in ASCF imita l&#39;ischemia cerebrale e induce lesioni ischemiche 12 , 13 , 14 . Dopo l&#39;OGD, le fette del cervello vengono aggiornate in ASCF regolare (r-ASCF) per fornire reperfusione e quindi trattate con APC usando ASCF acido bolle con 20% CO 2 . La fetta corticostriatal mantiene la caratterizzazione istologica intatta rispetto alle cellule primari coltivate. Per studiare la funzionalità cerebrale in vivo , viene utilizzato il modello di occlusione cerebrale cerebrale centrale (MCAO). L&#39;arteria cerebrale centrale viene bloccata inserendo un monofilamento a fiamma attraverso la comune arteria carotidea. Come uno dei modelli di corsa più utilizzati, il modello MCAO dimostra la rilevanza clinica e l&#39;applicazione di un monofilamento rende più facile la reperfusione. Semplicemente inalando il gas misto normalmente contenente 20% di CO 2 dopo l&#39;insorgenza del reperfusioN, APC ha dimostrato significativi effetti protettivi contro l&#39;ischemia cerebrale indicata da volumi ridotti del cervello.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" width="723">
	<colgroup>
		<col />
		<col />
		<col />
		<col />
	</colgroup>
	<tbody>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Sodium chloride</td>
			<td style="width:183px;">Sigma</td>
			<td style="width:157px;">S5886</td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Potassium chloride</td>
			<td style="width:183px;">Sigma</td>
			<td style="width:157px;">P5405</td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">Potassium phosphate monobasic</td>
			<td style="width:183px;">Sigma</td>
			<td style="width:157px;">P9791</td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Magnesium sulfate</td>
			<td style="width:183px;">Sigma</td>
			<td style="width:157px;">M2643</td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Sodium bicarbonate</td>
			<td style="width:183px;">Sigma</td>
			<td style="width:157px;">S5761</td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Calcium chloride dihydrate</td>
			<td style="width:183px;">Sigma</td>
			<td style="width:157px;">C5080</td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">D-(+)-Glucose</td>
			<td style="width:183px;">Sigma</td>
			<td style="width:157px;">G7021</td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Vibratome</td>
			<td style="width:183px;">Leica</td>
			<td style="width:157px;">VT1000 S</td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">2,3,5-triphenyltetrazolium hydrochloride</td>
			<td style="width:183px;">Sigma</td>
			<td style="width:157px;">T8877</td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">Absolute Ethanol</td>
			<td style="width:183px;">Aladdin Industrial Corporation</td>
			<td style="width:157px;">E111993</td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Dimethyl sulfoxide</td>
			<td style="width:183px;">Sigma</td>
			<td style="width:157px;">D8418</td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">Laser Doppler Flowmetry</td>
			<td style="width:183px;">Moor Instruments Ltd</td>
			<td style="width:157px;">Model Moor VMS-LDF2</td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">Diethyl ether anhydrous</td>
			<td style="width:183px;">Sinopharm Chemical Reagent Corporation</td>
			<td style="width:157px;">80059618</td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">Trichloroacetaldehycle hydrate</td>
			<td style="width:183px;">Sinopharm Chemical Reagent Corporation</td>
			<td style="width:157px;">30037517</td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">10% Formalin</td>
			<td style="width:183px;">Aladdin Industrial Corporation</td>
			<td style="width:157px;">F111936</td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">24-well plates</td>
			<td style="width:183px;">Jet Biofil</td>
			<td style="width:157px;">TCP-010-024</td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

experimental models to study the neuroprotection of acidic postconditioning against cerebral ischemia

L&#39;ictus è una delle principali cause di mortalità e disabilità in tutto il mondo, con approcci terapeutici limitati. Come una strategia endogena per la neuroprotezione, i trattamenti post-condizionatori si sono dimostrati come terapie promettenti contro l&#39;ischemia cerebrale. Tuttavia, complicate procedure e potenziali problemi di sicurezza limitano la loro applicazione clinica. Per superare questi svantaggi, abbiamo sviluppato postcondizionamento acico (APC) come terapia per l&#39;ischemia cerebrale focale sperimentale. APC si riferisce al trattamento di acidosi mite mediante inalazione del CO 2 durante la reperfusione a seguito di ischemia. Qui presentiamo due modelli per eseguire APC in vitro e in vivo rispettivamente. Il trattamento della deprivazione di ossigeno-glucosio (OGD) dei topi e l&#39;occlusione corticostriatale e l&#39;occlusione dell&#39;arteria cerebrale centrale (MCAO) dei topi sono stati impiegati per simulare l&#39;ischemia cerebrale. L&#39;APC può essere ottenuto semplicemente trasferendo le fettucce del cervello in tampone acido con 20% CO 2 , oR per topi inalando 20% di CO 2 . APC ha mostrato significativi effetti protettivi contro l&#39;ischemia cerebrale, come rispecchia la vitalità del tessuto e il volume dell&#39;infarto del cervello.

Nel modello di fetta corticostriatal descritto sopra, la vitalità della fetta corticostriatale è stata quantificata con il dosaggio TTC a 1 h dopo la reperfusione. La conversione TTC è stata calcolata normalizzando l&#39;assorbimento a 490 nm alla fetta di controllo. Secondo la conversione TTC, l&#39;APC è protetto contro lesioni di reperfusione indotte da OGD in un modo di dipendenza dal tempo e dalla durata. In dettaglio, sia 1 e 3 minuti di trattamento dell&#39;acidosi hanno migli...

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Experimental Models to Study the Neuroprotection of Acidic Postconditioning Against Cerebral Ischemia

La postcondizionazione acida protegge contro l&#39;ischemia cerebrale. Qui presentiamo due modelli per eseguire APC. Esse vengono ottenute rispettivamente trasferendo fette corticostriatali in tampone acico dopo la privazione di ossigeno-glucosio in vitro e inalando 20% di CO 2 dopo l&#39;occlusione dell&#39;arteria cerebrale media in vivo .

Modelli sperimentali per studiare la neuroprotezione del post-condizionamento acido contro l&#39;ischemia cerebrale

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