Name: a genetically engineered mouse model of sporadic colorectal cancer
Uploaded: 2017-07-06T12:30:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about A Genetically Engineered Mouse Model of Sporadic Colorectal Cancer at JoVE.com

Ce travail est consacré à la mémoire du professeur Moritz Koch.

Les expériences animales présentées ici ont été revues et approuvées de manière indépendante par un comité institutionnel et gouvernemental de soins et d&#39;utilisation des animaux et ont été menés conformément aux directives de la Fédération des associations de scientifiques de laboratoire (FELASA). Toutes les mesures possibles ont été prises pour minimiser les souffrances, y compris l&#39;anesthésie et l&#39;analgésie ou, si nécessaire, une euthanasie prématurée. 1. In...

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	<li>Siegel, R. L., Miller, K. D., Jemal, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cancer+statistics,+2016.">Cancer statistics, 2016.</a> CA Cancer J Clin. 66 (1), 7-30 (2016).</li><li>Weitz, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Colorectal+cancer.">Colorectal cancer.</a> Lancet. 365 (9454), 153-165 (2005).</li><li>Bork, U., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Prognostic+relevance+of+minimal+residual+disease+in+colorectal+cancer.">Prognostic relevance of minimal residual disease in colorectal cancer.</a> World J Gastroenterol. 20 (30), 10296-10304 (2014).</li><li>Steinert, G., Sch&#246;lch, S., Koch, M., Weitz, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Biology+and+significance+of+circulating+and+disseminated+tumour+cells+in+colorectal+cancer.">Biology and significance of circulating and disseminated tumour cells in colorectal cancer.</a> Langenbecks Arch Surg. 397 (4), 535-542 (2012).</li><li>Garc&#237;a, S. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=LDB1+overexpression+is+a+negative+prognostic+factor+in+colorectal+cancer.">LDB1 overexpression is a negative prognostic factor in colorectal cancer.</a> Oncotarget. 7 (51), 84258-84270 (2016).</li><li>van Noort, V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Novel+Drug+Candidates+for+the+Treatment+of+Metastatic+Colorectal+Cancer+through+Global+Inverse+Gene-Expression+Profiling.">Novel Drug Candidates for the Treatment of Metastatic Colorectal Cancer through Global Inverse Gene-Expression Profiling.</a> Cancer Res. 74 (20), 5690-5699 (2014).</li><li>Nanduri, L. K., Garc&#237;a, S., Weitz, J., Sch&#246;lch, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mouse+Models+of+Colorectal+Cancer-Derived+Circulating+Tumor+Cells.">Mouse Models of Colorectal Cancer-Derived Circulating Tumor Cells.</a> Med Chem (Los Angeles). 6 (7), 497-499 (2016).</li><li>Taketo, M. M., Edelmann, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mouse+models+of+colon+cancer.">Mouse models of colon cancer.</a> Gastroenterology. 136 (3), 780-798 (2009).</li><li>Sch&#246;lch, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Circulating+tumor+cells+exhibit+stem+cell+characteristics+in+an+orthotopic+mouse+model+of+colorectal+cancer.">Circulating tumor cells exhibit stem cell characteristics in an orthotopic mouse model of colorectal cancer.</a> Oncotarget. 7 (19), 27232-27242 (2016).</li><li>Sch&#246;lch, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Radiotherapy+combined+with+TLR7/8+activation+induces+strong+immune+responses+against+gastrointestinal+tumors.">Radiotherapy combined with TLR7/8 activation induces strong immune responses against gastrointestinal tumors.</a> Oncotarget. 6 (7), 4663-4676 (2015).</li><li>Corbett, T. H., Griswold, D. P., Roberts, B. J., Peckham, J. C., Schabel, F. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tumor+induction+relationships+in+development+of+transplantable+cancers+of+the+colon+in+mice+for+chemotherapy+assays,+with+a+note+on+carcinogen+structure.">Tumor induction relationships in development of transplantable cancers of the colon in mice for chemotherapy assays, with a note on carcinogen structure.</a> Cancer Res. 35 (9), 2434-2439 (1975).</li><li>Roper, J., Hung, K. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Priceless+GEMMs:+genetically+engineered+mouse+models+for+colorectal+cancer+drug+development.">Priceless GEMMs: genetically engineered mouse models for colorectal cancer drug development.</a> Trends Pharmacol Sci. 33 (8), 449-455 (2012).</li><li>Hung, K. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Development+of+a+mouse+model+for+sporadic+and+metastatic+colon+tumors+and+its+use+in+assessing+drug+treatment.">Development of a mouse model for sporadic and metastatic colon tumors and its use in assessing drug treatment.</a> Proc Natl Acad Sci USA. 107 (4), 1565-1570 (2010).</li><li>Sharpless, N. E., Depinho, R. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+mighty+mouse:+genetically+engineered+mouse+models+in+cancer+drug+development.">The mighty mouse: genetically engineered mouse models in cancer drug development.</a> Nat Rev Drug Discov. 5 (9), 741-754 (2006).</li><li>Shibata, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Rapid+colorectal+adenoma+formation+initiated+by+conditional+targeting+of+the+Apc+gene.">Rapid colorectal adenoma formation initiated by conditional targeting of the Apc gene.</a> Science. 278 (5335), 120-123 (1997).</li><li>Kuraguchi, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Adenomatous+polyposis+coli+(APC)+is+required+for+normal+development+of+skin+and+thymus.">Adenomatous polyposis coli (APC) is required for normal development of skin and thymus.</a> PLoS Genet. 2 (9), e146 (2006).</li><li>Jackson, E. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Analysis+of+lung+tumor+initiation+and+progression+using+conditional+expression+of+oncogenic+K-ras.">Analysis of lung tumor initiation and progression using conditional expression of oncogenic K-ras.</a> Genes Dev. 15 (24), 3243-3248 (2001).</li><li>Olive, K. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mutant+p53+gain+of+function+in+two+mouse+models+of+Li-Fraumeni+syndrome.">Mutant p53 gain of function in two mouse models of Li-Fraumeni syndrome.</a> Cell. 119 (6), 847-860 (2004).</li><li>Madisen, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+robust+and+high-throughput+Cre+reporting+and+characterization+system+for+the+whole+mouse+brain.">A robust and high-throughput Cre reporting and characterization system for the whole mouse brain.</a> Nature Neurosci. 13 (1), 133-140 (2010).</li><li>Becker, C., Fantini, M. C., Neurath, M. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=High+resolution+colonoscopy+in+live+mice.">High resolution colonoscopy in live mice.</a> Nat Protoc. 1 (6), 2900-2904 (2006).</li><li>Moser, A. R., Pitot, H. C., Dove, W. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+dominant+mutation+that+predisposes+to+multiple+intestinal+neoplasia+in+the+mouse.">A dominant mutation that predisposes to multiple intestinal neoplasia in the mouse.</a> Science. 247 (4940), 322-324 (1990).</li><li>de Wind, N., Dekker, M., Berns, A., Radman, M., te Riele, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Inactivation+of+the+mouse+Msh2+gene+results+in+mismatch+repair+deficiency,+methylation+tolerance,+hyperrecombination,+and+predisposition+to+cancer.">Inactivation of the mouse Msh2 gene results in mismatch repair deficiency, methylation tolerance, hyperrecombination, and predisposition to cancer.</a> Cell. 82 (2), 321-330 (1995).</li><li>Reitmair, A. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Spontaneous+intestinal+carcinomas+and+skin+neoplasms+in+Msh2-deficient+mice.">Spontaneous intestinal carcinomas and skin neoplasms in Msh2-deficient mice.</a> Cancer Res. 56 (16), 3842-3849 (1996).</li><li>Ayala, J. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Standard+operating+procedures+for+describing+and+performing+metabolic+tests+of+glucose+homeostasis+in+mice.">Standard operating procedures for describing and performing metabolic tests of glucose homeostasis in mice.</a> Dis Model Mech. 3 (9-10), 525-534 (2010).</li><li>Jensen, T. L., Kiersgaard, M. K., S&#248;rensen, D. B., Mikkelsen, L. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fasting+of+mice:+a+review.">Fasting of mice: a review.</a> Lab Anim. 47 (4), 225-240 (2013).</li></ol>

Bien qu&#39;ils soient généralement faciles à générer et à maintenir, les modèles de souris CRC classiques basés sur l&#39;injection de ligne cellulaire sont artificiels et ne sont pas en mesure de récapituler complètement la maladie humaine. En conséquence, les GEMM ont été développés. Le premier CRC GEMM était la souris Apc Min , qui abrite une mutation hétérozygote null dans le gène Apc, imitant ainsi la polypose adénomateuse familiale (FAP) de la maladie héréditaire humaine. <sup cla...

Le cancer colorectal (CRC) continue d&#39;être l&#39;une des principales causes de mortalité liée au cancer dans les pays occidentaux. 1 Alors que le pronostic des patients atteints d&#39;une maladie de stade précoce est bon, de nombreuses tumeurs sont diagnostiquées à des stades ultérieurs où, malgré de nombreuses options de traitement, le pronostic est limité. 2 , 3 , 4 , 5 La majorité des modèles actuels de souris de CRC sont basés sur l&#39;implantation de cellules tumorales dérivées de lignées cellulaires ou de tumeurs patientes en souris immunodéficientes. 6 , 7 , 8 Cela conduit à la localisation et, selon le site d&#39;injection et les cellules tumorales utilisées pour l&#39;injection, parfois des tumeurs métastatiques. 9 , 10 Cependant, les modèles de xénogreffe résultants ont majoR limitations. Ils doivent être établis chez des souris immunodéficientes, éliminant ainsi l&#39;interaction complexe entre la tumeur et le système immunitaire de l&#39;hôte. De plus, comme le stroma tumoral est dérivé de cellules hôtes, l&#39;interaction entre le parenchyme tumoral humain et le stroma murin est défectueuse et n&#39;est donc pas représentative de la maladie. Ces lacunes peuvent être évitées par l&#39;utilisation de lignées cellulaires murines pour injection. Cependant, seules quelques lignes de cellules CRC murines sont disponibles et, semblables à la plupart des lignées de cellules CRC humaines disponibles, sont monoclonales et hautement anaplasiques. 11 En résumé, la plupart des modèles de souris CRC actuellement disponibles sont hautement artificiels et ne sont pas entièrement représentatifs de la maladie humaine. Les modèles de souris génétiquement modifiés (GEMM) de CRC peuvent éviter ces inconvénients car ils présentent des tumeurs de souris authentiques qui sont créées par l&#39;induction de mutations clés de CRC dans le côlon. 12 , 13 ,14 Ceci peut être réalisé par l&#39;activation de mutations de la lignée germinale conditionnelle (floxed) par la recombinase cré dans la muqueuse colorectale. Alors que dans les GEMM de nombreuses autres entités tumorales, l&#39;expression de la lignée germinale (inducible) conduite par des promoteurs spécifiques de tissu est utilisée, la lignée germique ne peut pas être utilisée dans le côlon car cela conduit à un grand nombre d&#39;adénomes dans tout le colon provoquant la mort par une charge tumorale bénigne à Un très jeune âge. Par conséquent, dans le modèle décrit ici, un creuset exprimant un vecteur adénoviral est utilisé pour infecter un court segment de côlon. Cela conduit à l&#39;induction de la tumorigénèse dans ce segment de la muqueuse à un moment défini par l&#39;investigateur, ce qui entraîne des adénomes qui progressent finalement vers un carcinome invasif et métastatique. Les tumeurs sont des tumeurs de souris authentiques, poussent dans un micro-environnement intact et sont donc capables de simuler l&#39;intégrité de l&#39;oncogenèse colorectale, y compris l&#39;interaction tumeur-hôte et la cascade métastatique. Ce modèle estDonc une plate-forme attrayante pour les études sur la biologie du cancer et les essais thérapeutiques précliniques. Un inconvénient majeur des modèles de souris génétiquement modifiés de CRC est leur complexité technique. La délivrance de la création locale à l&#39;aide d&#39;enemas rectangulaires adeno-cre chez des souris portant des allèles Apc floxed a été décrite précédemment; Cependant, l&#39;incidence, la multiplicité et l&#39;emplacement des tumeurs intestinales peuvent être très variables avec cette technique. 15 Par conséquent, la technique de confinement de l&#39;infection adéno-creuse par serrage chirurgical du segment à induire a été développée. 13 Nous avons modifié cette procédure afin d&#39;améliorer le bien-être des animaux, ainsi que de réduire la mortalité et le nombre de tumeurs qui en résultent. Avec ce protocole, tous les laboratoires ayant une expérience en chirurgie de petits rongeurs devraient pouvoir reproduire le modèle et produire des tumeurs hautement reproductibles et facilement accessibles à la coloscopie. Selon le m conditionnelLes utilisations utilisées pour la tumorigénèse, le spectre complet de l&#39;adénome, du carcinome invasif et des métastases peuvent être observés. Comme les tumeurs sont situées dans le côlon distal, l&#39;évaluation endoscopique en série est facilement possible dans ce modèle.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>Reagents / consumables</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dulbecco&#39;s Phosphate Buffered Saline</td>
			<td>Life Technologies GmbH</td>
			<td>14190169</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Trypsin-EDTA (0.25%, Phenol-Red)</td>
			<td>Life Technologies GmbH</td>
			<td>25200072</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Normal saline 0.9% (E154)</td>
			<td>Serumwerk Bernburg AG</td>
			<td>10013</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Aqua ad injectabilia</td>
			<td>B. Braun Melsungen AG</td>
			<td>235144</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ad5CMV-Cre (adenovirus, c = 2E+11 PFU/mL)</td>
			<td>Gene Transfer Vector Core 
			University of Iowa</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>15 mL, 50 mL centrifuge tubes</td>
			<td>Greiner Bio-One GmbH</td>
			<td>188271/227270</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Eppendorf tubes 1.5 mL/ 2 mL</td>
			<td>Sarstedt AG &#38; Co.</td>
			<td>72,695,400</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Petri dish PS 100/15 mm (sterile, Nuclon)</td>
			<td>Fisher Scientific GmbH</td>
			<td>10508921/ NUNC150350</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>1 mL Syringe (without dead volume) - Injekt-F SOLO</td>
			<td>Braun/neoLab</td>
			<td>194291661</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>30G injection needle</td>
			<td>BECTON DICKINSON</td>
			<td>304000</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Name</td>
			<td>Company</td>
			<td>Catalog Number</td>
			<td>Comments</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Analgesia / anesthesia</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sevoflurane (Sevoflurane AbbVie)</td>
			<td>AbbVie Germany GmbH &#38; Co. KG</td>
			<td>-</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Medical oxygen</td>
			<td>Air Liquide Medical GmbH</td>
			<td>-</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Buprenorphine (Temgesic)</td>
			<td>Indivior Eu Ltd.</td>
			<td>-</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Bepanthen - ophthalmic ointment</td>
			<td>Bayer Vital GmbH</td>
			<td>10047757</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Table Top Research Anesthesia Machine x/O2 Flush w/ Sevoflurane Vaporizer</td>
			<td>Parkland Scientific</td>
			<td>V3000PS/PK</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Name</td>
			<td>Company</td>
			<td>Catalog Number</td>
			<td>Comments</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Surgical Equipment</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cellulose swabs</td>
			<td>Lohmann &#38; Rauscher Deutschland</td>
			<td>13356</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Insulin syringe EMG 1 mL (with 30G cannula)</td>
			<td>B. Braun Melsungen AG</td>
			<td>9161627S</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fine Bore Tubing (bore: 0.28 mm/ diameter: 0.61mm)</td>
			<td>Smiths Medical Deutschland</td>
			<td>800/100/100</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Micro-Adson Forceps</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>11018-12</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Iris Scissor - ToughCut</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>14058-11</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Olsen-Hegar Needle Holder</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>12002-12</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>AutoClip Kit</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>12020-00</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PDS Z1012H 6/0 C1 (surgical suture)</td>
			<td>Johnson &#38; Johnson Medical GmbH</td>
			<td>Z1012H</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Curved Micro Serrefine Vascular Clamp</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>18055-05</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fogarty Spring Clips</td>
			<td>Edwards</td>
			<td>CDSAFE 6</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hot Plate 062</td>
			<td>Labotect</td>
			<td>13854</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Isis - Hair shaver</td>
			<td>Aesculap - Braun</td>
			<td>-</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Name</td>
			<td>Company</td>
			<td>Catalog Number</td>
			<td>Comments</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Colonoscopy</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cold Light Fountain XENON 175 SCB</td>
			<td>Karl Storz</td>
			<td>20132101-1</td>
			<td>Karl Storz Coloview System Mainz</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fiber Optic Light Cable</td>
			<td>Karl Storz</td>
			<td>69495NL</td>
			<td>Karl Storz Coloview System Mainz</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>TRICAM Three-Chip Camera Head</td>
			<td>Karl Storz</td>
			<td>20221030</td>
			<td>Karl Storz Coloview System Mainz</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>TRICAM SLII Camera Control Unit</td>
			<td>Karl Storz</td>
			<td>20223011-1</td>
			<td>Karl Storz Coloview System Mainz</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>15&#34; Flat Screen Monitor EndoVue</td>
			<td>Karl Storz</td>
			<td>9415NN</td>
			<td>Karl Storz Coloview System Mainz</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>HOPKINS Straight Forward Telescope 
			diameter 1.9 mm; length 10 cm 
			autoclavable 
			fiber optic light transmission incorporated</td>
			<td>Karl Storz</td>
			<td>64301AA</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Protection and Examination Sheath</td>
			<td>Karl Storz</td>
			<td>61029C</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

a genetically engineered mouse model of sporadic colorectal cancer

Malgré les avantages d&#39;une applicabilité et d&#39;une rentabilité faciles, les modèles de souris cancéreuses basées sur l&#39;injection de cellules tumorales ont des limites sévères et ne simulent pas exactement la biologie tumorale et la diffusion de cellules tumorales. Des modèles de souris génétiquement modifiés ont été introduits pour surmonter ces limitations; Cependant, ces modèles sont techniquement exigeants, en particulier dans les grands organes tels que le côlon dans lequel une seule tumeur est souhaitée. En conséquence, un modèle immunocompétent, souris génétiquement modifiée de cancer colorectal a été développé qui développe des tumeurs hautement uniformes et peut être utilisé pour des études de biologie tumorale ainsi que des essais thérapeutiques. Le développement de la tumeur est déclenché par une infection chirurgicale et segmentaire du côlon distal avec le virus adeno-cre chez les souris mutantes conditionnelles composées. Les tumeurs peuvent être facilement détectées et surveillées par coloscopie. Nous décrivons ici la technique chirurgicale de l&#39;infection adénoculaire segmentaire deLe colon, la surveillance de la tumeur par coloscopie à haute résolution et présente les tumeurs colorectales résultantes.

Si elle est correctement réalisée,&gt; 85% des animaux développent des tumeurs. La mortalité de la chirurgie ici présentée est &lt;5%, la mortalité de la coloscopie est pratiquement inexistante. Chez la majorité des souris, une seule lésion est détectée; Dans environ 30% 2 - 3 petits adénomes peuvent être détectés qui se fondent généralement sur une seule tumeur dans les 2 à 3 semaines suivant l&#39;induction de la tumeur. <p class="jove_content" fo:keep-together.wi...

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A Genetically Engineered Mouse Model of Sporadic Colorectal Cancer

Un modèle de souris génétiquement modifiée de cancer colorectal sporadique

Un protocole pour l&#39;établissement d&#39;un modèle de souris génétiquement modifiée de cancer colorectal par une infection segmentaire adeno-cre et sa surveillance par coloscopie à haute résolution est présentée.

Despite the advantages of easy applicability and cost-effectiveness, colorectal cancer mouse models based on tumor cell injection have severe limitations ...

The overall goal of this procedure is to achieve segmental adeno-cre infection of the colon in a genetically engineered mouse model. This method can help answer key questions in the field of colorectal cancer, or CRC, as it provides an excellent model for studying the biology and treatment of CRC. The main advantage of this technique is that any lab with small rodent surgery experience can use this model to produce highly reproducible and easily accessible colon-localized tumors.Begin by placing an anesthetized mouse in the supine position and apply ointment to the animal's eyes. Tape the mouse in a secure position and then confirm the appropriate level of sedation by toe pinch. Make an approximately 15-millimeter midline incision in the skin of the lower abdomen.Then, use forceps to grasp the abdominal wall musculature and carefully incise the muscle with scissors to open the abdominal cavity. After identifying the distal colon, carefully clinch the tissue with a delicate clamp approximately 15 millimeters proximal to the anus. Next, insert a flexible Teflon tube transanally carefully advancing the tube until it reaches the luminal occlusion.Encannulate the tube with a 30-gauge cannula. Connect a standard one-milliliter syringe to the cannula and flush the colon with several milliliters of normal saline until all of the fecal matter has been evacuated. Once the distal colon is empty, replace the saline tube with a new Teflon tube and use a second clamp to occlude the colon approximately three millimeters distal to the first clamp.Using a second one-milliliter syringe equipped with a 30-gauge cannula, carefully inject 50 to 80 microliters of 0.25%trypsin-EDTA into the clamped colon segment. The colon should inflate enough to break up the mucosal barrier without perforating the clamped tissue segment. After 10 minutes, remove the distal clamp.Then, remove the trypsin tube and flush the distal colon with 500 microliters of normal saline. After inserting a new Teflon tube, clamp the colon again and inflate the tissue with 50 to 80 microliters of the adenoviral solution. After 30 minutes, remove the clamps and the tube and close the abdominal wall with 6-0 rapidly absorbable running sutures.Close the skin with surgical wound clips and monitor the animal on a heating pad until it is fully recovered. To monitor tumor growth via colonoscopy, place the anesthetized tumor-bearing animal in the supine position on a heating pad and transanally insert the endoscope into the intestinal tract. Gently insufflate air under visual control to distend the colon.Then, carefully push the scope forward until a mucosal lesion can be identified in the distal colon saving each endoscopic image as it is acquired for later evaluation. When all of the images have been obtained, slowly remove the endoscope and place the mouse on a 38-degree-Celsius heating pad until fully recovered. The tumors can be easily and repeatedly monitored via colonoscopy without major stress for the animals.The disease manifestations are very similar to the human colorectal cancer with the animals first developing adenomas followed ultimately by adenocarcinoma development in the distal colon. Depending on the conditional genotype of the animals, the tumors also metastasize to the peritoneum and the liver. If a fluorescent cre-reporter allele is used, the tumor manifestations can be easily identified by fluorescent protein expression which depending on the reporter allele, may be bright enough to be visualized in daylight.Histologically, 95%of the developing tumors are adenocarcinomas closely resembling human colorectal cancer and feature the entire spectrum of tumor development from non-invasive adenoma to adenocarcinoma invading the surrounding structures. Once mastered, this technique can be completed in 50 minutes if it's performed properly. While attempting this procedure, it is important to remember to give special attention to the vulnerability of the colon at all times.Perforation inevitably leads to peritonitis and sepsis and requires a termination of the enema. Don't forget that working with adenovirus requires biosafety level two safety measures as the virus can be hazardous.

Research

JoVE Journal

Cancer Research

Fluorescent Orthotopic Mouse Model of Pancreatic Cancer

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Pancreatic cancer remains one of the cancers for which survival has not improved substantially in the last few decades. Only 7% of diagnosed patients will ...

Recherche

Recherche en cancérologie

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Cancer-related fatigue (CRF) is a distressing and costly condition that often affects patients receiving cancer treatments, including radiation therapy. ...

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Despite the advantages of easy applicability and cost-effectiveness, subcutaneous mouse models have severe limitations and do not accurately simulate ...

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Utilisant des ultrasons de haute résolution à l’apparition de tumeur de moniteur et de la croissance dans les modèles issus du génie génétique du cancer du pancréas

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Détection d’un Panel de micro-ARN Custom circulant chez les Patients atteints de Cancer Colorectal métastatique

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Tyr::CreER+,BrafCA/+,Ptenlox/lox&#160;genetically engineered mice (Braf/Pten mice) are widely used as an in vivo model of metastatic melanoma. Once a ...

Portal Vein Injection of Colorectal Cancer Organoids to Study the Liver Metastasis Stroma

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Hepatic metastasis of colorectal cancer (CRC) is a leading cause of cancer-related death. Cancer-associated fibroblasts (CAFs), a major component of the ...

Molecular and Immunologic Techniques in a Genetically Engineered Mouse Model of Gastrointestinal Stromal Tumor

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