Name: establishing dual resistance to egfr-tki and met-tki in lung adenocarcinoma cells in vitro with a 2-step dose-escalation procedure
Uploaded: 2017-08-11T14:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Establishing Dual Resistance to EGFR-TKI and MET-TKI in Lung Adenocarcinoma Cells In Vitro with a 2-step Dose-escalation Procedure at JoVE.com

Agradecemos os membros do Instituto de Oncologia Molecular para seus comentários pensativos e conselhos úteis e Editage por sua ajuda com a edição de língua inglesa. Este trabalho foi financiado pelo programa MEXT-suporte para a Fundação de pesquisa estratégica em universidades privadas (2012-2016) do Ministério da educação, cultura, esportes, ciência e tecnologia do Japão. Tohru Ohmori recebeu financiamento (2015-2016) da investigação da Boehringer-Ingelheim (Ingelheim, Alemanha).

1. estabelecer células Gefitinib-resistente
<ol>
	<li>Determine a concentração inicial de gefitinib por ensaio de diphenyltetrazolium 3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-2,5-brometo (MTT).
	<ol>
		<li>PC-9 células em um meio de cultura (meio RPMI-1640 com 10% FBS e 1% de antibióticos (penicilina: 100 U/mL e estreptomicina: 100 µ g/mL)), numa incubadora 5% CO2 a 37 ° C.</li>
		<li>Ajustar as células para 1,0 × 105 células/mL usando uma célula automatizada counter (consulte a <s...

<ol>
	<li>Lynch, T. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Activating+mutations+in+the+epidermal+growth+factor+receptor+underlying+responsiveness+of+non-small-cell+lung+cancer+to+gefitinib.">Activating mutations in the epidermal growth factor receptor underlying responsiveness of non-small-cell lung cancer to gefitinib.</a> N Engl J Med. 350 (21), 2129-2139 (2004).</li><li>Paez, J. G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=EGFR+mutations+in+lung+cancer:+correlation+with+clinical+response+to+gefitinib+therapy.">EGFR mutations in lung cancer: correlation with clinical response to gefitinib therapy.</a> Science. 304 (5676), 1497-1500 (2004).</li><li>Pao, W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=EGF+receptor+gene+mutations+are+common+in+lung+cancers+from+"never+smokers"+and+are+associated+with+sensitivity+of+tumors+to+gefitinib+and+erlotinib.">EGF receptor gene mutations are common in lung cancers from "never smokers" and are associated with sensitivity of tumors to gefitinib and erlotinib.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 101 (36), 13306-13311 (2004).</li><li>Mitsudomi, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mutations+of+the+epidermal+growth+factor+receptor+gene+predict+prolonged+survival+after+gefitinib+treatment+in+patients+with+non-small-cell+lung+cancer+with+postoperative+recurrence.">Mutations of the epidermal growth factor receptor gene predict prolonged survival after gefitinib treatment in patients with non-small-cell lung cancer with postoperative recurrence.</a> J Clin Oncol. 23 (11), 2513-2520 (2005).</li><li>Sequist, L. V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Genotypic+and+histological+evolution+of+lung+cancers+acquiring+resistance+to+EGFR+inhibitors.">Genotypic and histological evolution of lung cancers acquiring resistance to EGFR inhibitors.</a> Sci Transl Med. 3 (75), 75ra26 (2011).</li><li>Engelman, J. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=MET+amplification+leads+to+gefitinib+resistance+in+lung+cancer+by+activating+ERBB3+signaling.">MET amplification leads to gefitinib resistance in lung cancer by activating ERBB3 signaling.</a> Science. 316 (5827), 1039-1043 (2007).</li><li>Schmidt, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Novel+mutations+of+the+MET+proto-oncogene+in+papillary+renal+carcinomas.">Novel mutations of the MET proto-oncogene in papillary renal carcinomas.</a> Oncogene. 18 (14), 2343-2350 (1999).</li><li>Olivero, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Novel+mutation+in+the+ATP-binding+site+of+the+MET+oncogene+tyrosine+kinase+in+a+HPRCC+family.">Novel mutation in the ATP-binding site of the MET oncogene tyrosine kinase in a HPRCC family.</a> Int J Cancer. 82 (5), 640-643 (1999).</li><li>Janne, P. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=AZD9291+in+EGFR+inhibitor-resistant+non-small-cell+lung+cancer.">AZD9291 in EGFR inhibitor-resistant non-small-cell lung cancer.</a> N Engl J Med. 372 (18), 1689-1699 (2015).</li><li>Bean, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=MET+amplification+occurs+with+or+without+T790M+mutations+in+EGFR+mutant+lung+tumors+with+acquired+resistance+to+gefitinib+or+erlotinib.">MET amplification occurs with or without T790M mutations in EGFR mutant lung tumors with acquired resistance to gefitinib or erlotinib.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 104 (52), 20932-20937 (2007).</li><li>. NCT02468661 - ClinicalTrials.gov Available from: <a target="_blank" href="https://clinicaltrials.gov/ct2/show/NCT02468661">https://clinicaltrials.gov/ct2/show/NCT02468661</a> (2017)</li><li>Yamaoka, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Acquired+Resistance+Mechanisms+to+Combination+Met-TKI/EGFR-TKI+Exposure+in+Met-Amplified+EGFR-TKI-Resistant+Lung+Adenocarcinoma+Harboring+an+Activating+EGFR+Mutation.">Acquired Resistance Mechanisms to Combination Met-TKI/EGFR-TKI Exposure in Met-Amplified EGFR-TKI-Resistant Lung Adenocarcinoma Harboring an Activating EGFR Mutation.</a> Mol Cancer Ther. 15 (12), 3040-3054 (2016).</li><li>Mosmann, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Rapid+colorimetric+assay+for+cellular+growth+and+survival:+application+to+proliferation+and+cytotoxicity+assays.">Rapid colorimetric assay for cellular growth and survival: application to proliferation and cytotoxicity assays.</a> J Immunol Methods. 65 (1-2), 55-63 (1983).</li><li>Cifone, M. A., Fidler, I. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Correlation+of+patterns+of+anchorage-independent+growth+with+in+vivo+behavior+of+cells+from+a+murine+fibrosarcoma.">Correlation of patterns of anchorage-independent growth with in vivo behavior of cells from a murine fibrosarcoma.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 77 (2), 1039-1043 (1980).</li><li>Ercan, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Amplification+of+EGFR+T790M+causes+resistance+to+an+irreversible+EGFR+inhibitor.">Amplification of EGFR T790M causes resistance to an irreversible EGFR inhibitor.</a> Oncogene. 29 (16), 2346-2356 (2010).</li><li>Ogino, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Emergence+of+epidermal+growth+factor+receptor+T790M+mutation+during+chronic+exposure+to+gefitinib+in+a+non+small+cell+lung+cancer+cell+line.">Emergence of epidermal growth factor receptor T790M mutation during chronic exposure to gefitinib in a non small cell lung cancer cell line.</a> Cancer Res. 67 (16), 7807-7814 (2007).</li><li>Ando, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Enhancement+of+sensitivity+to+tumor+necrosis+factor+alpha+in+non-small+cell+lung+cancer+cells+with+acquired+resistance+to+gefitinib.">Enhancement of sensitivity to tumor necrosis factor alpha in non-small cell lung cancer cells with acquired resistance to gefitinib.</a> Clin Cancer Res. 11 (24 Pt 1), 8872-8879 (2005).</li><li>Suda, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Reciprocal+and+complementary+role+of+MET+amplification+and+EGFR+T790M+mutation+in+acquired+resistance+to+kinase+inhibitors+in+lung+cancer.">Reciprocal and complementary role of MET amplification and EGFR T790M mutation in acquired resistance to kinase inhibitors in lung cancer.</a> Clin Cancer Res. 16 (22), 5489-5498 (2010).</li><li>Shien, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Acquired+resistance+to+EGFR+inhibitors+is+associated+with+a+manifestation+of+stem+cell-like+properties+in+cancer+cells.">Acquired resistance to EGFR inhibitors is associated with a manifestation of stem cell-like properties in cancer cells.</a> Cancer Res. 73 (10), 3051-3061 (2013).</li><li>Sagawa, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Establishment+of+three+cisplatin-resistant+endometrial+cancer+cell+lines+using+two+methods+of+cisplatin+exposure.">Establishment of three cisplatin-resistant endometrial cancer cell lines using two methods of cisplatin exposure.</a> Tumour Biol. 32 (2), 399-408 (2011).</li><li>Ritter, C. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Human+breast+cancer+cells+selected+for+resistance+to+trastuzumab+in+vivo+overexpress+epidermal+growth+factor+receptor+and+ErbB+ligands+and+remain+dependent+on+the+ErbB+receptor+network.">Human breast cancer cells selected for resistance to trastuzumab in vivo overexpress epidermal growth factor receptor and ErbB ligands and remain dependent on the ErbB receptor network.</a> Clin Cancer Res. 13 (16), 4909-4919 (2007).</li></ol>

O protocolo descrito aqui pode ser usado para o estabelecimento de dual-resistência adquirida nas células cancerosas, usando um método de dose de 2-passo-escalada em vitro. Muitas pesquisas têm relatado que o PC-9 células desenvolveram EGFR-TKI (gefitinib ou erlotinib) resistência através do EGFR T790M mutações15,16. No entanto, nós não detectar T790M mutações no exon 20 das nossas células de PC-9MET1000 por sequenciamento direto (<strong c...

Oncogênicas mutações no receptor do fator de crescimento epidérmico (EGFR) encontram-se em um subconjunto dos pacientes com câncer de pulmão não-pequenas células (NSCLC) e são importantes biomarcadores preditivos desta doença1,2. Estas ativando mutações do EGFR mais comumente ocorrem como uma exclusão em-frame no exon 19 (delE746-A750) ou uma mutação de ponto substituindo leucina com arginina no códon 858 da exon 21 (L858R) no EGFR tirosina quinase domínio3,4. O tratamento com inibidores de EGFR-tirosina quinase (TKIs) é uma terapia clinicamente eficaz para pacientes com NSCLC abrigando mutações do EGFR. No entanto, esta terapia é limitada pela inevitável aquisição da resistência ao EGFR-TKIs como gefitinib e erlotinib. A resistência adquirida mais comum ocorre através de uma mutação T790M secundária no exon 20 EGFR, que foi detectado em aproximadamente 60% dos pacientes que adquiriram resistência de EGFR-TKI (gefitinib ou erlotinib). Outros mecanismos moleculares associados a resistência adquirida para EGFR-TKIs são ativação de sinalização de desvio causado pela amplificação do MET, transformação de cânceres de pulmão de pequenas células e epiteliais e mesenquimais transição5,6. O receptor para o fator de crescimento do hepatócito, codificado pelo gene MET, que é dysregulatedin muitos tumores, tem sido relatada a ser alvo de um importante candidato para terapias7,8.
Estratégias para superar a resistência adquirida para EGFR-TKIs agora estão passando por avaliação clínica. Estudos pré-clínicos e clínicos têm demonstrado que inibidores do EGFR de terceira geração como osimertinib são eficazes para pacientes com mutação T790M9. Além disso, o crescimento de cânceres de EGFR mutante com amplificação do MET pode ser inibido pelo tratamento combinado com TKIs EGFR - e MET6,10. Ensaios clínicos avaliando uma combinação de inibidores da MET e EGFR em pacientes com resistência adquirida ao gefitinib e erlotinib agora em curso são11.
Para estudar o mecanismo molecular de resistência adquirida aos agentes quimioterápicos, linhas celulares que inicialmente respondem aos inibidores são tratadas continuamente com estes inibidores. Dois métodos estão disponíveis para estabelecer a resistência adquirida em linhas celulares. Um é dose-escalada gradual, e o outro é a exposição de alta concentração. O método de escalonamento gradual tem sido mais comumente usado, porque tem uma maior taxa de sucesso. As células são primeiro expostas a baixas concentrações dos inibidores, quase um décimo do valor máximo meia concentração inibitória (IC50), e a concentração em seguida é aumentada gradualmente por 10-30% até que a concentração alvo é alcançada. O método de exposição de alta concentração envolve expor as células para a última dose do inibidor do meio de cultura, que é mais do que o valor de IC50 , para que as células parentais são quase completamente mortas. Este método de alta concentração de exposição tem muito uma menor taxa de sucesso do que o método de escalonamento em etapas.
Em um estudo anterior, tratamento combinado com EGFR-TKI e MET-TKI foi mostrado para ser eficaz em um sistema in vitro . Resistência adquirida a um TKI-EFGR, gefitinib, foi estabelecida por meio de escalada gradual por 12 meses, junto com a amplificação da MET, e assim, uma linhagem de células resistentes ao gefitinib chamada PC-9MET1000 foi gerado12.
O protocolo aqui apresentado é um procedimento de escalonamento de dose em duas etapas para a obtenção de uma mutação de EGFR NSCLC PC-9 células com dupla resistência para o EGFR-TKI, gefitinib e uma MET-TKI, PHA665752 (Figura 1). Esse método para o estabelecimento que adquiriu resistente em linhas celulares é relativamente fácil de realizar, com uma elevada taxa de sucesso. O protocolo descrito pode ser modificado para aplicação com inibidores de outras drogas de alvo molecular e agentes citotóxicos também.

<table width="970">
	<tbody>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="width:365px;height:21px;">RPMI-1640</td>
			<td style="width:177px;">Wako</td>
			<td style="width:119px;">189-02025</td>
			<td style="width:309px;">with L-Glutamine and Phenol Red</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">CellTiter 96</td>
			<td style="width:177px;">Promega</td>
			<td style="width:119px;">G4100</td>
			<td>Non-Radioactive Cell Proliferation Assay</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="width:365px;height:21px;">FBS</td>
			<td style="width:177px;">gibco</td>
			<td style="width:119px;">26140-079</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="width:365px;height:21px;">Pen Strep</td>
			<td style="width:177px;">gibco</td>
			<td style="width:119px;">15140-163</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="width:365px;height:21px;">gefitinib</td>
			<td style="width:177px;">Selleck</td>
			<td style="width:119px;">S1025</td>
			<td>stocked 10 mM/EMSO at -20&#186;C</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="width:365px;height:21px;">PHA665752</td>
			<td style="width:177px;">Selleck</td>
			<td style="width:119px;">S1070</td>
			<td>stocked 10 mM/EMSO at -20&#186;C</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="width:365px;height:21px;">96-well plate</td>
			<td style="width:177px;">IWAKI</td>
			<td style="width:119px;">860-096</td>
			<td>flat bottom with lid, low evaporation type</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="width:365px;height:21px;">TC10 Automated Cell Counter</td>
			<td style="width:177px;">BIO RAD</td>
			<td>#1450010</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="26">
			<td height="26" style="width:365px;height:26px;">CellTiter 96 Non-Radioactive Cell Proliferation Assay</td>
			<td style="width:177px;">Promega</td>
			<td style="width:119px;">G4100</td>
			<td style="width:309px;">Dye Solution and Solubilization/Stop Solution</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Powerscan HT microplate reader</td>
			<td>BioTek</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="26">
			<td height="26" style="width:365px;height:26px;">GraphPad Prism v.5.0 software</td>
			<td style="width:177px;">GraphPad Inc.</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="26">
			<td height="26" style="width:365px;height:26px;">PC-9</td>
			<td style="width:177px;">Riken BioResource Center</td>
			<td style="width:119px;">RCB4455</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="width:365px;height:21px;">P100 dish</td>
			<td style="width:177px;">FALCON</td>
			<td align="right" style="width:119px;">353003</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

establishing dual resistance to egfr-tki and met-tki in lung adenocarcinoma cells in vitro with a 2-step dose-escalation procedure

Resistência às drogas é um grande desafio na terapia do câncer. A geração de sublines resistente em vitro é necessária para descobrir novos mecanismos para superar este desafio. Aqui, um método de dose de 2-passo-escalada para estabelecer dual-resistência para um receptor de fator de crescimento epidérmico (EGFR)-inibidor de tirosina quinase (TKI), gefitinib e uma MET-TKI, PHA665752, é descrito. Este método é baseado na simples dose-escalada gradual de inibidores para induzir adquiriu resistência em linhas celulares. O método alternativo para a geração de sublines resistentes envolve expor as células para altas concentrações do inibidor em uma única etapa. O método de dose-escalada gradual tem uma maior possibilidade de sucesso induzindo adquiriu resistência do que esse método. Ativando o EGFR mutações são biomarcadores da resposta ao tratamento com EGFR-TKI, que é um tratamento de primeira linha aplicado para cânceres de pulmão não-pequenas células (NSCLC) que hospedam essas mutações. No entanto, apesar dos relatos de respostas eficazes, o uso de EGFR-TKI é limitado porque tumores inevitavelmente adquirem resistência. Os principais mecanismos por trás da resistência do EGFR-TKI incluem uma mutação secundária no local o porteiro, T790M no exon 20 de EGFR e um sinal de desvio de MET. Assim, uma potencial solução para esse problema seria uma combinação de EGFR-TKI e MET-TKI. Este tratamento combinado tem demonstrado ser eficaz em um modelo de estudo in vitro . Gefitinib-resistência adquirida foi estabelecida por meio de amplificação da MET por dose-escalada gradual de gefitinib por 12 meses, e uma linha de celular chamada PC-9MET1000 foi gerada em um estudo anterior. Para investigar os mecanismos da MET-TKI adquirida e EGFR-TKI resistência, um MET-TKI, PHA665752, foi administrada para estas células com dose-escalada gradual na presença de gefitinib por 12 meses. Este protocolo também foi aplicado com êxito para um número de terapias de combinação para estabelecer a resistência adquirida de outras moléculas de inibidor.

A visão geral do protocolo apresentado neste manuscrito é mostrado na Figura 1, incluindo a indução de dual-resistência adquirida para gefitinib e PHA665752 em células de PC-9 por um procedimento de dose de 2-passo-escalonamento. A Figura 2 mostra uma diminuição da proliferação de células parentais do PC-9 como a concentração de aumentos de gefitinib. Isso indica que o PC-9 células tornou-se sensível ao gefitinib a...

Watch this Scientific Journal Video about Establishing Dual Resistance to EGFR-TKI and MET-TKI in Lung Adenocarcinoma Cells In Vitro with a 2-step Dose-escalation Procedure at JoVE.com

Establishing Dual Resistance to EGFR-TKI and MET-TKI in Lung Adenocarcinoma Cells In Vitro with a 2-step Dose-escalation Procedure

É descrito um método em vitro para estabelecer a resistência dupla para um EGFR-TKI e uma MET-TKI em células cancerosas. Este método é útil para o desenvolvimento de tratamentos para pacientes com EGFR-mutações, que apresentam progressão da doença apesar do tratamento de EGFR-TKI com MET-amplificação. Ele também pode ser modificado por inibidores como alvo outras moléculas.

Estabelecimento de dupla resistência de EGFR-TKI e conheci-TKI em Lung Adenocarcinoma células In Vitro com um procedimento passo-2 Dose-escalada

Drug resistance is a major challenge in cancer therapy. The generation of resistant sublines in vitro is necessary for discovering novel mechanisms to ...

Research

JoVE Journal

Cancer Research

Establishing Dual Resistance to EGFR-TKI and MET-TKI in Lung Adenocarcinoma Cells In Vitro with a 2-step Dose-escalation Procedure

Long-term High-Resolution Intravital Microscopy in the Lung with a Vacuum Stabilized Imaging Window

De longo prazo de alta resolução Intravital Microscopia no pulmão com um vácuo estabilizado Janela de imagem

Metastasis to secondary sites such as the lung, liver and bone is a traumatic event with a mortality rate of approximately 90% 1. Of these sites, the lung ...

Pesquisa do câncer

Using RNA-sequencing to Detect Novel Splice Variants Related to Drug Resistance in In Vitro Cancer Models

Using RNA-sequencing to Detect Novel Splice Variants Related to Drug Resistance in In Vitro Cancer Models

Usando RNA-sequenciação para detectar Novel Splice variantes relacionadas à resistência aos medicamentos em<em&gt; In Vitro</em&gt; modelos de cancro

Drug resistance remains a major problem in the treatment of cancer for both hematological malignancies and solid tumors. Intrinsic or acquired resistance ...

Moving Upwards: A Simple and Flexible In Vitro Three-dimensional Invasion Assay Protocol

Moving Upwards: A Simple and Flexible In Vitro Three-dimensional Invasion Assay Protocol

Se movendo para cima: Um simples e flexível em Vitro invasão tridimensional protocolo do ensaio

Although 3D invasion assays have been developed, the challenge remains to study cells without affecting the integrity of their microenvironment. ...

Orthotopic Transplantation of Syngeneic Lung Adenocarcinoma Cells to Study PD-L1 Expression

Ortotópico transplante de células de Adenocarcinoma de pulmão Syngeneic para estudar a expressão de PD-L1

The use of mouse models is indispensable for studying the pathophysiology of various diseases. With respect to lung cancer, several models are available, ...

Mesenchymal Stem Cell Isolation from Pulp Tissue and Co-Culture with Cancer Cells to Study Their Interactions

Isolamento de células-tronco mesenquimais de tecido pulpar e co-cultura com células cancerosas para estudar suas interações

Cancer as a multistep process and complicated disease is not only regulated by individual cell proliferation and growth but also controlled by tumor ...

Establishment and Characterization of Three Afatinib-resistant Lung Adenocarcinoma PC-9 Cell Lines Developed with Increasing Doses of Afatinib

Estabelecimento e caracterização de três linhagens de células PC-9 de adenocarcinoma de pulmão resistentes ao Afatinib desenvolvidas com doses crescentes de Afatinib

Acquired resistance to molecular target inhibitors is a severe problem in cancer therapy. Lung cancer remains the leading cause of cancer-related death in ...

In Vitro Assay to Study Tumor-macrophage Interaction

Ensaio in vitro para estudo do tumor-interação macrófago

Tumor associated macrophages (TAMs) account for a large percentage of cells in the tumor mass for different types of cancers. Glioblastoma (GBM), a ...

In Vitro Evaluation of Oncogenic Transformation in Human Mammary Epithelial Cells

Avaliação In Vitro da Transformação Oncogênica em Células Epiteliais Mamárias Humanas

Tumorigenesis is a multi-step process in which cells acquire capabilities&#160;that allow their growth, survival, and dissemination under hostile ...

Using Computer-based Image Analysis to Improve Quantification of Lung Metastasis in the 4T1 Breast Cancer Model

Usando análise de imagem baseada em computador para melhorar a quantificação da metástase pulmonar no modelo de câncer de mama 4T1

Breast cancer is a devastating malignancy, accounting for 40,000 female deaths and 30% of new female cancer diagnoses in the United States in 2019 alone. ...

Chemical Conjugation of a Purified DEC-205-Directed Antibody with Full-Length Protein for Targeting Mouse Dendritic Cells In Vitro and In Vivo

Chemical Conjugation of a Purified DEC-205-Directed Antibody with Full-Length Protein for Targeting Mouse Dendritic Cells In Vitro and In Vivo

Conjugação Química de um anticorpo purificado DEC-205-Directed com proteína de comprimento completo para direcionar células dendríticas de camundongos in vitro e in vivo

Targeted antigen delivery to cross-presenting dendritic cells (DC) in vivo efficiently induces T effector cell responses and displays a valuable approach ...