Name: establishing dual resistance to egfr-tki and met-tki in lung adenocarcinoma cells in vitro with a 2-step dose-escalation procedure
Uploaded: 2017-08-11T14:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Establishing Dual Resistance to EGFR-TKI and MET-TKI in Lung Adenocarcinoma Cells In Vitro with a 2-step Dose-escalation Procedure at JoVE.com

Vi tacka medlemmarna i Institutet för molekylär onkologi för deras genomtänkta kommentarer och goda råd, och Editage för deras hjälp med engelska språkgranskning. Detta arbete stöds av MEXT-stödda programmet för stiftelsen strategisk forskning vid privata universitet (2012-2016) från ministeriet för utbildning, kultur, sport, vetenskap och teknik i Japan. Tohru Ohmori fått forskningsmedel (2015-2016) från Boehringer-Ingelheim (Ingelheim, Tyskland).

1. upprätta Gefitinib-resistenta celler
<ol>
	<li>Bestäm första gefitinib genom 3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyltetrazolium metylbromid (MTT) analys.
	<ol>
		<li>Kultur PC-9 celler i odlingsmedium (RPMI-1640 medium med 10% FBS och 1% antibiotika (penicillin: 100 U/mL och streptomycin: 100 µg/mL)), i en 5% CO2 inkubator vid 37 ° C.</li>
		<li>Justera celler till 1,0 × 105 celler/mL med hjälp av en automatiserad cell counter (se tabell av material) o...

<ol>
	<li>Lynch, T. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Activating+mutations+in+the+epidermal+growth+factor+receptor+underlying+responsiveness+of+non-small-cell+lung+cancer+to+gefitinib.">Activating mutations in the epidermal growth factor receptor underlying responsiveness of non-small-cell lung cancer to gefitinib.</a> N Engl J Med. 350 (21), 2129-2139 (2004).</li><li>Paez, J. G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=EGFR+mutations+in+lung+cancer:+correlation+with+clinical+response+to+gefitinib+therapy.">EGFR mutations in lung cancer: correlation with clinical response to gefitinib therapy.</a> Science. 304 (5676), 1497-1500 (2004).</li><li>Pao, W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=EGF+receptor+gene+mutations+are+common+in+lung+cancers+from+"never+smokers"+and+are+associated+with+sensitivity+of+tumors+to+gefitinib+and+erlotinib.">EGF receptor gene mutations are common in lung cancers from "never smokers" and are associated with sensitivity of tumors to gefitinib and erlotinib.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 101 (36), 13306-13311 (2004).</li><li>Mitsudomi, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mutations+of+the+epidermal+growth+factor+receptor+gene+predict+prolonged+survival+after+gefitinib+treatment+in+patients+with+non-small-cell+lung+cancer+with+postoperative+recurrence.">Mutations of the epidermal growth factor receptor gene predict prolonged survival after gefitinib treatment in patients with non-small-cell lung cancer with postoperative recurrence.</a> J Clin Oncol. 23 (11), 2513-2520 (2005).</li><li>Sequist, L. V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Genotypic+and+histological+evolution+of+lung+cancers+acquiring+resistance+to+EGFR+inhibitors.">Genotypic and histological evolution of lung cancers acquiring resistance to EGFR inhibitors.</a> Sci Transl Med. 3 (75), 75ra26 (2011).</li><li>Engelman, J. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=MET+amplification+leads+to+gefitinib+resistance+in+lung+cancer+by+activating+ERBB3+signaling.">MET amplification leads to gefitinib resistance in lung cancer by activating ERBB3 signaling.</a> Science. 316 (5827), 1039-1043 (2007).</li><li>Schmidt, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Novel+mutations+of+the+MET+proto-oncogene+in+papillary+renal+carcinomas.">Novel mutations of the MET proto-oncogene in papillary renal carcinomas.</a> Oncogene. 18 (14), 2343-2350 (1999).</li><li>Olivero, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Novel+mutation+in+the+ATP-binding+site+of+the+MET+oncogene+tyrosine+kinase+in+a+HPRCC+family.">Novel mutation in the ATP-binding site of the MET oncogene tyrosine kinase in a HPRCC family.</a> Int J Cancer. 82 (5), 640-643 (1999).</li><li>Janne, P. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=AZD9291+in+EGFR+inhibitor-resistant+non-small-cell+lung+cancer.">AZD9291 in EGFR inhibitor-resistant non-small-cell lung cancer.</a> N Engl J Med. 372 (18), 1689-1699 (2015).</li><li>Bean, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=MET+amplification+occurs+with+or+without+T790M+mutations+in+EGFR+mutant+lung+tumors+with+acquired+resistance+to+gefitinib+or+erlotinib.">MET amplification occurs with or without T790M mutations in EGFR mutant lung tumors with acquired resistance to gefitinib or erlotinib.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 104 (52), 20932-20937 (2007).</li><li>. NCT02468661 - ClinicalTrials.gov Available from: <a target="_blank" href="https://clinicaltrials.gov/ct2/show/NCT02468661">https://clinicaltrials.gov/ct2/show/NCT02468661</a> (2017)</li><li>Yamaoka, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Acquired+Resistance+Mechanisms+to+Combination+Met-TKI/EGFR-TKI+Exposure+in+Met-Amplified+EGFR-TKI-Resistant+Lung+Adenocarcinoma+Harboring+an+Activating+EGFR+Mutation.">Acquired Resistance Mechanisms to Combination Met-TKI/EGFR-TKI Exposure in Met-Amplified EGFR-TKI-Resistant Lung Adenocarcinoma Harboring an Activating EGFR Mutation.</a> Mol Cancer Ther. 15 (12), 3040-3054 (2016).</li><li>Mosmann, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Rapid+colorimetric+assay+for+cellular+growth+and+survival:+application+to+proliferation+and+cytotoxicity+assays.">Rapid colorimetric assay for cellular growth and survival: application to proliferation and cytotoxicity assays.</a> J Immunol Methods. 65 (1-2), 55-63 (1983).</li><li>Cifone, M. A., Fidler, I. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Correlation+of+patterns+of+anchorage-independent+growth+with+in+vivo+behavior+of+cells+from+a+murine+fibrosarcoma.">Correlation of patterns of anchorage-independent growth with in vivo behavior of cells from a murine fibrosarcoma.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 77 (2), 1039-1043 (1980).</li><li>Ercan, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Amplification+of+EGFR+T790M+causes+resistance+to+an+irreversible+EGFR+inhibitor.">Amplification of EGFR T790M causes resistance to an irreversible EGFR inhibitor.</a> Oncogene. 29 (16), 2346-2356 (2010).</li><li>Ogino, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Emergence+of+epidermal+growth+factor+receptor+T790M+mutation+during+chronic+exposure+to+gefitinib+in+a+non+small+cell+lung+cancer+cell+line.">Emergence of epidermal growth factor receptor T790M mutation during chronic exposure to gefitinib in a non small cell lung cancer cell line.</a> Cancer Res. 67 (16), 7807-7814 (2007).</li><li>Ando, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Enhancement+of+sensitivity+to+tumor+necrosis+factor+alpha+in+non-small+cell+lung+cancer+cells+with+acquired+resistance+to+gefitinib.">Enhancement of sensitivity to tumor necrosis factor alpha in non-small cell lung cancer cells with acquired resistance to gefitinib.</a> Clin Cancer Res. 11 (24 Pt 1), 8872-8879 (2005).</li><li>Suda, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Reciprocal+and+complementary+role+of+MET+amplification+and+EGFR+T790M+mutation+in+acquired+resistance+to+kinase+inhibitors+in+lung+cancer.">Reciprocal and complementary role of MET amplification and EGFR T790M mutation in acquired resistance to kinase inhibitors in lung cancer.</a> Clin Cancer Res. 16 (22), 5489-5498 (2010).</li><li>Shien, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Acquired+resistance+to+EGFR+inhibitors+is+associated+with+a+manifestation+of+stem+cell-like+properties+in+cancer+cells.">Acquired resistance to EGFR inhibitors is associated with a manifestation of stem cell-like properties in cancer cells.</a> Cancer Res. 73 (10), 3051-3061 (2013).</li><li>Sagawa, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Establishment+of+three+cisplatin-resistant+endometrial+cancer+cell+lines+using+two+methods+of+cisplatin+exposure.">Establishment of three cisplatin-resistant endometrial cancer cell lines using two methods of cisplatin exposure.</a> Tumour Biol. 32 (2), 399-408 (2011).</li><li>Ritter, C. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Human+breast+cancer+cells+selected+for+resistance+to+trastuzumab+in+vivo+overexpress+epidermal+growth+factor+receptor+and+ErbB+ligands+and+remain+dependent+on+the+ErbB+receptor+network.">Human breast cancer cells selected for resistance to trastuzumab in vivo overexpress epidermal growth factor receptor and ErbB ligands and remain dependent on the ErbB receptor network.</a> Clin Cancer Res. 13 (16), 4909-4919 (2007).</li></ol>

Protokollet beskrivs här kan användas för etableringen av förvärvad dual-resistens i cancerceller använder en 2-stegs-dosupptrappning metod in vitro. Många forskningsrapporter har rapporterat att PC-9 celler utvecklas EGFR-TKI (gefitinib eller erlotinib) motstånd genom T790M EGFR mutationer15,16. Dock gjorde vi inte upptäcka T790M mutationer i exon 20 av våra PC-9MET1000 celler av sekvensering (figur 4 c). Dessutom...

Onkogena mutationer i den epidermal tillväxtfaktor (EGFR) finns i en undergrupp av patienter med icke-småcellig lungcancer (NSCLC) och är viktiga Prediktiva biomarkörer för denna sjukdom1,2. Dessa aktiverande EGFR-mutationer vanligast förekomma antingen som en i-frame borttagning i exon 19 (delE746-A750) eller en punktmutation som ersätter leucin med arginin vid kodon 858 av exon 21 (L858R) i EGFR tyrosin Kinas domän3,4. Behandling med EGFR-tyrosinkinashämmare (TKI) är en kliniskt effektiv terapi för patienter med NSCLC härbärgerat EGFR-mutationer. Denna behandling är dock begränsad av oundvikliga förvärvet av resistens mot EGFR-TKI såsom gefitinib och erlotinib. Den vanligaste förvärvad resistens uppstår genom en sekundär T790M mutation i exon 20 av EGFR, som upptäcktes i cirka 60% av patienterna som förvärvat EGFR-TKI (gefitinib eller erlotinib) motstånd. Andra molekylära mekanismer som är associerad med förvärvad resistens mot EGFR-TKI är aktivering av bypass signalering orsakas av MET amplifiering, omvandling av små-cellig lung cancer och epitelial-till-mesenkymala övergången5,6. Receptorn för hepatocyte tillväxtfaktorn, kodas av genen MET, som är dysregulatedin många tumörer, har rapporterats vara en viktig kandidat för riktade terapier7,8.
Strategier för att övervinna den förvärvad resistensen mot EGFR-TKI nu genomgår klinisk utvärdering. Prekliniska och kliniska studier har visat att tredje generationens EGFR-hämmare såsom osimertinib är effektiv för patienter med T790M mutation9. Dessutom kan tillväxten av EGFR-mutant cancerformer med MET förstärkning hämmas av kombinerad behandling med EGFR - och MET-TKI6,10. Kliniska prövningar bedömningen av en kombination av MET och EGFR-hämmare hos patienter med förvärvad resistens mot gefitinib och erlotinib är pågår nu11.
För att studera den molekylära mekanismen av förvärvad resistens mot kemoterapeutika, behandlas cellinjer som initialt reagerar på hämmare kontinuerligt med dessa hämmare. Det finns två metoder att upprätta förvärvad resistens i cellinjer. En är stegvis dosökning, och den andra är högkoncentrerad exponering. Stegvis upptrappning metoden har använts oftare, eftersom det har större framgång. Cellerna är först utsätts för låga koncentrationer av hämmare, nästan en tiondel av värdet halv maximal hämmande koncentration (IC50), och koncentrationen ökas sedan gradvis med 10-30% tills målet koncentrationen uppnås. Metoden högkoncentrerad exponering innebär att utsätta celler till den sista dosen av hämmare i odlingsmediet, vilket är mer än värdet IC50 , så de föräldrarna cellerna dödas nästan helt. Högkoncentrerad exponering metoden har mycket en lägre framgång än metoden stegvis upptrappning.
I en tidigare studie visade kombinerad behandling med EGFR-TKI och MET-TKI sig vara effektivt i ett in vitro -system. Förvärvad resistens mot en eGFR-TKI, gefitinib, inrättades genom stegvis upptrappning i 12 månader, tillsammans med MET-amplifiering, och således en gefitinib-resistenta cellinje som kallas PC-9MET1000 var genererade12.
Det protokoll som presenteras här är ett tvåstegsförfarande dosupptrappning för att erhålla EGFR-muterade NSCLC PC-9 celler med dubbla motstånd mot den EGFR-TKI, gefitinib och en MET-TKI, PHA665752 (figur 1). Denna metod för att fastställa förvärvat resistenta i cellinjer är relativt lätt att utföra, med en hög framgång. Protokollet beskrivs kan ändras för tillämpning med hämmare av andra molekylära målet droger och cytotoxiska medel samt.

<table width="970">
	<tbody>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="width:365px;height:21px;">RPMI-1640</td>
			<td style="width:177px;">Wako</td>
			<td style="width:119px;">189-02025</td>
			<td style="width:309px;">with L-Glutamine and Phenol Red</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">CellTiter 96</td>
			<td style="width:177px;">Promega</td>
			<td style="width:119px;">G4100</td>
			<td>Non-Radioactive Cell Proliferation Assay</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="width:365px;height:21px;">FBS</td>
			<td style="width:177px;">gibco</td>
			<td style="width:119px;">26140-079</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="width:365px;height:21px;">Pen Strep</td>
			<td style="width:177px;">gibco</td>
			<td style="width:119px;">15140-163</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="width:365px;height:21px;">gefitinib</td>
			<td style="width:177px;">Selleck</td>
			<td style="width:119px;">S1025</td>
			<td>stocked 10 mM/EMSO at -20&#186;C</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="width:365px;height:21px;">PHA665752</td>
			<td style="width:177px;">Selleck</td>
			<td style="width:119px;">S1070</td>
			<td>stocked 10 mM/EMSO at -20&#186;C</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="width:365px;height:21px;">96-well plate</td>
			<td style="width:177px;">IWAKI</td>
			<td style="width:119px;">860-096</td>
			<td>flat bottom with lid, low evaporation type</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="width:365px;height:21px;">TC10 Automated Cell Counter</td>
			<td style="width:177px;">BIO RAD</td>
			<td>#1450010</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="26">
			<td height="26" style="width:365px;height:26px;">CellTiter 96 Non-Radioactive Cell Proliferation Assay</td>
			<td style="width:177px;">Promega</td>
			<td style="width:119px;">G4100</td>
			<td style="width:309px;">Dye Solution and Solubilization/Stop Solution</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Powerscan HT microplate reader</td>
			<td>BioTek</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="26">
			<td height="26" style="width:365px;height:26px;">GraphPad Prism v.5.0 software</td>
			<td style="width:177px;">GraphPad Inc.</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="26">
			<td height="26" style="width:365px;height:26px;">PC-9</td>
			<td style="width:177px;">Riken BioResource Center</td>
			<td style="width:119px;">RCB4455</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="width:365px;height:21px;">P100 dish</td>
			<td style="width:177px;">FALCON</td>
			<td align="right" style="width:119px;">353003</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

establishing dual resistance to egfr-tki and met-tki in lung adenocarcinoma cells in vitro with a 2-step dose-escalation procedure

Resistens är en stor utmaning i cancerbehandling. Generering av resistenta segmenten i vitro är nödvändigt för att upptäcka nya mekanismer att övervinna denna utmaning. Här, en 2-stegs-dosupptrappning metod för fastställande av dual-motstånd mot en epidermal tillväxtfaktor (EGFR)-tyrosinkinashämmare (TKI), gefitinib och en MET-TKI, PHA665752, beskrivs. Denna metod bygger på Enkel stegvis dosökning av hämmare för att inducera förvärvad resistens i cellinjer. Den alternativa metoden för att skapa resistenta segmenten innebär att utsätta celler till höga koncentrationer av hämmaren i ett steg. Metoden stegvis dosökning har en högre möjligheten att framgångsrikt inducerande förvärvad resistens än denna metod. Aktivera EGFR är mutationer biomarkörer för ett svar på behandling med EGFR-TKI, som är en tillämpad första linjens behandling för icke-small cell lung cancer (NSCLC) som hyser dessa mutationer. Men trots rapporter om effektiva svar är användning av EGFR-TKI begränsad eftersom tumörer oundvikligen förvärva motstånd. De viktigaste mekanismerna bakom EGFR-TKI motstånd inkluderar en sekundär mutation på webbplatsen gatekeeper, T790M i exon 20 av EGFR och en bypass signal om marknadsekonomisk status. En möjlig lösning på problemet skulle således vara en kombination av EGFR-TKI och MET-TKI. Denna kombinerade behandling har visat sig vara effektivt i en in vitro- studie modell. Förvärvad gefitinib-resistens inrättades genom MET-förstärkning av stegvis-upptrappning av dosen av gefitinib i 12 månader, och en cellinje som heter PC-9MET1000 skapades i en tidigare studie. För att ytterligare undersöka mekanismer förvärvade MET-TKI och EGFR-TKI administrerades motstånd, en MET-TKI, PHA665752, till dessa celler med stegvis dosökning i närvaro av gefitinib i 12 månader. Detta protokoll har framgångsrikt tillämpats även för ett antal kombinationsbehandlingar att upprätta förvärvad resistens mot andra hämmare molekyler.

Översikt av det protokoll som presenteras i detta manuskript visas i figur 1, inklusive induktion av förvärvad dual-resistens mot gefitinib och PHA665752 i PC-9 celler genom en 2-stegs-dosupptrappning förfarande. Figur 2 visar en minskning av spridningen av föräldrarnas PC-9 celler som koncentrationen av gefitinib ökar. Detta indikerar att PC-9 cellerna blev känslig för gefitinib efter dosupptrappning förfarandet utför...

Watch this Scientific Journal Video about Establishing Dual Resistance to EGFR-TKI and MET-TKI in Lung Adenocarcinoma Cells In Vitro with a 2-step Dose-escalation Procedure at JoVE.com

Establishing Dual Resistance to EGFR-TKI and MET-TKI in Lung Adenocarcinoma Cells In Vitro with a 2-step Dose-escalation Procedure

En in vitro- Metod för fastställande av dubbla motstånd mot en EGFR-TKI och en MET-TKI i cancerceller beskrivs. Denna metod är användbar för att utveckla behandlingar för patienter med EGFR-mutationer, som uppvisar sjukdomsprogress trots EGFR-TKI behandling med MET-förstärkning. Det kan också ändras för hämmare inriktning andra molekyler.

Om dubbla motstånd mot EGFR-TKI och träffade-TKI i lunga adenokarcinom celler In Vitro med en 2-stegs-dosupptrappning procedur

Drug resistance is a major challenge in cancer therapy. The generation of resistant sublines in vitro is necessary for discovering novel mechanisms to ...

Research

JoVE Journal

Cancer Research

Establishing Dual Resistance to EGFR-TKI and MET-TKI in Lung Adenocarcinoma Cells In Vitro with a 2-step Dose-escalation Procedure

Long-term High-Resolution Intravital Microscopy in the Lung with a Vacuum Stabilized Imaging Window

Långsiktig Högupplösta Intravital Mikroskopi i lungan med en vakuum Stabiliserad Imaging Fönster

Metastasis to secondary sites such as the lung, liver and bone is a traumatic event with a mortality rate of approximately 90% 1. Of these sites, the lung ...

Using RNA-sequencing to Detect Novel Splice Variants Related to Drug Resistance in In Vitro Cancer Models

Using RNA-sequencing to Detect Novel Splice Variants Related to Drug Resistance in In Vitro Cancer Models

Användning av RNA-sekvensering för att upptäcka Novel Splice varianter besläktade med drogmotstånd i<em&gt; In Vitro</em&gt; Cancer modeller

Drug resistance remains a major problem in the treatment of cancer for both hematological malignancies and solid tumors. Intrinsic or acquired resistance ...

Moving Upwards: A Simple and Flexible In Vitro Three-dimensional Invasion Assay Protocol

Moving Upwards: A Simple and Flexible In Vitro Three-dimensional Invasion Assay Protocol

Flytta uppåt: Ett enkelt och flexibelt In Vitro tredimensionella Invasion Assay protokoll

Although 3D invasion assays have been developed, the challenge remains to study cells without affecting the integrity of their microenvironment. ...

Orthotopic Transplantation of Syngeneic Lung Adenocarcinoma Cells to Study PD-L1 Expression

Ortotop Transplantation av syngena lunga adenokarcinom celler att studera PD-L1-uttryck

The use of mouse models is indispensable for studying the pathophysiology of various diseases. With respect to lung cancer, several models are available, ...

Mesenchymal Stem Cell Isolation from Pulp Tissue and Co-Culture with Cancer Cells to Study Their Interactions

Mesenkymala stamceller isolering från massa vävnad och samtidig kultur med cancerceller för att studera deras interaktioner

Cancer as a multistep process and complicated disease is not only regulated by individual cell proliferation and growth but also controlled by tumor ...

Establishment and Characterization of Three Afatinib-resistant Lung Adenocarcinoma PC-9 Cell Lines Developed with Increasing Doses of Afatinib

Etablering och karakterisering av tre afatinib-resistenta lung adenocarcinom PC-9 cellinjer som utvecklats med ökande doser av afatinib

Acquired resistance to molecular target inhibitors is a severe problem in cancer therapy. Lung cancer remains the leading cause of cancer-related death in ...

In Vitro Assay to Study Tumor-macrophage Interaction

In vitro-analys för att studera interaktion med tumör-makrofage

Tumor associated macrophages (TAMs) account for a large percentage of cells in the tumor mass for different types of cancers. Glioblastoma (GBM), a ...

In Vitro Evaluation of Oncogenic Transformation in Human Mammary Epithelial Cells

In Vitro Utvärdering av Oncogenic Transformation i mänskliga mammary Epitelial celler

Tumorigenesis is a multi-step process in which cells acquire capabilities&#160;that allow their growth, survival, and dissemination under hostile ...

Using Computer-based Image Analysis to Improve Quantification of Lung Metastasis in the 4T1 Breast Cancer Model

Använda datorbaserad bildanalys för att förbättra kvantifiering av lung metastasering i 4T1 Bröstcancermodellen

Breast cancer is a devastating malignancy, accounting for 40,000 female deaths and 30% of new female cancer diagnoses in the United States in 2019 alone. ...

Chemical Conjugation of a Purified DEC-205-Directed Antibody with Full-Length Protein for Targeting Mouse Dendritic Cells In Vitro and In Vivo

Chemical Conjugation of a Purified DEC-205-Directed Antibody with Full-Length Protein for Targeting Mouse Dendritic Cells In Vitro and In Vivo

Kemisk konjugation av en renad DEC-205-riktad antikropp med fulllängdsprotein för inriktning på mus dendritiska celler in vitro och in vivo

Targeted antigen delivery to cross-presenting dendritic cells (DC) in vivo efficiently induces T effector cell responses and displays a valuable approach ...