Name: live imaging of mouse secondary palate fusion
Uploaded: 2017-07-27T14:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Live Imaging of Mouse Secondary Palate Fusion at JoVE.com

Vi tackar M. Douglas Benson för första samtal om sekundär gombildning. Vi erkänner också David Castaneda-Castellanos (Leica) och Chris Rieken (Zeiss) för deras hjälp att anpassa bildförhållanden i konfokal mikroskopi. Vi uppskattar Lynsey Hamilton (Bitplane) för användbara förslag på kvantitativ bildanalys med hjälp av Imaris-programvaran. Detta arbete finansierades av NIH / NIDCR R01 DE025887.

Alla djurförsök utfördes i enlighet med protokoll från University of California i San Francisco Institutionella djurvård och användningskommitté. 1. Förberedelse av Live Imaging Media <ol><li> Framställning av flytande odlingsmedium <ol><li> Lägg till 20% fetalt bovint serum (FBS), 2 mM L-glutamin, 100 U / ml penicillin, 100 | ig / ml streptomycin, 200 | ig / ml L-askorbinsyra, 15 mM HEPES till Dulbeccos modifierade örnmedium (DMEM) / F12 media. OBS! Live...

<ol>
	<li>Ray, H. J., Niswander, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mechanisms+of+tissue+fusion+during+development.">Mechanisms of tissue fusion during development.</a> Dev. Camb. Engl. 139, 1701-1711 (2012).</li><li>Dudas, M., Li, W. -. Y., Kim, J., Yang, A., Kaartinen, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Palatal+fusion+-+where+do+the+midline+cells+go?+A+review+on+cleft+palate,+a+major+human+birth+defect.">Palatal fusion - where do the midline cells go? A review on cleft palate, a major human birth defect.</a> Acta Histochem. 109, 1-14 (2007).</li><li>Bush, J. O., Jiang, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Palatogenesis:+morphogenetic+and+molecular+mechanisms+of+secondary+palate+development.">Palatogenesis: morphogenetic and molecular mechanisms of secondary palate development.</a> Development. 139, 231-243 (2012).</li><li>Lan, Y., Xu, J., Jiang, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cellular+and+Molecular+Mechanisms+of+Palatogenesis.">Cellular and Molecular Mechanisms of Palatogenesis.</a> Curr Top Dev Biol. 115, 59-84 (2015).</li><li>Taya, Y., O'Kane, S., Ferguson, M. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pathogenesis+of+cleft+palate+in+TGF-b3+knockout+mice.">Pathogenesis of cleft palate in TGF-b3 knockout mice.</a> Development. 126, 3869-3879 (1999).</li><li>Kim, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Convergence+and+Extrusion+Are+Required+for+Normal+Fusion+of+the+Mammalian+Secondary+Palate.">Convergence and Extrusion Are Required for Normal Fusion of the Mammalian Secondary Palate.</a> PLOS Biol. 13, 100122 (2015).</li><li>Yoshida, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Periderm+cells+covering+palatal+shelves+have+tight+junctions+and+their+desquamation+reduces+the+polarity+of+palatal+shelf+epithelial+cells+in+palatogenesis.">Periderm cells covering palatal shelves have tight junctions and their desquamation reduces the polarity of palatal shelf epithelial cells in palatogenesis.</a> Genes Cells. 17, 455-472 (2012).</li><li>Fitchett, J., Hay, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Medial+edge+epithelium+transforms+to+mesenchyme+after+embryonic+palatal+shelves+fuse.">Medial edge epithelium transforms to mesenchyme after embryonic palatal shelves fuse.</a> Dev. Biol. 131, 455-474 (1989).</li><li>Akira, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+expression+of+TGF-beta3+for+epithelial-mesenchyme+transdifferentiated+MEE+in+palatogenesis.">The expression of TGF-beta3 for epithelial-mesenchyme transdifferentiated MEE in palatogenesis.</a> J Mol Hist. 41, 343-355 (2010).</li><li>Sani, F. V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fate-mapping+of+the+epithelial+seam+during+palatal+fusion+rules+out+epithelial-mesenchymal+transformation.">Fate-mapping of the epithelial seam during palatal fusion rules out epithelial-mesenchymal transformation.</a> Dev. Biol. 285, 490-495 (2005).</li><li>Jin, J. -. Z., Ding, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Analysis+of+cell+migration,+transdifferentiation+and+apoptosis+during+mouse+secondary+palate+fusion.">Analysis of cell migration, transdifferentiation and apoptosis during mouse secondary palate fusion.</a> Development. 133, 3341-3347 (2006).</li><li>Xu, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cell+autonomous+requirement+for+Tgfbr2+in+the+disappearance+of+medial+edge+epithelium+during+palatal+fusion.">Cell autonomous requirement for Tgfbr2 in the disappearance of medial edge epithelium during palatal fusion.</a> Dev. Biol. 297, 238-248 (2006).</li><li>Carette, M. J., Ferguson, M. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+fate+of+medial+edge+epithelial+cells+during+palatal+fusion+in+vitro:+an+analysis+by+Dil+labelling+and+confocal+microscopy.">The fate of medial edge epithelial cells during palatal fusion in vitro: an analysis by Dil labelling and confocal microscopy.</a> Development. 114, 379-388 (1992).</li><li>Muzumdar, M., Tasic, B., Miyamichi, K., Li, L., Luo, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+global+double-fluorescent+Cre+reporter+mouse.">A global double-fluorescent Cre reporter mouse.</a> Genesis. 45, 593-605 (2007).</li><li>Dassule, H., Lewis, P., Bei, M., Mass, R., McMahon, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Sonic+hedgehog+regulates+growth+and+morphogenesis+of+the+tooth.">Sonic hedgehog regulates growth and morphogenesis of the tooth.</a> Development. 127, 4775-4785 (2000).</li><li>Eisenhoffer, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Crowding+induces+live+cell+extrusion+to+maintain+homeostatic+cell+numbers+in+epithelia.">Crowding induces live cell extrusion to maintain homeostatic cell numbers in epithelia.</a> Nature. 484, 501-546 (2012).</li><li>Riedl, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Lifeact:+a+versatile+marker+to+visualize+F-actin.">Lifeact: a versatile marker to visualize F-actin.</a> Nat Methods. 5, 605-607 (2008).</li><li>Riedl, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Lifeact+mice+for+studying+F-actin+dynamics.">Lifeact mice for studying F-actin dynamics.</a> Nat Methods. 7, 168-169 (2010).</li><li>Can, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Attenuation+correction+in+confocal+laser+microscopes:+a+novel+two-view+approach.">Attenuation correction in confocal laser microscopes: a novel two-view approach.</a> J Microsc. 211, (2003).</li><li>Veenman, C., Reinders, M., Backer, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Resolving+motion+correspondence+for+densely+moving+points.">Resolving motion correspondence for densely moving points.</a> IEEE Trans Pattern Anal Mach Intell. 23, 54-72 (2001).</li><li>Udan, R., Piazza, V., Hsu, C., Hadjantonakis, A., Dickinson, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Quantitative+imaging+of+cell+dynamics+in+mouse+embryos+using+light-sheet+microscopy.">Quantitative imaging of cell dynamics in mouse embryos using light-sheet microscopy.</a> Development. 141, 4406-4414 (2014).</li><li>Stoller, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cre+reporter+mouse+expressing+a+nuclear+localized+fusion+of+GFP+and+beta-galactosidase+reveals+new+derivatives+of+Pax3-expressing+precursors.">Cre reporter mouse expressing a nuclear localized fusion of GFP and beta-galactosidase reveals new derivatives of Pax3-expressing precursors.</a> Genesis. 46, 200-204 (2008).</li></ol>

Levande avbildning av vävnadsmorfogenes med 3D-organexplanteringskulturen kan ge detaljerad information om cellulära processer som inte kan visas i konventionell färganalys av fasta vävnadssektioner. Genom att använda in vitro- explant-kulturen av mus-embryonala sekundärpalats, observerade vi flera intressanta cellulära beteenden som ledde oss att föreslå en ny mekanism av palatsfusion som innefattar epitelkonvergens och cellsträngsprutning. En gemensam utmaning i studier ...

Vävnadsfusion är ett viktigt steg i utvecklingen av flera organ. Huvudsakliga mänskliga fosterskador som klyvtapp och gom, spina bifida och missbildningar av hjärtat kan bero på brister i vävnadsfusion 1 . Mus sekundär gommen fusion har studerats omfattande för att identifiera de cellulära och molekylära mekanismerna som kontrollerar vävnadsfusion i utveckling 2 , 3 , 4 . I muskeln börjar sekundär gommen utveckling runt E11.5 med utväxten av en sekundär palatalhylla från varje bilateral maxillärprocess. Initial tillväxt av palatalhyllorna sker vertikalt längs tungan, tills ungefär E14.0, vid vilken tidpunkt palatalhyllorna höjs horisontellt över tungan. Medialt riktad tillväxt resulterar i fysisk kontakt mellan epithelernas tillhörande epitel i de två palatala hyllorna, som bildar mittlinjen epitheliAl seam (MES) vid E14.5. Den mellanliggande MES måste avlägsnas från mellan de sekundära palatalhyllorna för att möjliggöra mesenkymkonfluens och utvecklingen av en intakt, fullständigt smält sekundär gommen genom E15.5 3 . Hur en gemensam epitelial MES-cellskikt bildas mellan två separata palatala hyllor och sedan avlägsnas för att uppnå mesenkymkonfluens har varit en central fråga vid gomutveckling. Baserat på mus histologiska och elektronmikroskopi (EM) studier, explant kulturstudier och funktionella musgenetiska experiment har flera grundläggande cellbeteenden varit inblandade i denna process. Filopodia-liknande utsprång från medialkanten epitel MEE av varje palatalhylla underlättar initial kontakt 5 , 6 följt av interkalering av dessa epitelceller till en gemensam singel MES 6 , 7 . Avlägsnande av den resulterande delade MESHar föreslagits att fortsätta med tre icke-exklusiva mekanismer. Tidiga studier som använde histologisk observation och ex vivo linjespårning med vitala färgämnen indikerade att MES kan avlägsnas genom epitel till mesenkymal övergång (EMT) hos MES-celler 8 , 9 , men nyligen har genetisk linjär spårning av epitelceller ökat osäkerheten med avseende på Det långsiktiga bidraget från epitelceller till palatalhylsan mesenchym 10 , 11 , 12 . Signifikant antal apoptotiska celler och en minskning av deras antal i vissa mutanter som misslyckas med att genomgå riktig palatsfusion har lett till tanken att apoptos kan vara en viktig drivkraft för MES-upplösning 2 , 3 . Slutligen baseras initialt på studier som involverar epitelmärkning och statisk observation vid progressiva tidpunkter, MES-cellerFöreslogs att migrera i oronasala och anteroposterior dimensionerna 11 , 13 , men sådana dynamiska cellbeteenden var initialt okontrollerade på grund av en oförmåga att observera dem i levande palatal vävnad. Nyligen kunde vi direkt observera dessa beteenden genom att utveckla en ny levande bildhanteringsmetodik som kombinerar musegenetiska metoder för fluorescerande märkning med konfokal levande bildbehandling av explanted palatal hyllor. Först, för att visualisera dynamiska cellulära beteenden i gom epitelceller under gommen fusion, genererade vi en epitelial specifika reporter mus genom att korsa ROSA26-mTmG flox möss med Keratin14-cre möss 14, 15. Konfokal levande avbildning av palat explant kultur av de resulterande embryon bekräftade några tidigare föreslagna cellulära beteenden och identifierade nya händelser i fusionsprocessen 6 </sup&gt;. Epitelcellsmembranutskjutningar föregick initial cellcellkontakt följt av epitelial konvergens genom cellinterkallering och oronascellförskjutning. I synnerhet upptäckte vi också att cellsträngsprutning, en process som rapporterades spela viktiga roller i epitelial homeostas, var en viktig mekanism för att driva musens sekundära palatsfusion 6 , 16 . Denna bildmetod kan användas med andra reporterlinjer; Vi utnyttjade Lifeact-mRFPruby- transgena möss 17 , 18 för att undersöka aktins cytoskeletaldynamik under fusionsprocessen. Andra journalister kan också användas för att observera andra specifika aspekter av gomfusion, och denna metod kan anpassas antingen till laserskanning av konfokal mikroskopi eller för spin-disk-konfokal mikroskopi beroende på bildbehov och tillgänglighet av mikroskop. Levande bildbehandling blir alltmer en keystone-strategi i utvecklingsbiologi. PartiCularly, kraniofacial morfogenes är komplex och mänskliga fosterskador som påverkar ansiktet är vanliga. Denna konfokala levande avbildningsmetod kommer att bidra till att möjliggöra en bättre förståelse av underliggande grundläggande utvecklingsmekanismer såväl som ursprung för mänskliga kraniofaciella abnormiteter.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" width="1193">
	<colgroup>
		<col />
		<col />
		<col />
		<col />
	</colgroup>
	<tbody>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:348px;">Reagents</td>
			<td style="width:360px;"></td>
			<td style="width:225px;"></td>
			<td style="width:260px;"></td>
		</tr>
		<tr height="19">
			<td height="19" style="height:19px;">DMEM/F12</td>
			<td>Life technology</td>
			<td>11330-032</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="19">
			<td height="19" style="height:19px;">Fetal Bovine Serum</td>
			<td>Life technology</td>
			<td>16000-044</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="19">
			<td height="19" style="height:19px;">L-glutamine</td>
			<td>Life technology</td>
			<td>25030-081</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="19">
			<td height="19" style="height:19px;">L-Ascorbic acid</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>A4544-100G</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="19">
			<td height="19" style="height:19px;">Pennicillin/Streptomycin</td>
			<td>Life technology</td>
			<td>15140-122</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="19">
			<td height="19" style="height:19px;">Low melting agarose</td>
			<td>BioExpress</td>
			<td>E-3111-125</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="19">
			<td height="19" style="height:19px;">35mm glass bottom dish</td>
			<td>MatTek</td>
			<td>P35G-1.5-10-C</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="19">
			<td height="19" style="height:19px;">Petrolieum Jelly (Vaseline)</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>16415-1Kg</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Mice</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="19">
			<td height="19" style="height:19px;">Keratin14-cre</td>
			<td></td>
			<td>MGI: J:65294</td>
			<td>Allele = Tg(KRT14-cre)1Amc</td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;">ROSA26mTmG</td>
			<td></td>
			<td>MGI: J:124702</td>
			<td>Allele = Gt(ROSA)26Sortm4(ACTB-tdTomato,-EGFP)Luo</td>
		</tr>
		<tr height="19">
			<td height="19" style="height:19px;">Lifeact-mRFPruby</td>
			<td></td>
			<td>MGI: J:164274</td>
			<td>Allele = Tg(CAG-mRuby)#Rows</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Microscope</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="19">
			<td height="19" style="height:19px;">White Light SP5 confocal microscope</td>
			<td>Leica Microsystems</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="19">
			<td height="19" style="height:19px;">Cell Observer spinning disk confocal microscope</td>
			<td>Zeiss Microscopy</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

live imaging of mouse secondary palate fusion

Sammansmältningen av de sekundära palatalhyllorna för att bilda den intakta sekundära gommen är en nyckelprocess i däggdjursutveckling och dess störning kan leda till kluven sekundär gom, en vanlig medfödd anomali hos människor. Sekundär gomfusion har studerats omfattande, vilket leder till flera föreslagna cellulära mekanismer som kan förmedla denna process. Dessa studier har emellertid för det mesta utförts på fasta embryonala vävnader vid progressiva tidpunkter under utveckling eller i fasta explantkulturer analyserade vid statiska tidpunkter. Statisk analys är begränsad för analys av dynamiska morfogenetiska processer, såsom en palatsfusion och vilka typer av dynamiska cellulära beteenden som medier palatalfusion är ofullständigt förstådd. Här beskrivs ett protokoll för levande avbildning av ex vivo sekundärpalatsfusion i musembryon. För att undersöka cellulära beteenden av gommen fusion användes epithelial-specifik Keratin14- cre för att märka gomepitelceller i ROSA26-mTmG Flox reporter embryon. För att visualisera filamentöst aktin användes Lifeact-mRFPruby- reportermöss. Levande bildbehandling av sekundär palatsfusion utfördes genom att dissekera nyligen adhererade sekundära palatalhyllor av embryonala (E) 14.5-stegsembryon och odling i agaroshaltiga medier på en glasskål för att möjliggöra avbildning med ett inverterat konfokalmikroskop. Med hjälp av denna metod har vi upptäckt en mängd nya cellulära beteenden under sekundär palatsfusion. En uppskattning av hur distinkt cellbeteende samordnas i rymden och tiden bidrar mycket till vår förståelse av denna dynamiska morfogenetiska process. Detta protokoll kan appliceras på mutanta muslinjer eller kulturer behandlade med farmakologiska hämmare för att ytterligare förstå förståelse för hur sekundär palatsfusion kontrolleras.

Levande avbildning av palat explant kultur avslöjade flera cellulära processer mediating palate fusion 6 . Inledande kontakter mellan två epitelceller är gjorda av membranutsprång ( Figur 2 B-2E ). När två epitelskikt möts bildar de ett flerskiktskiktat MES följt av interkalering för att skapa ett integrerat enkelcellskikt MES genom epithelkonvergens ( Figur 2 A-2E</stro...

Watch this Scientific Journal Video about Live Imaging of Mouse Secondary Palate Fusion at JoVE.com

Live Imaging of Mouse Secondary Palate Fusion

Här presenterar vi ett protokoll för levande avbildning av mus-sekundär palatsfusion med konfokal mikroskopi. Detta protokoll kan användas i kombination med en rad fluorescerande reportermuslinjer, och med pathway-hämmare för mekanisk inblick. Detta protokoll kan anpassas för levande bildbehandling i andra utvecklingssystem.

The fusion of the secondary palatal shelves to form the intact secondary palate is a key process in mammalian development and its disruption can lead to ...

The overall goal of this confocal live imaging method is to directly observe the cellular processes, the drive's secondary palate fusion during cranial facial development. Begin by separating the head from the body of the embryo under a dissecting microscope in a petri dish containing fresh, room temperature PBS. Grasp the head with one pair of fine number five forceps and use a second pair of forceps to remove the upper brain, cutting away any extra tissue outside of the palatal shelves with a second pair of forceps.Remove the mandible carefully without damaging the palatal shelves. When the mandible has been detached, carefully remove the tongue and confirm the presence of a robust reporter signal in the midline epithelia seam. It's important not to damage it, palatal explained during dissection to keep the midline epithelia seam intact.Next, remove the hind brain, brain stem and both maxilli with the adhered palatal shelves. Cut the anterior upper jaw tissue, keeping both the primary and secondary palates intact. Remove the nasal septum on the nasal side of the explant to expose the midline epithelia seam and confirm that the epithelia layer between the tissue is intact.Now, add live imaging medium to a 35 millimeter glass bottom dish and place the dissected palatal shelves, oral side down in the dish as close to the glass bottom as possible. Then, place dry ice pellets on a conductive surface near the culture dish to expedite the solidification of the agarose within the imaging medium. When the agarose is semi-solid, mount the culture dish in an inverted confocal microscope equipped with a 37 degree celsius incubation chamber and use a syringe to apply petroleum jelly between the culture dish and the culture cover to prevent evaporation of the imaging medium.Select a low magnification objective to locate the region of interest. Then, select a high magnification objective and scan multiple z stacks with five micron steps for 16 to 24 hours, using the appropriate laser excitation. Live imaging of palate explant culture reveals multiple cellular processes that mediate palate fusion, with the initial contacts between the two epithelia cells being made by membrane protrusions.When the two epithelia layers meet, they form a multi cell layered midline epithelia seam, followed by intercalation to generate an integrated single cell layer, midline epithelia seam through epithelia convergence. The epithelia cells in deeper z levels are also progressively displaced to the oral side of the midline epithelia seam, contributing to the epithelia convergence process. Posterior directed cell migration is observed in middle palate midline epithelia seam.With epithelia cell extrusion events observed during palate fusion, suggesting that the epithelia cells in the midline epithelia seam can be removed by this active process. This integrated epithelia seam will ultimately break down to achieve confluency. Further, filamentis actin becomes enriched at the border between the epithelia and mazenkemo areas, forming a cable like structure along the anterior posterior axis.Software can be used to track specific cellular behaviors of interest, during palate fusion with the best method for cell tracking depending on the reporter signal used in the experiment.

Research

JoVE Journal

Developmental Biology

Live-imaging of the Drosophila Pupal Eye

Live-imaging of the Drosophila Pupal Eye

Live-avbildning av<em&gt; Drosophila</em&gt; PUPP Eye

Inherent processes of Drosophila pupal development can shift and distort the eye epithelium in ways that make individual cell behavior difficult to track ...

In Vitro Differentiation of Mature Myofibers for Live Imaging

In Vitro Differentiation of Mature Myofibers for Live Imaging

In vitro-differentiering av mogna Myofibers för Live Imaging

Skeletal muscles are composed of myofibers, the biggest cells in the mammalian body and one of the few syncytia. How the complex and evolutionarily ...

Live Confocal Imaging of Developing Arabidopsis Flowers

Live Confocal Imaging för att utveckla Arabidopsis blommor

The study of plant growth and development has long relied on experimental techniques using dead, fixed tissues and lacking proper cellular resolution. ...

Long-term Live Imaging of Drosophila Eye Disc

Long-term Live Imaging of Drosophila Eye Disc

Långsiktig Live avbildning av<em&gt; Drosophila</em&gt; Ögon Disc

Live imaging provides the ability to continuously track dynamic cellular and developmental processes in real time. Drosophila larval imaginal discs have ...

Bioengineering of Humanized Bone Marrow Microenvironments in Mouse and Their Visualization by Live Imaging

Bioengineering av humaniserade benmärgsmiljöer i mus och deras visualisering genom Live Imaging

Human hematopoietic stem cells (HSCs) reside in the bone marrow (BM) niche, an intricate, multifactorial network of components producing cytokines, growth ...

In Vitro Ovule Cultivation for Live-cell Imaging of Zygote Polarization and Embryo Patterning in Arabidopsis thaliana

In Vitro Ovule Cultivation for Live-cell Imaging of Zygote Polarization and Embryo Patterning in Arabidopsis thaliana

In Vitro Fröämnet odling för Live-cell Imaging av zygot polarisering och Embryo mallning i Arabidopsis thaliana.

In most flowering plants, the zygote and embryo are hidden deep in the mother tissue, and thus it has long been a mystery of how they develop dynamically; ...

Live Cell Imaging of Chromosome Segregation During Mitosis

Levande cellen avbildning av kromosomsegregering under Mitos

Chromosomes must be reliably and uniformly segregated into daughter cells during mitotic cell division. Fidelity of chromosomal segregation is controlled ...

Live Imaging and Analysis of Muscle Contractions in Drosophila Embryo

Live Imaging and Analysis of Muscle Contractions in Drosophila Embryo

Levande avbildning och analys av muskelsammandragningar i Drosophila embryo

Coordinated muscle contractions are a form of rhythmic behavior seen early during development in Drosophila embryos. Neuronal sensory feedback circuits ...

Vascular Casting of Adult and Early Postnatal Mouse Lungs for Micro-CT Imaging

Vaskulär gjutning av vuxna och tidiga Postnatala Mus lungor för Micro-CT Imaging

Blood vessels form intricate networks in 3-dimensional space. Consequently, it is difficult to visually appreciate how vascular networks interact and ...

Dissection and Live-Imaging of the Late Embryonic Drosophila Gonad

Dissection and Live-Imaging of the Late Embryonic Drosophila Gonad

Dissektion och live-avbildning av den sena embryonala Drosophila Gonad

The Drosophila melanogaster male embryonic gonad is an advantageous model to study various aspects of developmental biology including, but not limited to, ...