Name: maintaining aedes aegypti mosquitoes infected with wolbachia
Uploaded: 2017-08-14T15:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Maintaining Aedes aegypti Mosquitoes Infected with Wolbachia at JoVE.com

ونعترف ييب لين هنغ، كريس باتون وجونسون بيترينا ودويغ كلير لمساهمتها في تطوير أساليب عملنا والحفاظ على مستعمرة والمراجعين المجهول ثلاثة لاقتراحاتهم التي ساعدت على تحسين المخطوطة. ابحاثنا معتمد برنامج المنح والزمالات إلى آه من "الصحة الوطنية"، و "مجلس البحوث الطبية" وترجمة منحة من مؤسسة ويلكوم ترست. PAR الحكومة الأسترالية بحوث التدريب برنامج منحة.

تغذية الدم للبعوض على البشر وأقر جامعة "ملبورن لجنة الأخلاقيات البشرية" (الموافقة على رقم: 0723847). وأبلغ جميع المتطوعين تقديم موافقة خطية.
1. تربية اليرقات
ملاحظة: تجري البعوض في 26 ± 0.5 درجة مئوية و 50-70% رطوبة نسبية، مع 12:12 ح (الضوء: الظلام) كبيرة لهذا البروتوكول صيان?...

يتبع البروتوكول المعروضة هنا لصيانة ولبخيه-ينبغي أن تكفل المصابة Ae. مصرية أن البعوض صحية نوعية متسقة يتم إنتاجها للتجارب وفتح مجال النشرات. خلافا للبروتوكولات الأخرى التي تعطي الأولوية لإنتاج كميات أسلحة من البعوض (انظر المرجع57)، الأساليب التي تركز على تحقيق الحد ا...

البعوض بعوض الزاعجة المصرية المسؤولة عن تحيل بعض سيتناقش الأكثر أهمية في العالم، بما في ذلك حمى الضنك، Zika وشيكونغونيا1. وأصبحت هذه الفيروسات تهديدا متزايداً للصحة العالمية بتوزيع واسع النطاق عبد اللطيف. الزاعجة المصرية في المناطق المدارية وتواصل توسيع2،،من34. أنثى الزاعجة المصرية عبد اللطيف. تفضيلي تتغذى على الدم البشري5 وهكذا تميل إلى العيش بالقرب من البشر، وبخاصة في المناطق الحضرية حيث السكان أكثر كثافة. من خلال هذا الارتباط الوثيق مع البشر أنها تكيفت أيضا تولد في الموائل الاصطناعية، بما في ذلك إطارات السيارات والأواني ومزاريب وخزانات المياه6،7. عبد اللطيف-مصرية أيضا سهولة التكيف مع بيئات المختبرات حيث أنها يمكن الحفاظ عليه دون أي متطلبات خاصة بعد يجري جمعها مباشرة من الميدان، وعلى عكس بعض الأنواع الأخرى في جنس بعوض 8، 9،10. سهولة الصيانة شهد لهم درس على نطاق واسع في المختبر في طائفة واسعة من المجالات، وتهدف في نهاية المطاف إلى السيطرة على البعوض الأمراض قد يحيل.
تقليديا، أربوفيرال التحكم تعتمد اعتماداً كبيرا على استخدام المبيدات الحشرية للحد من السكان البعوض. مع ذلك، هناك اهتمام متزايد في النهج حيث البعوض المعدل يتم تربيتها في المختبر وثم أطلق سراحه في السكان الطبيعية. البعوض المفرج عنهم قد معدلة وراثيا11،12،13، بيولوجيا14،15، عن طريق تشعيع16،17،العلاج الكيميائي18، أو بالجمع بين تقنيات19 قمع سكان البعوض أو استبدالها بالبعوض التي المقاوم للحرارة إلى انتقال أربوفيرال20.
ولبخيه هي البكتيريا التي تستخدم حاليا كعامل مكافحة البيولوجية سيتناقش. وأدخلت مؤخرا عدة سلالات ولبخيه في Ae. مصرية تجريبيا باستخدام microinjection الجنينية21،22،،من2324. هذه السلالات تقلل من قدرة سيتناقش نشر وتكرار في البعوضة، تتضاءل انتقال المحتملة23،25،،من2627،28 . ولبخيه العدوى تنتقل من الأم إلى ذرية، إلا أن بعض سلالات حمل العقم عند الذكور المصابين تتزاوج مع الإناث غير مصاب22. ولبخيه-ولذلك يمكن إطلاق الذكور المصابة بكميات كبيرة لقمع السكان البعوض الطبيعية، أظهرت مؤخرا في15،الأنواع الأخرى من بعوضة 29. بيد منذ ولبخيه تمنع أيضا انتقال أربوفيرال في Ae. مصرية، يمكن أيضا إصدار البعوض لاستبدال السكان الأصليين بناقلات الأكثر فقراً. عبد اللطيف-مصرية مصابة تجريبيا ولبخيه تصدر الآن في الميدان في العديد من البلدان باستخدام هذا النهج الأخير14،،من3031.
ولبخيه-استناداً إلى النهج للتحكم أربوفيرال تعتمد على فهم سليم للتفاعلات بين ولبخيهوالبعوض والبيئة. ولبخيه تحدث طبيعيا في طائفة واسعة من الحشرات، والسلالات أدخلت البعوض المتنوعة في تلك الآثار32. كما يتم عرض أنواع العدوى ولبخيه جديدة في Ae. مصرية24، من الضروري أن تميز كل سلالة لآثارها على اللياقة البدنية البعوض والاستنساخ والتدخل أربوفيرال ضمن مجموعة من الشروط. ولذلك مطلوب التجريب الدقيق في المختبر لتقييم إمكانات سلالات ولبخيه لتحقيق النجاح في هذا المجال.
يمكن أن تتطلب فتح الحقل إطلاقات عبد اللطيف-مصرية مع التهابات ولبخيه غالباً ما تربى الآلاف إلى عشرات آلاف البعوض كل منطقة الإفراج عن أن يكون كل أسبوع14،،من3031. ويمكن تحسين نجاح الإصدارات الأولية عن طريق الإفراج عن البعوض حجم كبير إلى أقصى حد ممكن على خصوبتها33 و34،نجاح التزاوج35. كما ينبغي أن يكون البعوض تتكيف مع الظروف أنهم سوف الخبرة في هذا المجال، تربية المختبر الطويلة الأجل ولكن قد يسبب تغييرات في السلوك، وعلم وظائف الأعضاء التي يمكن أن تؤثر في مجال أداء36،37، 38.
يمكننا وصف بروتوكول بسيط لتربية عبد اللطيف-مصرية في المختبر باستخدام المعدات الأساسية. هذا البروتوكول مناسبة لكل نوع البرية و ولبخيه-إصابة البعوض، هذه الأخيرة التي يمكن أن تتطلب اهتماما خاصا ببعض سلالات ولبخيه آثاراً كبيرة على البعوض تاريخ حياة الصفات39، 40-شروط تربية تجنب الاكتظاظ والتنافس على الغذاء لإنتاج البعوض بحجم متسقة، وهي حاسمة بالنسبة لناقلات اختصاص وتجارب اللياقة البدنية، ويضمن أن البعوض يتمتعون بصحة جيدة للإفراج عن الحقل41 . ونحن أيضا اتخاذ الاحتياطات اللازمة للتقليل من التكيف مختبر والاستيلاد بتقليل الضغوط انتقائية والتأكد من أن الجيل القادم هو أخذ عينات من تجمع كبير وعشوائي. ومع ذلك، مختبر البيئات تختلف اختلافاً واضحا من الأوضاع الميدانية، والصيانة على المدى الطويل في ظروف مريحة يمكن أن تقلل من اللياقة البدنية للبعوض عند الإفراج عنهم إلى الحقل37،42،43 . ولذلك نعبر الإناث من خطوط المختبر إلى ميدان جمع الذكور بصورة دورية، الناتج في المستعمرات التي تشبه وراثيا للمقارنات التجريبية والتي يتم تطويعها وفقا ل السكان الحقل الهدف39. الأساليب لا تتطلب أي معدات متخصصة ويمكن زيادتها إلى الخلفي عشرات الآلاف من الأفراد أسبوعيا للإطلاقات الحقل. البروتوكول أيضا أولويات اللياقة بدنية البعوض داخل وعبر الأجيال، واعتبار هام للحشرات المتجهة إلى إنشاء في السكان طبيعية. البروتوكول مناسبة لمعظم المختبرات التي تتطلب الحفاظ على عبد اللطيف-مصرية، خاصة بالنسبة للمقارنات التجريبية الهامة فيها نوعية متسقة للبعوض و relatability إلى الميدان.

<table width="1661">
	<tbody>
		<tr height="24">
			<td height="24" style="width:287px;height:24px;">Wild type Aedes aegypti</td>
			<td style="width:168px;"></td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td style="width:1087px;">Collected from field locations in Queensland, Australia, see Yeap and others39 for details</td>
		</tr>
		<tr height="24">
			<td height="24" style="width:287px;height:24px;">w Mel-infected Aedes aegypti</td>
			<td style="width:168px;"></td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td>Provided by Monash University. Refer to Walker and others23 for information on the strain</td>
		</tr>
		<tr height="24">
			<td height="24" style="width:287px;height:24px;">w AlbB-infected Aedes aegypti</td>
			<td style="width:168px;"></td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td>Provided by Monash University. Refer to Xi and others21 for information on the strain</td>
		</tr>
		<tr height="24">
			<td height="24" style="width:287px;height:24px;">w MelPop-infected Aedes aegypti</td>
			<td style="width:168px;"></td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td>Provided by Monash University. Refer to McMeniman and others22 for information on the strain</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="width:287px;height:21px;">Instant dried yeast</td>
			<td style="width:168px;">Lowan</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td>Stimulates egg hatching. Found in general grocery stores. Other brands may be used</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="width:287px;height:21px;">5 L plastic tub</td>
			<td style="width:168px;">Quadrant</td>
			<td style="width:119px;">Q110950</td>
			<td>Used for hatching and rearing larvae. Other products may be used</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="width:287px;height:21px;">Fish Food (Tetramin Tropical Tablets)</td>
			<td style="width:168px;">Tetra</td>
			<td style="width:119px;">16152</td>
			<td>Provided to larvae as a source of food. Web address: https://www.amazon.com/Tetra-16152-TetraMin-Tropical-10-93-Ounce/dp/B00025Z6SE</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="width:287px;height:21px;">Plastic containers</td>
			<td style="width:168px;"></td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td>Used for rearing larvae. Any plastic container above 500 mL should be suitable</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="width:287px;height:21px;">Glass pipette</td>
			<td style="width:168px;"></td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td>Used for transferring larvae and pupae between containers. Web address: https://www.aliexpress.com/item/10Pcs-Durable-Long-Glass-Experiment-Medical-Pipette-Dropper-Transfer-Pipette-Lab-Supplies-With-Red-Rubber-Cap/32704471109.html?spm=2114.40010308.4.2.py4Kez</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="width:287px;height:21px;">Clicker counter</td>
			<td style="width:168px;">RS Pro</td>
			<td style="width:119px;">710-5212</td>
			<td>Used to assist in the counting of larvae, pupae and eggs. Web address: http://au.rs-online.com/web/p/products/7105212/?grossPrice=Y</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="width:287px;height:21px;">Rearing trays</td>
			<td style="width:168px;">Gratnells</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td>Used for rearing larvae. Web address: http://www.gratnells.com</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="width:287px;height:21px;">Nylon mesh</td>
			<td style="width:168px;"></td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td>Used to transfer larvae and pupae to containers of fresh water. Other brands may be used. Web address: https://www.spotlightstores.com/fabrics-yarn/specialty-apparel-fabrics/nettings-tulles/nylon-netting/p/BP80046941001-white</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="width:287px;height:21px;">Cages</td>
			<td style="width:168px;">BugDorm</td>
			<td>DP1000</td>
			<td>Houses adult mosquitoes. Alternative products may be used. Web address: http://bugdorm.megaview.com.tw/bugdorm-1-insect-rearing-cage-30x30x30-cm-pack-of-one-p-29.html</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="width:287px;height:21px;">35 mL plastic cup</td>
			<td style="width:168px;">Huhtamaki</td>
			<td style="width:119px;">AA272225</td>
			<td>Used to provide water or sucrose to adult mosquitoes. Other brands may be used</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="width:287px;height:21px;">35 mL plastic cup lid</td>
			<td style="width:168px;">Huhtamaki</td>
			<td>GB030005</td>
			<td>Used to provide sucrose to adult mosquitoes. Other brands may be used</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="width:287px;height:21px;">Cotton wool</td>
			<td style="width:168px;">Cutisoft</td>
			<td style="width:119px;">71841-13</td>
			<td>Moist cotton wool is provided as a source of water to adults. Other brands may be used</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="width:287px;height:21px;">White Sugar</td>
			<td style="width:168px;"></td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td>Provided as a source of sugar to adult mosquitoes. Found in general grocery stores</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="width:287px;height:21px;">Rope</td>
			<td style="width:168px;">M Recht Accessories</td>
			<td>C323C/W</td>
			<td>Used to provide sucrose solution to adults. Other brands may be used. Web address: https://mrecht.com.au/haberdashery/braids-cords-and-tapes/cords/plaited-cord/cotton/</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="width:287px;height:21px;">Plastic cup (large)</td>
			<td style="width:168px;"></td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td>Used as an oviposition container. Any plastic cup that holds 100 mL of water should be suitable</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="width:287px;height:21px;">Sandpaper</td>
			<td style="width:168px;">Norton Master Painters</td>
			<td>CE015962</td>
			<td>Provided as an oviposition substrate. Alternative products may be used, but we use this brand because it is relatively odorless. Lighter colors are used for contrast with eggs. Web address: https://www.bolt.com.au/115mm-36m-master-painters-bulk-roll-p80-medium-p-9396.html</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="width:287px;height:21px;">Filter paper</td>
			<td style="width:168px;">Whatman</td>
			<td style="width:119px;">1001-150</td>
			<td>Used as an alternative oviposition substrate. Other brands may be used</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="width:287px;height:21px;">Latex gloves</td>
			<td style="width:168px;">SemperGuard</td>
			<td>Z560979</td>
			<td>Prevents mosquito bites on hands when blood feeding. Other brands may be used. Web address: http://www.sempermed.com/en/products/detail/semperguardR_latex_puderfrei_innercoated/</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

maintaining aedes aegypti mosquitoes infected with wolbachia

ويجري استخدام البعوض بعوض الزاعجة المصرية المصابة تجريبيا مع ولبخيه في برامج السيطرة على انتشار سيتناقش مثل حمى الضنك وداء شيكونغونيا وزكى. ولبخيه-يمكن إطلاق البعوض في الحقل أما تقليل أحجام السكان عن طريق ماتينجس غير متوافقة أو تحويل السكان مع البعوض التي صهر لانتقال الفيروس. لهذه الاستراتيجيات أن تنجح، يجب أن يكون البعوض التي تطلق في الميدان من المختبر تنافسية مع البعوض الأصلي. ومع ذلك، يمكن أن يؤدي الحفاظ على البعوض في المختبر في الاستيلاد والانجراف الجينية ومختبر التكيف التي يمكن أن تقلل من لياقتهم البدنية في الميدان، وقد يتيه نتائج التجارب. لاختبار مدى ملاءمة مختلف الإصابات ولبخيه للنشر في الميدان، من الضروري الحفاظ على البعوض في بيئة مختبرية تحت التحكم عبر أجيال متعددة. يمكننا وصف بروتوكول بسيط للحفاظ على البعوض Ae-مصرية في المختبر، ومناسبة لكلا ولبخيه-البعوض المصاب والبرية من نوع. الأساليب تقليل التكيف المختبر وتنفيذ التهجين إلى زيادة أهمية التجارب في ميدان البعوض. بالإضافة إلى ذلك، يتم الاحتفاظ بالمستعمرات تحت الظروف المثلى لتعظيم لياقتهم للإطلاقات فتح الحقل.

يوضح الشكل 4 آثار التغذية الأمثل على تنمية يرقات Ae. مصرية . عندما يتم توفير حاويات مع 0.25 مغ أغذية كل يرقة يوميا أو أقل، يزيد الوقت التنمية لكل من الذكور والإناث، وهو تقدم متزامن أقل مما في حاويات مع 0.5 ملغ غذاء. إذا لم يتم توفير الغذاء الكافي طوال مدة الت...

Watch this Scientific Journal Video about Maintaining Aedes aegypti Mosquitoes Infected with Wolbachia at JoVE.com

Maintaining Aedes aegypti Mosquitoes Infected with Wolbachia

الحفاظ على بعوض الزاعجة المصرية "البعوض مصابة" ولبخيه

هي أن يطلق سراحه البعوض بعوض الزاعجة المصرية المصابين ولبخيه إلى السكان الطبيعية لمنع انتقال سيتناقش. يصف لنا أساليب لخلفي عبد اللطيف-مصرية مع التهابات ولبخيه في المختبر للتجارب والإفراج عن الميدان، مع أخذ الاحتياطات اللازمة للتقليل من التكيف مع المختبر واختيار.

Aedes aegypti mosquitoes experimentally infected with Wolbachia are being utilized in programs to control the spread of arboviruses such as dengue, ...

Research

JoVE Journal

Biology

Maintaining Aedes aegypti Mosquitoes Infected with Wolbachia

Wolbachia Bacterial Infection in Drosophila

الولبخية عدوى بكتيرية في ذبابة الفاكهة

Injection of dsRNA into Female A. aegypti Mosquitos

حقن الرنا المزدوج الجديلة الى انثى البعوض بعوض A.

Reverse genetic approaches have proven extremely useful for determining  which genes underly resistance to vector pathogens in mosquitoes.  This video ...

Microinjection of A. aegypti Embryos to Obtain Transgenic Mosquitoes

Microinjection الجنين بعوض ألف الحصول على البعوض المعدلة وراثيا

In this video, Nijole Jasinskiene demonstrates the methodology employed to generate transgenic Aedes aegypti mosquitoes, which are vectors for dengue ...

Protocol for Dengue Infections in Mosquitoes (A. aegypti) and Infection Phenotype Determination

Protocol for Dengue Infections in Mosquitoes A. aegypti and Infection Phenotype Determination

بروتوكول للعدوى حمى الضنك في البعوض (بعوض ألف) ، وتحديد النمط الظاهري العدوى

The purpose of this procedure is to infect the Aedes mosquito with dengue virus in a laboratory condition and examine the infection level and dynamic of ...

Maintaining Wolbachia in Cell-free Medium

الحفاظ على الولبخية في الخلية خالية متوسطة

In this video protocol, procedures are demonstrated to (1) purify Wolbachia symbionts out of cultured mosquito cells, (2) use a fluorescent assay to ...

Dissection of Midgut and Salivary Glands from Ae. aegypti Mosquitoes

تشريح الغدد اللعابية والمعي المتوسط ​​من AE. بعوض البعوض

The mosquito midgut and salivary glands are key entry and exit points for pathogens such as Plasmodium parasites and Dengue viruses. This video protocol ...

Building a Better Mosquito: Identifying the Genes Enabling Malaria and Dengue Fever Resistance in A. gambiae and A. aegypti Mosquitoes

بناء عالم أفضل البعوض : تحديد الجينات تمكين الملاريا وحمى الضنك حمى المقاومة في الغامبية ألف وألف البعوض بعوض

In this interview, George Dimopoulos focuses on the physiological mechanisms used by mosquitoes to combat Plasmodium falciparum and dengue virus ...

RNAi-mediated Gene Knockdown and In Vivo Diuresis Assay in Adult Female Aedes aegypti Mosquitoes

RNAi-mediated Gene Knockdown and In Vivo Diuresis Assay in Adult Female Aedes aegypti Mosquitoes

رني ضربة قاضية بوساطة الجينات و<em&gt; في الجسم الحي</em&gt; فحص إدرار البول في الإناث البالغات<em&gt; الزاعجة المصرية</em&gt; البعوض

This video protocol demonstrates an effective technique to knockdown a particular gene in an insect and conduct a novel bioassay to measure excretion ...

Physiological Recordings and RNA Sequencing of the Gustatory Appendages of the Yellow-fever Mosquito Aedes aegypti

Physiological Recordings and RNA Sequencing of the Gustatory Appendages of the Yellow-fever Mosquito Aedes aegypti

الفسيولوجية تسجيلات وRNA تسلسل الزوائد ذوقي من البعوض الحمى الصفراء<em&gt; الزاعجة المصرية</em

Electrophysiological recording of action potentials from sensory neurons of mosquitoes provides investigators a glimpse into the chemical perception of ...

Fat Body Organ Culture System in Aedes Aegypti, a Vector of Zika Virus

Fat Body Organ Culture System in Aedes Aegypti, a Vector of Zika Virus

الجسم الدهون نظام الثقافة الجهاز في بعوض الزاعجة المصرية، ناقل للفيروس Zika

The insect fat body plays a central role in insect metabolism and nutrient storage, mirroring functions of the liver and fat tissue in vertebrates. Insect ...